小时，在90°C下加热回流提取4次，每次3 h，得到提 取液，该提取液经减压干燥至膏状即得。
[0035] 减压干燥条件是指真空度为0· 08 MPa，温度为40°C。
[0036] ⑵微孔树脂除杂： 将异叶青兰弱极性类组分部位用其质量10倍的体积分数为90%的甲醇溶液溶解，过滤 得到滤液，该滤液上微孔树脂柱分离，用5倍柱体积且体积分数为90%的甲醇溶液洗脱，收 集90%的甲醇溶液洗脱物；90%的甲醇溶液洗脱物经减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰五环 三萜类组分粗品1422. 8 g。
[0037] 其中：微孔树脂是指MCI型树脂柱。
[0038] 异叶青兰弱极性类组分部位与微孔树脂比例为I g :30 mL。
[0039] 减压干燥条件是指真空度为0· 08 MPa，温度为40°C。
[0040] ⑶硅胶柱层析分离： 将异叶青兰五环三萜类组分粗品经硅胶柱色谱分离，用5倍柱体积的石油醚-乙酸乙 酯混合溶剂洗脱，按每份1000 mL收集馏分，并采用薄层色谱检测，其中展开剂为石油醚、乙 酸乙酯按7 :3的体积比（mL/ mL)混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙 醇溶液，合并收集Rf值为〇. 2~0. 8的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈淡黄色粉末状的异叶 青兰五环三萜类组分916.4 g。
[0041] 其中：硅胶柱的尺寸为80 mmX 100 cm。
[0042] 石油醚-乙酸乙酯混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按9 :1的体积比（mL/ mL)混 合而成。
[0043] 减压干燥条件是指真空度为0· 08 MPa，温度为40°C。
[0044] 实施例3 -种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，包括以下步骤： ⑴液液分配富集： 2. 0 Kg异叶青兰植物醇提物用其质量30倍的分析纯水分散，得到分散液，该分散液用 其30倍体积的石油醚萃取3次，合并得到石油醚萃取液；石油醚萃取液经减压干燥得异叶 青兰弱极性类组分部位669. I g。
[0045] 其中：异叶青兰植物醇提物是指将异叶青兰植物阴干、粉碎后，加入其质量14倍 的体积浓度为95%乙醇溶液浸泡12个小时，在85°C下加热回流提取3次，每次3 h，得到提 取液，该提取液经减压干燥至膏状即得。
[0046] 减压干燥条件是指真空度为0· 06 MPa，温度为50°C。
[0047] ⑵微孔树脂除杂： 将异叶青兰弱极性类组分部位用其质量8倍的体积分数为95%的甲醇溶液溶解，过滤 得到滤液，该滤液上微孔树脂柱分离，用4倍柱体积且体积分数为95%的甲醇溶液洗脱，收 集95%的甲醇溶液洗脱物；95%的甲醇溶液洗脱物经减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰五环 三萜类组分粗品545. 6 g。
[0048] 其中：微孔树脂是指HP20SS型树脂柱。
[0049] 异叶青兰弱极性类组分部位与微孔树脂比例为I g :30 mL。
[0050] 减压干燥条件是指真空度为0· 06 MPa，温度为50°C。
[0051] ⑶硅胶柱层析分离： 将异叶青兰五环三萜类组分粗品经硅胶柱色谱分离，用4倍柱体积的石油醚-乙酸乙 酯混合溶剂洗脱，按每份800 mL收集馏分，并采用薄层色谱检测，其中展开剂为石油醚、乙 酸乙酯按7 :3的体积比（mL/ mL)混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙 醇溶液，合并收集Rf值为〇. 2~0. 8的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈淡黄色粉末状的异叶 青兰五环三萜类组分359. 4 g。
[0052] 其中：硅胶柱的尺寸为50 mm X 80 cm。
[0053] 石油醚-乙酸乙酯混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按7 :3的体积比（mL/ mL)混 合而成。
[0054] 减压干燥条件是指真空度为0· 06 MPa，温度为50°C。
[0055] 上述实施例1~3所制得的异叶青兰五环三萜类组分在制备抗肝炎病毒药物或保 健食品中的应用是指：该异叶青兰五环三萜类组分作为有效组分按常规方法与药学上可接 受的任何载体制成各类抗肝炎病毒药用制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可 接受的任何载体制成各类保健类食品。
【主权项】
1. 一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，包括以下步骤： ⑴液液分配富集： 异叶青兰植物醇提物用其质量20~50倍的分析纯水分散，得到分散液，该分散液用其 20~50倍体积的石油醚萃取3次，合并得到石油醚萃取液；所述石油醚萃取液经减压干燥得 异叶青兰弱极性类组分部位； ⑵微孔树脂除杂： 将所述异叶青兰弱极性类组分部位用其质量5~10倍的体积分数为90~100%的甲醇溶 液溶解，过滤得到滤液，该滤液上微孔树脂柱分离，用3~5倍柱体积且体积分数为90~100% 的甲醇溶液洗脱，收集90~100%的甲醇溶液洗脱物；所述90~100%的甲醇溶液洗脱物经减压 干燥，即得呈黄色的异叶青兰五环三萜类组分粗品；所述异叶青兰弱极性类组分部位与所 述微孔树脂比例为I g :30 mL ; ⑶硅胶柱层析分离： 将所述异叶青兰五环三萜类组分粗品经硅胶柱色谱分离，用3~5倍柱体积的石油 醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，按每份500~1000 mL收集馏分，并采用薄层色谱检测，其中展 开剂为石油醚、乙酸乙酯按7 :3的体积比混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓 硫酸乙醇溶液，合并收集Rf值为0. 2~0. 8的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈淡黄色粉末状 的异叶青兰五环三萜类组分。2. 如权利要求1所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，其特征 在于：所述步骤⑴中异叶青兰植物醇提物是指将异叶青兰植物阴干、粉碎后，加入其质量 8~20倍的体积浓度为95%乙醇或甲醇溶液浸泡10~15个小时，在80~90°C下加热回流提取 2~4次，每次3 h，得到提取液，该提取液经减压干燥至膏状即得。3. 如权利要求1或2所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，其特征 在于：所述减压干燥条件是指真空度为〇. 〇5~0. 08 MPa，温度为40~60°C。4. 如权利要求1所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，其特征在 于：所述步骤⑵中微孔树脂是指HP20SS型树脂柱或MCI型树脂柱。5. 如权利要求1所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，其特征在 于：所述步骤⑶中硅胶柱的尺寸为30 mm~80謹X60 cm~100 cm。6. 如权利要求1所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，其特征在 于：所述步骤⑶中石油醚-乙酸乙酯混合溶剂是指石油醚和乙酸乙酯按9 :1~5 :5的体积比 混合而成。7. 如权利要求1所述的一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法制得的异叶 青兰五环三萜类组分在制备抗肝炎病毒药物或保健食品中的应用，其特征在于：该异叶青 兰五环三萜类组分作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗肝炎 病毒药用制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可接受的任何载体制成各类保健 类食品。
【专利摘要】本发明涉及一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法，该方法包括以下步骤：⑴液液分配富集：异叶青兰植物醇提物经分散、萃取、减压干燥得异叶青兰弱极性类组分部位；⑵微孔树脂除杂：将异叶青兰弱极性类组分部位溶解、过滤、上微孔树脂柱分离、洗脱，收集洗脱物；所述洗脱物经减压干燥，即得呈黄色的异叶青兰五环三萜类组分粗品；⑶硅胶柱层析分离：将异叶青兰五环三萜类组分粗品经硅胶柱色谱分离、洗脱，并采用薄层色谱检测，合并收集Rf值为0.2~0.8的馏分，该馏分经减压干燥，即得呈淡黄色粉末状的异叶青兰五环三萜类组分。本发明工艺简单、易规模化。同时，本发明还公开了该异叶青兰五环三萜类组分在制备抗肝炎病毒药物或保健食品中的应用。
【IPC分类】A61P31/14, A23L1/29, A61K36/53, A61P31/20
【公开号】CN104997840
【申请号】CN201510412394
【发明人】王启兰, 党军, 陶燕铎, 王蒲, 岳会兰, 邵赟, 卢晓华, 郑威
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月15日