电荷反转的DNA纳米载体及其制备方法和应用与流程

文档序号:12076028阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种电荷反转的DNA纳米载体,其特征在于:包括甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐与pDNA形成的复合物,不同pH条件下带电荷量的不同,在相应的PH条件下可以进行电荷反转。

2.一种制备如权利要求1所述的电荷反转的DNA纳米载体的方法,其特征在于:步骤如下:

(一)制备丁二酸甲酯

称取丁二酸, Dowex 50W-X2,加入到甲酸甲酯/辛烷的混合液中,80℃水浴反应持续12h,将溶液过滤并蒸干,然后通过色谱纯对所得产物进行纯化,即为丁二酸甲酯;所述丁二酸与甲酸甲酯的摩尔比为1:2;

(二)制备甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯

称取上步所得丁二酸甲酯、0.5倍丁二酸甲酯摩尔量的3-二甲基氨基-1-丙醇和1/5丁二酸甲酯摩尔量的4-甲氨基吡啶溶解在二氯甲烷中,得到溶液1:将4倍丁二酸甲酯摩尔量的二环己基碳二亚胺溶解在二氯甲烷中,得到溶液2,备用:另外将溶液2加入到溶液1中,持续搅拌2d,然后过滤除去不溶物后将溶剂挥发,得到甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯;

(三)制备甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐

将上步所得甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯溶解在二氯甲烷中,加入3倍丁二酸甲酯摩尔量的MeI,在室温下搅拌4h后蒸发浓缩,残余物通过二氯甲烷/乙醚混合溶液进行重结晶,得到甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐;

(四)以0.2PH为间隔配制3.2-8.0pH梯度的pH缓冲溶液,将上步所得甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐加入不同pH的缓冲溶液中,测定甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐所带电荷量,并找到电荷反转的点;

(五)制备电荷反转DNA复合物

1.称取步骤三中所的甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐溶解在灭菌水中,调节其pH值使其符合使用环境,通过0.22µm滤膜进行灭菌操作,放入无菌操作台备用;

2.将上步所得季铵盐溶液加入离心管1中,将pDNA加入离心管2中,加入无菌水稀释至2µg/mL,备用;按照药用比例设定将稀释后的pDNA分批加入离心管1中,涡旋30s后将离心管1放入孵育器中,在37℃条件下孵育1h,即得。

3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(一)中,甲酸甲酯/辛烷混合液中甲酸甲酯与辛烷体积比为2:8。

4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(五)1中,调节甲基丁二酸-3-二甲氨基-1-丙基酯季铵盐溶液pH值的调节剂为0.1M HCl或0.1MNaOH。

5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(五)2中,将稀释后的pDNA分批加入离心管1中的具体操作为将稀释后的pDNA按照每次15µL的量加入到离心管1中。

6.如权利要求1所述的电荷反转的DNA纳米载体在基因治疗和抗体生产领域的应用。

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