本发明涉及四氢异喹啉类生物碱在制备α-淀粉酶等体外消化酶抑制剂和3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制剂方面的用途。
背景技术：
世界卫生组织已宣布肥胖是最大的全球成年人慢性疾病。肥胖的病因极为复杂，包括各种行为，环境因素，代谢和遗传因素等相互作用，普遍是由于能量摄入和消耗之间的长期失衡所导致。肥胖不仅影响美观，而且极易诱发心脑血管及其他代谢疾病并增大其风险，包括高血压，高血脂，冠状动脉疾病和2型糖尿病等，已逐渐成为世界性健康问题之一。
α-淀粉酶是一种内切葡糖苷酶，作用于α-1，4-葡萄糖糖苷键。唾液、胰液中的α-淀粉酶可作用于食物中碳水化合物，将其分解为麦芽糖，糊精，低聚糖和葡萄糖等寡糖。寡糖经进一步分解为单糖后，被小肠上皮细胞吸收入血。α-淀粉酶抑制剂(α-Amylase Inhibitor，α-AI)调节血脂的机制可能与其抑制酶活性有关。α-AI能有效地抑制肠道唾液和胰液中α-淀粉酶的活性，阻碍碳水化合物的分解，减少葡萄糖过度产生和摄取，减少糖向脂肪转化，降低血脂含量，并可以使一部分脂类转化成糖以供机体生理的需要，使脂肪的合成减少。
天然存在的α-淀粉酶抑制剂有3种类型，分别为：(1)微生物产带一个寡生物胺单位的含氮碳水化合物；(2)微生物产多肽，如：Paim(来自微生物的猪胰腺a-淀粉酶抑制剂)和Haim(微生物起源人α-淀粉酶抑制剂)；(3)在谷类、豆类以及其它较高等植物中发现的大分子蛋白质抑制剂(吕凤霞等，α-淀粉酶抑制剂的研究进展，食品科学，2002年第23卷第3期，第152-155页)。临床上将α-淀粉酶抑制剂用于防治高血糖。人工合成小分子α-淀粉酶抑制剂目前尚为空白。
胰脂肪酶(pancreaticlipase，PL)是脂肪水解过程中的关键酶，由胰腺分泌到十二指肠，可水解50％～70％的食物脂肪成甘油一酯和脂肪酸。通过抑制PL的活性可阻止脂肪分解，进而使其直接通过消化道排出体外，从而达到减肥目的。同时，该酶抑制剂可直接在肠道内起作用，不需肠吸收，副作用较小，所以PL抑制类药物研发成为一种重要研究方向。
3T3-L1前脂肪细胞在诸多文献中已有报道，其与高脂肥胖症状有着密切的联系。3T3-L1前脂肪细胞可分化为成熟的脂肪细胞，成熟脂肪细胞可大容量的储存脂滴，而脂肪细胞的数目多少正是肥胖疾病形成的关键因素之一，故抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化，干预成熟脂肪细胞的形成及数量，可对脂滴的储存量进行调控，从而达到减少脂肪储存、控制和治疗肥胖的目的。
四氢异喹啉生物碱在自然界中数量多，分布广泛。特别的，苄基异喹啉类生物碱和苯乙基四氢异喹啉类生物碱在生源上来自于苯丙氨酸/酪氨酸衍生途径，结构特征鲜明，合成途径简捷。药理学研究已经证实该类化合物在降胆固醇、抗心律失常、抗高血压的心脑血管疾病，自身免疫调节，中枢神经系统等多方面具有较好的药理活性。本发明通过在C环上添加取代基的方法，获得一系列取代四氢异喹啉类生物碱，并将其研究开发为3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制剂及α-淀粉酶抑制剂和胰脂肪酶抑制剂，在制备糖尿病，高脂血症，肥胖或代谢综合征药物的临床研究方面具有良好的应用前景。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供四氢异喹啉类生物碱及其衍生物的新用途。
本发明提供了一种式(I)或式(II)所示四氢异喹啉类生物碱在制备α-淀粉酶抑制剂及3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制剂的应用。本发明制备的四氢异喹啉类生物碱及其衍生物，经α-淀粉酶、胰脂肪酶和3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制活性的筛选，发现大多数化合物具有良好的体外活性，可作为进一步开发为3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制剂及α-淀粉酶抑制剂的前体物质。
本发明的四氢异喹啉类生物碱及衍生物结构通式(I)或(II)表示：
结构通式(I)或(II)中R1、R2、R3、R4、R5分别选自氢，卤，-R0，-OR0，-R0CO，-R0COO；所述R0为芳香烃或C1～C12的烷烃；R6选自氢，羟基；R7选自氨基，叔丁氧羰基氨基，9-芴甲氧羰基氨基，苄氧羰基氨基。
特别的，结构通式(II)所涉及的化合物，其C环原料为含苯环氨基酸，符合苄基异喹啉类生物碱和苯乙基四氢异喹啉类生物碱生源合成的途径。
根据本发明中所有四氢异喹啉类生物碱衍生物，其药学上可接受的盐包括通式(I)或(II)化合物与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸等。
本发明中取代四氢异喹啉类生物碱的制备方法包括：醚化反应，碱水解反应，酰氯化反应，N-酰化反应，Bischler-Napieralski反应，亚胺还原反应等。
本发明所制备的四氢异喹啉类生物碱在预防或治疗糖尿病，高脂血症，肥胖或代谢综合征方面疾病的用途，是以α-淀粉酶、胰脂肪酶抑制活性及3T3-L1前脂肪细胞的增值和分化抑制活性的筛选为载体，本发明首次建立了以肠道中α-淀粉酶和胰脂肪酶两种体外消化酶抑制活性的筛选，来评价化合物降糖降脂活性的方法。
其中，α-淀粉酶抑制活性的筛选采用3，5-二硝基水杨酸法，胰脂肪酶采用PNPP显色法，对3T3-L1前脂肪细胞的增殖活性的影响是采用MTT法检测，对细胞分化的影响是通过油红O脂肪染色法检测。
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
油红O脂肪染色法，是一种检测组织或细胞内脂肪的方法。其检测原理是油红O可特异性的对脂肪进行染色，从而可在显微镜下进行直观观察。而染色后的油红O还可通过异丙醇等有机溶剂萃取出来，在520nm波长下进行吸光度值量化测定。3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞的过程中，一个很明显的标志就是细胞内有明显的脂滴富集，故对分化结束后的脂肪细胞进行油红O染色，再进行定量，从而可对总生物碱提取物对3T3-L1前脂肪细胞的分化影响进行检测。
本发明所制备的四氢异喹啉类生物碱及其衍生物，经α-淀粉酶活性筛选，在100μmol/L浓度下均表现出明显的抑制活性，部分化合物在5μmol/L浓度下仍让表现出较明显活性。经胰脂肪酶活性筛选，在100μmol/L浓度下均表现出明显的抑制活性。3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化抑制活性筛选了部分化合物，表现出了极明显的增殖抑制作用及分化抑制作用。
根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明技术思想的前提下，还可以做出其他多种形式的修改，替换和变更。
以下通过实施例形式对上述内容作进一步补充说明，但不应该理解为本发明范围仅限于以下实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1
本发明所筛选化合物的合成与鉴定
所有试剂均为市售化学纯或分析纯。
反应基本过程：四氢异喹啉类的全合成可以以苯乙胺和苯乙酸或氨基酸为中间体原料进行N-酰化缩合，再经Bischler-Napieralski反应得到二氢异喹啉类化合物，再经亚胺还原以及成盐反应，最终得到四氢异喹啉类生物碱盐。中间体原料可通过改变苯乙胺衍生物与苯乙酸衍生物或氨基酸衍生物中苯环上的取代基团，可实现在环上引入各种不同的取代基。
(1)中间体4-烷氧基苯乙酸甲酯(m1）的合成
称取对羟基苯乙酸甲酯0.009mol，无水碳酸钾0.009mol，加入至50mL三颈烧瓶中，回流装置顶端加干燥管或N2保护装置，磁力搅拌，65℃加热30min缓慢滴加溴代烷烃0.01mol，78℃回流反应24h及以上，TLC监测反应完全后，结束反应，减压蒸去溶剂，加入30mL甲基叔丁基醚，依次用20mL，10mL，10mL 5％NaOH溶液洗涤后，再依次用20mL，10mL，10mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥有机层，过滤回收溶剂，得到油状物m1。TLC检测为一点，收率约为95.5％。
(2)4-烷氧基苯乙酸(m2)的合成
取m1于50ml三颈烧瓶中，依次加入10％氢氧化钠10mL和12mL甲醇(1.2倍)，常温下搅拌3h，再加入10％以上盐酸调pH酸性，有白色固体析出，减压抽干得白色固体，TLC检测为一点，收率约为96.8％。
(3)烷氧基苯乙酰氯(m3)的合成
取m2于50mL三颈烧瓶，用二氯甲烷溶清，加入2～3mL SOCl2，再加1滴DMF，N2保护下40℃搅拌3～6小时，旋干得淡黄色油状物0.0075mol，收率约90.6％。直接用作下一步原料。
(4)中间体(m4)的合成
称取3，4-二甲氧基苯乙胺0.85g与12mL乙醚，加入5mL 10％NaOH溶液后搅拌至不分层，缓慢滴加m3(每0.001mol溶于3mL无水乙醚中)。室温反应1h，反应液加入40mL氯仿稀释，取氯仿层，依次用20mL水，20mL稀盐酸(适量以中和NaOH)，20mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去氯仿，得中间体m4：N-6，7-二甲氧基苯乙基-4-烷氧基苯乙酰胺0.0027mol，针状结晶，收率73％，化合物用乙醚，丙酮滤洗纯化，TLC检测为一点，紫外灯254nm下有荧光，碘化铋钾显色橘红。
(5)中间体(m5)的合成
称取m4，用10mL甲苯溶清，加入约1.91g POCl3，95℃下反应1～2h，结束反应，减压蒸去甲苯，得6，7-二甲氧基-1-(4-烷氧基苄基)-1，2-二氢异喹啉，PH调碱性，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥后抽滤，旋干溶剂，得中间体m5约0.0015mol，收率55％，即可直接进行下一步反应。TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。
(6)化合物(m6)的合成
取m5加入15mL甲醇和少量NaOH固体调pH碱性，2g硼氢化钾，冷水浴下磁力搅拌，反应1h后TLC检测反应完全，结束反应，减压蒸去甲醇，加入30mL 10％NaOH溶液，若溶液已呈碱性，则加入30mL水，用3×15mL氯仿萃取，合并萃取液，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收氯仿，得淡黄色油状物m6，滴加氯化氢无水乙醚液，有白色体析出，抽滤，无水乙醚洗，少量丙酮洗，得化合物6，7-二甲氧基-1-(4-烷氧基苄基)-1，2，3，4四氢异喹啉0.00126mol，收率84％，总收率28％。TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。
上述溴代烷烃可替换为溴代芳烃；3，4-二甲氧基苯乙胺可替换为β-苯乙胺或其他取代的苯乙胺；取代苯乙酸可替换为氨基保护的氨基酸，选自苯丙氨酸或酪氨酸时，符合苄基异喹啉类生物碱和苯乙基四氢异喹啉类生物碱生源合成的途径。
特别的，结构通式(II)中原料氨基酸的氨基可选择用叔丁氧羰基、9-芴甲氧羰基或苄氧羰基保护。取代苯乙胺与氨基酸的羧基的N-酰化，可选择以温和条件的酰化催化剂如EDCI等直接缩合。以Boc-L-苯丙氨酸为例，其合成路线如下：
上述路线中，R选自氢，卤，-R0，-OR0，-R0CO，-R0COO；所述R0为芳香烃或C1～C12的烷基。步骤1是以EDCI、HOBt、DMAP为酰化催化剂，直接进行酰胺缩合。步骤2是以脱水剂进行环合，2′、2″都是副反应步骤，d′、d″都是环合反应副产物。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)确定的。NMR的测定是使用Bruker AVANCE-300核磁共振仪，测定溶剂是DMSO-d6，内标为TMS，化学位移是10-6ppm为单位给出。
化合物1：1-(4-乙氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.14(br.s，2H，NH，HCl)，7.15-7.34(m，6H，Ar-H)，6.87(d，2H，Ar-H)，3.95(q，2H，OCH2)，2.87-3.12(m，8H，Ar-CH2，CH2，N-CH2)，1.28(t，3H，OCH3)。
化合物2：1-(4-丙氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.35(br.s.2H)，7.15-7.36(m，6H)，6.87(d，2H)，3.87(t，2H)，2.89-3.10(m，8H)，1.65(m，2H)，0.94(t，3H)。
化合物3：1-(4-丁氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.05(s，2H)，7.39-7.31(m，2H)，7.27(d，J＝5.5Hz，2H)，7.17(d，J＝8.4Hz，2H)，6.90(d，J＝8.3Hz，2H)，3.94(t，J＝6.4Hz，2H)，3.14(s，4H)，3.04-2.83(m，4H)，1.74-1.61(m，2H)，1.51-1.32(m，2H)，0.93(t，J＝7.4Hz，3H)。
化合物4：1-(4-己氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.12(s，2H)，7.40-7.31(m，2H)，7.27(d，J＝5.8Hz，3H)，7.17(d，J＝8.5Hz，2H)，6.89(d，J＝8.6Hz，2H)，3.93(t，J＝6.4Hz，2H)，3.15(d，J＝11.8Hz，5H)，3.04-2.83(m，4H)，1.68(m，2H)，1.40(s，2H)，1.34-1.22(m，4H)，0.88(t，J＝6.8Hz，3H)。
化合物5：1-(4-辛氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.38(s，2H)，7.25(d，J＝8.2Hz，2H)，6.92(d，J＝7.8Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.49(s，1H)，4.58(s，1H)，3.94(t，J＝6.4Hz，2H)，3.73(s，2H)，3.55(s，2H)，3.29-2.81(m，4H)，1.77-1.61(m，2H)，1.41(s，2H)，1.28(m，8H)，0.86(d，J＝6.7Hz，3H)。
化合物6：1-(4-十二烷氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.28(br.s，2H)，7.25(d，J＝8.5Hz，2H)，6.92(d，J＝8.5Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.48(s，1H)，4.58(s，1H)，3.94(t，1H)，3.83(s，2H)，3.74(s，3H)，3.45-3.32(s，2H)，3.19-3.12(s，2H)，3.12-2.81(m，4H)，1.77-1.61(m，2H)，1.25(s，16H)，0.86(t，3H)。
化合物7：1-(4-氯苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.27(s，2H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.35-7.25(m，6H)，4.20-4.02(m，1H)，3.35(s，2H)，3.00(d，J＝6.8Hz，4H)。
化合物8：1-(2，6-二氯基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.91(s，2H)，7.54-7.43(m，2H)，7.43-7.32(m，1H)，7.29-7.19(m，2H)，7.07-6.97(m，1H)，6.45(d，J＝7.8Hz，1H)，4.72(t，J＝7.6Hz，1H)，3.70-3.54(m，3H)，3.43(m，1H)，3.20-3.03(m，2H)。
化合物9：6，7-二甲氧基-1-(4-乙氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.21(br.s.2H)，7.23(d，J＝8.55Hz，2H)，6.90(d，J＝8.52Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.48(s，1H)，4.29(t，1H)，4.0(q，2H)，3.73(s，3H)，3.54(s，3H)，3.17-3.25(m，6H)，1.32(t，3H)，1.32(t，3H)。
化合物10：6，7-二甲氧基-1-(4-丙氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.27(br.d.2H)，7.23(d，J＝8.49Hz，2H)，6.92(d，J＝8.49Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.48(s，1H)，4.29(s，1H)，3.89(t，2H)，3.73(s，3H)，3.54(s，3H)，2.9-3.30(m，6H)，2.08(s，1H)，1.68(m，2H)，0.94(t，3H)。
化合物11：6，7-二甲氧基-1-(4-丁氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.34(s，1H)，9.23(s，1H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，6.92(d，J＝8.5Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.48(s，1H)，4.58(s，1H)，3.96(t，J＝6.4Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.55(s，3H)，3.46-3.20(m，9H)，2.96(m，2H)，1.75-1.62(m，2H)，1.43(m，2H)，0.93(t，J＝7.3Hz，3H)。
化合物12：6，7-二甲氧基-1-(4-己氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.53(s，2H)，7.25(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(d，J＝8.5Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.46(s，1H)，4.56(s，1H)，4.10(s，4H)，3.94(t，J＝6.4Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.54(s，3H)，3.26-2.79(m，6H)，1.68(m，2H)，1.41(s，2H)，1.35-1.23(m，4H)，0.88(t，J＝6.5Hz，3H)。
化合物13：6，7-二甲氧基-1-(4-辛氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.37(s，2H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，6.91(d，J＝8.6Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.48(s，1H)，4.57(s，1H)，3.94(t，J＝6.3Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.55(s，3H)，3.49-3.19(m，6H)，2.96(m，2H)，1.76-1.61(m，2H)，1.32(m，9H)，0.86(d，J＝6.7Hz，3H)。
化合物14：6，7-二甲氧基-1-(4-十二烷氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.28(d，2H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，6.92(d，J＝8.5Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.48(s，1H)，4.58(s，1H)，3.94(t，J＝6.4Hz，2H)，3.83(s，2H)，3.74(s，3H)，3.55(s，3H)，3.43-3.19(m，5H)，3.05-2.82(m，2H)，1.69(d，J＝6.9Hz，2H)，1.40(s，2H)，1.25(s，15H)，0.86(t，J＝6.6Hz，3H)。
化合物15：6，7-二甲氧基-1-(4-氯苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.47(s，2H)，7.42(d，J＝9.2Hz，4H)，6.80(s，1H)，6.56(s，1H)，4.64(s，1H)，3.74(s，3H)，3.59(s，3H)，3.47-3.39(m，3H)，3.30-3.11(m，2H)，2.96(m，2H)，2.09(s，1H)。
化合物16：6，7-二甲氧基-1-(2，6-二氯苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.87(br.s，2H)，7.51(d，J＝7.9Hz，2H)，7.43-7.35(m，1H)，6.81(s，1H)，5.69(s，1H)，4.61(t，J＝7.7Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.65-3.39(m，5H)，3.28(s，3H)，3.01(s，2H)。
化合物17：1-(4-苄氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.25(d，2H)，7.43(m，2H)，7.36(m3H)，7.27(d，J＝6.1Hz，2H)，7.18(d，J＝8.6Hz，2H)，7.00(t，J＝8.6Hz，2H)，5.10(d，J＝4.2Hz，2H)，4.12(s，1H)，3.35(s，3H)，3.01-2.88(m，3H)，1.23(s，1H)。
化合物18：6，7-二甲氧基-1-(4-苄氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.60(s，2H)，7.49-7.32(m，5H)，7.28(d，J＝8.5Hz，2H)，7.00(d，J＝8.5Hz，2H)，6.77(s，1H)，6.43(s，1H)，5.11(s，2H)，4.56(t，J＝6.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.50(s，3H)，3.37(s，2H)，3.32-3.18(m，3H)，3.07-2.82(m，2H)。
化合物19：6，7-二甲氧基-1-(4-甲氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.25(s，2H)，7.27(d，J＝8.6Hz，2H)，6.94(d，J＝8.5Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.49(s，1H)，4.59(s，1H)，3.75(d，J＝3.0Hz，3H)，3.73(s，3H)，3.56(s，3H)，3.21(m，3H)，3.03-2.86(m，2H)。
化合物20：1-(4-甲氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.20(s，2H)，7.38-7.30(m，2H)，7.27(m，2H)，7.18(d，J＝8.6Hz，2H)，6.90(d，J＝8.6Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.35(s，2H)，3.12(s，4H)，3.03-2.88(m，4H)。
化合物21：6，7-二甲氧基-1-(2-甲氧基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.39(s，2H)，7.32(t，J＝7.9Hz，1H)，7.21(d，J＝7.1Hz，1H)，7.06(d，J＝8.2Hz，1H)，6.93(t，J＝7.0Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.28(s，1H)，4.58(t，J＝7.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，3.73(s，3H)，3.49(s，3H)，3.34(s，2H)，3.23(d，J＝7.1Hz，2H)，2.97(d，J＝6.9Hz，2H)。
化合物22：6，7-二甲氧基-1-(4-甲基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.42(s，2H)，7.21(m，4H)，6.78(s，1H)，6.45(s，1H)，4.61(t，J＝7.0Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.53(s，3H)，3.39-3.09(m，6H)，2.94(m，2H)，2.31(s，3H)。
化合物23：1-(4-甲基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.09(s，2H)，7.34(d，J＝6.1Hz，2H)，7.29-7.25(m，2H)，7.15(s，4H)，3.34(s，2H)，3.15(m，4H)，2.94(m，4H)，2.28(s，3H)。
化合物24：6，7-二甲氧基-1-(2-甲基苄基)-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.42(s，2H)，7.21(dd，J＝20.7，7.9Hz，4H)，6.78(s，1H)，6.45(s，1H)，4.61(t，J＝7.0Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.53(s，3H)，3.39-3.09(m，6H)，2.94(m，2H)，2.31(s，3H)。
化合物25：6-乙氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.32(s，2H)，7.26-7.34(m，5H)，6.69-6.77(m，2H)，6.93(d，J＝8.7Hz，1H)，4.67(br.s，1H)，3.84(q，J＝6.9Hz，2H)，2.89-3.34(m，6H)，1.28(t，J＝6.9Hz，3H)。
化合物26：6-甲氧基-7-丙氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.50(s，2H)，7.27-7.39(m，5H)，6.78(s，1H)，6.37(s，1H)，4.65(br.s，1H)，3.73(s，3H)，3.59(m，2H)，2.87-3.36(m，6H)，1.60(m，2H)，0.89(t，J＝7.5Hz，3H)。
化合物27：6，7-二乙氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.54(s，2H)，7.27-7.36(m，5H)，6.77(s，1H)，6.40(s，1H)，4.63(t，J＝6.9Hz，1H)，3.98(q，J＝6.9Hz，2H)，3.72(q，J＝6.9Hz，2H)，2.88-3.36(m，6H)，1.30(t，J＝6.9Hz，3H)，1.20(t，J＝6.9Hz，3H)。
化合物28：6，7-二丙氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.45(s，2H)，7.29-7.40(m，5H)，6.78(s，1H)，6.39(s，1H)，4.64(br.s，1H)，3.88(t，J＝6.3Hz，2H)，3.61(t，J＝6.3Hz，2H)，2.85-3.37(m，6H)，1.71(m，2H)，1.58(m，2H)，0.96(s，J＝7.5Hz，3H)，0.90(s，J＝7.5Hz，3H)。
化合物29：6-丁氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.37(br.s，2H)，7.32(m，5H)，6.96(d，J＝8.5Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.72-6.76(dd，J＝8.5Hz，2.4Hz，1H)，4.69(br.s.1H)，3.94(s，J＝6.4Hz，2H)，2.97-3.36(m，6H)，1.66(m，J＝7.6Hz，2H)，1.42(m，J＝7.6Hz，2H)，0.92(t，J＝7.3Hz，3H)。
化合物30：7-丁氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，8.99(br.s，2H)，7.31(m，5H)，7.17(m，J＝8.4Hz，2H)，6.89(d，J＝8.6Hz，1H)，4.67(br.s.1H)，3.94(s，J＝6.45Hz，2H)，2.97-3.36(m，6H)，1.68(m，J＝7.6Hz，2H)，1.42(m，J＝7.6Hz，2H)，0.92(t，J＝7.3Hz，3H)。
化合物31：6，7-丁氧基-1-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐的制备：制法同上，得白色固体化合物，TLC检测为一点，紫外灯254nm下及365nm下均有荧光，碘化铋钾显色橘红。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)，9.41(s，2H)，7.32(m，5H)，6.79(s，1H)，6.38(s，1H)，4.65(s，1H)，3.91(t，J＝6.5Hz，3H)，3.63(m，3H)，3.27-3.37(m，4H)，2.89-2.95(m，2H)，1.61(m，4H)，1.38(m，4H)，0.91(q，J＝7.4Hz，3H)。
实施例2
取代四氢异喹啉衍生物α-淀粉酶抑制活性的测定。
测定仪器为THERMO Varioskan Flash全波长多功能酶标仪。
以实施例1方法所得的化合物以以下方法测α-淀粉酶抑制活性：
实验原理：利用α淀粉酶水解淀粉产生的麦芽糖与3，5-二硝基水杨酸(DNS显色剂)显色的原理设计。二硝基水杨酸(DNS显色剂)与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与麦芽糖含量成比例关系，用比色法测定麦芽糖含量。
溶液配制：pH 6.9的磷酸盐缓冲溶液；磷酸盐缓冲液溶解的可溶性淀粉作为底物溶液；由3，5-二硝基水杨酸和酒石酸钾钠配制的DNS显色剂；α-淀粉酶溶液；精密称取化合物样品10-5mol，加少量DMSO溶解后，加PBS稀释到所需浓度的样品溶液。
测定时每个样品有4个体系：样品组(取0.25mL的酶溶液，0.1mL的样品抑制剂)，空白组(不加酶)，阳性对照组(不加抑制剂)，阴性对照组(不加酶和抑制剂)。加完，37℃预热10min。后加入0.5mL同样已预热的底物溶液，按最佳反应时间3min进行反应，后加入0.5mL DNS显色剂，混合后沸水加热显色。冷却至室温后加入适量去离子水稀释至2mL，移液枪吸取0.1mL至96孔板，并在540nm处测定吸光度值。
扣除空白后，在540nm处测得样品组吸光度为AI，扣除阴性后，在540nm处测定阳性对照组吸光度为AE。每个样品水平测定3次，依公式计算抑制率。
样品单体抑制率(％)＝[(AE-AI)/AE]×100％。对于抑制率高于50％的化合物，选择5个浓度测定其抑制率，每个样品重复3次，并计算该化合物IC50值。
表1：在100μmol/L浓度下化合物的抑制率及IC50
测定结果表明：本发明公开的部分化合物对α-淀粉酶具有抑制作用，且呈现一定的构效关系。其中，C环引入基团的链长对活性影响较大，在R1、R4、R5位引入较大疏水基团时，其α-淀粉酶抑制活性也相应增大。4′位烷氧基的碳链长度在2～8时，其抑制活性随碳链长度增加。
实施例3
取代四氢异喹啉衍生物胰脂肪酶活性的测定。
以实施例1方法所得的化合物以以下方法测胰脂肪酶活性：
实验原理：胰脂肪酶能水解4-硝基苯棕榈酸酯(PNPP)产生黄色的4-硝基苯酚(PNP)和棕榈酸，PNP在水溶液中显黄色，且其最大吸收波长为405nm，因此可以通过测定在405nm处的吸光度来计算出PNP的含量变化，来测得胰脂肪酶活力。
溶液配制：样品化合物，先用少量DMSO溶解后，再加Tris-HCl缓冲液稀释到所需浓度。胰脂肪酶用Tris-HCl缓冲液配成1.2mg/mL的酶溶液，PNPP先用少量异丙醇溶解，再加Tris-HCl缓冲液稀释配制成1mmol/L的底物溶液。
测定时每个样品由4个体系：样品组(取0.05mL的酶溶液，0.02mL的样品抑制剂，0.11mL的缓冲液)，空白组(不加酶)，阳性对照组(不加抑制剂)，阴性对照组(不加酶和抑制剂)。于37℃水浴下保温10min，然后加入1mmol/L的底物溶液，在37℃水浴下反应30min。在405nm波长下测定各体系吸光度值。
以空白组调零，测定样品组吸光度，即为AI；以阴性对照组调零，测定阳性对照组吸光度，即为AE。每个样品的每个浓度水平重复测定3次。
根据公式计算抑制率。样品单体抑制率(％)＝[(AE-AI)/AE]×100％。对于抑制率高于50％的化合物，选择5个浓度测定其抑制率，每个样品重复3次，并计算该化合物IC50值。
表2：在100μmol/L浓度下抑制率高于50％的化合物的IC50值
测定结果表明，本发明公开的部分化合物对胰脂肪酶具有抑制作用，且呈现一定的构效关系。
实施例4
取代四氢异喹啉衍生物对3T3-L1前脂肪细胞增殖抑制活性的测定。
细胞株：3T3-L1前脂肪细胞，购于中科院上海细胞库。
主要试剂或仪器：胎牛血清(FBS)，DMEM培养基购于Gibco公司。酶联免疫检测仪Thermo Electron Corporation 1500；倒置显微镜，重庆光学仪器厂XSZ-D2；脱色摇床，金坛市医疗仪器厂TY-80R。
以实施例1方法所得的化合物以MTT法测对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性影响：
收集3T3-L1对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入200μL细胞悬浮液铺板，使细胞密度至2000-5000个细胞/孔(边缘孔用无菌PBS填充)。5％CO2，37℃孵育12h，至细胞生长至合适密度，单层贴壁孔底(96孔平底板)，吸出孔中原培养液，给药组换上浓度100μg/mL和200μg/mL样品化合物的200μL完全培养基，空白组和细胞对照组换上200uL完全培养基。设6个复孔。5％CO2，37℃孵育24h，显微镜下观察。每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL，即0.5％MTT)，继续培养4h。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。细胞存活率＝(给药组OD值-空白对照组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)*100％。重复实验3次。抑制率＝1-细胞存活率。
实施例5
取代四氢异喹啉衍生物对3T3-L1前脂肪细胞分化抑制活性的测定。
以实施例1方法所得的化合物以油红O脂肪染色法测对3T3-L1前脂肪细胞分化抑制活性：首先是细胞分化，收集3T3-L1对数期细胞，调整细胞悬液浓度，得细胞浓度为(2-3)*104个/mL，将细胞接种于24孔培养板，每孔加入细胞悬液1mL，每种处理设6个复孔。先使用含10％FBS的完全培养基培养2d，当细胞长满后更换新的完全培养液1mL继续培养2d，使细胞达到接触抑制。然后更换为含10μg/mL胰岛素、0.5mmol/LIBMX、1μmol/L DEX的完全培养液(细胞初级诱导液)1mL，培养2d后，换只含10μg/mL胰岛素的完全培养液1mL，培养2d，再换用完全培养液1mL培养1～3d，直到分化结束，90％左右细胞呈脂肪细胞表型。给药组完全培养液中除上述分化过程中需要的药物外，自分化第1d起，同时加入样品溶液，使终浓度分别为10μg/mL和20μg/mL，直至分化结束。
分化结束后进行油红O染色及吸光度值测定：小心移去24孔板中的细胞培养液，注意不要将细胞吸走以及吹散，加入0.5mL PBS清洗3次，吸走及加液的过程要轻柔。加入0.5mL 4％多聚甲醛PBS水溶液固定15min，PBS洗3次。将细胞瞭干20min，加入0.5mL油红O染液，染色30min后去除染液，再加适量70％乙醇迅速清洗细胞1次清除多余的染料，加纯水洗3次。置于倒置显微镜下观察并拍摄照片。加入1mL异丙醇，于520nm波长下测定吸光值。
实施例6：化合物对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响
对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性影响的研究。结果表明，与各化合物在不同浓度下培养24h，抑制率随浓度升高而增大，与对照组相比，存在显著性差异(p＜0.01)，具有统计学意义。
MTT实验数据表明，当化合物浓度达到50μmol/L时，化合物对3T3-L1前脂肪细胞表现出了极明显的增殖抑制作用，其抑制率如表3所示：
表3：浓度为50μmol/L时，部分化合物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖抑制作用
实施例7：化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响
对3T3-L1前脂肪细胞分化影响的研究结果表明，在不同浓度药物作用下，3T3-L1前脂肪细胞的分化受到不同程度的抑制，且随着药物浓度的升高，抑制作用也在增强，细胞中的脂肪积累逐渐减少，油红O染色后于镜下的观察中，给药组和对照组有明显差异。通过对油红O吸光度值定量发现，当化合物浓度达到10μmol/L时，化合物对3T3-L1前脂肪细胞表现出了极明显的分化抑制作用，其抑制率如下表4所示：
表4：浓度为10μmol/L时，部分化合物对3T3-L1前脂肪细胞的分化抑制作用