专利名称：咪唑并硒唑类化合物及其预防和/或者治疗与蛋白老化相关疾病的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及取代咪唑并硒唑类化合物、其几何异构体及其药学上可接受的盐、它们的制备方法，含有它们的药用组合物。本发明还涉及所述化合物用于(i)增加皮肤弹性或者减少皮肤皱纹，预防或者治疗(ii)非胰岛素依赖型糖尿病；(iii)糖尿病的并发症；(iv)肾脏损伤；(v)血管损伤或者预防或治疗血管硬化；(vi)高血压；(vii)视网膜病变；(viii)晶状体蛋白损伤；(ix)白内障；(x)周围神经病变；(xi)吸烟引起的肺AGEs的形成，以及由此产生的肺纤维化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨关节炎；或者用于口腔局部用药用于防止或逆转牙齿着色的用途；或者用于各种食物用植物或动物蛋白的保鲜用途。
背景技术：
早在1912年，Maillard发现葡萄糖和其他还原糖与氨基酸反应，经过一系列的脱氢重排形成了稳定的褐色色素，进一步的研究发现贮存和加热食物也能够产生这种由糖和多肽形成的色素，相应的这种色素的形成降低了蛋白的生物活性，相关的应用专利可以参考美国专利U.S.08/588249。这种非酶催化的还原糖和自由氨基酸的反应会形成一种稳定的二酮基的产物，就是已知的Amadori产物。特别是血红素表面氨基酸的β侧链残基与葡萄糖反应生成血红素A1c。体内其他蛋白也会发生这样的反应，比如晶状体，胶原蛋白和神经蛋白。(AdvancedGlycosylation；Chemistry，Bilolgy，and Implications for Diabetes andAging，Advances in Pharmacology，Vol.23，pp.1-34 Academic Press1992)
上述反应在糖尿病血糖水平增高的情况下会加速发生，正常血糖状态下也会发生上述反应。同时衰老过程与脂褐素的形成密切相关，同样胶原蛋白老化在体外可以用糖和胶原蛋白模拟。葡萄糖诱导的胶原产物被其他蛋白捕获反应，这样引起了蛋白之间的交联反应。这种葡萄糖诱导的交联反应所产生的就是晚期糖基化终产物(advancedglycosylation endproducts AGEs)，已知AGEs与糖尿病的并发作用相关，正常的衰老过程也引起AGEs的增加，体内的AGEs不仅由于其异常的病理化学结构而且还会被一些特定的受体识别从而引起复杂的糖尿病和衰老相关的病理改变。
目前，已经有一些抑制AGEs累积的疗方法。其中一个方法见于U.S.4758583，其先导物氨基胍及其类似物可以抑制AGEs的形成，通过与早期糖基化产物反应从而阻止了糖基化产物进一步转化而成为AGEs，同时也阻止了AGEs与组织进一步交联。这个方法的有效性在糖尿病和老龄化大鼠的动物模型上进行了评价，同时也包括如大血管，肾脏，和神经病理方面的其他指标。Vlassara等人对这些数据进行了总结。(Vlassara et al，1994 Biology of Diseases.“Pathogeniceffects of advanced glycosylationbiochemical，biologic and clinicalimplications for diabetes and aging”Laboratory Investigation70138-151；Brownlee，1995，“The pathological implications of proteinglycation”Clin.Invest.Med.，18275-281；and Brownlee，1995，“Advanced protein glycosylation in diabetes and aging，”Ann.Rev.Med.46223-34.)另一种控制组织中AGEs的方法特别是在组织中已经形成并累积的AGEs交联产物(这些交联产物导致临床或者亚临床病理改变)的方法是逆转或者裂解已经形成的AGEs交联产物。Vassan等人证明这种裂解AGEs的方法是有效的。(vassan et al Nature.1996 Vol382(18)275-278)在美国专利U.S.5656261以及应用专利08/588249和08/848776中公布的化学实体，制剂，方法都可以在体内和体外裂解已经形成的AGEs交联结构。研究表明这类化合物对于衰老造成的心血管疾病有良好的作用。(Wolffenbuttel et al.，1998，“Breakers ofAdvanced Glycation End Products Restores Large Artery Properitesin Experimental Diabetes”Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.954630-4634)在这些研究中9周的糖尿病大鼠给予AGEs裂解剂1-3周逆转了由于糖尿病造成的大动脉硬化。改善的参数有心输出量，外周阻力，体动脉顺应性，主动脉输入阻力，以及颈动脉顺应性。(U.S.6319934)发明内容本发明的目的是寻找并且开发作用于AGEs的小分子裂解剂，用来裂解已经形成的AGEs从而阻止蛋白交联，对已经交联的蛋白裂解，从而促进蛋白的代谢，进一步改善由于AGEs在体内的增高导致的各种病理改变，包括增加皮肤弹性或者减少皮肤皱纹，治疗糖尿病或者治疗或缓解糖尿病的后遗症，肾脏损伤，血管损伤，高血压，视网膜病变，晶状体蛋白损伤，白内障，周围神经病，吸烟引起的肺AGEs的形成，以及由此产生的肺纤维化、呼吸窘迫等肺部疾病；或者骨关节炎。同时这种蛋白交联结构裂解剂所作用的糖基化蛋白还不局限于人体蛋白，还包括粮食中的植物或者动物器官蛋白，因而可以扩展用于保鲜用途。
本发明已经发现通式I的化合物可以用于治疗和/或预防由蛋白糖基化造成的多种疾病。
本发明涉及式I的化合物、其几何异构体或其可药用的盐或水合物。
其中R1，R2独立地选自氢；取代的或未取代的C5～C8的脂环基；取代或未取代的C1～C8直链或支链烷基；取代或未取代的C2～C8直链或支链烯基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基烷基；取代或未取代的C1～C4羧酰氨基烷基；取代或未取代的C1～C4烷基亚磺酰基；取代或未取代的C1～C4烷基磺酰基；取代或未取代的C3～C8环烷基；取代或未取代的C5～C8环烯基，以上所述的取代基选自下述一组中的至少一个取代基团氧、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8环烷基、C5～C7环烯基，或者R4；取代或未取代的的C5～C14芳香基；取代或未取代的的C5～C6芳香磺酰基；取代或未取代的的C5～C6芳香亚磺酰基，这里的芳香基环中包含1～6个选自下面的杂原子O，S，N，Se；所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巯基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、氧、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8环烷基，C5～C7环烯基、芳烷基或者R4，R3独立选自氢；C1～C8直链或支链烷基；C2～C8直链或支链烯基或者R4，R4独立选自取代或未取代的C5～C14芳香碳环或杂环，杂环中包含1～6个选自下面的杂原子O，S，N，Se；所述的取代基选自下述一组中的至少1-3个取代基团C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巯基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、氧、卤素、硝基、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或氨基。
根据本发明的一个优选实施方案，本发明涉及通式I的化合物、其几何异构体或其药学上可用的盐 R1独立地选自氢；取代或未取代的C2～C8烷基；取代或未取代的C5～C10芳香基，以上所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团甲氧基、卤素、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R2独立地选自氢；取代或未取代的C2C8直链或支链烷基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的的C5～C10芳香基；取代或未取代的C5～C10芳香磺酰基；取代或未取代的C5C10芳香亚磺酰基，以上所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团甲氧基、卤素、羟基、巯基、氰基，硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R3独立选自氢；甲基；乙基；苯基，R4独立选自取代的或未取代的苯环、萘环、噻吩、硒吩、呋喃或者吡咯，所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团卤素、硝基、羟基、羟甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、苯氧基、苄氧基、羧基或氨基。
根据本发明本发明式I化合物、其几何异构体或其药学上可接受的盐优选下面表1中的化合物。
表1.式I咪唑并硒唑类化合物中优选的化合物
根据本发明，本发明更优选的式I化合物为6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
本发明另一方面涉及制备通式I的化合物、其几何异构体或其药学上可接受的盐的方法，其包括1)将硒脲或KSeCN/SiO2及NH4OAc/Al2O3与式VI的α-卤代酮反应， 其中R1，R2同本发明中式I化合物的定义；Z为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式III化合物 2)将式III化合物与式IV化合物在非质子传递溶剂中反应，
其中R3，R4同上述式I化合物中的定义；X为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式I化合物 或，将式III化合物与式IV化合物在质子化溶剂中反应 其中R3，R4同上述式I化合物的定义；X为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式V化合物， 将式V化合物与酸或碱反应，得到式I化合物 根据本发明，本发明式I化合物的制备可通过反应路线1-3更详细说明反应路线1
在反应路线1中，将式VI的α-卤代酮和硒脲溶解于适量的丙酮或甲醇或乙醇或水中，升温至回流温度反应8h左右，真空浓缩，得到粗品，用硅胶柱纯化或者重结晶的方法得到式III化合物(可以参考Shafiee A，Ebrahimzadeh MA，Maleki A，J.Heherocyclic Chem，1999，36901-903；Hanson RN，Davis MA，J.Heherocyclic Chem，1981，18205-206，Moriarty BM，Vaid BK，Duncan MP et al，synthesis，1992，11845-846 et al.)化合物III和化合物IV在非质子传递溶剂，其包括二甲基吡咯二酮，二甲基甲酰胺，N-甲基吡啶，N-甲基吡咯，N-甲基吡咯烷酮(NMP)，乙腈等，优选乙腈中，加热温度为不低于60℃，不高于81.5℃，反应时间为不低于2min，最好不超过96h的条件下反应得到式I化合物。详细的制备方法参见实施例4-20。
反应路线2
在反应路线2中，式III化合物制备如反应路线1所述，然后将化合物III和1.1倍量的化合物IV混和，加入适量的质子化溶剂，包括甲醇、乙醇、异丙醇等，最优选的为乙醇，80℃条件下搅拌反应，反应时间不低于1.5h，不超过24h。反应完毕，得到含有式V化合物的反应液。将式V化合物与酸反应，即将含有式V化合物的反应液冷却到0℃，滴加等摩尔的酸(可为如无机酸，或有机酸，如硫酸，盐酸，优选为浓盐酸)，滴加完毕，于0℃继续反应不低于1h，不超过3h。反应完毕，将反应混合物倒入冰水，中和到pH约为7，在用乙酸乙酯提取，酯层用无水硫酸钠或者无水硫酸镁干燥。然后，过滤得到酯层，蒸干得到粗品。粗品用硅胶层析的方法纯化，这里所使用的硅胶为常规层析用硅胶，颗粒度10～40u，或者100-200目或者200-300目。洗脱剂由单一或者多种溶剂配制而成，优选由乙酸乙酯与石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者与环己烷按不同比例(如1∶5-15，体积比)配制的混合溶剂。纯化后得到本发明化合物I。或，将式V化合物与碱反应，即将含有式V化合物的反应液冷却到0℃，滴加等摩尔的碱(可为无机碱或有机碱，如氨水，氢氧化钠，氢氧化钾，优选的为浓氨水)，滴加完毕，于0℃继续反应不低于1h，不超过3h。反应完毕，将反应混合物倒入冰水，中和到pH约为7，在用乙酸乙酯提取，酯层用无水硫酸钠或者无水硫酸镁干燥。然后，过滤得到酯层，蒸干得到粗品。粗品用硅胶层析的方法纯化，这里所使用的硅胶为常规层析用硅胶，颗粒度10～40u，或者100-200目或者200-300目。洗脱剂由单一或者多种溶剂配制而成，优选由乙酸乙酯与石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者与环己烷按不同比例(如1∶5-15，体积比)配制的混合溶剂。纯化后得到本发明化合物I。
反应路线3 在反应路线3中，将式VI的α-卤代酮化合物 其中R1，R2同本发明中式I化合物的定义；Z为离去基团，选自F、Cl、Br或I；与固相在硅胶上硒氰化钾(KSeCN/SiO2)和固相在三氧化二铝上的乙酸铵(NH4OAc/Al2O3)，其中SiO2指常规用硅胶，颗粒度为10～40u，100目，100-200目，200-300目等，最优选的为100-200目；Al2O3(三氧化二铝)指常用氧化铝，最优选的为中性氧化铝，粒度为100-200目，在惰性溶剂或者非质子传递溶剂中如苯，甲苯，乙苯和其它取代苯，二甲亚砜，二甲基吡咯二酮，二甲基甲酰胺，乙腈等，优选为甲苯和苯，在80℃反应，反应时间不低于4h，不超过24h得到式III化合物。
其中R1，R2同权利要求1中式I化合物的定义；C2和N原子之间的键为双键；C4和C5之间的键为双键。
制备固相在硅胶上的硒氰化钾(KSeCN/SiO2)的方法为将KSeCN适量溶解于甲醇或者水或者乙醇中，一次性加入适量的100-200目的硅胶，混合物在室温搅拌0.5h，然后旋转蒸发减压蒸除溶剂，浴温不高于50℃，即得到固相在硅胶上硒氰化钾(KSeCN/SiO2)。固相在硅胶上硒氰化钾(KSeCN/SiO2)在使用前在25℃/20mmHg干燥，干燥时间不低于4h；制备固相在三氧化二铝上的乙酸铵(NH4OAc/Al2O3)的方法为将醋酸胺适量溶解于甲醇或者水或者乙醇中，一次性加入适量的100-200目的Al2O3，混合物在室温搅拌0.5h，然后旋转蒸发减压蒸除溶剂，浴温不高于50℃，即得到固相在三氧化二铝上乙酸铵(NH4OAc/Al2O3)。固相在三氧化二铝上乙酸铵(NH4OAc/Al2O3)在使用前在25℃/10mmHg干燥，干燥时间不低于4h。
进一步讲，式VI的α-卤代酮或者具用α活泼氢的羰基化合物与固相在硅胶上的硒氰化钾(KSeCN/SiO2)和固相在三氧化二铝上的乙酸铵(NH4OAc/Al2O3)反应得到式III化合物的更详细描述如下将3mmol的式VI化合物，5mmol的KSeCN/SiO2和6mmol的NH4OAc/Al2O3混合均匀，在适量的惰性溶剂或非质子传递溶剂(优选是甲苯)中，在80℃加热搅拌反应不低于4h，不超过24h。反应结束，过滤除去残留固体。滤液蒸干得到粗产物。粗产物重结晶或者使用硅胶柱层析处理提纯。这里所使用的硅胶为常规层析用硅胶，颗粒度10～40u，200-300目，100-200目；洗脱剂由单一或者多种溶剂配制而成，优选由乙酸乙酯与石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者与环己烷按不同比例(1∶5-15)配制的混合溶剂。纯化后得到本发明式III化合物。
其中R1，R2同本发明中式I化合物的定义；C2和N原子之间的键为双键；C4和C5之间的键为双键。
所得式III化合物可按反应路线1中相应步骤与式IV化合物反应得到式I化合物，或式III化合物按反应路线2中相应步骤与式IV化合物反应先得到式V化合物，然后再由式V化合物转化为式I化合物。
下表所列16个化合物作为式III化合物的举例均按照上述方法合成(化合物a～p均经核磁和质谱结构确证)。
表2本发明权利要求8制备得到的式III化合物
本发明再一个方面涉及药物组合物，其包括至少一种通式I咪唑并硒唑类化合物或其几何异构体或其药学上可接受的盐以及药用载体或赋形剂。
本发明中的药用组合物可按本领域已知的方法制备，如将式I咪唑并硒唑类化合物、几何异构体或其药学上可接受的盐与药用载体或赋形剂混合。
本发明再一方面涉及至少一种式I咪唑并硒唑类化合物、几何异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗蛋白糖基化所导致的各种疾病的药物的用途。
本发明还涉及预防和/或治疗蛋白糖基化老化所导致的各种疾病的方法，其包括将预防和/或治疗有效量的至少一种式I咪唑并硒唑类化合物、几何异构体或其药学上可接受的盐给予需要预防和/或治疗蛋白糖基化老化所导致的各种疾病的方法。
本发明所提到的糖基化蛋白不局限于人体蛋白，还包括食物中的植物或者动物器官蛋白，因而本发明公开的化合物或其组合物还可以用于食物的保鲜。
根据本发明，本发明化合物的可药用盐包括其无机盐或有机盐，其中盐包括但不限于盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硝酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，乙酸盐，丙酸盐，丁酸盐，草酸盐，三甲基乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，乳酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，富马酸盐，苦味酸盐，天门冬氨酸盐，葡糖酸盐，苯甲酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐。
本发明所涉及的药用组合物是在体内用于治疗用，且具有生物相容性。药用组合物是指本发明所提及的有效治疗量的制剂或者含有本发明化合物的可接受的药用载体，药用载体可按本发明所涉及的用途和/或具体的剂型选择。药用组合物可以根据不同给药方法而制备成各种形式。本发明所提及的化合物也可以被制备成各种药学可接受的盐。
根据本发明，本发明的药用组合物包括有效剂量的本发明式I咪唑并硒唑类化合物、几何异构体或其药学上可接受的盐和一种或多种适宜的可药用载体。这里的药用载体包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛脂。
本发明化合物是一类强效交联蛋白裂解剂，与美国专利US 5656267中优选ALT-711相比，本发明化合物有更好的裂解能力。裂解糖基化老化蛋白可以用于但不局限于(i)增加皮肤弹性或者减少皮肤皱纹；预防或者治疗(ii)非胰岛素依赖型糖尿病；(iii)糖尿病的并发症；(iv)肾脏损伤；(v)血管损伤或者预防或治疗血管硬化；(vi)高血压；(vii)视网膜病变；(viii)晶状体蛋白损伤；(ix)白内障；(x)周围神经病变；(xi)吸烟引起的肺AGEs的形成，以及由此产生的肺纤维化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨关节炎；或者用于各种食物中植物动物蛋白的保鲜用途。
本发明可以扩展应用于阻止或逆转由于口腔中的非酶促糖基化反应导致的牙齿着色或变色。含有本发明的化合物的用药方案可以根据所提及的用途进行变化。
发生在口腔中的非酶促反应可以导致牙齿着色。目前所使用的抗蛀蚀剂可以加速这种碳基化反应进一步导致了牙齿的着色。最近一类有抗蛀蚀功能的阳离子杀菌剂用于常规口腔清洗。这些阳离子抗菌剂有阿莱西丁，十六烷基吡啶氯酸盐等等。而这些制剂可以加速糖基化反应中关键的一步Maillard反应，进而加速牙齿的着色(Nordbo，J.Dent.Res.，581429(1979))。并且有报道在体外观察到了洗必泰和洁而灭能够催化糖基化反应(褐化反应)。由于Maillard反应，洗必泰加入糖和氨基酸的混合物中加速了色素的形成。
基于上述原因，本发明所涉及的化合物及其药用组合物可以用于口腔。特别是用于口腔清洗液和牙膏中的添加剂。
在有关本发明所述化合物的上述用途中，无毒并且药学上可接受的载体可以采用方便的形式应用于洁口液和牙膏中。
根据本发明，本发明所述化合物的药用组合形式可以以下面的任意方式施用口服，喷雾吸入，直肠用药，鼻腔用药，颊部用药，局部用药，非肠道用药，如皮下，静脉，肌内，腹膜内，鞘内，心室内，胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。其中优选口服，腹膜内或静脉内用药方式。
当口服用药时，本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不局限于片剂，胶囊，水溶液或水悬浮液。其中，片剂一般使用的载体包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂一般使用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。如果需要，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂，芳香剂或着色剂。
当局部用药时，特别是治疗局部外敷容易达到的患面或器官，如眼睛，皮肤或下肠道神经性疾病时，本发明所述化合物可根据不同的患面或器官制成不同的局部用药制剂形式，具体说明如下当眼部局部施用时，本发明化合物可配制成一种微粉化悬浮液或溶液的制剂形式，所使用载体为等渗的一定pH的无菌盐水，其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐。此外对于眼用，也可将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。
当皮肤局部施用时，本发明化合物可制成适当的软膏，洗剂或霜剂制剂形式，其中活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。这里软膏制剂可使用的载体包括但不限于矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，吐温60，十六烷酯蜡，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。
本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液，或无菌注射溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本发明化合物针对不同患者的特定使用剂量和使用方法决定于诸多因素，包括患者的年龄，体重，性别，自然健康状况，营养状况，化合物的活性强度，服用时间，代谢速率，病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。使用剂量介于0.01～100mg/kg体重/天，其中一般可在20mg/kg-30mg/kg。
具体实施例方式
实施例本发明可以通过下面的实施例得到说明，但是这些实施例对本发明不构成任何限制。
化合物熔点由SRY-1型熔点仪测定，温度未经校正。1HNMR光谱由Bruker ARX 400或US Varian Unity Inova 600型核磁仪测定，质谱由Zabspect高分辨质谱仪测定。
实施例15-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑的合成取2.2g，15mmol的KSeCN(MW144.08)溶解于5ml的无水甲醇中，加入50ml的园底烧瓶中；一次性加入1.5g 100-200目的硅胶。然后旋转蒸发减压蒸除水分，浴温不高于50℃。产物25℃/20mmHg干燥4h待用。醋酸胺7.7g(100mmol，MW77.08)溶解于甲醇，加入Al2O392.3g，混合物在室温搅拌0.5h。然后蒸除甲醇，产物室温真空干燥2h(15mmHg)，待用。
分别取5mmol的KSeCN/SiO2，6mmol的NH4OAc/Al2O3和3mmol的甲酰氯代乙酸甲酯，混合均匀，加入50ml甲苯为反应溶剂，于80℃下搅拌加热反应6h。反应结束，过滤除去残留固体。滤液蒸干得到粗产物。粗产物使用硅胶柱层析处理提纯。洗脱剂为乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，纯化后得到5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑。产率51.2％，mp202-203℃。
IR(KBr)3450cm-1；3260cm-1(NH2)；1695cm-1(C＝O)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.697(s，3H，CH3)；7.624(3，1H，H5)；8.151(s，2H，NH2).
FAB MSm/z＝206.1(100)[M+]元素分析，理论值C5H6N2O2Se(204.982)C，29.27；H，2.93；N，13.66实测值C，29.38；H，2.95；N，13.82实施例25-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯
1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml无水乙醇中，加热到回流。取1.14g(5.37mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml无水乙醇中，滴加到回流的反应液中，滴速为1d/s。滴加完毕，继续在回流加热4h。反应完毕，反应液冷却到0℃，滴加2.2ml浓盐酸，滴加完毕，于0℃继续反应1h，反应完毕，将反应混合物倒入冰水，氨水中和到pH约为7，用乙酸乙酯提取，酯层用无水硫酸钠干燥。过滤得到酯层，蒸干得到粗品。粗品用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，纯化后得到白色絮状结晶。产率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理论值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78实测值C，52.89；H，3.67；N，8.75实施例35-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml无水乙醇中，加热到回流。取1.14g(5.37mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml无水乙醇中，滴加到回流的反应液中，滴速为1d/s。滴加完毕，继续在回流加热4h。反应完毕，反应液冷却到0℃，滴加1ml浓氨水，滴加完毕，于0℃继续反应1h，反应完毕，将反应混合物倒入冰水，用乙酸乙酯提取，酯层用无水硫酸钠干燥。过滤得到酯层，蒸干得到粗品。粗品用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，纯化后得到白色絮状结晶。产率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理论值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78实测值C，52.89；H，3.67；N，8.75实施例45-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml无水乙腈中，加热到81.5℃回流。取1.14g(5.34mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml无水乙腈中，滴加到回流的反应液中，滴速为1d/s。滴加完毕，继续在81.5℃回流加热8h。反应完毕，反应液蒸干得到棕色残渣，加10ml甲醇溶解，使用硅胶柱层析处理提纯。洗脱剂为乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，纯化后得到白色絮状结晶。产率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理论值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78实测值C，52.89；H，3.67；N，8.75
说明性实施例4 可按与实施例4相同的方法制备，只是用相同或不同的反应物III和反应物IV分别进行制备。在不同的反应过程中反应现象不完全一样，有的在反应进行中即生成大量的沉淀，有的在反应完毕后静置后析出沉淀。这些反应，过滤得到沉淀，再将沉淀用无水甲醇溶解，按照实施例4的方法用硅胶柱层析处理纯化后得到目标化合物。
实施例56-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-苯基-乙基-1-酮。为淡黄色针状结晶，产率51.04％，mp 158-159℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.304(t，J＝7.30Hz，1H)；7.427(t，J＝7.80Hz，2H)；7.849(d，J＝7.55Hz，2H)；8.318(s，1H，5-CH)；8.768(s，1H，3-CH)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝52.751(CH3O-)；112.037(5-C)；119.911(ph，C)；124.869(ph，2CH)；127.482(ph，CH)；128.380(3-CH)；128.664(ph，2CH)；133.229(6-C)；144.748(8-C)；146.822(2-C)；162.460(C＝O)。
FAB MSm/z＝306.9(100)[M+]，292.9(4)，274.2(9)，248.9(2)，224.9(9)，145.1(5)，132.9(58)元素分析，理论值C13H10N2O2Se(305.2)C，51.15；H，3.28；N，9.18实测值C，51.17；H，3.14；N，9.12实施例66-(4-氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-氯-苯基)-乙基-1-酮。回流加热过程中即生成黄色沉淀。目标产物为类白色结晶，产率40.25％，mp 180-182℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.858(s，3H)；7.463(dd，J1＝1.76Hz，J2＝2.52Hz，2H)；7.860(dd，J1＝1.76Hz，J2＝2.01Hz，2H)；8.359(s，1H，5-CH)；8.779(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝339.9(40)，292.9(4)，306.9(4)，280.9(5)，243.0(4)，193.0(4)，169.0(10)，131.0(59)HRMS理论值C13H9ClN2O2Se339.9517 实测值339.9514实施例76-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-氟-苯基)-乙基-1-酮。目标产物为类白色结晶，产率37.98％，mp195-196℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.250(m，2H)；7.887(m，2H)；8.316(s，1H，5-CH)；8.787(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝324.0(47)，291.0(3)，306.9(4)，230.9(5)，211.0(3)，162.0(11)，143.0(2)，119.0(11)，99.9(10).
HRMS理论值C13H9FlN2O2Se323.9813 实测值323.9833实施例86-(4-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生产大量沉淀。目标产物为黄色结晶，产率41.56％，mp 240-244℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.877(s，3H)；8.121(d，J＝8.96Hz，2H)；8.276(d，J＝8.96Hz，2H)；8.590(s，1H，5-CH)；8.830(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(65)，323.0(5)，302.9(5)，267.0(2)，245.0(3)，162.0(5)，114.0(3)，100.0(9)HRMS理论值C13H9N3O4Se350.9758 实测值350.9776实施例96-(4-溴-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-溴-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为黄色结晶，产率51.01％，mp 197-200℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.608(d，J＝8.40Hz，2H)；7.804(d，J＝8.40Hz，2H)；8.383(s，1H，5-CH)；8.792(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝384.0(39)，353.0(2)，265.0(4)，211.9(7)，193.0(3)，162.0(9)，93.0(9)，HRMS理论值C13H9BrN2O2Se383.9013 实测值383.9027实施例106-萘基-2-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(2-萘-2-基)-乙基-1-酮。目标产物为黄色结晶，产率49.13％，mp187-191℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.880(s，3H)；7.512(m，2H)；7.940(m，4H)；8.410(s，1H)；8.467(s，1H，5-CH)；8.835(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝356.0(95)，331.0(4)，241.9(8)，280.9(5)，220.1(14)，181.0(30)，162.0(10)，119.0(17)，93.0(6)HRMS理论值C17H12N2O2Se356.0064 实测值356.0061实施例116-(3-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(3-硝基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为黄色结晶，产率82.50％，mp 185-187℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.890(s，3H)；7.713(t，J1＝7.84Hz，J2＝8.12Hz，1H)；8.128(dd，1H)；8.280(d，J＝7.84Hz，1H)；8.5719(s，1H)；8.655(s，1H，5-CH)；8.811(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(62)，302.9(11)，245.0(4)，230.9(6)，181.0(26)，162.0(12)，143.0(3)，119.0(15)，100(11)HRMS理论值C13H9N3O4Se350.9758 实测值350.9752实施例126-(2，5-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为黄色结晶，产率51.12％，mp 192-195℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.876(s，3H)；3.889(s，3H)；3.907(s，3H)；6.901(dd，J＝3.08Hz，1H)；7.084(d，J＝8.961Hz，1H)；7.652(d，1H，J2＝3.08Hz)；8.412(s，1H，5-CH)；8.833(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝366.0(15)，331.9(5)，262.0(8)，205.0(2)，162.0(9)，123.9(4)，100.0(12)，HRMS理论值C15H14N2O4Se366.0119 实测值366.0128实施例136-(4-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为白色结晶，产率39.69％，mp 169-171℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.792(s，3H)；3.870(s，3H)；7.003(d，J＝8.96Hz，2H)；7.768(d，J＝8.68Hz，2H)；8.247(s，1H，5-CH)；8.797(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝336.0(100)，321.0(36)，294.0(6)，267.0(8)，231.0(6)，212.0(11)，181.0(70)，162.0(19)，132.0(7)，119.0(18)，100.0(31)HRMS理论值C14H12N2O3Se336.0013 实测值336.0018实施例146-(2-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备3中的溴代酮为2-溴-1-(2-硝基-苯基)-乙基-1-酮。目标产物为黄色结晶，产率75.18％，mp129-130℃1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.932(s，3H)；7.468(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.84Hz，1H)；7.630(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.56Hz，1H)；7.716(d，J＝8.12Hz，1H)；7.797(s，1H，5-CH)；7.893(d，J＝7.56Hz，1H)；8.779(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(30)，323.0(29)，292.0(5)，264.0(9)，234.0(5)，215.1(7)，200(42)，172.0(12)，141.0(10)，129.0(12)，119.0(100)，105.0(20)，90.0(31)HRMS理论值C13H9N3O4Se350.9758 实测值350.9756实施例156-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(2，4-二氯-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的白色沉淀。目标产物为白色结晶，产率56.84％，mp 199-201℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.872(s，3H)；7.535(dd，J1＝2.24Hz，
J2＝1.96Hz，1H)；7.720(d，J＝2.24Hz，1H)；8.177(d，J＝8.68Hz，1H)；8.584(s，1H，5-CH)；8.798(s，1H，3-CH)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝52.966(CH3O-)；116.327(5-CH)；120.890(2-C)；127.697(3-CH)；128.441(ph，CH)；129.797；130.322(ph，CH)；130.618(3-CH)；131.038(ph，CH)；132.336； 141.578(6-C)；146.351(8-C)；1 62.427(C＝O)。
EI MSm/z＝373.9(100)，292.9(4)，345.0(7)，212.0(5)，171.0(6)，148.0(3)，131.0(27)，116.0.0(3)，100.0(5)HRMS理论值C13H8Cl2N2O2Se373.9128 实测值373.9137实施例166-(4-溴-苯基)-5-甲基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-溴-苯基)-丙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为白色结晶，产率32.26％，mp 192-195℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.6426(s，3H)；3.885(s，3H)；7.639(4H)；8.881(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝397.9(88)，368.9(3)，338.9(3)，312.0(5)，282.0.0(4)，262.0(4)，213.0(8)，162.0(46)，131.0(100)，100.0(7)HRMS理论值C14H11BrN2O2Se397.9169 实测值397.9163实施例175，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1，2-二苯基-乙基-1-酮。目标产物为淡黄色结晶，产率22.43％，mp180-182℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.841(s，3H)；7.304(m，3H)；7.535(m，7H)；8.105(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝382.49(100)，351.4(3)，321.4(7)，242.4(6)，203.4(3)，178.4(8)，165.4(21)，140.3(4)，103.3(5)，77.2(5)HRMS理论值C19H14N2O2Se381.9857 实测值381.9845实施例186-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(2，4-二甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为白色结晶，产率57.57％，mp 189-192℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.820(s，3H)；3.873(s，3H)；3.951(s，3H)；6.677(ddd，J1＝2.52Hz，J2＝8.68Hz，2H)；7.962(d，J＝8.68Hz，1H)；8.277(s，1H，5-CH)；8.846(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝366.0(61)，324.0(10)，262.0(10)，244.0(5)，231.0(6)，131.0(100)，93.0(19)HRMS理论值C15H14N2O4Se336.0119 实测值336.0126实施例196-二苯基-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-苯基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为黄色结晶，产率53.80％，mp 229-230℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.879(s，3H)；7.382(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.28Hz，1H)；7.487(t，J1＝7.84Hz，J2＝7.38Hz，2H)；7.733(m，4H)；7.953(d，J＝8.40Hz，2H)；8.428(s，1H，5-CH)；8.844(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝382.0(100)，353.0(4)，317.0(4)，280.9(5)，281.0(12)，262.0(4)，231.0(18)，212.0(5)，182.0(7)，162.0(18)，119.0(31)HRMS理论值C19H14N2O2Se382.0220 实测值382.0218实施例206-(3-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(3-甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反应完毕静置生成大量的黄色沉淀。目标产物为黄色结晶，产率33.85％，mp 177-1 79℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.807(s，3H)；3.869(s，3H)；6.875(dd，J1＝1.68Hz，J2＝7.28Hz，1H)；7.329(t，J1＝8.1Hz，J2＝7.84Hz，1H)；7.425(m，2H)；8.383(s，1H，5-CH)；8.816(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝336.0(100)，206.0(33)，306.9(4)，275.0(5)，243.0(6)，182.0(4)，162.0(7)，81.9(12)HRMS理论值C14H12N2O3Se336.0013 实测值336.0018实施例216-(4-腈基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按实施例4方法制备该化合物，只是实施例4制备中的溴代酮为2-溴-1-(4-腈基-苯基)-乙基-1-酮。反应过程中生成大量的黄色沉淀。目标产物为白色结晶，产率32.61％，mp 234-236℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.889(s，3H)；7.879(d，J＝8.40Hz，2H)；8.04(d，J＝8.40Hz，2H)；8.552(s，1H，5-CH)；8.843(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝329.0(100)，300.0(43)，272.0(11)，194.0(4)，166.0(4)，142.0(8)，127.0(6)，114.0(3)，102.0(2)HRMS理论值C14H9N3O2Se328.9868实测值328.9826实施例22 裂解AGE-BSA-胶原交联结构的ELISA筛选试验以AGE-BSA与包被在96孔酶标板上大鼠尾胶蛋白交联、体外制备AGEs交联结构，采用ELISA方法评价化合物对AGEs交联的裂解作用。
尾胶原包被96孔酶标板制备正常Wister大鼠(体重200±20g)，急性处死，取尾，4℃下进行以下尾胶原蛋白制备过程。首先，抽取尾腱胶原丝，用生理盐水洗并去除非胶原丝组织，再经双蒸水洗3次，剪碎、浸泡于0.1％冰醋酸中4℃1周，期间时常进行震摇。最后以8000g×30min离心，收集离心上清胶原蛋白溶液，稀释后测定蛋白含量。以每孔70μg胶原蛋白，满孔包被96孔酶标板(Costar)，4℃、24h，弃包被液，无菌条件下风干、保鲜膜包被，4℃贮存备用。
AGE-BSA制备牛血清白蛋白BSA(V)(Roch)50mg/ml及0.5M葡萄糖在0.2MPBS(PH7.4)中，37℃无菌条件下，避光孵育3-4个月，使其形成糖基化BSA即BSA-AGEs。同时，以无葡萄糖的BSA制备无糖基化BSA。然后在0.01MPBS(pH7.4)透析液中透析，除去未反应的葡萄糖，荧光扫描(Exi/Em(395/460nm))，及SDS-PAGE鉴定BSA-AGEs形成，同时采用Lowery方法进行蛋白定量。
分析测定方法流程尾胶原包被96孔板，用pH7.4 PBS满孔中和酸性胶原1h；SuperBlock(PIERCE)37℃，封闭1h；PBST(PBS-Tween)洗板3次，每次振荡1分钟；用PBS稀释AGE-BSA，以获得最大交联度浓度的AGE-BSA 100μl加入96孔板的A、B、C、D行的孔中，相同浓度的BSA加入E、F、G、H行的孔中，1列前3孔中PBS，作为系统和试剂空白，37℃，4h使之与胶原交联；PBST洗板4次，间隔振荡1 min；受试化合物采用pH7.4 PBS稀释，取100μl/孔分别加于AGE-BSA交联和BSA孔各4孔，同样方式加入PBS 100μl/孔作为非裂解对照，37℃孵育16h；PBST洗板4次，间隔振荡1min；加80μl/孔兔抗BSA抗体(1∶500)37℃，50min；PBST洗板4次，间隔振荡1min；加入80μl/孔辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(1∶1000)37℃，50min；PBST洗板3次，间隔振荡1min；加底物液TMB(3、3’、5、5’-四甲基联苯胺)100μl/孔室温，闭光20min；用2mol/L H2SO4终止反应；10min内，BOBRAD Model550读板机450nm下，板空白孔调零读取OD值。
数据分析平均OD值采用4孔平均值。
校正OD＝AGE-BSA孔的OD平均值-BSA孔的OD平均值裂解率以OD值降低的百分率表示[(PBS孔的OD平均值-受试药物孔OD平均值)/PBS孔的OD平均值]×％根据上述步骤受试化合物在0.1、1mmol/L或较低浓度下裂解率结果见下表(以下结果均为5次以上筛选结果的平均值)ELISA测定式I化合物对AGE-BSA-胶原交联的裂解率
权利要求
1.式I的咪唑并硒唑化合物或其药用盐 其中R1，R2独立地选自氢；取代的或未取代的C5～C8的脂环基；取代或未取代的C1～C8直链或支链烷基；取代或未取代的C2～C8直链或支链烯基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基烷基；取代或未取代的C1～C4羧酰氨基烷基；取代或未取代的C1～C4烷基亚磺酰基；取代或未取代的C1～C4烷基磺酰基；取代或未取代的C3～C8环烷基；取代或未取代的C5～C8环烯基，以上所述的取代基选自下述一组中的至少一个取代基团氧、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8环烷基、C5～C7环烯基，或者R4；取代或未取代的的C5～C14芳香基；取代或未取代的的C5～C6芳香磺酰基；取代或未取代的的C5～C6芳香亚磺酰基，这里的芳香基环中包含1～6个选自下面的杂原子O，S，N，Se；所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巯基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、氧、卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8环烷基，C5～C7环烯基、芳烷基或者R4，R3独立选自氢；C1～C8直链或支链烷基；C2～C8直链或支链烯基或者R4，R4独立选自取代或未取代的C5～C14芳香碳环或杂环，杂环中包含1～6个选自下面的杂原子O，S，N，Se；所述的取代基选自下述一组中的至少1～3个取代基团C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巯基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、氧、卤素、硝基、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或氨基。
2.权利要求1所述化合物其中 R1独立地选自氢；取代或未取代的C2～C8烷基；取代或未取代的C5～C10芳香基，以上所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团甲氧基、卤素、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R2独立地选自氢；取代或未取代的C2～C8直链或支链烷基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的的C5～C10芳香基；取代或未取代的C5～C10芳香磺酰基；取代或未取代的C5～C10芳香亚磺酰基，以上所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团甲氧基、卤素、羟基、巯基、氰基，硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R3独立选自氢；甲基；乙基；苯基，R4独立选自取代的或未取代的苯环、萘环、噻吩、硒吩、呋喃或者吡咯，所述的取代基选自下述一组中的1-3个取代基团卤素、硝基、羟基、羟甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、苯氧基、苄氧基、羧基或氨基。
3.权利要求1所述化合物的季胺盐或水合物，其中 R1和R2，R3和R4取代基定义同权利要求1，2，Z是药学上可以接受的盐，包括卤素形成的盐，F，Cl，Br，I，或者甲磺酸盐，对甲苯磺酸盐，优选的盐为氢溴酸盐和甲磺酸盐。
4.权利要求1的化合物，其包括5-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-溴-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-萘基-2-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(3-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，5-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-溴-苯基)-5-甲基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(3-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-腈基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
5.权利要求4的化合物，其中所述化合物为6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
6.药物组合物，其含有权利要求1～5任一项所述的化合物、其几何异构体或者其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体。
7.制备权利要求1-5任一项所述化合物的方法，该方法包括1)将硒脲或KSeCN/SiO2及NH4OAc/Al2O3与式VI的α-卤代酮反应， 其中R1，R2同本发明中式I化合物的定义；Z为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式III化合物 2)将式III化合物与式IV化合物在非质子传递溶剂中反应， 其中R3，R4同上述式I化合物中的定义；X为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式I化合物 或，将式III化合物与式IV化合物在质子化溶剂中反应 其中R3，R4同上述式I化合物的定义；X为离去基团，选自F、Cl、Br或I，得到式V化合物， 将式V化合物与酸或碱反应，得到式I化合物
8.权利要求1～6任一项所述的化合物、其几何异构体或者其药学上可接受的盐在制备用于抑制或者/和裂解晚期糖基化终产物(AGEs)的产品中用途。
9.权利要求8的用途，其中所述产品是指用于(i)增加皮肤弹性或者减少皮肤皱纹，预防或者治疗(ii)非胰岛素依赖型糖尿病；(iii)糖尿病的并发症；(iv)肾脏损伤；(v)血管损伤或者预防或治疗血管硬化；(vi)高血压；(vii)视网膜病变；(viii)晶状体蛋白损伤；(ix)白内障；(x)周围神经病变；(xi)吸烟引起的肺AGEs的形成，以及由此产生的肺纤维化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨关节炎的产品。
10.权利要求1～6任一项所述的化合物、其几何异构体或者其药学上可接受的盐在制备用于牙齿着色的逆转剂或者用于防止和逆转牙齿着色的产品中用途。
11.权利要求1～6任一项所述的化合物、其几何异构体或者其药学上可接受的盐在制备用于植物ak动物体保鲜的产品中用途。
全文摘要
本发明涉及通式I的咪唑并硒唑类化合物，其几何异构体及其药学上可接受的盐，式中各个基团的定义如权利要求书所述。本发明还涉及制备式I化合物的方法、含有上述化合物的药用组合物以及这些所述化合物用于(i)增加皮肤弹性或者减少皮肤皱纹，预防或者治疗(ii)非胰岛素依赖型糖尿病；(iii)糖尿病的并发症；(iv)肾脏损伤；(v)血管损伤或者预防或治疗血管硬化；(vi)高血压；(vii)视网膜病变；(viii)晶状体蛋白损伤；(ix)白内障；(x)周围神经病变；(xi)吸烟引起的肺AGEs的形成，以及由此产生的肺纤维化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨关节炎；或者用于口腔局部用药用于防止或逆转牙齿着色的用途；或者用于各种食物中植物或动物蛋白的保鲜用途。
文档编号C07D517/00GK1690061SQ20041003401
公开日2005年11月2日 申请日期2004年4月21日 优先权日2004年4月21日
发明者李松, 钟武, 王莉莉, 程罡, 刘洪英, 阮承迈, 崔浩, 肖军海, 郑志兵, 谢云德, 胡远东, 聂爱华 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所