专利名称：13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物用于制备抗肝纤维化或其他组织器官纤维化药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物及其药学上可接受的盐类在制备抗纤维化药物中的用途。
背景技术：
肝纤维化是肝脏对各种病因所致慢性肝损伤的修复反应，主要特征是细胞外基质 (extracellular matrix,ECM)的过度沉积。肝纤维化是各种慢性肝病共有的病理特征，是进一步向肝硬化发展，甚至恶变死亡的主要中间环节。由于肝硬化的治疗十分困难、死亡率高，而目前认为肝纤维化具有可逆性，因此阻断或延缓肝纤维化的发生发展，对于多种伴随肝纤维化的慢性肝病的治疗，具有重要应用价值。目前，临床上肝纤维化治疗包括针对原发病的病因治疗和针对纤维化本身的治疗。但去除原发病因并不能完全抑制肝纤维化的发展，而纤维化的存在还可影响对原发病的治疗效果，因此，针对纤维化的治疗尤显重要。目前在研的抗肝纤维化药物主要通过抑制或减轻炎症反应、抗氧化应激、抑制肝纤维化过程中起主要作用的肝星状细胞激活、增殖或促进其凋亡、保护肝细胞、促进肝再生、抑制或中和促纤维化因子活性以及抑制细胞外基质合成或促进其降解等环节。近几十年来，抗肝纤维化药物研究虽然取得了一定的进展，但目前许多药物仍处于临床前或临床试验阶段，如 TGF^ 1拮抗剂、肝细胞生长因子、S-腺苷蛋氨酸、吡非尼酮等，但目前尚无一种化学药物被批准用于人类肝纤维化的治疗。除肝纤维化外，纤维化还可发生于肺、肾、心等多种组织器官。大量文献资料研究表明，ECM产生细胞，如肝脏星状细胞、肾小球系膜细胞、肾间质成纤维细胞、肺成纤维细胞、 心成纤维细胞等在器官或组织纤维化中起重要的作用，它们已成为预防和治疗器官或组织纤维化的靶标，抑制ECM产生细胞的激活、增殖或促进其凋亡是防治纤维化的重要手段。中国专利申请号200910199252. 0提供了一类硫代苦参碱化合物及其药学上可接受的盐类的制备方法，还提供了这类化合物能抑制参与炎症过程的细胞因子产生和核转录因子NF κ B转录活性，可用于制备治疗细胞因子和核转录因子NF κ B参与的诸如慢性炎症等相关的炎症性疾病和病理过程的药物。
发明内容
本发明是在现有技术基础上，进一步公开13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I) 及其药学上可接受的盐类在制备抗纤维化药物中的用途。本发明提供的化合物(I)，其结构式见图1。上述化合物药学上可接受的盐类是乙酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氢溴酸盐、 草酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐等。本发明从细胞实验和整体动物实验证明13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)具有抗纤维化作用从细胞学实验证明13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)对大鼠肝星状细胞、肾小球系膜细胞、肺成纤维细胞、心成纤维细胞增殖和胶原合成具有抑制作用； 通过动物实验说明13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物⑴对小鼠四氯化碳和D-氨基半乳糖造成的急性肝损伤具有保护作用；以大鼠胆管结扎(BDL)肝纤维化模型和硫代乙酰胺 (TAA)肝纤维化模型证实13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)能显著减轻肝细胞变性、 坏死和纤维组织的形成，且抗纤维化作用优于苦参碱和临床使用的苦参素注射液，并在多环节上产生药理活性，能抑制肝星状细胞增殖和活化，抑制纤维化肝脏上皮细胞间质转型。 对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有降低大鼠肺组织羟脯氨酸含量和大鼠死亡率的作用。结果说明13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)具有确切的抗纤维化作用，因此可用来制备预防和治疗肝纤维化或其他组织器官纤维化药物。
本发明化合物(1)13-甲氨基-18-硫代苦参碱结构见图1 ；大鼠肝纤维化模型中胆管结扎(BDL)肝纤维化模型中病理检查可见化合物(I)能显著减轻肝细胞变性、坏死和纤维组织的形成见图2 ；硫代乙酰胺(TAA)肝纤维化模型中，化合物(I) (25,50mg/kg)能显著降低TAA升高的血清ALT、AST水平(ρ <0.01)和肝脏羟脯氨酸含量(ρ < 0. 01)，且优于苦参碱组或苦参素组(P < 0. 05)，结果见图3 ；免疫组织化学染色TAA纤维化模型组，结果表明，化合物(I)减少细胞外基质产生，治疗肝纤维化是通过抑制肝细胞和HSC的上皮细胞间质转型(印ithelial-to-mesenchymal transition, EMT)起作用，见图 4。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述，但本发明的具体实施方式
不限于以下实施例。实施例1 :13_甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)对ECM产生细胞增殖和胶原合成的作用试验方法细胞增殖试验96孔细胞培养板每孔加入IX 104个大鼠肝星状细胞HSC-T6、肾小球系膜细胞、肺成纤维细胞、心成纤维细胞，在37°C C02孵箱中孵育24h，然后加入100 μ 1 含有不同药物浓度和10%新生牛血清(NCS)的DMEM培养液或无药培养液，继续培养48h后加入噻唑兰(MTT)酶标仪测定570nm吸收度值。胶原合成的测定采用3H-脯氨酸同位素法。将细胞浓度调整为2. 5X 105个/ml， 在96孔板上每孔加100 μ 1，培养24h使之形成单层，以消除细胞生长对胶原合成的影响。 然后加入含50 μ g. ml-1的维生素C的药物与10% NCS或转化生长因子β 1 (TGF β 1)再培养48h，同时加入每孔[3H]-脯氨酸18. 5kBq。细胞用胰酶消化后，收集于玻璃纤维滤纸上， 用液闪仪测定细胞3H-脯氨酸掺入值(cpm)。结果表明，13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I) (5 40 μ mol. L_l)能显著浓度依赖地抑制ECM产生细胞肝星状细胞HSC-T6、肾小球系膜细胞、肺成纤维细胞、心成纤维细胞增殖和胶原合成(表1，2)。表1 13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)对ECM产生细胞增殖的影响
权利要求
1.13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)，其结构式如图所示，在制备抗肝纤维化或其他组织器官纤维化药物中的用途。
2.13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)药学上可接受的盐类乙酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氢溴酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐等在制备抗肝纤维化或其他组织器官纤维化药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，具体涉及13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物(I)及其盐类在制备抗纤维化药物中的用途。本发明从细胞学试验证实13-甲氨基-18-硫代苦参碱能抑制细胞外基质产生细胞肝星状细胞增殖和活化，抑制纤维化肝脏上皮细胞间质转型。此外，对其他各种导致器官或组织纤维化的细胞外基质产生细胞也具有抑制作用。动物试验证明13-甲氨基-18-硫代苦参碱有非常显著的抗肝纤维化作用。结果说明，13-甲氨基-18-硫代苦参碱具有确切的抗肝纤维化或其他组织器官纤维化作用，可用来制备预防和治疗肝纤维化或其他组织器官纤维化的药物。
文档编号A61P1/16GK102258516SQ201010186858
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者张俊平, 李云华, 李婕, 王绍展, 胡宏岗 申请人:上海沪丰生物科技有限公司