专利名称：：葛根素的氨基酸酯衍生物及其医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的葛根素的氨基酸酯的衍生物，及其非毒性药学上可接受的盐，这些衍生物具有较好的水溶性和较高的口服生物利用度。葛根素(Puerarin,商品名普乐林、普乐宁)是从豆科植物野葛中提取的黄酮类物质，化学名为4',7-二羟基-8-(3-D-葡萄吡喃糖-异黄酮。结构式J(口下戶斤示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>葛根素具有较为广泛的药理作用，实验证明葛根素对冠状动脉有扩张作用，能保护全心缺血心肌和心肌缺血再灌注损伤，减少急性心梗面积，降低心肌耗氧量，防止血小板黏附、聚集和血栓形成，葛根素对急性脑缺血有明显的保护作用，对P-肾上腺素能受体有阻断作用。在临床上，葛根素主要用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、缺血性脑血管病、高血压、突发性耳聋、视网膜动、静脉阻塞等症的治疗。但是，葛根素脂溶性和水溶性均较差，口服生物利用度低。静注注射用葛根素的制剂中需添加助溶剂如聚乙烯吡咯烷酮PVP等，易引起发热、皮疹、过敏性哞喘、过敏性休克等不良反应。
背景技术：
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发明内容本发明的目的是提供式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物:其中，R为氢、曱基、异丙基、异丁基、2-曱基丙基或苯曱基等L-氨基酸的侧《连。本发明还提供式I所示的葛根素的氨基酸酯的衍生物的非毒性药学上可接受的盐。本发明还提供含有式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。本发明还提供式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性药学上可接受的盐，以及包含式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物用于治疗心脑血管疾病的用途。具体实施例方式本发明的化合物可以按照如下合成路线制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>葛根素与N-千氧羰基氨基酸在二环己基碳二亚胺作用下缩合，得到2"-O-(N-千氧羰基氨基酰)-葛根素，催化氬化脱保护，得到目标化合物。结构式中R为氢、曱基、异丙基、异丁基、2-甲基丙基或苯甲基等氨基酸侧链。下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。实施例12"-0-(甘氨酰)-葛根素(U的制备将4.16g(10.0mmol)葛根素、2.09g(lO.Ommol)N-千氧羰基甘氨酸用25ml二曱基曱酰胺溶解，然后加入O.lml二曱氨基吡咬，2.5g(12mmol)二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应过夜，过滤，将滤液减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯曱烷/甲醇/乙酸(9:1:O.Ol)混合溶剂洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得2"-0-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素2.8克。将2"-0-(N-苄氧羰基甘氨酰)-葛根素用25ml毫升二氧六环溶解，加入0.1克5%的钯炭，在1个大气压的氢气下搅拌4小时后，滤去催化剂。将滤液减压浓缩，然后以硅胶柱层析分离，用二氯曱烷/甲醇(5:l)混合溶剂洗脱，收集所需组分，减压蒸干，得I!1.7克。核磁共振氢谱5(卯m，腿SO-dJ:5(ppm,DMSO-d6):9.475(s，1H);8.320(s，1H);8.274(brs，2H);7.929(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d,2H，J=8.4Hz);7.077(d，1H,J=8.7Hz);6.842(d，2H，J=8.2Hz);5.702(t,1H);5.049(d,1H);3.758(m,1H);3.671(m,1H);3.624(t,1H);3.517(dd,1H);3.425(m,1H);3.346(m,1H);3.325(m，1H)。实施例22"-O-(L-丙氨酰)-葛根素(12)的制备按照实施例1的方法，用N-节氧羰基-L-丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨酰)-葛根素代替2"-O-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到12。核磁共振氢谱5(ppm，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.470(s,1H);8.327(s，1H);8.271(brs，2H);7.922(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.846(d，2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.043(d,IH);3.755(m，IH);3.627(t,IH);3.540(q,lH);3.518(dd,IH);3.422(m，IH);3.344(m,IH);1.261(d,3H)。实施例32"-0-(L-缬氨酰)-葛根素(I3)的制备按照实施例1的方法，用N-节氧羰基-L-缬氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-O-(N-节氧羰基一L-缬氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-卡氧羰基一L-缬氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到13。核磁共振氢谱S(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.472(s,IH);8.324(s，IH);8.276(brs，2H);7.930(d,1H，J=8.9Hz),7.415(d，2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.841(d,2H，J=8.2Hz);5.705(t,IH);5.053(d,IH);3.761(m，IH);3.683(m，lH);3.625(t，IH);3.516(dd，IH);3.422(m，IH);3,347(m,IH);1.610(m，1H);0.621(d，3H);0.569(d，3H)。实施例42"-O-(L-亮氨酰)-葛根素(I4)的制备按照实施例1的方法，用N-千氧羰基-L-亮氨酸代替N-节氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-O-(N-千氧羰基一L-亮氨酰)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-亮氨酰)-葛根素代替2"-O-(N-苄氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到I"核磁共振氢谱5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.474(s,IH);8.321(s,IH);8.276(brs,2H);7.925(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H,J=8.4Hz);7.073(d，IH,J=8.7Hz);6駕(d,2H，J=8.2Hz);5.709(t,IH);5.043(d，IH);3.752(m,IH);3.624(t,IH);3.537(q，lH);3.516(dd,IH);3.425(m，IH);3.340(m,IH);1.426(m，IH);1.312(m,1H);0.562(d，3H);0.526(d，3H)。实施例52"-0-(L-异亮丙氨酰)-葛根素(I5)的制备按照实施例1的方法，用N-千氧羰基-L-异亮氨酸代替N-节氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-0-(N-苄氧羰基一L-异亮氨酰)-葛根素。用2"-0-(1^苄氧羰基一1^异亮氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到15。核磁共振氢谱5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.477(s，IH);8.320(s,IH);8.275(brs,2H);7.924(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d，2H,J=8.4Hz);7'073(d,1H，J=8.7Hz);6.848(d，2H,J=8.2Hz);5.702(t,IH);5.047(d,IH);3.751(m,IH);3.629(t，IH);3.543(q，lH);3.518(dd，IH);3.425(m，IH);3.340(m，IH);1.364(m,lH);0.662(m，2H);0.517(t，3H)。实施例62"-0-(L-脯氨酰)-葛根素(I6)的制备按照实施例1的方法，用N-爷氧羰基-L-脯氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-脯氨酰)-葛根素。用2"-0-(]^-,氧羰基一卜脯氨酰)-葛根素代替2，，-O-(N-千氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到13。核磁共振氢谱S(卯m,DMSO-d6):5(ppm，DMSO-d6):9.791(brs，IH);9.473(s,IH);8.326(s，IH);7.930(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H，J=8.4Hz);7.074(d，IH,J=8.7Hz);6.842(d,2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.041(d,IH);4.072(brs,lH);3.758(m,IH);3.624(t,IH);3.521(dd，IH);3.417(m,IH);3.124(m,2H);2.129(m，IH);1.760(m，IH);1.647(m，2H)。实施例72"-O-(L-苯丙氨酰)-葛根素(I7)的制备按照实施例1的方法，用N-千氧羰基-L-苯丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二环己基碳二亚胺与葛根素缩合，得到2"-O-(N-节氧羰基一L-苯丙氨酰)-葛根素。用2"-O-(N-苄氧羰基一L-苯丙氨酰)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨酰)-葛根素，催化氢化脱保护，得到I7。核磁共振氢谱5(卯m，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.478(s,1H);8'326(s，1H);8.270(brs，2H);7.94(d,lH);7.923(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.23(m，5H);7.071(d，1H,J=8.7Hz);6.846(d,2H,J=8.2Hz);5.708(t,1H);5.043(d，1H);3.755(m,1H);3'627(t，1H);3.540(q，lH);3.518(dd，1H);3.422(m,1H);3,359(m,1H);3.15(dd,lH);3.01(dd,lH)。实施例8抗缺氧活性试—验将质量18-20g的昆明小鼠，随机分组，每组10只，禁食过夜。将葛根素及待测目标化合物悬浮或溶解于1%的羧曱基纤维素钠的水溶液中，配成5mg/ml的浓度，按100mg/kg的剂量口服给予的葛根素注射液及目标化合物。的不同的待测化合物；给药2h后，将动物置于磨口广口瓶中，立即用真空脂封口，记录小鼠存活时间，计算平均值。结果见表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例9扩血管活性试验将Wistar大鼠断头处死，取主动脉制成动脉条，置于血液营养液中，37。C恒温，固定并与生物传感器相连。稳定lhr后，于浴槽中加入去曱肾上腺素至lxl(Tmol/L的浓度，待血管张力达到稳定的强弱一致的收缩畔值后，加入待测化合物，在不同浓度测定相应的张力值，以去曱肾上腺素引起的收缩碎值为100%,计算收缩抑制率。结果见表2。表2扩血管活性试验结果化合物收縮抑制率(％)5ug/ml10ug/ml20ug/ml生理盐水2.50.21.1葛根素5.411.619.7II3.66.911.3l26.48.318.2139.819.426.0l43.98.812.9153.713.921.6工60.73.25.1176.810.513.3实施例IO口服生物利用度的测定参考文献(吴燕红，苏子仁，赖小平，林吉。愈风宁心片中葛根素在Beagle犬体内药代动力学研究。中成药。2006;28(2):215-218.)的方法，测定目标化合物口服给药后的不同时间点葛根素的血药浓度，与静脉注射的葛根素比较，计算生物利用度。采用自身对照设计试验法，单剂量一次静脉注射葛根素注射液或口服相同剂量的目标化合物。采用HPLC法测定狗血浆中葛根素的浓度，应用PKsolutions2.0程序计算药动学参数和生物利用度。将3只Beagle犬称重(空腹重量)、编号；实验前禁食12h,但不禁水。按单剂量IOmg/kg于左前肢静脉注射葛根素药液，并在静脉注射前和注射后5min,10min,20min,30min,40min，60min,80min，2hr,3hr,4hr，5hr，8hr、12hr和24hr于对侧的右前月支采血0.5mL置于肝素钠和氟化钠处理过的离心管中。动物在300min前可以适当喂々大水，狗在300min釆血后方可进食。每间隔二周，按单剂量IOmg/kg分别喂服葛根素及目标化合物的胶嚢，并在服药前和服药后15min,35min，60min,90min,120min,150min,3hr,4hr，5hr,8hr,12hr和24hr采血O.5mL置于肝素钠和氟化钠处理过的离心管中，动物在300min前可以适当喂饮水，狗在300min采血后方可进食。将血样离心IOmm(8000r/min)，取上清200juL置离心管中，再加入200liL的6。/。高氯酸溶液沉淀蛋白质，混合2min后，离心(10000r/min)5min，放入水箱中静置2h，耳又出再离心(10000r/min)5min，取上清液用O.45jum微孔滤膜过滤，取滤液2GiuL进样。色谱条件K腦osilODSKR则一5色谱柱(250mmx4.6mm);Phenoie腦0DS保护柱(4mmx3.0mm);流动相曱醇-O.2%醋酸(30:70);流速1.0mL/min;;f主温30°C;4企测波长250nm。实验结果见表3:表3Beagle犬口服生物利用度<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1、式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物其中，R为氢、甲基、异丙基、异丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-氨基酸的侧链。。2、权利要求1所述的葛根素的氨基酸酯衍生物的非毒性药学上可接受的盐。3、权利要求1所述的葛根素的氨基酸酯衍生物的非毒性药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。4、权利要求1、2和3所述的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性药学上可接受的盐，以及包含式I所示的葛根素的氨基酸酯衍生物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物用于治疗心脑血管疾病的用途。全文摘要本发明的目的是提供式I所代表的葛根素的氨基酸酯的衍生物，其中，R为氢、甲基、异丙基、异丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-氨基酸的侧链。文档编号C07D407/00GK101353346SQ200710130138公开日2009年1月28日申请日期2007年7月23日优先权日2007年7月23日发明者杨振华,王建民申请人:北京美倍他药物研究有限公司