专利名称：因子Ⅶa抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及因子VIIa的新型抑制剂，包含这些抑制剂的药物组合物以及利用这些抑制剂治疗或预防由因子VIIa介导的疾病的方法。本发明还公开了这些抑制剂的制备方法。
背景技术：
血栓形成由被称为凝固级联的复杂顺序的生物化学事件引起。凝固的触发事件是在循环中发现的丝氨酸蛋白酶因子VIIa(FVIIa)对在损伤或炎症之后的血管表面上发现的组织因子(TF)的结合。一旦结合于TF，因子VIIa催化丝氨酸蛋白酶因子Xa的形成，其随后形成级联中的最终蛋白酶-凝血酶。
血栓形成的临床表现不等，从在心脏的关键血管(冠状动脉脉管系统)中发生的急性心肌梗塞(AMI或心脏病发作)和不稳定型绞痛(UA)，到在较低末端形成血块并且经常在臀部和膝部的矫形术、以及一般腹部外科和瘫痪之后形成的深静脉血栓形成(DVT)。DVT的形成是肺栓塞(PE)形成的危险因素，其中在较低末端形成的血块的一部分脱落并且行进到肺，在那里阻断血液流动。不可预知的PE形成经常导致致命的结果。血栓形成也可系统地形成，在整个血管系统中形成微血块。这种状况，被称为弥漫性血管内凝血(DIC)，可以是由于某些病毒性疾病如埃博拉病(Ebola)、某些癌症、脓毒病和类风湿性关节炎所引起。严重的DIC可以由于凝固应答的过度活化而导致凝血因子的急剧减少，其可引起多个器官衰竭、出血和死亡。
脑的脑血管中血块的形成或栓塞是引起缺血性卒中的关键事件。引起中风的引发因素是心脏的心房纤颤或心房的节奏异常和动脉粥样硬化之后在从心脏到脑的主要动脉(颈动脉)中的血栓形成。在美国每年有超过600,000人发生中风。这些中风患者的三分之二发生某些残疾，三分之一发生永久性和严重的残疾。因此，需要用于治疗多种血栓形成状况的抗血栓形成剂。本发明满足这些和相关的需要。
发明内容
本发明的一个方面的目的是式I的化合物，或其两性离子；或其药学可接受的盐，条件是式I的化合物不是(RS)-2-{2-[5-(5-甲脒基(carbamimidoyl)-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸、(RS)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酰氨基}琥珀酸；和(RS)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-脲基甲基联苯-3-基]-2-甲基丙酰氨基}琥珀酸或其药学可接受的盐， 其中X1、X2、X3和X4独立地为-N-或-CR4-，其中R4为氢、烷基或卤素，条件是X1、X2、X3和X4中不超过三个是-N-；R1为氢、烷基、卤素、羧基或氨基羰基；R2为氢、烷基或卤素；R3为二羧基烷基氨基羰基烷基或二羧基烷基氨基羰基环烷基；Rx为氢、烷基、烷基硫基、卤素、羟基、羟基烷基、烷氧基、氨磺酰基、烷基氨磺酰基、二烷基氨磺酰基或硝基；Ry为氢、烷基或卤素；Rz为氢、烷基、卤代烷基、环烷基、烷基硫基、卤素、羟基、羟基烷基、硝基、氰基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷基氧基、羟基烷基氧基、氨基烷基氧基、羧基烷基氧基、氨基羰基烷基氧基、卤代烷氧基、羧基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氰基烷基、烷基磺酰基、烷基磺酰基烷基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、甲脒基、羟基-甲脒基、烷氧基甲脒基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氨基烷基、烷氧基磺酰氨基、烷氧基磺酰氨基烷基、杂环烷基烷基氨基羰基、羟基烷氧基烷基氨基羰基、杂环烷基羰基、杂环烷基羰基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、氧代杂环烷基、氧代杂环烷基烷基、杂芳基、杂芳烷基、脲基、烷基脲基、二烷基脲基、脲基烷基、烷基脲基烷基、二烷基脲基烷基、硫脲基、硫脲基烷基、-COR12(其中R12为烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基或氨基烷基)、-(亚烷基)-COR12(其中R12为烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基或氨基烷基)、-CONR14R15(其中R14为氢或烷基并且R15为氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷基)-CONR16R17(其中R16为氢、烷基或羟基烷基并且R17为氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-NR18R19(其中R18为氢或烷基并且R19为氢、烷基、酰基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷基)-NR20R21(其中R20为氢、烷基或羟基烷基并且R21为氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-SO2NR22R23(其中R22为氢或烷基并且R23为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基，或者R22和R23与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-(亚烷基)-SO2NR24R25(其中R24为氢或烷基并且R25为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R24和R25与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-NR26SO2NR27R28(其中R26和R27独立地为氢或烷基并且R28为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R27和R28与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-(亚烷基)-NR29SO2NR30R31(其中R29和R30独立地为氢或烷基并且R31为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R30和R31与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-CONH-(亚烷基)-NR32R33(其中R32为氢或烷基并且R33为烷基)，或者芳烷基；和R13为氢、羟基、(C1-10)烷氧基、-C(O)R35(其中R35为烷基、芳基、卤代烷基或氰基烷基)或-C(O)OR36(其中R36为烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、酰基、芳基或卤代烷基)。所述化合物的名称为用AutoNom版本2.2产生的。
在第二个方面，本发明涉及药物组合物，其包含药学可接受的载体和治疗有效量的式I的化合物或其两性离子或其药学可接受的盐。
在第三个方面，本发明涉及在动物中治疗由因子VIIa、IXa、Xa和/或XIa，优选VIIa介导的疾病的方法，该方法包括对所述的动物给用治疗有效量的式I的化合物或其两性离子或其药学可接受的盐。优选地，所述疾病为血栓栓塞性疾病或癌症或类风湿性关节炎，更优选为血栓栓塞性疾病，甚至更优选所述疾病为深静脉血栓形成。优选地，本发明的化合物进行预防性给用。
在第四个方面，本发明涉及在动物中治疗血栓栓塞性疾病的方法，该方法包括对所述的动物给用治疗有效量的式I的化合物或其两性离子或其药学可接受的盐与另外一种或多种抗凝血剂的组合，所述另外一种或多种抗凝血剂独立地选自凝血酶抑制剂、因子IXa抑制剂、因子Xa抑制剂、Aspirin和Plavix。
在第五个方面，本发明涉及抑制生物样品(例如储存的血液产品和样品)凝固的方法，其包括给用式I的化合物或其两性离子或其药学可接受的盐。
在第六个方面，本发明涉及式I的化合物或其两性离子或其药学可接受的盐在制备用于在动物中治疗血栓栓塞性疾病或癌症或类风湿性关节炎的药物中的应用。优选地，所述疾病为血栓栓塞性疾病，例如深静脉血栓形成。
在第七个方面，本发明涉及式(II)的中间体
其中PG1为适当的氧-保护基，并且PG2为适当的氨基-保护基。优选地，PG1为烷基或芳烷基，更优选为苄基。优选地，PG2为烷基，更优选为叔丁基。
在第八个方面，本发明涉及其中R3为二羧基烷基氨基羰基烷基的式I化合物的制备方法，其包括(i)将下式的化合物或其被适当保护的衍生物与二羧基烷基氨基进行反应，其中所述的二羧基烷基氨基中的羧基任选被保护， 其中R1、R2、R13、Rx、Ry、Rz、X1-X4如在本发明的发明内容中所定义的；(ii)任选除去所有的保护基；(iii)任选修饰任意的R1、R2、R13、Rx、Ry和Rz基团；(iii)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为酸加成盐；(iv)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为游离碱；(v)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为两性离子。
在第九个方面，本发明涉及以下式Ib或Ic化合物的制备方法
或Ic所述方法包括(i)将下式的化合物分别与(R)或(S)天冬氨酸反应， 其中所述的(R)或(S)天冬氨酸的羧基任选被保护；(ii)任选使任何被保护的一个或多个羧基脱保护；(ii)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为酸加成盐；(iii)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为游离碱；(iv)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为两性离子；任选使任何被保护的一个和多个羧基脱保护。
优选地，所述羧基用苄基保护并且被制备的化合物为Ib。
在第十个方面，本发明涉及以下式(II)的中间体的制备方法 其中PG1为适当的氧-保护基并且PG2为适当的氨基-保护基，所述的方法包括(i)将以下式(III)的化合物与一当量的式RLi或RMgX1的有机金属试剂反应以使得-SO2NHPG2基团去质子化，其中所述的式RLi或RMgX1的有机金属试剂中R为烷基或芳基并且X1为卤素，
其中PG1和PG2如上所定义并且X为卤素；(ii)用一当量的式RLi或RMgX1的有机金属试剂使在上述步骤(i)中形成的化合物发生金属转移，其中所述的式RLi或RMgX1的有机金属试剂中R为烷基或芳基；(iii)用硼酸三烷基酯处理在上述步骤(ii)中产生的化合物以生成式(II)的化合物。
优选在上述步骤(i)中使用甲基溴化镁；在上述步骤(ii)中使用异丙基溴化镁并且所述的硼酸三烷基酯为硼酸三甲酯。优选地，在上述化合物(III)中，PG1为苄基，PG2为叔丁基并且X为碘。
本发明的详细描述定义用于本说明书和权利要求书中的如下术语意于具有如下所定义的含义，除非另外指明或用于命名化合物。
“烷基”指一到六个碳原子的直链饱和单价烃基或者三到六个碳原子的支链饱和单价烃基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基(包括所有的同分异构形式)、戊基(包括所有的同分异构形式)等。
“亚烷基”指一到六个碳原子的直链饱和二价烃基或者三到六个碳原子的支链饱和二价烃基，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、1-甲基亚丙基、2-甲基亚丙基、亚丁基、亚戊基等。
“烷基硫基”指-SR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲硫基、乙硫基、丙硫基(包括所有的同分异构形式)、丁硫基(包括所有的同分异构形式)等。
“氨基”指-NRR’基团，其中R和R’独立地为氢、烷基或-CORa，其中Ra为烷基，例如-NH2、甲氨基乙基、1，3-二氨基丙基、乙酰氨基丙基等。
“烷基氨基”指-NHR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氨基、乙氨基、丙氨基(包括所有的同分异构形式)等。
“酰基”指-COR’基，其中R’为如本文中所定义的烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基烷基、羟基烷基或烷氧基烷基，例如乙酰基、三氟乙酰基、羟甲基羰基等。
“氨基磺酰基”或“氨磺酰基”指-SO2NH2基。
“烷基氨基磺酰基”指-SO2NHR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氨基磺酰基、乙氨基磺酰基等。
“烷基磺酰基”指-SO2R基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲磺酰基、乙磺酰基、正丙磺酰基或异丙磺酰基等。
“烷基磺酰基烷基”指-(亚烷基)-SO2R基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲磺酰甲基、乙磺酰甲基、正丙磺酰乙基或异丙磺酰乙基等。
“烷基磺酰氨基”指-NHSO2R基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲磺酰氨基、乙磺酰氨基、正丙磺酰氨基或异丙磺酰氨基等。
“烷基磺酰氨基烷基”指-(亚烷基)-NHSO2R，其中R为如上所定义的烷基，例如甲磺酰氨基甲基、乙磺酰氨基甲基、正丙磺酰氨基乙基或异丙磺酰氨基乙基等。
“烷氧基磺酰基氨基”指-NHSO2R，其中R为如本文中所定义的烷氧基，例如甲氧基磺酰氨基、乙氧基磺酰氨基等。
“烷氧基磺酰氨基烷基”指-(亚烷基)-NHSO2R，其中R为如本文中所定义的烷氧基，例如甲氧基磺酰氨基甲基、乙氧基磺酰氨基甲基等。
“烷氧基”指-OR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基或2-丙氧基，正、异或叔丁氧基等。
“烷氧基羰基”指-COOR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基等。
“烷氧基羰基烷基”指-(亚烷基)-COOR基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基羰基甲基、乙氧基羰基甲基等。
“烷氧基烷基”指用如上所定义的至少一个烷氧基，优选一个或两个烷氧基取代的一到六个碳原子的直链单价烃基或者三到六个碳原子的支链单价烃基，例如2-甲氧基乙基，1-、2-或3-甲氧基丙基、2-乙氧基乙基等。
“氨基烷基”指用至少一个，优选一个或两个-NRR’取代的一到六个碳原子的直链单价烃基或者三到六个碳原子的支链单价烃基，其中-NRR’中R和R’独立地为氢、烷基或-CORa(其中Ra为烷基)，例如氨基甲基、甲氨基乙基、1，3-二氨基丙基、乙酰氨基丙基等。
“氨基羰基烷基”指用一个或两个-CONRR’取代的一到六个碳原子的直链单价烃基或者三到六个碳原子的支链单价烃基，其中-CONRR’中R和R’独立地为氢、烷基或-CORa(其中Ra为烷基)，例如氨基羰基甲基、甲氨基羰基甲基、乙酰氨基羰基丙基等。
“烷氧基烷基氧基”指-OR基，其中R为如上所定义的烷氧基烷基，例如2-甲氧基乙基氧基，1-、2-或3-甲氧基丙基氧基，2-乙氧基乙基氧基等。
“氨基烷基氧基”指-OR基，其中R为如上所定义的氨基烷基，例如2-氨基乙基氧基，1-、2-或3-甲氨基丙基氧基等。
“氨基羰基”或“氨基甲酰基”指-CONH2基。
“氨基羰基烷基氧基”指-O-(亚烷基)-CONRR”基，其中R和R’独立地为如上所定义的氢或烷基，例如2-氨基羰基乙基氧基，氨基羰基甲基氧基等。
“烷基脲基”指-NRCONHR’基，其中R为氢或烷基并且R’为烷基，例如甲基脲基甲基等。
“烷基脲基烷基”指-(亚烷基)-NRCONHR’基，其中R为氢或烷基并且R’为烷基，例如甲基脲基甲基等。
“芳基”指6-12个环原子的单价单环或双环芳香族烃基，并且任选独立地由一个或多个取代基，优选一个、两个或三个取代基取代，所述取代基选自烷基、卤代烷基、烷氧基、烷基硫基、卤素、硝基、-COR(其中R为烷基)、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、羧基或-COOR(其中R为烷基)。典型的例子包括但不限于，苯基、联苯基、1-萘基和2-萘基及其衍生物。
“芳基磺酰基”指-SO2R基，其中R为如上所定义的芳基，例如苯磺酰基等。
“芳烷基”指-(亚烷基)-R基，其中R为如上所定义的芳基，例如苄基、苯乙基、3-(3-氯苯基)-2-甲基戊基等。
“烷氧基甲脒基”指-C(＝NH)NHOR或-C(＝NOR)NH2基，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基甲脒基。
“ 环烷基”指三至六个碳原子的环状饱和单价烃基，例如环丙基、环丁基等，优选环丙基。
“ 羧基烷基”指-(亚烷基)-COOH基，例如羧甲基、羧基乙基、1-、2-或3-羧丙基等。
“羧基烷基氧基”指-O-(亚烷基)-COOH基，例如羧甲基氧基、羧基乙基氧基等。
“甲脒基”指-C(＝NH)NH2基或其被保护的衍生物。
“氰基烷基”指-(亚烷基)-CN基，例如氰甲基、氰乙基、氰丙基等。
“ 二羧基烷基氨基羰基烷基”指-(亚烷基)-CONHR基，其中R为本文中所定义的用两个羧基取代的烷基，例如-CH2CONHCH(COOH)(CH2COOH)、-CH2CONHCH(CH2COOH)2、-C(CH3)2-CONHCH(COOH)(CH2COOH)、-C(CH3)2-CONHCH(CH2COOH)2等。
“ 二羧基烷基氨基”指-NHR基，其中R为如本文中所定义的用两个羧基取代的烷基。
“二羧基烷基氨基羰基环烷基”指如下式的基团 其中n为1-4并且R为如本文中所定义的用两个羧基取代的烷基。
“二烷基氨基”指-NRR’基，其中R和R’独立地为如上所定义的烷基，例如二甲氨基、甲基乙基氨基、甲基丙基氨基(包括所有同分异构形式)等。
“二烷基氨基磺酰基”指-SO2NRR’基，其中R和R’独立地为如上所定义的烷基，例如二甲氨基磺酰基、甲基乙基氨基磺酰基等。
“二烷基脲基”指-NRCONR’R”基，其中R为氢或烷基，并且R’和R”独立地为烷基，例如二甲基脲基等。
“二烷基脲基烷基”指-(亚烷基)-NRCONR’R”基，其中R为氢或烷基，并且R’和R”独立地为烷基，例如二甲基脲基甲基等。
“胍基烷基”指用至少一个，优选一个或两个-NRC(NRR’)NRR’取代的一到六个碳原子的直链单价烃基或者三到六个碳原子的支链单价烃基，其中-NRC(NRR’)NRR’中R和R’独立地为氢、烷基或-CORa，其中Ra为烷基，例如胍基甲基、N’-甲氨基乙基、2-(N’，N’，N”，N”-四甲基-胍基)-乙基等。
“卤”指氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。
“卤代烷基”指用一个或多个卤素原子，优选一个至三个卤素原子，优选氟或氯取代的烷基，包括用不同卤素原子取代的那些，例如-CH2C1、-CF3、-CHF2等。
“卤代烷氧基”指-OR基，其中R为如上所定义的卤代烷基，例如-OCH2C1、-OCF3、-OCHF2等。
“羟基烷基”指用一至五个羟基取代的一到六个碳原子的直链单价烃基或者三到六个碳原子的支链单价烃基，条件是如果存在两个羟基，它们不在相同的碳原子上。典型的例子包括但不限于，羟基甲基、2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、3-羟基丁基、4-羟基丁基、2，3-二羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-羟基乙基、2，3-二羟基丁基、3，4-二羟基丁基和2-(羟基甲基)-3-羟基丙基，优选2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基和1-(羟基甲基)-2-羟基乙基。
“羟基烷基氧基”指-OR基，其中R为如上所定义的羟基烷基，例如2-羟基乙基氧基、3-羟基丙基氧基等。
“羟基烷氧基烷基氨基羰基”指-CONH-(亚烷基)-O-(亚烷基)OH基，其中亚烷基如上所定义，例如-CONH-(CH2)2-O-(CH2)2OH等。
“杂环烷基”指3-8个环原子的饱和或不饱和单价环状基团，其中一个或两个环原子为选自N、O或S(O)n的杂原子，其中n为0-2的整数，剩余的环原子为C。该杂环烷基环可任选被一个或多个取代基取代，优选一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、3，5，6-三羟基-2-羟甲基-四氢吡喃-3-基、4，5-二羟基-2-羟甲基-6-(4，5，6-三羟基-2-羟甲基-四氢吡喃-3-基氧基)-四氢吡喃-3-基、杂芳烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基烷基、胍基烷基、卤素、氰基、羧基、-COOR(其中R为如上所定义的烷基)或-CONRaRb(其中Ra和Rb独立地为氢或烷基)或其被保护的衍生物。更明确地，术语杂环烷基包括但不限于吡咯烷基(pyrrolidino)、哌啶基(piperidino)、吗啉基、哌嗪基(piperazino)、四氢吡喃基和硫代吗啉基。
“杂环烷基羰基”指-COR基，其中R为如上所定义的杂环烷基。更明确地，术语杂环烷基羰基包括但不限于1-吡咯烷基羰基、1-哌啶基羰基、4-吗啉基羰基、1-哌嗪基羰基、2-四氢吡喃基羰基和4-硫代吗啉基羰基及其衍生物。
“杂环烷基羰基烷基”指-(亚烷基)-COR基，其中R为如上所定义的杂环烷基。更明确地，术语杂环烷基羰基包括但不限于1-吡咯烷基羰基甲基、1-哌啶基羰基甲基、4-吗啉基羰基乙基、1-哌嗪基羰基甲基及其衍生物。
“杂环烷基烷基”指-(亚烷基)-R基，其中R为如上所定义的杂环烷基。更明确地，术语杂环烷基烷基包括但不限于吡咯烷-1-基甲基、哌啶-1-基甲基、2-吗啉-1-基乙基、哌嗪-1-基乙基及其衍生物。
“杂环烷基烷基氨基羰基”指-CONH-(亚烷基)-R基，其中R为如上所定义的杂环烷基。更明确地，术语杂环烷基烷基氨基羰基包括但不限于1-吡咯烷基乙基-氨基羰基、1-哌啶基乙基-氨基羰基、4-吗啉基乙基羰基、1-哌嗪基乙氨基羰基和4-硫代吗啉基丙基氨基羰基及其衍生物。
“杂芳基”指含5-10个原子的单价单环或双环芳基，其包含一个或多个，优选一个或两个选自N、O或S的环杂原子，剩余的环原子为碳。所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，优选一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自烷基、卤代烷基、烷氧基、烷基硫基、氨基烷基、胍基烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、烷基或二烷基氨基、羟基、羧基或-COOR(其中R为如上所定义的烷基)。更明确地，术语杂芳基包括但不限于吡啶基、吡咯基、咪唑基、噻吩基、呋喃基、吲哚基、喹啉基、吡嗪、嘧啶、吡二嗪(pyradizine)、唑、异唑基、苯并唑、喹啉、异喹啉、苯并吡喃基和噻唑基。
“杂芳基磺酰基”指-SO2R基，其中R为如上所定义的杂芳基，例如吡啶磺酰基、呋喃磺酰基等。
“杂芳烷基”指-(亚烷基)-R基，其中R为如上所定义的杂芳基，例如吡啶基甲基、呋喃基甲基、吲哚基甲基、嘧啶基甲基等。
“杂环氨基”指3-8环原子的饱和或不饱和的单价环基团，其中一个或两个环原子为选自N、O或S(O)n的杂原子，其中n为0-2的整数，其余的环原子为C，条件是至少一个杂原子为氮并且其中一个或两个碳原子任选被羰基替代。所述的杂环氨基环可以任选被一个或多个取代基取代，优选一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基烷基、胍基烷基、卤素、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、卤代烷基、卤素、氰基、羧基、-CONRaRb(其中Ra和Rb独立地为氢或烷基)或-COOR(其中R为如上所定义的烷基)。更明确地，术语杂环氨基包括但不限于1-吡咯烷基、1-哌啶基、1-哌嗪基和硫代吗啉基及其衍生物。
“羟基甲脒基”指-C(＝NH)NHOH或-C(＝NOH)NH2基。
本发明还包括式I化合物的前体药物。术语前体药物意于表示共价结合的载体，当将前体药物给用到哺乳动物对象时，其能够释放式I的活性成分。活性成分的释放发生在体内。前体药物可通过本领域技术人员已知的技术制备。这些技术通常在给定的化合物中修饰适当的官能团。然而这些被修饰的官能团通过常规处理或在体内重新生成原始的官能团。式I化合物的前体药物包括这样的化合物，其中的羟基、甲脒基、胍基、氨基、羧基或类似的基团被修饰。前体药物的例子包括但不限于式I化合物中的羟基官能团的酯(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如，N，N-二甲基氨基羰基)，等。式I化合物的前体药物也落入本发明的范围中。
本发明还包括式I化合物的衍生物和被保护的衍生物。例如，当式I化合物包含可氧化的氮原子(例如当式I化合物包含吡啶、氨基、烷基氨基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或二烷基氨基基团)时，氮原子可以通过本领域公知的方法转化为N-氧化物。
同样当式I化合物包含例如羟基、羧基、羰基、硫醇或任何包含一个或多个氮原子的基团时，这些基团可用适当的保护基保护。适当保护基的全面列举可以在T.W.Greene，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley&Sons，Inc.1999中找到，其公开内容通过引用其全部内容而并入本发明中。式I化合物的被保护的衍生物可以用本领域公知的方法制备。
化合物的“药学可接受的盐”指制药学上可接受的盐并且具有所需的母体化合物的药理学活性。这样的盐包括酸加成盐，与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的盐；或与有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)-苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、葡庚糖酸、4，4’-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基磺酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成的盐；或当存在于母体化合物中的酸质子被金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子替代或者与有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡萄糖胺等配位而形成的盐。应当理解的是，适当的药学可接受的盐为无毒的。关于药学可接受的盐的更多的信息可见于Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985中，通过引用并入本发明。
本发明的化合物可以具有不对称中心。包含不对称取代原子的本发明的化合物可以以旋光或外消旋形式分离。本领域公知如何制备旋光形式，例如通过物质拆分。许多烯属烃，C＝C双键等的几何异构体可以存在于描述于本文中的化合物中，并且所有稳定的异构体预计落入本发明中。本发明化合物的顺式和反式几何异构体被描述并可以作为异构体的混合物或作为分离的异构体形式被分离出来。结构上所有手性的、对映体的、非对映体的、外消旋的形式和所有的几何同分异构形式(表示式I的化合物)都意于包括在内，除非明确指出的特定的立体化学或异构体形式。
某些式I化合物存在互变异构平衡。以互变异构体形式存在的式I化合物在本申请中以一种可能的互变异构体被命名、说明或另外描述。然而，应当理解的是，所有可能的互变异构体意于包含于这样的命名、说明和描述中并落入本发明的范围中。例如，式I的化合物中基团-C(＝NR13)NH2可互变异构为-C(＝NH)NHR13基团。另外，如本文中所用的术语烷基虽然只列举了一些例子，但其包括所述烷基的所有可能的同分异构形式。另外，当环状基团，例如芳基、杂芳基、杂环烷基被取代时，虽然只列举了一些例子，但它们包括所有的位置异构体。
某些化合物包含碱性基团例如氨基部分和酸性部分例如羧酸部分，根据溶液的pH值而定，其可以游离胺和游离羧酸或以两性离子形式存在，在两性离子中，氨基被质子化形成铵离子并且羧酸脱质子形成羧酸根离子。所有这样的两性离子都包括在本发明中。
“氧代杂环烷基”指3-8个环原子的饱和或不饱和(条件是它不是芳族的)单价环状基团，其中一个或两个环原子为选自N、O或S(O)n的杂原子，其中n为0-2的整数，其余的环原子为C，其中一个或两个碳原子用氧代(C＝O)基团替代。所述的氧代杂环烷基环可以任选地被一个或多个取代基取代，优选一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、卤代烷基、卤素、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、胍基烷基、烷氧基、氰基、羧基或-COOR(其中R为如上所定义的烷基)。更明确地，术语氧代杂环烷基包括但不限于，2或3-氧代吡咯烷-1-基，2、3或4-氧代哌啶基，3-氧代吗啉基，2-氧代-哌嗪基，2-氧代四氢吡喃基，3-氧代硫代吗啉基，2-咪唑烷酮及其衍生物。
“氧代杂环烷基烷基”指-(亚烷基)-R基，其中R为如上所定义的氧代杂环烷基烷基。更明确地，术语氧代杂环烷基烷基包括但不限于2或3-氧代吡咯烷-1-基-(甲基、乙基或丙基)，2、3或4-氧代哌啶-1-基-(甲基、乙基或丙基)，3-氧代吗啉-4-基-(甲基、乙基或丙基)，2-氧代哌嗪-1-基-(甲基、乙基或丙基)，2-氧代四氢吡喃-3-基-(甲基、乙基或丙基)，3-氧代硫代吗啉-4-基-(甲基、乙基或丙基)，2-咪唑烷酮-1-基-(甲基、乙基或丙基)及其衍生物。
“任选的”或“任选地”指随后描述的事件或情况可以但不必发生，并且所描述的内容包括所述事件或情况发生的例子以及其不发生的例子。例如“任选地用烷基单取代或二取代的杂环烷基”中所述的烷基可以但不必存在，并且所描述的内容包括所述的杂环烷基用烷基单取代或二取代的情况和所述的杂环烷基不用烷基取代的情况。
“药学可接受的载体或赋形剂”指用于制备药物组合物的载体或赋形剂，其通常是安全、无毒的并且即没有生物活性也没有其它不希望有的活性，并且包括兽医应用以及人用药物应用的可接受的载体或赋形剂。本说明书和权利要求书中所用的“药学可接受的载体/赋形剂”既包括一种也包括多于一种的这样的赋形剂。
疾病的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括(1)预防疾病，即，在哺乳动物中使疾病的临床症状不发展，其中所述的哺乳动物可以遭受或易患有疾病但尚未经历或表现出所述疾病的症状；(2)抑制疾病，即，阻止或减少疾病或其临床症状的发展；或(3)消除疾病，即，使疾病或其临床症状的消退。
“治疗有效的量”指式I化合物的量，当给用到哺乳动物用于治疗疾病时，该量足以实现用于所述疾病的治疗。所述”治疗有效的量”将根据所用化合物、所患疾病及其严重性以及待治疗哺乳动物的年龄、体重等的不同而变化。
“硫脲基”指-NRC(S)NR’R”基，其中R、R’和R”独立地为氢或烷基。
“硫脲基烷基”指-(亚烷基)-NRC(S)NR’R”基，其中亚烷基如上所定义，典型的例子包括但不限于硫脲基甲基、硫脲基乙基等。
“脲基”指-NHCONH2基。
“脲基烷基”指-(亚烷基)-NHCONH2基，其中亚烷基如上所定义，典型的例子包括但不限于脲基甲基、脲基乙基等。
本发明典型的化合物公开于下表I中，其中R1、R2和Ry为氢；X1为-N-，X2、X3和X4为碳。
表I
优选的实施方案尽管在本发明的发明内容部分中阐明了本发明最宽范围的定义，但优选式I的一些化合物。例如(I)优选的一组化合物由以下式Ia表示
其中R3、R13和Rz为如在本发明的发明内容部分中的定义。
在上述的Ia组化合物中，优选的化合物组为这样的化合物，其中R3为二羧基烷基氨基羰基烷基，优选-CH2CONHR或-C(CH3)2CONHR，其中R为二羧基烷基，更优选1，2-二羧基烷基或1，3-二羧基丙-2-基，甚至更优选(R)-1，2-二羧基乙基或(S)-1，2-二羧基乙基。
在上述优选的组和更优选的组中，包含于其中的甚至更优选的化合物的组为这样的化合物或者其两性离子或药学可接受的盐，其中Rz为卤素、羟基烷基、烷基磺酰基氨基、烷基磺酰基氨基烷基、烷基磺酰基、氨磺酰基、杂环烷基羰基烷基、氧代杂环烷基、羧基烷基、氧代杂环烷基烷基、杂芳烷基、脲基、烷基脲基、二烷基脲基、脲基烷基、烷基脲基烷基、二烷基脲基烷基、硫脲基、硫脲基烷基、-COR12(其中R12为烷基、羟基烷基或卤代烷基)、-(亚烷基)-COR12(其中R12为烷基或卤代烷基)、-CONR14R15(其中R14为氢或烷基并且R15为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷基)-CONR16R17(其中R16为氢或烷基并且R17为氢、烷基、羟基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-NR18R19(其中R18为氢或烷基并且R19为氢、烷基、酰基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷u基)-NR20R21(其中R20为氢或烷基并且R21为氢、烷基、羟基烷基、酰基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-SO2NR22R23(其中R22和R23独立地为烷基)、-NR26SO2NR27R28(其中R26和R27独立地为氢或烷基，并且R28为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R27和R28与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)或-(亚烷基)-NR29SO2NR30R31(其中R29和R30独立地为氢或烷基，并且R31为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R30和R31与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)。
优选地，Rz为氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基烷基、卤素、羧基烷基、羟基烷基、杂环烷基羰基烷基、脲基、脲基烷基、烷基脲基烷基、二烷基脲基烷基、-CONR14R15(其中R14为氢或烷基并且R15为氢或烷基)、-(亚烷基)-CONR16R17(其中R16为氢或烷基并且R17为氢、烷基或羟基烷基)或者-(亚烷基)-NR20R21(其中R20为氢或烷基并且R21为氢、烷基、羟基烷基或酰基)。
更优选地，Rz为氟、氨磺酰基、脲基甲基、叔丁基脲基甲基、3，3-二甲基脲基甲基、氨甲基、哌嗪-1-基羰基-甲基、羧甲基、羟甲基羰基氨甲基、氨基羰基、乙酰氨基甲基、氨基羰基甲基、甲氨基羰基甲基、二甲氨基羰基甲基、2-羟乙基氨基羰基甲基、吗啉-4-基-羰基甲基、甲氧基羰基氨基甲基、R或S或RS-1-羟乙基羰基-氨基甲基、羟甲基，或甲磺酰基氨基甲基。
在上述优选的组和更优选的组和甚至更优选的组中，包含于其中的特别优选的化合物的组为这样的化合物，其中R13为氢、羟基、甲氧基或乙氧基羰基，更优选为氢。
更优选地，所述式I的化合物有以下式Ib或Ic或其两性离子或药学可接受的盐表示 或 (II)式I化合物的另一优选的组为这样的化合物，其中以下结构部分 为3’-乙酰基苯基、3’-羟基苯基、2’-羟基苯基、3’-氨基羰基苯基、3’-氰基苯基、5’-氟-2’-羟基苯基、5’-氯-2’-羟基苯基、2’-羟基-甲基苯基、2’-羟基苯基、5’-羧基-2’-羟基苯基、2’，5’-二羟基苯基、5’-氰基-2’-甲氧基苯基、5’-氨基羰基-2’-甲氧基苯基、2’，6’-二羟基苯基、2’-羟基-5’-硝基苯基、2’-氰基苯基、3’-羟基甲基苯基、5’-氰基-2’-羟基-苯基、5’-氨基羰基-2’-羟基苯基、2’，6’-二羟基苯基、5’-氨基甲基-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-脲基甲基苯基、2’-羟基-5’-咪唑-2-基苯基、5’-氨基-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-脲基苯基、2’-羟基-5’-(2-吗啉-4-基乙基)氨基羰基-苯基、3’-溴-2’-羟基-5’-羟基甲基苯基、5’-(2-氰基乙基)-2’-羟基苯基、3’-溴-5’-羧甲基-2’-羟基苯基、5’-(2-羧基乙基)-2’-羟基苯基、5’-氨基羰基甲基-2’-羟基苯基、3’，5’-二氯-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-[2-(2-羟基乙氧基)乙氨基羰基]苯基、5’-二甲氨基磺酰基氨基-2’-羟基-苯基、3’-溴-5’-氯-2’-羟基-苯基、2’-羟基-5’-(4-甲基哌嗪-1-基羰基)苯基、2’-羟基-5’-(4-甲基哌嗪-1-基甲基(emthyl))苯基、5’-甲脒基-2’-羟基苯基、5’-(2-二甲氨基乙氨基羰基)-2’-羟基苯基或5’-氨基羰基-2’-羟基苯基。优选2’-羟基苯基、5’-氟-2’-羟基苯基、5’-氯-2’-羟基苯基、2’-羟甲基苯基、2’-羟基苯基、5’-羧基-2’-羟基-苯基、2’，5’-二羟基苯基、2’，6’-二羟基-苯基、2’-羟基-5’-硝基苯基、5’-氰基-2’-羟基苯基、5’-氨基羰基-2’-羟基苯基、2’，6’-二羟基苯基、5’-氨基甲基-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-脲基甲基苯基、2’-羟基-5’-咪唑-2-基苯基、5’-氨基-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-脲基苯基、2’-羟基-5’-(2-吗啉-4-基乙基)氨基羰基-苯基、3’-溴-2’-羟基-5’-羟基甲基苯基、5’-(2-氰基乙基)-2’-羟基苯基、3’-溴-5’-羧甲基-2’-羟基苯基、5’-(2-羧基乙基)-2’-羟基苯基、5’-氨基羰基甲基-2’-羟基苯基、3’，5’-二氯-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-[2-(2-羟基乙氧基)乙氨基羰基]苯基、5’-二甲氨基磺酰基氨基-2’-羟基-苯基、3’-溴-5’-氯-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-(4-甲基哌嗪-1-基羰基)苯基、2’-羟基-5’-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯基、5’-甲脒基-2’-羟基苯基、5’-甲氨基羰基甲基-2’-羟基苯基、5’-(2-二甲氨基乙氨基羰基)-2’-羟基苯基或5’-氨基羰基-2’-羟基苯基。更优选2’，6’-二羟基苯基、5’-氟-2’-羟基苯基、3’-氨磺酰基苯基、5’-氨基羰基-2’-羟基苯基、5’-氨基羰基甲基-2’-羟基苯基、5’-甲氨基羰基甲基-2’-羟基苯基、5’-羟甲基-2’-羟基苯基、5’-乙酰氨基甲基-2’-羟基苯基、2’-羟基-5’-脲基苯基、2’-羟基-5’-脲基甲基苯基、2’-羟基-5’-N-甲基脲基甲基-苯基、2’-羟基-5’-N，N-二甲基脲基甲基苯基或5’-甲磺酰基氨基-2’-羟基苯基。
在这组中，优选的化合物组为这样的化合物，其中R1和R2为氢，X1为氮，X2-X4为碳并且R3为二羧基氨基羰基烷基，优选-CH2CONHR或-C(CH3)2CONHR，其中R为1，2-二羧基乙基或1，3-二羧基丙-2-基，甚至更优选(R)-1，2-二羧基乙基。
(III)式I化合物的另一优选的组为这样的化合物，其中以下的结构部分 为如下式的组 其中Rz为氟、氨磺酰基、脲基甲基、-CH2NHCONCH3、-CH2NHCONHC(CH3)3、N，N-二甲基脲基甲基、氨基甲基、哌嗪-1-基羰基甲基、羧甲基、-CH2NHCOCH2OH、氨基羰基、乙酰氨基甲基、氨基羰基甲基、甲氨基羰基甲基、二甲氨基羰基甲基、2-羟乙氨基羰基甲基、吗啉-4-基羰基甲基、甲氧基羰基氨基甲基、羟甲基或甲磺酰基氨基甲基。
参照如上阐明的优选的实施方案意于包括所有的具体的和优选的组的组合，除非另外说明。
一般合成设计本发明化合物可通过描述于如下所示的反应设计的方法而制备。
用于制备这些化合物的起始原料和试剂商购于例如AldrichChemical Co.，(Milwaukee，Wis.)、Bachem(Torrance，Calif.)或Sigma(St.Louis，Mo.)的供应商，或者用本领域技术人员已知的方法根据阐述于参考文献中的规程制备，所述参考文献例如Fieser and Fieser’sReagents for Organic Synthesis，第1-17卷(John Wiley and Sons，1991)；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds，第1-5卷和增补本(ElsevierScience Publishers，1989)；Organic Reactions，第1-40卷(John Wiley andSons，1991)；March’s Advanced Organic Chemistry，(John Wiley andSons，第4版)和Larock’s Comprehensive Organic Transformations，(VCHPublishers Inc.，1989)。这些设计仅仅例举了一些方法，通过这些方法可以合成本发明的化合物，并且参考这些公开内容，将对本领域技术人员产生启示，可以对这些设计进行各种改变。
如果需要可以使用常规技术分离和纯化所述的起始原料和反应中间体，所述常规技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。这些物质可用常规手段(包括物理常数和光谱数据)表征。
除非指明不同的情况，本文中所述的反应在常压下，在温度范围从约-78℃至约150℃，优选从约0℃至约125℃并且最优选在约室温(或环境温度)，例如约20℃下进行。
式I的化合物，其中X1为-N-，R13为氢，R3为二羧基烷基氨基羰基烷基，并且X2、X3、X4、R1、R2、Rx、Ry和Rz为在本发明的发明内容部分中所定义的，其可如在如下的示意图I中所述的那样制备。
示意图I
将式1的酚衍生物(其中R为氢或羟基的保护基，优选羟基，并且R’为烷基)甲酰化得到式2的化合物。所述甲酰化反应在氯化镁和有机碱例如三乙胺等的存在下，并在合适的例如乙腈等的有机溶剂中进行。用合适的卤化试剂例如N-溴代琥珀酰亚胺、N-碘代琥珀酰亚胺等，在合适的例如二甲基甲酰胺等的有机溶剂中进行式2的卤化给出式3的化合物(其中X为卤素)。
式1的化合物或者可以商购或者可以通过本领域中公知的方法制备它们。例如4-羟基苯基乙酸甲酯是可以商购的。
用合适的羟基保护基例如烷基、甲氧基乙氧基甲基、苄基等对在式3(其中R为氢)中的羟基的保护给出式4的化合物。其它合适的羟基保护基的全面的列举可在T.W.Greene，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley&Sons，Inc.1999中找到，其公开的内容通过引用其全部内容而并入本发明中。优选的羟基保护基为2-甲氧基乙氧基甲基和苄基。反应通常在碱例如二异丙基乙胺等的存在下，并且在例如二氯甲烷、四氯化碳、氯仿等的卤代有机溶剂中进行。
用式5(其中Rx、Ry和Rz为如在本发明发明内容部分所定义的)的硼酸化合物或其被保护的衍生物处理式4给出式6的联苯化合物。该反应在钯催化剂例如四(三苯基膦)钯的存在下，和在合适的例如甲苯或二甲氧基乙烷的有机溶剂，和碱例如碳酸钠、碳酸钾等中进行。或者，该反应在PdCl2(dppf)·CH2Cl2复合物的存在下，在二异丙基胺的存在下，在合适的例如四氢呋喃等的有机溶剂中进行。式5的化合物或者可以商购或者可以通过本领域中公知的方法制备它们。例如5-氟-2-甲氧基硼酸是可以商购的。其它的可以通过如下方式制备用有机金属试剂例如正丁基锂处理式Ph-(Rx，Ry，Rz)X的卤代苯，其中X为卤素并且Rx、Ry和Rz如在本发明发明内容部分所定义的，以生成有机金属物质，该物质当用硼酸三甲酯处理时给出相应的硼酸。式Ph-(Rx，Ry，Rz)X的卤代苯可以商购或者可以通过本领域中公知的方法制备它。例如2-溴-4-氟苯酚是可以商购的。1-(3-溴-4-甲氧基乙氧基甲氧基苄基)-3-叔丁基脲可以通过如下方法制备用甲氧基乙氧基甲基氯在碱例如二异丙基胺等的存在下处理3-溴-4-羟基苄腈，随后将形成的3-溴-4-甲基乙氧基甲氧基苄腈用适当的还原剂例如乙硼烷还原成3-溴-4-甲基乙氧基甲氧基苄胺。然后，用异氰酸叔丁酯处理3-溴-4-甲基乙氧基苄胺给出所需的化合物。1-(3-溴-4-甲氧基乙氧基甲氧基苄基)-3-叔丁基脲可通过在酸性水解反应条件下除去叔丁基而转化为1-(3-溴-4-甲氧基乙氧基甲氧基苄基)脲。
在合适的氧化剂例如苯醌、空气氧化或FeCl3和O2的存在下，在合适的例如甲醇、乙醇等的有机溶剂中，用式7的1，2-二氨基化合物与式6缩合给出式8的化合物，其在碱性水解条件下除去R’基团给出式9的化合物。或者，该反应利用偏亚硫酸氢钠水溶液，在醇溶剂例如异丙醇中，并在氧气的存在下进行。
用二羧基被保护的二羧基烷基氨基与9反应给出二羧基被保护的式I的化合物，其在脱去二羧基保护基的情况下给出式I的化合物(其中X1为-N-)。胺化反应在适当的偶合试剂存在下，任选地在1-羟基苯并三唑(HOBT)以及碱例如N，N-二异丙基乙基胺、三乙胺、N-甲基吗啉等的存在下进行，所述偶合试剂为例如苯并三唑-1-基氧基三-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基-脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)。通常该反应在20-30℃下，优选约25℃下进行，并需要2-24小时以进行完全。合适的反应溶剂为惰性有机溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺等。
式(I)化合物的其他制备方法公开于Hu，Huiyong等人的美国专利申请中，公开号为20030114457A1，于2003年6月19日出版，其所公开的内容通过引用其全部内容而并入本发明中。
式I的化合物，其中X1为-CH-，R13为氢，R3为二羧基烷基氨基羰基烷基，并且X2、X3、X4、R1、R2、Rx、Ry和Rz为在本发明的发明内容部分中所定义的，其可如在如下的示意图II中所述的那样制备。
示意图II
在式7化合物中的羟基用适当的羟基保护基保护，给出式11的化合物。合适的羟基保护基的全面的列举可在T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，Inc.1999中找到，其所公开的内容通过引用其全部内容而并入本发明中。优选的羟基保护基为2-甲氧基乙氧基甲基。通常反应在碱例如N，N-二异丙基乙胺等的存在下，并且在例如二氯甲烷、四氯化碳、氯仿等的卤代的有机溶剂中进行。
利用描述于Muller，S.；Liepold，B.；Roth G.J.；Bestmann H.J.Synlett 1996，6,521-522中所述的修饰过程进行乙炔化反应，以给出式12的乙炔基联苯化合物。
式13的氰基化合物(其中PG1为适当的氮保护基例如甲磺酰基、叔丁氧基羰基、三氟乙酰基等，并且X为卤素)与式12的化合物的反应，利用描述于Sakamoto，T；Kondo，Y.；Iwashita，S.；Nagano，T.；Yamanaka，H.Chem.Pharm.Bull.1988，36，1305中的反应条件给出式14的化合物5-氰基-2-联苯-3-基吲哚(其中X1、X2、X3和X4为碳并且PG1不为氢)。在式14中氨基的脱保护给出式15的化合物5-氰基-2-(联苯-3-基)-1H-吲哚。在脱保护步骤中所用的反应条件依赖于所用氮原子保护基的性质而定。例如，如果所述的保护基为甲磺酰基，它在碱水解反应条件下脱去。适当的碱为氢氧化钠、氢氧化钾的水溶液等。该反应在醇溶液例如甲醇、乙醇等中进行。如果所述的保护基为叔丁氧基羰基，它在酸水解反应条件下脱去。式13化合物可以是商购的，或者它们也可以通过本领域公知的方法制备。
然后将在式15中的羟基保护基脱去给出式16的化合物5-氰基-2-(2-羟基联苯-3-基)-1H-吲哚。用于脱保护反应的反应条件依赖于该羟基保护基的性质而定。例如如果所述的保护基为2-甲氧基乙氧基甲基，它通过用酸在合适的醇溶剂的非水反应条件下处理式16而脱去。
然后将化合物16中的氰基通过如下步骤转化为甲脒基首先用氯化氢气体在无水醇溶剂例如甲醇、乙醇等中处理式16，然后用无机碱例如碳酸铵等，或者过量的氨在醇溶剂例如甲醇、乙醇中处理所形成的(5-甲氧基甲脒基)-2-(2-羟基联苯-3-基)-1H-吲哚17给出形成的式18的(5-甲脒基)-2-(2-羟基联苯-3-基)-1H-吲哚，然后将其转化为在上面示意图I中所述的式I的化合物。
式I化合物可以被转化为其它的式I的化合物。例如式I的化合物(其中Rx为烷氧基)，可以通过用适当的脱烷基化试剂例如氢溴酸等使烷氧基水解而转化为相应的式I的化合物(其中Rx为羟基)。式I的化合物(其中Rz为氰基)可以在水解反应条件下转化为相应的式I的化合物(其中Rz为氨基羰基)。所述的氰基还可以被还原以给出氨基甲基，其可以用异氰酸酯或硫氰酸酯处理给出相应的式I的化合物(其中Rz分别为脲基甲基或硫脲基甲基)。式I的化合物(其中R13为氢)可以通过将其与羟胺或烷氧基胺在本领域公知的条件下转化为相应的式I的化合物(其中R13为羟基或烷氧基)。
应用本发明的化合物抑制因子VIIa、IXa、Xa和XIa，特别是因子VIIa，并且因此用作用于治疗或预防哺乳动物中的血栓栓塞性疾病的抗凝血剂。
可以提及的具体的疾病状况包括治疗和预防静脉血栓形成(如DVT)和肺栓塞、动脉血栓形成(如在心肌梗塞、不稳定型心绞痛、基于血栓形成的中风和外周动脉血栓形成中)，和通常由心房纤颤过程中的心房或由在透壁性心肌梗塞之后的左心室或由充血性心力衰竭引起的系统性栓塞；预防血栓溶解、经皮腔内血管成形术(PTA)和冠脉架桥手术之后的再闭塞(即，血栓形成)；预防通常在显微术和血管术之后的再栓塞。
另外的适应症包括治疗和预防由细菌、多发伤、中毒或任何其它机制引起的弥漫性血管内凝血；在血液接触体内外来物表面如血管移植物、血管支架、血管导管、机械和生物假体阀或任何其它医疗装置时的抗凝血治疗；和在血液接触体外医疗装置时的抗凝血治疗，如在心血管手术过程中使用心肺机或在血液透析中；治疗和/或预防特发性成人呼吸窘迫综合征、辐射或化疗处理后的肺纤维化、脓毒性休克、败血病、炎症性反应，其包括但不限于浮肿、急性或慢性动脉粥样硬化如冠状动脉疾病和动脉粥样硬化性斑块形成、脑动脉疾病、脑梗塞、脑血栓形成、脑栓塞、外周动脉疾病、缺血、心绞痛(包括不稳定型心绞痛)、再灌注损伤、经皮经腔血管成形术(PTA)和冠状动脉旁路手术之后的再狭窄。
式I的化合物还可以用于癌症或类风湿性关节炎的治疗。
测试本发明的化合物抑制因子VIIa和Xa的能力可以在以下生物试验实施例1和2中所述的体外和体内试验中进行试验。
给药和药用组合物通常，本发明的化合物以用于给用具有类似应用的药物的任何接受的给用方式以治疗有效量给用。本发明的化合物，即活性成分的实际用量根据多种因素如被治疗的疾病的严重程度、主体的年龄和相对健康状态，使用的化合物的效力、给药途径和形式和其它因素而定。
本发明的化合物的治疗有效量可为每天每千克接受者体重约0.01-50mg；优选约0.1-20mg/kg/天，更优选约0.25mg/kg/天到10mg/kg/天。因此，为了对70kg的人给用，最优选剂量范围为每天约7mg到1.4g。
通常，本发明的化合物作为药用组合物通过以下途径的任一种给用口服给用，系统给用(如，透皮、鼻内或通过栓剂给用)，或非肠道给用(如，肌肉内、静脉内或皮下给用)。优选的给用方式是使用方便的日剂量方案的口服或非肠道给用，其可以根据痛苦程度进行调整。口服组合物可为片剂、丸剂、胶囊、半固体剂、粉末剂、持续释放制剂、溶液剂、悬浮剂、酏剂、气雾剂或任何其它适当的组合物形式。
制剂的选择根据多种因素而定，如药物的给用方式(如，对于口服给用优选片剂、丸剂或胶囊形式)和药用物质的生物利用度。最近，已经根据通过提高表面积(即减小粒径)可增加生物利用度的原理开发了特别适合生物利用度差的药物的药物制剂。例如，美国专利4,107,288描述了其中活性物质被支持在交联高分子基质上的具有粒度为10到1,000nm的粒子的药物制剂。美国专利5,145,684描述了药物制剂的生产，其中在表面改性剂的存在下将药物粉碎为纳米粒子(平均粒度400nm)、然后分散在液体基质中，以得到表现出显著高的生物利用度的药物制剂。
所述的组合物通常由式I化合物与至少一种药学可接受的赋形剂的组合组成。可药用的赋形剂是无毒的、有助于给用、并且不会不利地影响本发明的化合物的治疗学益处。这种赋形剂可以为本领域技术人员通常可得的所有固体，液体，半固体，或者在气雾剂组合物的情况下为气态赋形剂。
固体药用赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉等。液体和半固体赋形剂可选自甘油、丙二醇、水、乙醇和多种油类，包括得自石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液体载体，特别是用于可注射溶液的液体载体，包括水、盐水、右旋糖水溶液和二醇类。
压缩气体可用于将本发明的化合物分散为气雾剂形式。适合用于这个目的的惰性气体为氮气、二氧化碳等。
其它适当的药用赋形剂和它们的制剂描述于Remington’sPharmaceutical Sciences，由E.W.Martin编辑(Mack PublishingCompany，第18版，1990)。
制剂中化合物的量可以在本领域技术人员采用的整个范围内变化。通常，制剂包含基于全部制剂为约0.01-99.99重量％的本发明的化合物，余量为一种或多种适当的药用赋形剂。优选地，化合物以约1-80重量％的水平存在。包含本发明的化合物的代表性的药物制剂描述如下。
式I化合物可单独给用，或与其它的式I化合物或与一种或多种其它活性成分组合给用。例如，式I的化合物可与独立地选自凝血酶抑制剂、因子IXa和因子Xa抑制剂的其它一种或多种抗凝血剂组合使用。优选地，凝血酶抑制剂为在PCT申请公开WO94/29336和WO97/23499中公开的Inogatran、Melagatran或其前药，所述专利公开的每一个被全文并入本文作为参考。可用于本发明的组合产品中的因子Xa抑制剂包括在Current Opinion in Therapeutic Patents，1993，1173-1179和国际专利申请WO00/20416、WO00/12479、WO00/09480、WO00/08005、WO99/64392、WO99/62904、WO99/57096、WO99/52895、WO99/50263、WO99/50257、WO99/50255、WO99/50254、WO99/48870、WO99/47503、WO99/42462、WO99/42439、WO99/40075、WO99/37304、WO99/36428、WO99/33805、WO99/33800、WO99/32477、WO99/32454、WO99/31092、WID99/26941、WO99/26933、WO99/26932、WO99/26919、WO99/26918、WO99/25720、WO99/16751、WO99/16747、WO99/12935、WO99/12903、WO99/11658、WO99/11617、WO99/10316、WO99/07732、WO9/07731、WO99/05124、WO99/00356、WO99/00128、WO99/00127、WO99/00126、WO9/00121、WO98/57951、WO98/57937、WO98/57934、WO98/54164、WO98/46591、WO98/31661、WO98/28282、WO98/28269、WO98/25611、WO98/24784、WO98/22483、WO98/16547、WO98/16525、WO98/16524、WO98/16523、WO98/15547、WO98/11094、WO98/07725、WO98/06694、WO98/01428、WO7/48706、WO97/46576、WO97/46523、WO97/38984、WO97/30971、WO97/30073、WO97/29067、WO97/24118、WO97/23212、WO97/21437、WO97/08165、WO97/05161、WO96/40744、WO96/40743、WO96/40679、WO96/40100、WO96/38421、WO96/28427、WO96/19493、WO96/16940、WO95/28420、WO94/13693、WO00/24718、WO99/55355、WO99/51571、WO99/40072、WO99/26926、WO98/51684、WO97/48706、WO97/24135、WO97/11693、WO00/01704、WO00/71493、WO00/71507、WO00/71508、WO00/71509、WO00/71511、WO00/71512、WO00/71515、WO00/71516、WO00/13707、WO00/31068、WO00/32590、WO00/33844、WO00/35859、WO00/35886、WO00/38683、WO00/39087、WO00/39092、WO00/39102、WO00/39108、WO00/39111、WO00/39117、WO00/39118、WO00/39131、WO00/40548、WO00/40571、WO00/40583、WO00/40601、WO00/47207、WO00/47553、WO00/47554、WO00/47563、WO00/47578、WO00/51989、WO00/53264、WO00/59876、WO00/59902、WO00/71510、WO00/76970、WO00/76971、WO00/78747、WO01/02356、WO01/02397、WO01/05784、WO01/09093、WO01/12600、WO01/19788、WO01/19795、WO01/19798、WO93/15756、WO94/17817、WO95/29189、WO96/18644、WO96/20689、WO96/39380、WO97/22712、WO97/36580、WO97/36865、WO97/48687、WO98/09987、WO98/46626、WO98/46627、WO98/46628、WO98/54132、WO99/07730、WO99/33458、WO99/37643和WO99/64446；在美国专利6,034,093、6,020,357、5,994,375、5,886,191、5,849,519、5,783,421、5,731,315、5,721,214、5,693,641、5,633,381、5,612,378、6,034,127、5,670,479、5,658,939、5,658,930、5,656,645、5,656,600、5,639,739、5,741,819、6,057,342、6,060,491、6,080,767、6,087,487、6,140,351、6,395,731和5,646,165；在日本专利申请JP99152269、JP10017549、JP10001467、JP98017549、JP00178243、JP11140040、JP12143623、JP12204081、JP12302765、JP6327488和JP98001467；在欧洲专利申请EP937723、EP937711、EP874629、EP842941、EP728758、EP540051、EP419099、EP686642、EP1016663和EP529715；和在德国专利申请DE19845153、DE19835950、DE19743435、DE19829964、DE19834751、DE19839499、DE19900355、DE19900471和DE19530996中描述的那些，所有上述参考文献的具体和一般的公开被并入本文作为参考。
因子Xa抑制剂包括在国际专利申请WO96/10022、WO97/28129、WO97/29104、WO98/211 88、WO99/06371、WO99/57099、WO99/57112、WO00/47573、WO00/78749、WO99/09027和WO99/57113中公开的那些，所有参考文献的具体和一般的公开都被并入本文作为参考，以及4-{4-[4-(5-氯吲哚-2-基磺酰基)哌嗪-1-羰基]苯基}-吡啶-1-氧化物及其可药用衍生物。优选的因子Xa抑制剂包括antistatin；蜱源抗凝血蛋白；和已知为SQ-311和SQ-315(参见国际专利申请WO98/57951)，SN-292(参见国际专利申请WO98/28282)，SN-429和SN116(参见国际专利申请WO98/28269)，RPR-208707(参见国际专利申请WO98/25611，实施例48)，XU-817(参见国际专利申请WO98/01428)，SF-324和SF-303(参见国际专利申请WO97/23212)，YM60828(参见国际专利申请WO96/16940，实施例75)，FACTOREX(参见US专利5,783,421)，SF-324(参见欧洲专利申请EP874629)，DX9065A(参见欧洲专利申请EP540051，实施例39)，1-(4-甲脒基苄基)-4-(6-氯萘-2-基磺酰基)-哌嗪-2-酮(参见JP12204081，实施例2)，M55555(参见国际专利申请WO99/33805，实施例39)，DPC423(1-(3-甲脒基苯基)-2-(2′-氨基磺酰基[1，1′-联苯]-4-基氨基羰基)-4-溴吡咯(参见国际专利申请WO98/28269)，3-(3，5-二氟-6-[3-(4，5-二氢-1-甲基-咪唑-2-基)-苯氧基]-4-[2，3-二羟基-丙氧基]-吡啶-2-基氧基)-4-羟基-苄脒(参见国际专利申请WO00/31068)，ZK-807834(参见国际专利申请WO7/29067)，1，4-二氮杂-4-(6-氯萘-2-基磺酰基)-6-(甲氧基甲基)-7-氧杂-1’-(吡啶-4-基)-螺[双环-[4-3.0]-壬烷-8，4′-哌啶]-2-酮(参见国际专利申请WO01/02397)，(S)-1-(4-氨基喹唑啉-7-基甲基)-4-[2-(5-氯噻吩-2-基氧基)-乙酰基]-3-甲氧基-甲基哌嗪-2-酮(参见国际专利申请WO00/32590)，3-(2-[4-(2-氨基磺酰基-苯基)苯甲酰基苯氧基)-苄脒(参见国际专利申请WO01/19788)，和4-(2-[4-(5-氯吲哚-2-基-磺酰基)-2-(吡咯烷-1-基-羰基甲基)哌嗪-1-基-羰基]-噻唑-5-基)吡啶N-氧化物(参见日本专利申请JP12143623)的那些；以及国际专利申请WO98/21188的实施例7的化合物，WO99/57113的实施例3和6的化合物，国际专利申请WO00/78747的实施例6的化合物，US专利6,080,767的实施例188、211和167的化合物，国际专利申请WO99/33805的实施例40、54和55的化合物，国际专利申请WO01/05784的实施例5、6、8、9、10、11、12、13、15、16和17的化合物，国际专利申请WO01/12600的实施例6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、22、23、25、26、28、29、30、31、32、33、34、38、39、40、41、42和43的化合物，和国际专利申请WO00/35886的实施例802和877的化合物。可用于组合治疗的其它抗凝血剂为在美国治疗申请20020065303、20020061842、20020058677、20020058657、20020055522、20020055469、20020052368、20020040144、20020035109、20020032223、20020028820、20020025963、20020019395、20020019394、20020016326、20020013314、20020002183、20010046974、20010044537、20010044536、20010025108、20010023292、20010023291、20010021775、20010020020033、20010018423、20010018414和20010000179中公开的那些，其都被全文并入本文作为参考。
用于给用美拉加群及其衍生物(包括前药)的适当的制剂在文献中有所描述，如特别在WO94/29336、WO96/14084、WO96/16671、WO97/23499、WO97/39770、WO97/45138、WO98/16252、WO99/27912、WO99/27913、WO00/12043和WO00/13671中所述的，每个文献的公开都被并入本文作为参考。
同样地，用于给用因子Xa抑制剂及其衍生物(包括前药)的适当的制剂在文献中有所描述，例如在上述的与因子Xa抑制剂有关的现有技术文献中描述，每种文献的公开都被并入本文作为参考。另外，适当的制剂(特别是包括美拉加群/衍生物和因子Xa抑制剂/衍生物的组合制剂)的制备可以通过本领域技术人员使用常规技术无需付出创造性的劳动而实现。美拉加群、因子Xa抑制剂或二者中任一种的衍生物在各自制剂中的量根据状况的严重程度和被治疗的患者及采用的化合物而定，但是可由本领域技术人员无需付出创造性的劳动而确定。
美拉加群、因子Xa抑制剂和二者中任一种的衍生物在用于哺乳动物(特别是人类患者)的治疗性和/或预防性治疗时适当的剂量通常可由职业医师或其它技术人员决定，并且包括在涉及美拉加群(或其衍生物(包括前药))、涉及上述的因子Xa抑制剂的现有技术文献中讨论的各自的剂量，每个文献的公开都被并入本文作为参考。
实施例除非另有说明，所有的溶剂和试剂购自Aldrich并且直接使用。所有的反应和产物都使用HPLC分析，采用装备有二极管阵列检测器和Phenomenex Prodigy 5μODS-3100A柱、150mm×3.0mm ID[Phenomenex商品目录#00D4096-Y0]的Agilent HPl 100系统。色谱分离在40℃的柱温下进行，化合物检测同时在214和254nm进行。采用梯度洗脱，使用乙腈-水流动相系统，TFA作为酸缓冲剂，通常为5-10分钟的梯度。反应产物和试剂的含水量分析用EM-Science型号V-200 AQUASTAR容量Karl Fischer滴定器测量。用Robertson MicrolitLaboratories，Inc.，Madison，NJ进行燃烧分析。
参考A(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯的合成 方法A步骤1向装备有悬臂式搅拌器、冷凝管、热电偶和加热套的12L圆底烧瓶中加入4-羟基苯基乙酸甲酯(302g，1.82mol)和乙腈(3L)。将反应混合物搅拌直至固体溶解，然后加入三乙胺(1015mL，737g，7.28mol)。然后在5分钟内分批加入无水氯化镁(346g，3.63mol)，这导致内部温度增加至～55℃。将反应混合物加热至回流(内部温度68℃)持续1h，形成具有一些悬浮白色固体的褐色溶液。加入多聚甲醛(382g，12.7mol，Aldrich目录编号44，124-4)并持续加热16-24小时，直到HPLC-UV分析表明＞95％的4-羟基苯基乙酸甲酯被消耗。反应混合物用乙醚(3L)稀释，并加入1N的HCl水溶液(3L)，使镁盐溶解。分层并且将有机相用1N的HCl水溶液和随后用饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)并浓缩给出(3-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯(308g；87.3％)，为琥珀色油状物。
步骤2向装备有磁力搅拌器、热电偶和冰水浴的2L圆底烧瓶中加入(3-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯(308g，1.59mol)和N，N-二甲基甲酰胺(1L)。搅拌反应混合物并冷却至-5至5℃。以可保持内部温度5-10℃的速度滴加N-溴代琥珀酰亚胺(311g，1.75mol)的DMF溶液(1.5至2L)。一旦滴加完成，将反应混合物温热至室温并通过HPLC分析监控反应完成。反应时间为约4h。反应混合物用乙酸异丙酯(3L)稀释，形成的溶液用水提取以除去DMF。浓缩有机相给出微红色固体，将其溶解于热异丙醇(400mL)并使其在搅拌下冷却。将得到的灰白色结晶产物过滤并用冷的IPA(-20℃；400mL)洗涤，得到(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯(368 g，84.7％)，为灰白色结晶。
方法B(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯的替代合成方法步骤1向配备有悬臂式搅拌器、温度计、回流冷凝管和N2管的3L三颈圆底烧瓶加入(4-羟基苯基)乙酸甲酯(Aldrich；166.2g，1.00mol)和乙腈(1000mL)。向搅拌中的溶液一次性加入三乙胺(121.4g，1.20mol，1.2当量)，然后在15分钟内分批加入氯化镁(98％w/w；115.2g，1.10mol，1.1当量)。将反应混合物搅拌20分钟，然后加热至75℃持续1h，这期间镁盐溶解。在30min内分批加入多聚甲醛(95％w/w的颗粒；Aldrich#44，124-4；63.2g，2.00mol，2.00当量)。加热至80℃持续2h后，发现反应不完全并因此分批加入更多的多聚甲醛(6.00g，0.20mol，0.2当量)。2h后，原位浓缩反应混合物(T内≤70℃，约30-40托)至其原始体积的约1/3，然后冷却至室温。在几分钟内加入水(500mL)并形成粘稠黄色浆状物。恢复至～30℃，分批加入浓磷酸(85％w/w；230.7g，2.00mol)并剧烈搅拌混合物。大部分固体溶解，在冷却后(T内～20℃)，一次性加入乙酸异丙酯(500mL)。剧烈搅拌化合物直至所有的固体溶解并清晰分层。将溶液转移至分液漏斗中将水层分出。有机层用水和浓磷酸(115g，1.00mol)的混合物洗涤，分离出含有3-甲酰基-4-羟基苯基乙酸甲酯和4-羟基苯基乙酸甲酯的有机层并应用于下步中。
步骤2将含有3-甲酰基-4-羟基苯基乙酸甲酯和4-羟基苯基乙酸甲酯的混合物的溶液(总体积～900mL，包含500mL乙酸异丙酯与～300mL乙腈)转移回原来的反应容器中并加入乙腈(900mL)。将反应物搅拌并加热至60℃，向搅拌的反应物中一次性加入溶解于水(175mL)的亚硫酸氢钠(NaHSO3；Aldrich#24，397-3，58.5％SO2；109.4g，1.00mol)混合物并继续加热。在5分钟内，形成白色沉淀。16小时后将反应混合物逐渐冷却至T内～5℃。收集沉淀并将滤饼用冷的1∶1乙腈-乙酸异丙酯洗涤，干燥给出4-羟基-3-(羟基磺酰甲基)苯基]乙酸甲酯的钠盐(208g，70％)。
步骤3将4-羟基-3-(羟基磺酰甲基)苯基]乙酸甲酯的钠盐(205.2g，0.688mol)在室温下溶解于水(2L)中并搅拌。一次性加入浓磷酸(400mL)，混合物在数分钟内变混浊。将反应混合物用二氯甲烷提取并且将合并的提取液浓缩，产生(3-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯(112g，58％)，如描述于上的方法A，步骤2那样将其转化为目标化合物。
参考B3，4-二氨基苄脒单盐酸盐的合成
步骤1将在1，4-二氧杂环己烷(600mL)中的4-氨基-3-硝基苄腈(63.3g，388mmol)和无水乙醇的混合物在冰水浴中冷却至0-5℃并用HCl气体处理1.5h。将反应混合物严密密封并使其温热至室温并同时搅拌18h。然后将烧瓶小心地解除密封并将反应混合物用无水乙醚(约2.4L)稀释直至获得混浊溶液。然后加入可以使溶液澄清的最小量的绝对乙醇，搅拌形成的溶液直至观察到4-氨基-3-硝基-亚氨代苯甲酸(benzimidic)乙酯。然后小心地加入乙醚以使结晶过程完全，并将悬浮液静置约30分钟。将结晶过滤并用无水乙醚洗涤，然后在真空抽气下干燥。在真空下干燥结晶，给出4-氨基-3-硝基-亚氨代苯甲酸乙酯的盐酸盐(84.6g)，为灰白色结晶。
步骤2将4-氨基-3-硝基-亚氨代苯甲酸乙酯的盐酸盐(84.5g，344mmol)悬浮于绝对乙醇(750mL)中然后冷却至0℃。然后向溶液通氨气2h。将烧瓶严密密封并在搅拌下温热至室温18h。用乙醚结晶产物并将形成的固体过滤，洗涤并干燥，给出4-氨基-3硝基苄脒单盐酸盐(70.7g)，为灰白色粉末。
步骤3将4-氨基-3硝基苄脒单盐酸盐(15g，69mmol)和Pearlman’s催化剂(Pd(OH)2，1.0g，7.12mmol)的甲醇悬浮液(200mL)在50psi的氢气氛下振摇1.5h，将悬浮液经硅藻土过滤并将滤液滴加至无水乙醚(400mL)中以沉淀出3，4-二氨基苄脒单盐酸盐，为棕褐色固体。
参考CN-叔丁基-4-甲氧基-5-(苯磺酰氨基)-3-硼酸的合成
步骤1将2-碘苯甲醚(221.2g，966mmol)的二氯甲烷(2.3L)溶液冷却至0℃，并在搅拌下于15分钟内滴加氯磺酸(64.5mL，112.6g，966mmol)。将反应混合物经过3h温热至10℃。将氮气通过溶液并将气体出口鼓泡通过氢氧化钠水溶液以洗涤反应产生的气态氯化氢。小份的反应物用HPLC分析，其显示出2-碘苯甲醚已经消耗。将反应混合物用五氯化磷(217.8g，1.045mol)处理并在室温下搅拌2h。在真空下将反应混合物浓缩以除去大部分挥发性组分，然后在浴温100℃下进一步浓缩以除去反应中产生的POCl3。将所形成的油状残余物溶解于CH2Cl2(2.8L)中，并将该溶液与水(3L)搅拌，同时加入固体碳酸氢钠以保持pH约为7。分层并将有机层冷却至0℃，以保持内部温度≤10℃的速度加入叔丁基胺(230mL，160g)。将反应混合物温热至室温过夜，然后用5％氢氧化钠洗涤。在真空下浓缩有机相给出N-叔丁基-3-碘-4-甲氧基苯磺酰胺(340g)，为灰白色固体。
步骤2将N-叔丁基-3-碘-4-甲氧基苯磺酰胺(335g，907mmol)溶解于二氯甲烷(3L)中并将形成的溶液冷却至内部温度为-20℃。用3.0M的甲基溴化镁的乙醚溶液(308mL，925mmol)在0.5h内滴加处理该溶液以保持烧瓶内部温度为-20±5℃。将该反应混合物在-20±5℃下搅拌2.5h，然后在约-35℃下加入2.13M的异丙基溴化镁的乙醚溶液(511mL，1.09mol)。在-35±5℃下搅拌所形成的溶液1.5h。将反应混合物温热至0℃并加入另外的异丙基溴化镁的乙醚溶液(86.0mL，183mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2h，然后加入另外一份异丙基溴化镁的乙醚溶液(25.0mL；53.3mmol)。用含硼酸三甲酯(320mL；2.90mol)的THF(175mL)一次性处理该反应混合物，导致温度上升至27℃。将反应混合物在该温度下搅拌4h，然后倾倒入水(1.3L)中，并加入85％磷酸直至溶液pH为2。分层并将有机相用1.5N的NaOH水溶液(2L)，随后用1％的NaOH水溶液(2L)洗涤。合并的水相用磷酸酸化至pH为2并将得到的酸性溶液用9∶1的二氯甲烷/THF溶液(2L随后用1L)提取。干燥有机相(Na2SO4)，过滤并在真空下浓缩给出250g白色固体，其被溶解于乙醇(1L)中。用水稀释该溶液给出总体积为4L，将形成的溶液在室温下搅拌过夜。将形成的结晶固体过滤并在真空下干燥过夜给出N-叔丁基-4-甲氧基-5-(苯磺酰氨基)-3-硼酸(221g)，为白色固体，其为二水合物(近似)。滤液用9∶1的二氯甲烷/THF溶液提取并将提取物浓缩。将粗固体(23g)从3∶1的水/乙醇溶液(500mL)中重结晶给出另外19g产物，为白色固体。
参考D(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-2’-甲氧基-6-甲氧基乙氧基甲氧基联苯-3-基)乙酸甲酯的合成 步骤1向5L圆底烧瓶中加入(3-溴-5-甲酰基-4-羟基-苯基)乙酸甲酯(210g，769mmol，在上述参考A中制备)、二氯甲烷(2L)和N，N-二异丙基乙胺(161mL，119g，923mmol)。经过加料漏斗在2h内滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(氯化MEM，得自TCI America；106mL；923mmol)的二氯甲烷溶液(500mL)。将反应物在室温下搅拌过夜，之后HPLC分析表明反应完全。反应混合物用0.5N的HCl水溶液(1L)稀释并将该溶液在室温下搅拌0.25h，然后分层。有机层用另外的0.5N的HCl水溶液，和随后用饱和氯化钠水溶液(1L)洗涤。真空下浓缩有机层给出油状物，放置后固化。该固体可以从乙酸乙酯和己烷中结晶，得到[3-溴-5-甲酰基-4-(2-甲氧基乙氧基甲氧基)苯基]乙酸甲酯(237g)，为无色固体。
步骤2向装备有机械搅拌器、加热套和回流冷凝管的12L圆底烧瓶中加入[3-溴-5-甲酰基-4-(2-甲氧基乙氧基甲氧基)-苯基]乙酸甲酯(215g，595mmol)、N-叔丁基-4-甲氧基-5-(苯磺酰氨基)-3-硼酸(184.5g，643mmol)、N，N-二异丙基胺(275mL，1.79mol)和THF(4L)。搅拌该溶液，真空下脱气并放置于氮气氛中。然后一次性加入PdCl2(dppf)·二氯甲烷复合物(4.86g，5.95mmol)并将该溶液加热至70℃持续16h。将反应混合物冷却至室温然后浓缩以除去大部分THF(3.5L)。残余物用乙酸乙酯(4L)稀释并用5％碳酸钾的水溶液(3.0L)洗涤，随后用盐水(2.0L)洗涤。将DARCO-60活性炭(8g)加入到有机相中并在室温下将形成的悬浮液搅拌4h。溶液经硫酸钠(200g)干燥后，然后该有机层通过覆盖有硅藻土(300g)、硅胶(300g)和硅藻土(300g)层的烧结过滤器过滤。滤饼用95∶5的二氯甲烷/甲醇(1L)洗涤并将得到的溶液在真空下浓缩，给出包含甲醇的粗(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-2’-甲氧基-6-甲氧基乙氧基甲氧基联苯-3-基)乙酸甲酯(～12g)，为油状物，其不用进一步纯化而直接用于下步中。
参考E4-苄氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰氨基的合成 方法A步骤1向1L的圆底烧瓶中加入2-碘苯酚(50g)和硝基甲烷(250mL)并将反应混合物冷却至0℃。滴加发烟硫酸(42mL，30％SO3)并将反应混合物温热至室温。2h后，反应完成并将其倾倒入水(400mL)中并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。然后将有机层用水(300mL)反提取并浓缩成油状物并与原来的水层合并。然后水层用5M氢氧化钠水溶液中和(300mL)并转移至2L圆底烧瓶中。然后加入氢氧化钠粒(11g)、乙醇(150mL)和溴苄(50mL)并将反应混合物加热至油浴温度82℃并搅拌16h。反应完全后，通过真空蒸馏除去乙醇，导致产物从溶液中沉淀出来。然后将产物过滤并于高真空下干燥给出4-苄氧基-3-碘-苯磺酸(61g，70％产率)。
步骤2向2L的圆底烧瓶中加入4-苄氧基-3-碘-苯磺酸(49.87g)和二氯甲烷(1000mL)。搅拌该悬浮液并加入五氯化磷(53g)，导致反应物变成溶液。将反应混合物在40℃下加热1h，然后缓慢加入氢氧化钠水溶液(400mL，20％)并搅拌直至水溶液pH为7。分离有机层并与50％饱和碳酸氢钠水溶液(125mL)搅拌30分钟(pH10)。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，倒入2L圆底烧瓶中并加入叔丁基胺(34mL)，16h后，将反应混合物用5％氢氧化钠水溶液碱化至pH13-14。分两批分离有机层并将其浓缩成固体，然后将该固体在50℃下在乙酸异丙酯中成淤浆，冷却，过滤给出4-苄氧基-N-叔丁基-3-碘-苯磺酰胺(46g，80％产率)。
步骤3向1L圆底烧瓶中加入4-苄氧基-N-叔丁基-3-碘-苯磺酰胺(32g)和二氯甲烷(320mL)，将反应混合物搅拌并冷却至-20至-25℃。滴加甲基溴化镁(24.4mL，3M，在乙醚中)。将反应混合物搅拌2h然后冷却至-35至-40℃。滴加异丙基溴化镁(54mL，2.13M，在乙醚中)。然后加入四氢呋喃(17mL)和硼酸三甲酯(6mL)，导致白色固体沉淀，升高反应混合物的内部温度至0℃。将反应混合物温热至室温并在12h后加入磷酸(250mL，1M，在500mL水中)。分离有机层并用2.5％的氢氧化钠水溶液(500mL)碱化导致一些产品沉淀。仍保留一些沉淀固体的水层然后用浓磷酸酸化至pH为2并用10％的四氢呋喃的二氯甲烷溶液提取。固体保持于有机相中，然后将有机相浓缩以给出白色固体，然后将该固体在1L水中成淤浆30分钟。将该固体过滤并在高真空下干燥给出4-苄氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺(23g，88％产率)。
方法B目标化合物的替代合成方法步骤13L三颈圆底烧瓶配备有悬臂式搅拌器、温度计、N2管线、250mL恒压滴液漏斗和通到NaOH溶液的出气洗涤器。用N2充满烧瓶并装入2-碘苯酚(Alfa Aesar；201.95，0.918mol)和无水二氯甲烷(920mL)。建立柔和的N2流通过反应顶部空间，然后将反应容器浸入冰盐浴中并冷却至-5℃。向滴液漏斗中加入无水二氯甲烷(175mL)，然后加入氯磺酸(Aldrich；106.96g，0.918mol，1.00当量)，形成的混合物用聚四氟乙烯棒搅拌。然后将稀释的氯磺酸溶液在约90min内滴加到反应混合物中。粘稠的粉色浆液随着滴加而形成。全部加入后30分钟，移去冰浴并将反应混合物在室温下搅拌。2h后将反应混合物浸入冷水浴中并向该反应混合物中在几分钟内加入水(500mL)。将得到的反应混合物剧烈搅拌直至在沉降时形成两相/均质物。将该混合物与水一起转移到分液漏斗中并用二氯甲烷提取。包含4-羟基-3-碘苯磺酸的水层转移回原来的反应容器中用于下一步。
步骤2向剧烈搅拌中的4-羟基-3-碘-苯磺酸的水溶液中分批加入氢氧化钠(小球，110g，2.75mol，3.00当量)。全部加入后10-15分钟，加入异丙醇(150mL)形成白色悬浮液。向滴液漏斗中加入溴苄(Aldrich；164.9g，0.964mol，1.05当量)并在约5分钟内加入到反应混合物中，将反应混合物加热至80℃≤T内≤84℃。约25分钟后，确定反应没有进一步进行并因此向反应混合物中加入另外的氢氧化钠(3.67g，91.8mmol，0.1当量)和随后加入溴苄(15.7g，91.8mmol，0.1当量)以给出均匀的溶液。70分钟后，随着原始的溴苄的加入，停止加热并使反应在油浴中搅拌下缓慢冷却。在7.5h，反应混合物显示出细的反光沉淀物在棕色液体中的悬浮液。用3∶1的水-硫酸将反应混合物从pH13酸化至pH7.5和8之间(约需70mL)。然后将反应混合物逐渐冷却至约5℃并在此温度下搅拌～1h。通过过滤收集蜡状白色小块，用二氯甲烷洗涤并在高真空下干燥(冷冻干燥机，100-200毫托)约24h，给出4-苄氧基-3-碘苯磺酸钠，为闪光的白色结晶固体(267.7g，71％)。
步骤33L三颈圆底烧瓶配备有悬臂式搅拌器、回流冷凝管(装备有通向NaOH净化溶液的气体出口)和装备有N2管线的恒压滴液漏斗。将烧瓶用N2充满，加入4-苄氧基-3-碘苯磺酸钠(234g，0.568mol)、二氯甲烷(1.15L)和催化量的二甲基甲酰胺(910mg，11.7mmol，2.1mol％)。在柔和的氮气流下搅拌该白色悬浮液并在油浴装置中加热至40-45℃之间。然后在3-5min内加入草酰氯(90.1g，0.710mol，1.25当量)。2.5h后将反应在冷水浴中冷却至25℃然后通过在约5min内滴加水(60mL)淬灭。一次性加入另一部分水(450mL)并剧烈搅拌反应混合物5-10min。分离有机相并用水洗涤直至水层的pH上升至pH为4-5。得到的4-苄氧基-3-碘-苯磺酸钠的二氯甲烷溶液用于下步中。
步骤43L三颈圆底烧瓶配备有悬臂式搅拌器、温度计和恒压滴液漏斗，恒压滴液漏斗中加有4-苄氧基-3-碘-苯磺酰氯的溶液。将烧瓶浸于冷水浴中(T内＝22℃)并滴加叔丁基胺(90.1g，0.710mol，2.1当量)(T内不变)。得到的反应混合物在环境水浴温度下搅拌过夜。17h后，处理反应混合物，分离有机相并浓缩至其初始体积的约1/3(～500mL)，这时产物开始沉淀。将反应混合物在常压下温热至35-40℃直至固体重新溶解。然后使溶液在小心地搅拌下冷却至室温。2天内形成白色沉淀。剧烈搅拌悬浮液同时缓慢加入己烷(1.5L)，搅拌过夜，然后在冰浴中冷却1-2h。过滤收集沉淀物并用己烷洗涤，干燥，首先在抽气泵下给出4-苄氧基-N-叔丁基-3-碘-苯磺酰胺(238，94％)。
步骤52L三颈圆底烧瓶配备有悬臂式搅拌器、温度计、恒压滴液漏斗和N2管线。用N2充满烧瓶然后加入4-苄氧基-N-叔丁基-3-碘-苯磺酰胺(198.6g，0.446mol)和二氧甲烷(600mL)。在柔和的氮气流下搅拌该白色悬浮液并在冰水浴中冷却(0℃≤T内≤5℃)。将甲基溴化镁(Aldrich；3.0M，在乙醚中，167g，～171mL，0.513mol，1.15当量)加入滴液漏斗中，将其以可保持T内＜5℃(必要时向冰浴中加入盐)的速度滴加至悬浮液中，在加入～1/3时得到无色均匀混合物。滴加完毕后，将异丙基溴化镁(Boulder Scientific；2.13M，在乙醚中；250mL，0.533mol，1.2当量)加入到滴液漏斗中，将其以可保持T内＜5℃的速度滴加至反应混合物中。滴加完毕后，反应混合物搅拌15-20min。移去滴液漏斗并换上隔膜和插管，将反应混合物在2小时内转移到3L三颈圆底烧中，该烧瓶中装有硼酸三甲酯(106.6g，1.03mol，2.30当量)和四氢呋喃(600mL)的溶液并保持在氮气氛中，利用冰水浴保持在T内＜5℃。加料完成后，将溶液在＜5℃下搅拌30分钟。然后转移到分液漏斗中并用等体积量的2∶1(水∶磷酸)溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥。向该溶液中加入乙酸乙酯并将合并的有机相浓缩，给出4-苄氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺(129g，80％)。
参考F(4-苄氧基-3-溴-5-甲酰基-苯基)乙酸甲酯的合成 向装备有聚四氟乙烯搅拌棒和回流冷凝管的250mL的圆底烧瓶中加入(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)乙酸甲酯(23.3g，85.3mmol，如上述参考A中所述的那样制备)、二氯甲烷(100mL)、溴苄(15.32g，10.64mL，89.59mmol)和N-乙基二异丙基胺(11.6g，15.6mL，89.5mmol)。将反应混合物加热至回流14h，然后冷却至室温。加入二氯甲烷(100mL)并分离有机层，用3％的NaOH水溶液(200mL)洗涤有机层。浓缩有机层，给出(4-苄氧基-3-溴-5-甲酰基-苯基)乙酸甲酯(30.65g)，为油状物。
实施例1(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸的合成 方法A步骤1向装备有搅拌棒的12L圆底烧瓶中加入(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-2’-甲氧基-6-甲氧基乙氧基甲氧基联苯-3-基)乙酸甲酯(324.3g)、甲醇(5.2L)，随后滴加浓HCl水溶液(0.29L)以保持烧瓶的内部温度低于25℃。室温下搅拌反应混合物过夜，其间产物从溶液中沉淀出来。将反应混合物冷却至-20℃，过滤并且然后用另一份已经预先冷却至-25℃的甲醇(750mL)洗涤。将得到的灰白色固体在真空下干燥，给出[(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-6-羟基-2’-甲氧基)联苯-3-基]乙酸甲酯(205g)。
步骤2向装备有机械搅拌器和加热套的12L圆底烧瓶中加入[(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-6-羟基-2’-甲氧基)联苯-3-基]乙酸甲酯(200.8g，461mmol)、异丙醇(2.3L)和溶解于水(0.21L)中的偏亚硫酸氢钠(106.4g，553mmol)。将形成的悬浮液加热至60℃持续2.5h。加入3，4-二氨基苄脒单盐酸盐(115.2g，617mmol)并然后使空气流循环通过烧瓶。0.25h后溶液变为橙色并变均匀。1h后，通过HPLC分析显示反应完成70％，但需要约18h的反应时间以导致沉淀产品完全。将反应混合物冷却至室温并过滤。用异丙醇(1L)洗涤固体并在真空室中干燥以给出[(5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6-羟基-2’-甲氧基联苯-3-基]乙酸甲酯(264g)，为芥末色固体。
步骤3向3L圆底烧瓶中加入[5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6-羟基-2’-甲氧基联苯-3-基]乙酸甲酯(49.9g，82.9mmol)和三氟乙酸(770mL)。将反应混合物在室温下搅拌1.5h，然后在真空下浓缩。向凝胶状残余物中加入甲醇(1L)并将溶液再次浓缩，然后高真空下干燥过夜。将干燥的固体产物转移到装备有Dean-Stark分水器、搅拌轴和氮气入口的3L三颈圆底烧瓶中。将烧瓶用氮气充满，然后加入吡啶盐酸盐(412g，3.57mol)和甲苯(100mL)。在回流下加热反应混合物以从吡啶盐和溶剂中除去残余的水。将溶液加热至150℃以熔化吡啶盐酸盐，之后在0.5h内将温度上升至180℃。1.5h后将溶液在氮气正压下冷却直至其固化并达到室温。加入水(3L)并将溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤并用水(200mL)和异丙醇(100mL)洗涤固体。在真空室中干燥固体过夜，形成[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]乙酸(38.15g)，其被约4％的硫酸污染。
-乙酸的替代合成在无水乙醚(200mL)中的吡啶(69.0g，70.4mL，0.87mol)用在二氧杂环己烷(250mL，1.0mol)中的4M HCl处理直至盐沉淀完全。通过蒸发除去过量溶剂并加入甲苯(500mL)。用Dean-Stark分水器回流该反应混合物2-3h。冷却后，尽可能使甲苯蒸发完全并将包含固体吡啶盐酸盐的烧瓶浸入到油浴中在180-185℃下加热并使其熔融。熔融的吡啶盐酸盐在180-185℃下加热30-60分钟，同时接上干燥管。接着，将熔融的盐一次性在适中的搅拌下用[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6-羟基-2’-甲氧基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]乙酸甲酯(25.0g，29.4mmol)(得自TFA处理[5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6-羟基-2’-甲氧基联苯-3-基]乙酸甲酯)处理。将热溶液伴随着搅拌加热60-90分钟直至通过HPLC分析反应完全。冷却后，将固体混合物溶于水(800mL)中并搅拌过夜。将形成的固体过滤并在真空下干燥，给出[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]乙酸(13-14g)，包含～1-2％的磺酸杂质。
步骤4向磁力搅拌的[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]乙酸(14.0g，27.1mmol)的N，N-二甲基乙酰胺的溶液(125mL)中在0℃下加入N-甲基吗啉(5.95mL，54.2mmol)、EDC(5.71g，29.8mmol)和HOBt(4.00g，29.8mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5h。向反应混合物中加入H-Asp-(OBn)-Obn·HCl(10.4g，29.8 mmol)的DMA溶液(25mL)并将形成的溶液在室温下搅拌12h。将溶液在高真空下浓缩，保持水浴温度低于50℃以除去大部分DMA。将残存的油状物悬浮于乙腈(150mL)中并将反应混合物在室温下搅拌0.5h，之后产物从溶液中沉淀出来。将固体通过过滤除去并用乙腈洗涤。将固体悬浮于饱和碳酸氢钠水溶液(150mL)中，在室温下搅拌0.5h，然后过滤。然后将形成的固体悬浮于10mM的HCl水溶液(150mL)中并在室温下搅拌0.5h。将悬浮液过滤并干燥给出(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸二苄酯(18g)，通过HPLC分析其纯度为80-90％。将该粗(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸二苄酯直接用于下步而不必进一步纯化。
步骤5将粗(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸二苄酯(18g)在超声帮助下溶于1∶1的乙酸和水的混合物(800mL)中。向该溶液中加入碳载氢氧化钯(Pearlman’s催化剂，基于干重为20wt％的Pd，包含50重量％水；7.0g)。反应混合物用氢加压至30psi并将该悬浮液在Parr装置上振摇10h。通过过滤除去催化剂并在真空下除去溶剂。粗(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸通过制备反相HPLC纯化，以给出(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸(7.2g)。
方法B[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]-乙酸的替代合成步骤1向装备有磁力搅拌棒和氮气回流冷凝管的1L圆底烧瓶中加入粗(4-苄氧基-3-溴-5-甲酰基-苯基)乙酸甲酯(19.36g，53.31mmol)、四氢呋喃(400mL)、二异丙基胺(16.7g，23.2mL，165.1mmol)和4-苄氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺(21.74g，59.7mmol)。将该反应混合物置于氮气氛下并加入二氯[1，1’-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.68g，0.832mmol)。将反应混合物加热至回流16h，其间通过HPLC监控反应完全。将溶液浓缩成固体并加入甲基叔丁基醚(500mL)以溶解该固体。将溶液用3％的冷氢氧化钠水溶液(500mL)洗涤两次。有机层通过硅藻土(200g)和硅胶(100g)的短柱过滤。将硅藻土用1∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯的混合物(400mL)洗涤。将滤液浓缩，给出(6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-联苯-3-基)-乙酸甲酯(32g)，为油状物，其直接用于下步而不必进一步纯化。
步骤2向装备有搅拌棒的250mL圆底烧瓶中加入粗(6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-联苯-3-基)-乙酸甲酯(5.00g，8.31mmol)、甲醇(50mL)和水(5mL)。将反应混合物温热至60℃并加入偏亚硫酸氢钠(1.58g，8.31mmol)，并将该反应混合物在60℃下搅拌2.5h。一次性加入3，4-二氨基苄脒盐酸盐(1.80g，9.64mmol)并将反应混合物在60℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温并加入250mL的(3∶1)乙酸异丙酯∶异丙醇溶液，随后加入水(50mL)。分离有机层，通过硅藻土过滤，经硫酸钠干燥，浓缩以给出[6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-联苯-3-基]-乙酸甲酯盐酸盐(5.8g，91％)，为淡褐色固体。
步骤2的替代方法向装备有搅拌棒和回流冷凝管的500mL圆底烧瓶中加入粗(6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-联苯-3-基)-乙酸甲酯(20g，33.23mmol)和3，4-二氨基苄脒(7.44g，39.88mmol)、PdCl2(MeCN)2(100mg，Strem Chemicals)，然后加入9∶1的异丙醇∶水的混合物(200mL)和偏亚硫酸氢钠(6.3g，33.2mmol)的水溶液(30mL)。将反应混合物用油浴加热回流并且回流冷凝管的顶部直接与大气相通。将溶液加热回流过夜，其间通过HPLC监控完成反应。向该溶液中加入Darco(5g)并将该溶液通过硅藻土(100g)热过滤。将硅藻土用异丙醇(100mL)洗涤并将形成的溶液用乙酸乙酯(300mL)和盐水(70mL)提取。将有机层浓缩，给出[6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)联苯-3-基]-乙酸甲酯盐酸盐，为无定形固体，其直接用于下步而没有进一步纯化。
步骤3向50mL圆底烧瓶中加入[6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-联苯-3-基]-乙酸甲酯盐酸盐(0.500g，0.651mmol)和冰醋酸(2.5mL)。加入12N HCl(水溶液)(2.5mL)然后将反应混合物加热至50℃。14h后将反应混合物加到水中(100mL)并将该溶液真空下浓缩至5mL给出沉淀。通过过滤移出沉淀，给出[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]-乙酸(365mg)，其包含水和2.8当量的HCl(93％)，然后将其如上所述地转化为目标化合物。
步骤3的替代方法向1L圆底烧瓶中加入粗[6，2’-双苄氧基-5’-N-叔丁基氨磺酰基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-联苯-3-基]-乙酸甲酯盐酸盐(22.0g，28.65mmol)和冰醋酸(400mL)。向该溶液中加入12N HCl(水溶液)(400mL)并将反应混合物加热至55℃，在14h后通过HPLC监控该反应完成＞95％。向该溶液中加入Darco(2g)。将该溶液在55℃下搅拌另外一小时，将该溶液通过硅藻土过滤除去炭。减压下浓缩该溶液给出固体，将其用1N HCl(600mL)和乙腈(200mL)处理。在加热时固体溶解，此时加入Darco(6g)。将溶液在70℃下搅拌1h并通过硅藻土进行热过滤。将溶液冷却至室温并将沉淀过滤，给出[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基-联苯-3-基]-乙酸(9.85g，66％)。
实施例2(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸两性离子的合成。
将纯化的冻干(S)-2-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]乙酰氨基}琥珀酸(11g)粉末悬浮于130mL的2M HCl(水溶液)中并温热至60℃。将THF(80mL)加入至该悬浮液中并在此温度下搅拌直至化合物完全溶解(溶液的pH保持在约2.0)。将该溶液热过滤并在加入晶种后于室温下缓慢搅拌24h。在室温下过滤结晶物质(5.2g)，用水洗涤该结晶物质直至洗涤液呈中性(pH为7)。元素分析和氯化物含量分析说明没有任何氯化物抗衡离子的存在，这说明该物质为两性离子。
1H NMR(DMSO-d6)9.21(2H，brs)，8.87(2H，brs)，8.21(1H，d，J＝7.8Hz)，8.0(2H，d，J＝7.2Hz)，7.79(1H，d，J＝7.8Hz)，7.73(J＝1.5Hz，1H，d)，7.6(J＝8.6，1.5Hz，dd，1H)，7.5(1H，dd，J＝8.5和2.5Hz)，7.2(1H，d，J＝2.3Hz)，4.3(1H，J＝2.3，5.3Hz，dd)，3.5(2H，s)，2.6(1H，dd，J＝16和7.3Hz)，2.44(1H，dd，J＝5.3Hz)。
生物学实施例实施例1因子VIIa抑制剂的体内试验将人类因子VIIa(通常以7nM供应)和试验化合物(作为不同浓度存在)在试验介质(包括NaCl，150mM(pH7.4)；CaCl2，5mM；吐温20，0.05％；Dade Innovin组织因子[Dade Behring，Newark，DE，USA]；EDTA，1.5mM；和二甲基亚砜，10％)中的混合物在室温下培养30分钟。然后加入底物[500μM的CH3SO2-D-Cha-But-Arg-pNA(得自Centerchem，Norwalk，CT，USA)]引发反应。通过在405nm下用分光光度法跟踪发色底物的水解五分钟。使用通过动力学分析程序(Batch Ki；BioKin，Ltd.，Pullman，WA)从进展曲线计算的初速度测量值测定表观抑制常数(表观Ki)。
通过上述试验测定本发明的化合物表现出对因子VIIa的抑制。
实施例2因子Xa抑制剂的体外试验将人类因子Xa(通常以3 nM供应，得自HaematologicTechnologies，Essex Junction，VT，USA)和试验化合物(不同浓度)在试验介质(包括Tris，50mM(pH7.4)；NaCl，50mM；CaCl2，5mM；吐温20，0.05％；EDTA，1mM，和二甲基亚砜，10％)中的混合物在室温下培养30分钟。然后加入底物[500μM的CH3CO2-D-Cha-Gly-Arg-pNA(得自Centerchem，Norwalk，CT，USA)]引发反应。通过在405nm下用分光光度法测定跟踪发色底物的水解五分钟。使用标准数学模型从酶进展曲线计算表观抑制常数(表观Ki)。
通过上述试验测定本发明的化合物表现出对因子Xa的抑制。
实施例3
药代动力学试验从Charles River购得具有预植入的颈静脉导管(在运输之前为其充满肝素/盐水/PVP封闭)的大鼠。每项研究选择三只大鼠，称重，并通过尾静脉注射给用试验化合物。保留任何剩余的试验化合物并且在-70℃储存，用于随后的分析。
在120小时内在给定时间从留置导管收集血样(每次0.25mL)。在每次收集之后立即将导管用生理盐水冲洗并在每次8、24和48小时收集之后充满肝素化盐水。在导管无效的情况中，在异氟烷麻醉下在适当的时间通过后眼窝窦收集血样。
将血样置于0.5mL Microtainer管(肝素锂)中，温和地摇动并且储存在湿冰上。将样品在冷冻离心机中在2400rpm下离心10分钟。将每个管的血浆样品(0.1mL)转移到0.5mL Unison聚丙烯小瓶(Sun-500210)中并在-70℃储存，用于随后通过LC/MS-MS分析。
实施例4体外凝固试验......aPTT和PT根据Hougie，C.Hematology(Williams，W.J.，Beutler，B.，Erslev，A.J.和Lichtman，M.A.，Eds.)，pp.1766-1770(1990)，McGraw-Hill，NewYork中所述的方法进行凝固试验，活化部分凝血活酶时间(aPTT)和前凝血酶时间(PT)。
简而言之，试验使用正常的人枸橼酸钠处理(citrated)血浆并且根据生产商的说明书(Medical Laboratory Automation-Pleasantville，NewYork)在37℃下在血凝度测量器(Electra 800)上进行。在即将收集具有抑制剂的样品的凝固时间之前将仪器校准。通过将抑制剂剂量反应曲线拟合于Hill方程的改进形式计算aPTT和PT的双重浓度。
药物组合物实施例以下是包含本发明的化合物的代表性的药物制剂。
片剂将以下成分密切混合并压缩为单独的刻痕片。
成分 每片的量，mg本发明的化合物400玉米淀粉 50交联羧甲纤维素钠 25乳糖 120硬脂酸镁 5胶囊剂将以下成分密切混合并装入硬明胶壳胶囊中。
成分 每粒胶囊的量，mg本发明的化合物200乳糖(喷雾干燥的) 148硬脂酸镁 2悬浮剂将以下成分混合以形成口服悬浮液。
成分 量本发明的化合物1g富马酸0.5g氯化钠2.0g对羟基苯甲酸甲酯 0.15g对羟基苯甲酸丙酯 0.05g砂糖 25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g调味剂0.035mL
着色剂 0.5mg蒸馏水 定量到100mL注射剂将以下成分混合以形成注射剂。
成分量本发明的化合物 1.2g乙酸钠缓冲溶液 0.4M，2.0mLHCl(1N)或NaOH(1N) 定量到适当的pH水(蒸馏的，无菌的) 定量到20mL将除水之外的所有上述成分混合并在搅拌下加热到60-70℃。然后在剧烈搅拌下加入足够量的60℃的水，以将所述成分乳化，然后加入水，定量到100g。
栓剂通过将本发明的化合物与WitepsolH-15(饱和植物脂肪酸的甘油三酯；Riches-Nelson，Inc.，New York)混合制备总重量为2.5g的栓剂，并且其具有以下组成本发明的化合物500mgWitepsolH-15余量非肠道制剂本发明的化合物40mg/mL羟丙基-β-环糊精 200mg/mL用1.0N氢氧化钠调节pH到7.4为了清楚和理解目的，已经通过说明和实施例相当详细地描述了前述的本发明。对于本领域技术人员来说，显而易见，可在权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解，上述说明是说明性的而非限制性的。因此，本发明的范围不参考上述说明确定，而是参考权利要求以及与这种权利要求要求的同等意义的完整范围而确定。
权利要求
1.由下式I表示的化合物、或其两性离子或其药学可接受的盐 其中X1、X2、X3和X4独立地为-N-或-CR4-，其中R4为氢、烷基或卤素，条件是X1、X2、X3和X4中不超过三个是-N-；R1为氢、烷基、卤素、羧基或氨基羰基；R2为氢、烷基或卤素；R3为二羧基烷基氨基羰基烷基或二羧基烷基氨基羰基-环烷基；Rx为氢、烷基、烷基硫基、卤素、羟基、羟基烷基、烷氧基、氨磺酰基、烷基氨磺酰基、二烷基氨磺酰基或硝基；Ry为氢、烷基或卤素；Rz为氢、烷基、卤代烷基、环烷基、烷基硫基、卤素、羟基、羟基烷基、硝基、氰基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷基氧基、羟基烷基氧基、氨基烷基氧基、羧基烷基氧基、氨基羰基烷基氧基、卤代烷氧基、羧基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氰基烷基、烷基磺酰基、烷基磺酰基烷基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、甲脒基、羟基-甲脒基、烷氧基甲脒基、烷基磺酰氨基、烷基磺酰氨基烷基、烷氧基磺酰氨基、烷氧基磺酰氨基烷基、杂环烷基烷基氨基羰基、羟基烷氧基烷基氨基羰基、杂环烷基羰基、杂环烷基羰基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、氧代杂环烷基、氧代杂环烷基烷基、杂芳基、杂芳烷基、脲基、烷基脲基、二烷基脲基、脲基烷基、烷基脲基烷基、二烷基脲基烷基、硫脲基、硫脲基烷基、-COR12(其中R12为烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基或氨基烷基)、-(亚烷基)-COR12(其中R12为烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基或氨基烷基)、-CONR14R15(其中R14为氢或烷基并且R15为氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷基)-CONR16R17(其中R16为氢、烷基或羟基烷基并且R17为氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-NR18R19(其中R18为氢或烷基并且R19为氢、烷基、酰基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-(亚烷基)-NR20R21(其中R20为氢、烷基或羟基烷基并且R21为氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基)、-SO2NR22R23(其中R22为氢或烷基并且R23为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R22和R23与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-(亚烷基)-SO2NR24R25(其中R24为氢或烷基并且R25为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R24和R25与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-NR26SO2NR27R28(其中R26和R27独立地为氢或烷基并且R28为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R27和R28与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-(亚烷基)-NR29SO2NR30R31(其中R29和R30独立地为氢或烷基并且R31为氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，或者R30和R31与它们所连接的氮原子一起形成杂环氨基)、-CONH-(亚烷基)-NR32R33(其中R32为氢或烷基并且R33为烷基)，或者芳烷基；和R13为氢、羟基、(C1-10)烷氧基、-C(O)R35(其中R35为烷基、芳基、卤代烷基或氰基烷基)或-C(O)OR36(其中R36为烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、酰基、芳基或卤代烷基)。
2.由下式Ib表示的化合物、或其两性离子或其药学可接受的盐
3.由下式Ic表示的化合物、或其两性离子或其药学可接受的盐
4.由下式(II)表示的中间体 其中，PG1为适当的氧保护基并且PG2为适当的氨基保护基。
5.式I化合物的制备方法，其中式I中R3为二羧基烷基氨基羰基烷基，所述方法包括(i)将下式所示的化合物或其被适当保护的衍生物与二羧基烷基氨基进行反应，其中所述的二羧基烷基氨基中的羧基被任选地保护， 其中R1、R2、R13、Rx、Ry、Rz、X1-X4如在本发明的发明内容中所定义的；(ii)任选使任何被保护的一个或多个羧基脱保护；(iii)任选修饰任意的R1、R2、R13、Rx、Ry和Rz基团；(iii)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为酸加成盐；(iv)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为游离碱；(v)任选将上述步骤(ii)或(iii)的产物转化为两性离子；和(vi)任选使任何被保护的一个或多个羧基脱保护。
6.制备式Ib或Ic化合物的方法，所述方法包括(i)将下式所示的化合物分别与(R)或(S)天冬氨酸反应，其中(R)或(S)天冬氨酸的羧基为任选被保护的； (ii)任选使任何被保护的一个或多个羧基脱保护；(iii)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为酸加成盐；(iii)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为游离碱；(iv)任选将上述步骤(i)或(ii)的产物转化为两性离子；(v)任选使任何被保护的一个或多个羧基脱保护。
7.式(II)的中间体的制备方法 其中PG1为适当的氧-保护基并且PG2为适当的氨基-保护基，所述的方法包括(i)将下式(III)所示的化合物与一当量的式RLi或RMgX1的有机金属试剂反应以使-SO2NHPG2基团去质子化，其中所述的式RLi或RMgX1的有机金属试剂中R为烷基或芳基并且X1为卤素， 其中PG1和PG2如上所定义并且X为卤素；(ii)用一当量的式RLi或RMgX1的有机金属试剂使在上述步骤(i)中形成的化合物发生金属转移，其中所述的式RLi或RMgX1的有机金属试剂中R为烷基或芳基；(iii)用硼酸三烷基酯处理在上述步骤(ii)中产生的化合物以生成式(II)的化合物。
全文摘要
本发明涉及因子VIIa、IXa、Xa、XIa的，特别是VIIa的新型抑制剂，包含这些抑制剂的药物组合物，以及利用这些抑制剂治疗或预防血栓栓塞性疾病、癌症或类风湿性关节炎的方法。本发明还公开了制备这些抑制剂的方法。
文档编号C07F5/02GK1964951SQ200580017896
公开日2007年5月16日 申请日期2005年6月2日 优先权日2004年6月2日
发明者丹尼尔·A·迪克曼, 丹吉·维贾伊·库马尔, 科林·欧布赖恩, 鲁帕·拉伊, 威廉·德沃夏克·施雷德, 基龙·韦森 申请人:法莫西克立克斯公司