1M磷酸根离子的溶液，混匀，离心过滤除去溶液；去离子水洗涤，干燥即得到CaP-PLA/PLGA微球。
[0016]在其中一个实施方案中，所述制备方法包括:
[0017]1)将PLA/PLGA溶于二氯甲烷和乙酸乙酯的混合油相0,二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为10: 1?2: 1，PLA/PLGA浓度是1 %?60%质量体积浓度；
[0018]2)含0.1M的钙离子溶液作为内水相％ ;
[0019]3)溶解了 PVA的水溶液作为外水相W2，其中PVA浓度为0.2%?10%质量体积浓度；
[0020]4)将％加入到0中，采用超声或均质方法制备初乳液V〇,将此初乳液V〇加入到W2中，采用机械搅拌方法制备预复乳液W/0/% ;
[0021]5)随后将此预复乳液Wi/O/^转移到快速膜乳化的储料罐中，在适当的氮气压力下反复过膜，过膜次数为2?8次，得到粒径均一的复乳液ΙΑ)/% ;
[0022]6)向复乳液W/0/%体系中添加含0.1M磷酸根离子的水溶液，混匀后，离心过滤除去溶液，去离子水洗涤，真空干燥即得到CaP-PLA/PLGA纳微球。
[0023]在另一实施方案中，所述方法包括:
[0024]1)将PLA/PLGA溶于二氯甲烷和乙酸乙酯的混合油相0,二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为7: 1?3: 1，PLA/PLGA浓度是10%?50%质量体积浓度；
[0025]2)含0.1M的钙离子溶液作为内水相％，其中钙离子来源于氯化钙；
[0026]3)溶解了 PVA的水溶液作为外水相W2，其中PVA浓度为2%?5%质量体积浓度；
[0027]4)将1加入到0中，采用超声或均质方法制备初乳液1/0,其中％和0的体积比为1: 100至1: 1，乳化时间是1?lOmin ;将此初乳液I/O加入到W2中，采用机械搅拌方法制备预复乳液V〇/W2，其中的体积比是1: 50?1: 200,乳化时间是5?15min ；
[0028]5)随后将此预复乳液W/0/%转移到快速膜乳化的储料罐中，在0.1-lMpa的氮气压力下反复过膜，过膜次数为3?5次，得到粒径均一的复乳液ΙΑ)/%，其中所述膜为SPG膜。
[0029]6)向复乳液W/0/%体系中添加含0.1M磷酸根离子的水溶液，混匀后，离心过滤除去溶液，微球经过去离子水洗涤3?5次，冷冻干燥即得到CaP-PLA/PLGA纳微球。
[0030]在另一实施方案中，所述方法包括:
[0031]1)将PLA/PLGA溶于二氯甲烷和乙酸乙酯的混合油相0中，二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为4: 1，PLA/PLGA浓度是25%质量体积浓度；
[0032]2)含0.1M的钙离子的水溶液作为内水相％，其中钙离子来源于氯化钙；
[0033]3)溶解了 PVA的水溶液作为外水相W2，其中PVA浓度为3 %质量体积浓度；
[0034]4)将1加入到0中，采用超声方法制备初乳液V0,其中1和0的体积比为1: 45,乳化时间是4min ;将此初乳液Wi/Ο加入到W2中，采用机械搅拌方法制备预复乳液W/0/%，其中1/0和W2的体积比是1: 75,乳化时间是8min ;
[0035]5)随后将此预复乳液W/0/%转移到快速膜乳化的储料罐中，在0.8Mpa的氮气压力下反复过膜，过膜次数为3次，得到粒径均一的复乳液ΙΑ)/%，其中所述膜为SPG膜，孔径大小为2.8微米。
[0036]6)向复乳液W/0/%体系中添加含磷酸根离子的水溶液，混匀后，离心过滤除去溶液，纳微球经过去离子水洗涤3次，冷冻干燥即得到CaP-PLA/PLGA纳微球，其中所述水溶液是浓度为〇.1M的磷酸氢二钠或磷酸二氢钠水溶液。
[〇〇37]在另一实施方案中，所述方法包括:
[0038]1)将PLA/PLGA溶于二氯甲烷和乙酸乙酯的混合油相0,二氯甲烷和乙酸乙酯的体积比为3: 1，PLA/PLGA浓度是40%质量体积浓度；
[0039]2)含0.1M的氯化钙的水溶液作为内水相I，；
[0040]3)溶解了 PVA的水溶液作为外水相W2，其中PVA浓度为4%质量体积浓度；
[0041]4)将1加入到0中，采用超声或均质方法制备初乳液1/0,其中％和0的体积比为1: 20,乳化时间是7min ;将此初乳液V0加入到W2中，采用机械搅拌方法制备预复乳液1/0/%，其中W/0和W2的体积比是1: 120,乳化时间是12分钟；
[0042]5)随后将此预复乳液W/0/%转移到快速膜乳化的储料罐中，在0.，9Mpa的氮气压力下过膜，得到粒径均一的复乳液Wi/0/%，其中所述膜为SPG膜，膜孔径大小为2.8微米。
[0043]6)向复乳液W/0/%体系中添加含0.1M磷酸氢二钠的水溶液，混匀后，离心过滤除去溶液，纳微球经过去离子水洗涤3次，冷冻干燥即得到CaP-PLA/PLGA纳微球。
[0044]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球。
[0045]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球的用途，包括作为免疫佐剂的用途。其中纳微球与免疫抗原的质量比是1: 0.005?1: 0.1。
[0046]本
【发明内容】
还包括一种含有佐剂的疫苗组合物，其特征在于:所述佐剂是CaP-PLA纳微球或CaP-PLGA纳微球。其中佐剂的浓度是1?40mg/mL。优选的，所述佐剂的浓度是5?20mg/mL。
[0047]本
【发明内容】
还包括一种含有佐剂的疫苗组合物，其特征在于:所述佐剂是CaP-PLA纳微球或CaP-PLGA纳微球。其中佐剂的浓度是1?40mg/mL。优选的，所述佐剂的浓度是5?20mg/mL。其中所述疫苗选自HBsAg疫苗，重组蛋白HA，季节性流感全病毒灭活病毒，季节性流感裂解蛋白抗原。
[0048]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为免疫佐剂的用途，包括作为HBsAg抗原佐剂的用途。其中微球与HBsAg抗原的质量比是1: 0.005?1: 0.1。
[0049]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为免疫佐剂的用途，包括作为重组蛋白HA，季节性流感全病毒灭活病毒，季节性流感裂解蛋白抗原佐剂的用途。其中微球与HBsAg抗原的质量比是1: 0.005?1: 0.1。
[0050]本
【发明内容】
还包括一种含有佐剂的HBsAg疫苗，其特征在于:所述佐剂是CaP-PLA纳微球或CaP-PLGA纳微球。
[0051]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为免疫佐剂的应用方法。
[0052]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为HBsAg抗原免疫佐剂的应用方法。包括:
[0053]1)称取采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球5?10mg ;
[0054]2)将上述微球与lmL HBsAg抗原溶液混匀得到混合溶液，其中HBsAg抗原溶液浓度是 5 ?200 μ g/mL ;
[0055]3)将混合溶液在小鼠背部皮下注射，每次注射量为100 μ L混悬液；
[0056]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为HBsAg抗原免疫佐剂的应用方法。包括:
[0057]1)称取采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球5mg ;
[0058]2)将上述微球与lmL HBsAg抗原溶液混匀得到混合溶液，其中HBsAg抗原溶液浓度是 5 ?200 μ g/mL ;
[0059]3)将混合溶液在小鼠背部皮下注射，每次注射量为100 μ L混悬液；
[0060]本
【发明内容】
还包括采用上述方法制备得到的CaP-PLA/PLGA纳微球作为HBsAg抗原免疫佐剂的应用方法。包括:
[0061]1)称