亡检测试剂盒说明书操作，分别加入Annexin V -FITC和PI Staining Solution混勾，用流式细胞仪检测，得到细胞凋亡率。
[0033] L 3统计学处理
[0034] 实验数据均以均数土标准差（X 土SD )表示，各组间数据比较用SPSS 17. 0软件 包，采用单因素方差分析（ANOVA)进行显著性分析。
[0035] L 4实验结果
[0036] I. 4. IMTT法检测甘草次酸对辐射所致细胞损伤的保护作用
[0037] 如表1所示，接受20Gy6°C〇-Y射线辐射后，模型组的细胞存活率为 79. 12±2. 52%，甘草次酸给药组（10 μ M)存活率为92. 50±4. 55%，与模型组相比差异具 有统计学意义（Ρ〈〇. 05)。而甘草酸、甘草黄酮组的细胞存活率分别为88. 24±5. 17%，存活 率为 84. 36±4. 29%。
[0038] 表1MTT法检测甘草次酸对辐射所致细胞损伤的保护作用（.r士SD，η = 3)
[0039]
[0040] *Ρ〈0· O5VS 模型组
[0041] I. 4. 2流式细胞术检测各组细胞凋亡情况
[0042] 如表2所示，接受20Gy6°C〇- γ射线辐射后，模型组细胞凋亡率显著性增加 (Ρ〈0. 01);与模型组相比，给药组（10 μΜ)的细胞凋亡率明显低于模型组（Ρ〈0. 05)。
[0043] 表2甘草次酸对辐射引起细胞凋亡的影响（X士SD, η = 3)
[0044]
[0045] ##Ρ〈0. 05模型组vs正常组；*Ρ〈0. 05甘草次酸组vs模型组
[0046] 实施例2.甘草次酸对辐射引起小鼠损伤的保护作用
[0047] 2. 1实验材料
[0048] 甘草次酸，购自大连美仑生物技术有限公司。
[0049] C57小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号码 SCXK (沪）2012-0002。
[0050] 2. 2实验方法
[0051] 2. 2. 1甘草次酸对辐射引起小鼠生存率的影响
[0052] C57小鼠灌胃给予不同剂量的甘草次酸（30, 60mg/kg/d)两周，然后以8Gy6°C〇-y 射线辐射，辐射后小鼠继续灌胃给药，观察辐射后30天内小鼠的生存率。
[0053] 2. 2. 2甘草次酸对辐射引起小鼠小肠组织损伤的影响
[0054] C57小鼠灌胃给予甘草次酸（60mg/kg/d)两周后，接受4Gy6°C〇- γ射线福射，福射 后小鼠继续灌胃给药，辐射7天后用水合氯醛麻醉小鼠，取小鼠小肠组织，用生理盐水冲洗 血液，置于冰上，立即放入戊二醛固定液固定4h，PBS缓冲液冲洗后采用锇酸固定2h，梯度 酒精脱水，每次l〇min，脱水后用Epon812环氧树脂包埋，包埋后采用切片机切片，用透射电 镜观察各组小肠组织的超微结构变化。
[0055] 2. 3统计学处理
[0056] 实验数据均以均数土标准差（X士SD )表示，各组间数据比较用SPSS 17. O软件 包，采用单因素方差分析（ANOVA)进行显著性分析。
[0057] 2. 4实验结果
[0058] 2. 4. 1甘草次酸对6°Co辐射C57小鼠生存率的影响
[0059] 如图1所示，辐射模型组小鼠的生存期均未超过11天；同模型组相比，甘草次酸低 剂量、高剂量组的生存率得到明显的改善。高剂量组的小鼠最长存活到第18天。甘草次酸 显著提高了 SGy致死剂量辐射后小鼠的生存率。
[0060] 2. 4. 2甘草次酸对6°Co辐射C57小鼠后肠道损伤的病理组织学观察
[0061] 如图2所示，透射电镜结果显示：4Gy6°C〇-Y射线辐射会引起小鼠肠道组织损伤， 小肠部分上皮细胞细胞核染色质聚集，胞浆内有较多大小不等的空泡，细胞表皮微绒毛排 列紊乱，部分断裂（图2B);甘草次酸^Omg/kg/d)给药组小肠损伤程度低于模型组，小肠 绒毛排列稀疏，但未见断裂，胞浆内有少量空泡结构（图2C)。
[0062] 从以上实验可以得出如下结论：在6°Co_Y射线辐射的情况下，会导致细胞存活率 降低和细胞出现凋亡、小鼠的生存率减短和小肠组织出现病变，而辐射前给予甘草次酸后 细胞的存活率增加和细胞凋亡显著性减少，动物生存率明显延长核小肠组织病变减轻。结 果表明，甘草次酸具有抗γ射线辐射损伤作用。
[0063] 以上实验结果说明，甘草次酸对生物体具有抗辐射作用，可将甘草次酸制成生物 体抗辐射保护剂，并用可行的剂量和剂型对生物体进行干预，以达到保护γ射线辐射下的 生物体的目的。这些均属于本发明的保护范围。
[0064] 以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述 实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的 变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
【主权项】
1. 甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用。2. 根据权利要求1所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于，所述的 抗辐射产品为预防或治疗辐射损伤的药物、保健食品，或保健饮料。3. 根据权利要求2所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于，所述的 药物为甘草次酸作为唯一活性成份或包含甘草次酸的药物组合物。4. 根据权利要求3所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于，所述的 药物中，甘草次酸的含量为>50 %。5. 根据权利要求3所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于，所述的 药物中，甘草次酸按常规药剂学制成各种药物剂型。6. 根据权利要求5所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于，所述的 剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、膏剂、贴剂或注射剂。7. 根据权利要求1至6任一所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于， 所述的辐射为核辐射、电离辐射。8. 根据权利要求1至6任一所述的甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用，其特征在于， 所述的辐射为Y射线辐射。
【专利摘要】本发明涉及医药、食品、饮料等技术领域，本发明提供了甘草次酸在制备抗辐射产品中的应用。本发明经细胞实验、动物实验证实，甘草次酸可以提高γ射线辐射后细胞和动物的存活率，减少γ射线引起的细胞凋亡，改善辐射小鼠小肠组织的病变，说明甘草次酸具有抗辐射保护作用。
【IPC分类】A23L2/38, A23L2/52, A61P39/00, A61K31/56, A61P17/16, A23L1/29
【公开号】CN104997787
【申请号】CN201510376808
【发明人】王静, 侯楠, 刘玉兰, 朱秋珍, 程浩, 柴逸峰, 高越, 章越凡, 李铁军, 芮耀诚
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月1日