[0042] 2. 5. 5脑组织样品的采集方法在相应时间点处死大鼠，与大鼠头颈处剪断脊椎，沿 着烦骨内壁中线剪开，打开烦骨，使嗅球W后（包括嗅球）区域尽量暴露，取出大脑，于生理 盐水中荡洗，去除血污，用滤纸吸干，置于试管中待测。
[0043] 2. 5. 6 时间点灌胃组与鼻腔组分别于 5min、15min、30min、45min、60min、90min、 120min、180min、240min、300min、360min、420min从大鼠眼眶静脉丛取血 0. 5血。每组 15 只 大鼠，其中3只为连续取血，其余12只在各个时间点取血的同时还进行取脑脊液（CS巧和 脑组织。
[0044] 2. 6样品处理方案
[0045] 2. 6. 1血浆样品处理方案
[0046] 眼眶取血后，血样置于涂有肝素钢的EP管中，12000巧m离屯、lOmin，取血浆 于-80°C冰箱保存待测。精密量取大鼠血浆0.ImL,加入0. 4血提取介质（乙酸乙醋-甲 醇，9 :1)，满旋3min，400化pm离屯、lOmin，将上层乙酸乙醋溶液移至离屯、管中。剩余溶液进 行二次提取，再向其中加入提取介质0. 4n止，继续满旋3min，400化pm离屯、lOmin，同样转移 乙酸乙醋层溶液至同一离屯、管中。将样品置与35°C离屯、浓缩仪中吹干，100yL流动相复溶 后，4°C下10000巧m离屯、IOmin后，取上清液进样。
[0047] 2. 6. 2脑组织样品处理方案
[0048] 完整取出大鼠脑部，用生理盐水冲洗后，把大脑分为十个部分：嗅球、梨状叶、皮 层、纹状体、海马、丘脑、中脑、小脑、脑桥和延脑。精密称量各部分质量，按质量的15倍体积 加入生理盐水，然后进行匀浆Imin。精密量取脑组织匀浆液0.ImU方法同2. 6. 1。
[0049] 2.6. 3脑脊液样品处理方案
[0050] 精密量取脑脊液0. 1血，方法同2. 6. 1。
[00川 3.结果
[0052] 3.I数据处理
[0053] 3. 1. 1血浆药代动力学参数
[0054] 使用DAS药代计算程序处理，自选参数如表1所示。
[005引表1房室模型、权重系数选择
[0056]
[0057]
[0058] 由表1可得，口服给药途径在二室模型，权重系数为1八2时，拟合度最好，鼻腔给 药途径，在一室模型，权重系数为1/c时，拟合度最好，所W拟合的姜黄素原料药口服在大 鼠体内过程符合二室模型，姜黄素原料药鼻腔给药符合一室模型，有关药动学参数见表2。
[0059] 表2药代动力学参数
[0060]
[0061] 根据HPLC测定结果，绘制图2。
[0062] 由图2可知，经鼻腔给药途径的姜黄素药时曲线出现双峰现象，由表2可知经鼻腔 给药的姜黄素Cmax和AUC明显高于姜黄素原料药，鼻腔给药C为口服给药的246. 44%，说 明鼻腔给药途径能明显促进姜黄素的吸收，提高其生物利用度，提高姜黄素的血药浓度。二 者Tmm无明显变化，说明相对于口服途径，鼻腔给药途径并不能加速或减缓Tm。、的到来，但 鼻腔给药途径下Ti/2延长，说明鼻腔给药能够延长姜黄素体内吸收时间，减缓姜黄素的体内 消除，使得姜黄素在体内作用时间延长，且维持较高的血药浓度。
[006引根据HPLC结果画出CSF浓度图，见图3
[0064] 由图3可知，鼻腔给药的姜黄素是直接通过嗅球直接入脑，然后才进入血液进行 代谢，原因是在5min的时间点上，鼻腔与口服两种途径下脑脊液中姜黄素浓度几乎没有 差别。若鼻腔给药不是直接入脑，而是经鼻粘膜吸收入血，则无需经过胃肠道吸收，应该是 5min时间点上，鼻腔血药浓度比口服较高，但实验测出两者几乎无差别，所W鼻腔给药是直 接入脑。
[0065] 3. 2. 2相对生物利用度计算
[0068] F%= 2141%
[0069] 经鼻腔给药的姜黄素的相对口服的生物利用度为2141%，由此可见鼻腔给药不仅 能够明显提高姜黄素的生物利用度，而且能够大量减少姜黄素的给药剂量。
[0070] 3. 2. 2脑组织分布
[0071] 口服给药途径下，姜黄素在脑组织内分布浓度均在检测限之下。鼻腔给药途径下， 在各个时间点巧min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、 360min、420min)各个脑组织分区（嗅球、梨状叶、皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑、小脑、脑 桥和延脑）根据HPLC结果作图如下，见图4-图15。
[0072] 由图4-图15中可W得出，鼻腔给药后，姜黄素于大鼠脑内分布有明显组织差异， 而且浓度明显大于口服给药方式。5-15min中，嗅球、梨状叶中分布浓度较高，15-90min中， 大脑皮层、纹状体、海马和丘脑中分布浓度较高，90-420min中，中脑、小脑、脑桥、脑延中分 布浓度较高，且除了 5min的时间点外，大脑皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑和小脑都能维持 相对较高且稳定的浓度，说明姜黄素经鼻腔给药后，具有良好的脑祀向作用，有益于脑部疾 病的治疗。在5min时间点上，姜黄素浓度最高出现在嗅球和梨状叶，并且脑组织内姜黄素 浓度明显高于血浆中的浓度，说明姜黄素是经嗅球入脑，药物经鼻给药可避开BBB，直接经 转运入脑。
[0073] 此外，因该鼻用粉雾剂不含任何辅料，与别的鼻用剂型相比，减少了引起过敏反应 的可能性，减少了给药剂量。
[0074] 但需指出的是，W上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任 何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之 内。
【主权项】
1. 一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其特征在于，它由符合鼻腔给药的姜黄 素微粉组成，所述微粉的粒径大于1μm，但不超过150μm。2. 根据权利要求1所述的用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其特征在于，所述微 粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。3. -种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，其特征在于，包括：将姜黄 素原料药经0. 5-1Mpa的气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉，所述微粉的粒径大于 1μm，但不超过150μm。4. 根据权利要求3所述用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，其特征在 于，所述微粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂及其制备方法。该鼻用粉雾剂由符合鼻腔给药的姜黄素微粉组成，所述微粉的粒径大于1μm，而不超过150μm，优选为6-100μm；其制备方法包括：将姜黄素原料经气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉。本发明通过将姜黄素制成符合鼻用粉雾剂要求的微粉，与口服制剂相比，在用于治疗阿尔兹海默病的同时，明显提高了其生物利用度，因该粉雾剂不含任何辅料，减少了引起的过敏反应以及给药患者带来的痛苦，同时还减少了给药剂量。
【IPC分类】A61K9/14, A61P25/28, A61K9/12, A61K31/12
【公开号】CN105343003
【申请号】CN201510784360
【发明人】付廷明, 陆瑾, 吕聪
【申请人】南京中医药大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年11月16日