并利用制剂学的技术领域中公知的任意方法来制 造。药理学上可接受的载体已知有多种物质，可以从这些物质中适当选择使用，可以例示出 缓冲液、各种盐、血清、白蛋白、氨基酸等添加物。
[0116](疫苗的抗体产生能力增强方法）
[0117]本发明的疫苗的抗体产生能力增强方法中，将NK细胞(优选活化NK细胞）、疫苗给 药给患者。另外，该NK细胞未必必须为源自该患者的NK细胞。
[0118] 但是，优选至少包括以下工序。另外，对于下述（1)和（2)的工序也可以变更其顺 序。
[0119] (1)将从患者获得的活化NK细胞给药给该患者的工序
[0120] (2)将疫苗给药给该患者的工序
[0121] (疫苗）
[0122] 作为能够使用本发明的增强剂的"疫苗"，没有特别限定，可以使用活疫苗、灭活疫 苗、肽疫苗、质粒DNA疫苗、抗原抗体复合体疫苗等。疫苗可以使用自身公知的市售的疫苗。
[0123] 本发明的增强剂优选用于肝炎疫苗，更优选用于B型肝炎疫苗。
[0124] (肝炎治疗剂）
[0125] 本发明的肝炎治疗剂是至少组合有作为有效成分的NK细胞和作为有效成分的肝 炎疫苗的肝炎治疗剂。
[0126] 另外，本发明的治疗剂为能够将作为有效成分的NK细胞和作为有效成分的肝炎疫 苗同时或分别给药给患者的形态。
[0127] (肝炎治疗用试剂盒）
[0128] 本发明的肝炎治疗用试剂盒至少包含疫苗的抗体产生能力增强剂和肝炎疫苗，所 述疫苗的抗体产生能力增强剂含有作为有效成分的NK细胞。
[0129] 本发明的试剂盒为能够将抗体产生能力增强剂和肝炎疫苗同时或分别给药给患 者的形态。
[0130] (肝炎治疗方法）
[0131]本发明的肝炎治疗方法中，将NK细胞(优选活化NK细胞）、肝炎疫苗给药给患者。另 外，该NK细胞未必必须是源自该患者的NK细胞。
[0132] 但是，优选至少包括以下工序。另外，对于下述（1)和（2)的工序也可以变更其顺 序。
[0133] (1)将从肝炎患者获得的活化NK细胞给药给该患者的工序
[0134] (2)将肝炎疫苗给药给该患者的工序
[0135] (抗体产生能力增强剂、肝炎治疗剂的形态）
[0136] 对于本发明的抗体产生能力增强剂、肝炎治疗剂的形态，可以以内含于包括能经 口给药到生物体内的缓冲水剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆制剂等的药品中的形态来使用， 也可以以内含于包括通过皮下注射、肌肉注射、静脉注射等方式非经口给药到生物体内的 注射剂、点滴剂、栓剂等的药品中的形态来使用。
[0137] 本发明的抗体产生能力增强剂、肝炎治疗剂可以经过冻干后使用，也可以以与在 治疗效果上可接受的载体、pH缓冲剂、稳定剂、赋形剂等各种添加物一起包含在药品中的形 态来使用。
[0138] 本发明的抗体产生能力增强剂、肝炎治疗剂的给药方法及给药量根据与临床前试 验、临床试验的过程的关联来适当决定。在经口给药本发明的抗体产生能力增强剂、肝炎治 疗剂时，其给药量通常对于成人为每天约〇. Olmg~约1000mg(所含的NK细胞和/或活化NK细 胞的浓度通常在约I X IO5个~I X IO11个/ml、优选约I X IO6个~1.0X 101()个/ml的范围），1 次或分数次进行该经口给药。另外，在非经口给药本发明的抗体产生能力增强剂、肝炎治疗 剂时，其给药量通常对于成人为每次约〇. Olmg~约1000mg(所含的NK细胞和/或活化NK细胞 的浓度通常在约I X IO5个~I X IO11个/ml、优选约I X IO6个~I X 101()个/ml的范围）。
[0139] 另外，经口给药或非经口给药的药物组合物的给药量根据年龄、体重及病的症状 来决定。
[0140] (对象）
[0141] 本发明的癌发病抑制剂、抗体产生能力增强剂、肝炎治疗剂、癌发病抑制方法、抗 体产生能力增强方法、以及肝炎治疗方法，以包括人在内的哺乳类为对象。例如可以例示出 人、狗、猫、马(尤其是赛马用马）、猪等。
[0142] 以下，通过实施例来具体说明本发明。另外，这些实施例是为了说明本发明而列举 的例子，其并不限定本发明的范围。
[0143] 实施例一
[0144] (NK细胞的培养和增殖）
[0145] 通过以下的工序，进行自体外周血淋巴细胞的培养和增殖，由此进行活化NK细胞 的培养和增殖。
[0146] (工序 1)
[0147] 相对于磷酸缓冲液(PBS)20ml，制作正克隆(0rthoclone)0KT3:0.1yl/ml (抗CD3抗 体，从杨森制药公司（Janssen Pharmaceutical Κ·Κ·)获得)及阿伦单抗(MABCAMPATH):20y 1~40yl/ml (抗CD52抗体、可从拜耳医药公司(Bayer AG)获得)的溶液。
[0148] (工序 2)
[0149] 将工序1的溶液分别分注到不同的225cm2的烧瓶(frasco)中，在4°C下静置一晚。
[0150] (工序 3)
[0151] 将工序2的烧瓶用PBS清洗2次。
[0152] (工序 4)
[0153] 从健康人采取肝素抗凝外周30ml，利用将Ficoll-Paque Plus(从Amersham Pharmacia Biotech株式会社获得）用作介质的密度梯度离心法，分离外周血单核细胞 (PBMC)0
[0154] (工序 5)
[0155] 使工序4中分离出的PBMC以0.5X IO6~IX IO6个/ml的浓度悬浮在包含IL-2(500单 位/ml、Chiron公司）的NKGM培养基(从日本KOHJIN生物有限公司(Kohjin Bio Co.，Ltd.)获 得）中，再添加患者血浆2 %~10 %，制成培养液。在该阶段，培养液为60ml~120ml。将该培 养液添加到工序3中得到的经固相化抗体处理后的培养烧瓶中。然后，在5 % CO2培养器内37 °C的环境下进行培养。
[0156] (工序 6)
[0157] 在从培养开始起的第3~5天，培养出多个菌落，确认已母细胞化(blast化)后，追 加20 %~100 %培养液，再添加500单位/ml的IL-2。通常，该时期是从培养开始起第3天。
[0158] (工序 7)
[0159] 在从在工序6中追加培养液后进入对数增殖期的第1~3天(多为第1天），将含有活 化淋巴细胞的培养液注入NKGM-B(1升装的袋）。再将其分注入2~3袋。分注后，以3~4天为 间隔，每袋添加 100mL~300ml NKGM培养基及10~20万单位IL-2。
[0160] (工序 8)
[0161] 在培养开始起第14~21天，将培养液从袋转移到离心管，将其以600G离心10分钟。 从离心管吸引上清液而残留颗粒后，对颗粒加入PBS进行清洗，再次进行离心操作。重复该 操作2~3次，充分清洗培养淋巴细胞。最后，收集颗粒，使其悬浮在生理食盐水100mL中，在 其中添加人血清白蛋白2%~4%。最后，确认到无菌测试、内毒素测试为阴性。
[0162] (冻结保存和解冻）
[0163] 在培养开始后第3~7天清洗培养细胞，与作为保存液的KMBANKER(日本KOHJIN生 物有限公司）一起加入冻结用管中，在液氮罐内保持在-190°C以下进行保存。解冻后，在添 加有IL-2的NKGM培养液中培养10~14天。
[0164] (培养液中的活化淋巴细胞的解析结果）
[0165] 在上述培养和增殖后的NK细胞表面出现CXCR3趋化因子受体、NKG2D、TRAIL、特异 性活化受体NKp30、NKp44、NKp46的表达。而且，确认到：在培养NK细胞中IFN γ持续产生，在 直至至少3周的培养中，以Κ562为靶的细胞毒活性维持在较高水平。
[0166] 由以上可以确认:在溶液中活化NK细胞以高浓度存在。
[0167] 实施例二
[0168] (通过给药活化NK细胞对癌发病进行抑制情况的确认）
[0169] 将包含从健康人得到的活化NK细胞的培养淋巴细胞给药给该健康人。然后，确认 该给药后的健康人和未给药的健康人的癌发病率。详细情况如下。
[0170] (NK细胞的给药）
[0171] 将实施例一的培养淋巴细胞解冻，用添加有IL-2的NKGM培养液培养10~14天后， 将其进行清洗，使其悬浮在100mL的生理食盐水中，从健康人的静脉进行滴液给药。
[0172] 每次给药的自培养淋巴细胞数为10.7 X IO9个(参照：图1)。此外，给药的淋巴细胞 中，包含最多⑶3-⑶56+ΝΚ细胞或⑶56+淋巴细胞(图2)。
[0173]另外，给药的详细情况如下。
[0174] (健康人的NK细胞给药组和非给药组）
[0175] 从2006年起开始进行了能够对一个健康人给药10次或其以上量的NK细胞的冻结 保存。以到2011年为止最低保存了 13个月以上的103例作为对象。其中，根据本人的要求而 在保存期间给药1次以上的"给药组"为53例（男性31例、女性22例），不希望给药的"非给药 组"为50例（男性25例、女性25例）。给药组共计给药242次，每人的给药次数为1次~57次，