双环取代吡唑酮偶氮类衍生物的盐,其制备方法及其在医药上的应用的制作方法

专利名称：双环取代吡唑酮偶氮类衍生物的盐,其制备方法及其在医药上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的双环取代吡唑酮偶氮类衍生物药学上可接受的盐、其制备方 法以及含有该药学上可接受盐的药物组合物、以及其作为治疗剂特别是作为血小板生成素 (TPO)模拟物(mimetic)和血小板生成素受体激动剂的用途。
背景技术：
血小板生成素(Thrombopoiet in，ΤΡ0)，又称为巨核细胞生长发育 因 子(megakaryocyte growth and development factor, MGDF), 血 小 板 生 成 刺 激因子(thrombocytopoiesis stimulating factor, TSF), c-Mpl 配 体 (c-myeloproliferativeleukemia ligand, c_Mpl)，mpl HS体，megapoietin 是一禾中与产生 血小板有关的糖蛋白(Wendling，F.，et. al.，Biotherapy 10(4) :269_77 (1998) ；Kuter D. 1.et al.，TheOncologist ；1 :98_106(1996) ；Metcalf，Nature 369 :519_520(1994))。在某些情况下，TPO的活性源自TPO与TPO受体(也称MPL)的结合。TPO受体 已经被成功克隆，也进行了氨基酸序列的测序(Vigon et al.，Proc. Nat. Acad. Sci. ,89 5640-5644(1992))。TPO是一种332-氨基酸糖基化多肽，在调节巨核细胞生成和由骨髓巨核细胞 产生血小板的过程中起着关键的作用(Kuter et al. , Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91: 11104-11108(1994) ；Barley et al.，Cell 77:1117-1124(1994) ；Kaushansky et al.， Nature 369:568-571(1994) ；Wendling et al. ,Nature 369:571-574(1994) ；and Sauvage et al. ,Nature 369 :533_538 (1994))。ΤΡ0产生于肝脏但主要作用于骨髓，刺激干细胞分化 成为巨核细胞以及巨核细胞的增殖，多倍体化，最重要的是进入血小板身体循环分裂。TPO 在血小板减少症和大量关于增加血小板数量、大小、增加实验动物同位素参入血小板的研 究中是一种主要的调节剂(Metcalf Nature 369 :519_520 (1994))。TPO被认为主要通过几 个途径影响巨核细胞生成(1)引起巨核细胞大小和数量的增加；(2)增加DNA内含物，多 倍体的形式，巨核细胞；(3)增加巨核细胞的核内有丝分裂；(4)增加成熟的巨核细胞；(5) 增加前体细胞的百分比，小乙酰胆碱酶-阳性形式的细胞，骨髓细胞。血小板是血液凝固必需的，当它的数量非常低时，病人就有出血死亡的危险。因 此，TPO已经被用于诊断和治疗多种血液疾病，如主要由血小板缺陷引起的疾病。同时，TPO 可以用于治疗血小板减少症，尤其是为治疗癌症和淋巴瘤而进行的化疗、放疗和骨髓移植。患者因血小板减少症而导致血小板水平恢复过慢是一个严重的问题，因此希望可 以找到一种治疗血小板减少症的活性TPO类似物。几年前，多肽类TPO类似物的发展被报 道。(W096/40750，W098/25965)这些多肽可以结合并活化TPO受体，但是不具备天然TPO 的序列同源性。最近几年，一些小分子的活性TPO类似物被报导。包括1，4_苯并二氮杂 卓-2-酮类(JP11001477)，由希夫碱配体得到的金属络合物(W0 99/11262)，环多胺衍生 物(W000/28987)，噻唑-2-基-苯酰胺类(W001/07423, W001/53267)，偶氮-芳基衍生物(W000/35446,W01/17349) ,2-芳基-萘唑类(W001/39773，W001/53267)和缩氨基脲衍生物 (W001/34585)。在基于细胞的体系内，所有这些分子都能活化细胞膜上的TPO受体的信号 转导途径，一些类型能直接作用于TPO受体本身。这一系列中一些最优先的化合物被发现 可以刺激TPO-responsive人类细胞系和低于IOOnM的人类骨髓培养液中的TPO的增殖和 分化。GSK公司在专利(W0-2003098992/W0-01089457)中报道血小板生成素类似物 eltrombopag，并表现出了相当的活性。本发明公开了一系列双环取代吡唑酮偶氮类衍生物药学上可接受的盐形式，是更 有效TPO模拟物和TPO受体激动剂。本申请的申请人于2009年1月4日提交的申请PCT/CN2009/000001保护了一类 新型的双环取代吡唑酮偶氮类衍生物，以及其作为TPO模拟物和TPO受体激动剂的用途，其 中公开的实施例1、实施例9、实施例15、实施例28、实施例43和实施例52，分别为2'-羟 基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-联苯 基-3-羧酸、5- {2-羟基-3-[N' - (1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑_4_亚 基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸、5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代(5，6，7， 8-四氢萘-2-基)-1，5_ 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}_苯基)_呋喃-2-羧酸、4-(2_羟 基-3- {N' - [3-甲基-5-氧代-1- (5，6，7，8-四氢萘亚甲基_2_基)-I，5- 二氢吡唑_4_亚 基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸、5-(3-{N' -[l-(3，3-二甲基茚满-5-基)-3_甲 基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-2_羟基苯)_呋喃-2-羧酸和4-{2-羟 基-3-[N' - (1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻 吩-2-羧酸以及六个化合物的羧酸酯，试验证明其对TPO受体激动作用明显，因此将其内容 整个作为本发明的参考文献。但是，国际申请PCT/CN2009/000001没有具体描述任何一个 化合物的盐的形式。本发明人发现双环取代吡唑酮偶氮类衍生物的游离酸在常规溶剂中溶解性差，不 利于被制备成药用剂型，并且降低了化合物的体内生物利用度，因此迫切需要开发双环取 代吡唑酮偶氮类衍生物的新形式，解决这类化合物溶解性差，药代吸收差的问题，以适合于 常规制剂工艺。

发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供新颖的通式(I)所示的双环取代 吡唑酮偶氮类衍生物药学上可接受的盐、其制备方法、包含该药学上可接受的盐的药物组 合物以及其作为治疗剂特别是作为TPO模拟物和TPO受体激动剂的用途。该成盐形式具有 治疗血小板减少症的优异活性，溶解度明显改善，且在动物体内的活性及其生物利用度良 好，毒性低，适合于制备治疗血小板减少症的制剂。“本发明的化合物”和“本发明的盐”可以互换使用，都是指通式(I)化合物所示的 双环取代吡唑酮偶氮类衍生物药学上可接受的盐。 其中Het选自苯基、呋喃基或噻吩基；R1, R2, R3和R4各自独立地选自氢原子或烷基；η 为 0、1 或 2;所述的盐为碱加成盐。所考虑的等价物——本领域普通技术人员将理解为，化合物(I)还可存在互变异 构体的形式。化合物(I)的互变形式可包括但不限于由下式(II)和(III)表示的结构 所有这些互变形式包括在本发明范围内并固有地包括在化合物(I)定义中。本发明中，所述的“药学上可接受的盐”是指在药学上无毒的碱加成盐。所述的 盐为通式(I)化合物与合适的碱金属氢氧化物、碱性氨基酸、胺类或季铵类形成的盐，包括 钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、精氨酸盐、赖氨酸盐、甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、乙胺盐、二 乙胺盐、三乙胺盐、乙醇胺盐、哌嗪盐、二苄基乙二胺盐、葡甲胺、氨基丁三醇盐、四甲基季铵 盐、四乙基季铵盐或胆碱盐，优选为二乙胺盐、乙醇胺盐、胆碱盐、哌嗪盐、葡甲胺盐或氨基 丁三醇盐，更优选为乙醇胺盐、胆碱盐、葡甲胺盐或氨基丁三醇盐。本发明通式(I)化合物的典型的药学上可接受的盐包括，但不限于 本发明涉及通式(I)化合物药学上可接受的盐的制备方法，该方法包括(a)将游离酸(通式(I)化合物)溶解于有机溶剂中，优选为四氢呋喃；(b)搅拌下加入2 3当量的碱金属氢氧化物、碱性氨基酸、胺类或季铵类；(c)反应2 24小时后，分离出制备的盐；其中所述的无机碱包括碱金属氢氧化物选自钠、锂、钾、钙、镁氢氧化物，所述的碱 性氨基酸选自赖氨酸或精氨酸，所述的胺类选自甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙 胺、乙醇胺、哌嗪、二苄基乙二胺、葡甲胺或氨基丁三醇，所述的季铵类选自四甲基季铵、四 乙基季铵或氢氧化胆碱，优选为二乙胺、乙醇胺、氢氧化胆碱、哌嗪、葡甲胺或氨基丁三醇， 更优选为乙醇胺、氢氧化胆碱、葡甲胺或氨基丁三醇。优选地，步骤(C)中，分离出制备的盐，包括从反应液中直接过滤出固体，将反应液减压浓缩得到固体产物粗品或用有机溶剂重结晶得到产物盐，然后干燥，如真空干燥或 高温空气干燥。上述制备过程可以在冷却、常温或者加热条件下进行，值得注意的是反应温度的 选择对不同的成盐反应有一定的影响，这也是本领域技术人员技术所熟知的，本发明成盐 反应温度为常温至所用溶剂的沸点，优选0 40°C ；本领域技术人员通过本领域常规的技 术手段就能容易地确定具体成盐反应的最优选反应温度。本发明涉及通式⑴化合物在制备TPO受体激动剂中的用途。本发明涉及通式(I)化合物在制备治疗血小板减少症药物中的用途。包括联合使 用治疗有效量的选自下列的药物集落刺激因子、细胞因子、趋化因子、白细胞介素或细胞 因子受体激动剂或拮抗剂、可溶的受体、受体激动剂或拮抗剂抗体或与一个或多个所述的 药物具有相同的机理而起作用的肽或小分子类。本发明涉及一种药物组合物，其包括药物有效量的通式(I)化合物药学上可接受 的盐和药学上可接受的载体或稀释剂。该组合物可以进一步含有联合使用的治疗有效量的 选自下列的药物集落刺激因子、细胞因子、趋化因子、白细胞介素或细胞因子受体激动剂。 该药物组合物在制备治疗血小板减少症药物的用途。所述的联合使用包括同时使用或者先 后依次使用本发明所述的化合物。本发明涉及一种制备含有有效量的通式(I)化合物及其药学上可以接受的盐和 药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物的方法，该方法包括将通式(I)化合物与药用 载体和稀释剂相结合。在药物组合物的配制过程中，重要的是药物物质是一种可方便操作和处理的形 式。不仅从获得商业上可行的制备方法的角度来说，而且从随后制备含该活性化合物的药 物制剂的角度来说，这都是很重要的。此外，在制备药物组合物的过程中，重要的是患者给药后，提供一种可靠的、可再 现的和恒定的药物血浆浓度曲线。活性成分的化学稳定性、固态稳定性和“储存寿命”同样是非常重要的因素。该药 物物质乙基包含它的组合物应该优选能够有效地储存相当一段时间，而活性成分的物理化 学特性(例如它的化学组成、密度、吸湿性和溶解度)没有表现出显著的变化。此外，提供尽可能化学纯形式的药物同样是非常重要的。本领域熟练技术人员可以理解，典型地，如果一种药物可以很容易地以稳定形式 获得，例如稳定的晶型，那么可以提供如下优点易于处理、易于制备合适的药物制剂以及 具有可靠的溶解特征。活性成分有效量是为有效无毒剂量，优选0.001 100mg/kg总体重的范围，更优 选0.001 50mg/kg。当治疗需要TPO类似物治疗的患者时，优选口服或非肠胃给药包括局 部、直肠、经皮、注射或持续输液。人类口服给药剂量优选包括0. 05 3500mg活性成分，最 优选0.5 IOOOmg活性成分。使用较低剂量的口服给药形式为优选。然而，在对患者安全 方便时，也可以施用高剂量非肠胃给药。上述剂量涉及优选的以游离酸表示的活性成分的 量。本领域技术人员应当肯定，活性成分个体剂量的最佳给药数量及间隔视治疗疾病 的性质及程度，给药剂型、途径及部位，治疗的具体患者而定，并且该最佳方案可通过常用技术确定。本领域技术人员也应当明白，最佳疗程，即既定时间内每天给予活性成分的剂量 次数可经本领域技术人员使用常用的确定疗程的试验确定。本发明的化合物可口服或非肠胃给药，可制成包括片剂、丸剂、粉剂及颗粒剂用于 各种给药途径。在这些固体制剂中，活性成分至少与一种惰性稀释剂相混合。按照常规操 作，口服制剂也可包括初惰性稀释剂以外的其他物质，如润滑剂、助流剂及抗氧化剂。若制 成胶囊、片剂及丸剂，制剂中包括缓冲剂。片剂及丸剂还可制成持续释放剂型。尽管也可采用乳剂的非水溶液，本发明的非肠胃给药制剂包括无菌水溶液。这些 剂型也可包括佐剂，如防腐剂、润湿剂、渗透剂、缓冲剂、乳化剂及分散剂。其灭菌可采用细 菌截留滤器(bacteria retaining filter)过滤，向组合物中加入灭菌剂，照射组合物或加 热组合物的方法灭菌。本发明的盐与其游离酸相比，主要优点如下(1)本发明的盐在常规的溶剂，如水中、甲醇和0. 盐酸中的溶解度明显增加， 适用于常规制剂，其中乙醇胺盐在0. 盐酸中溶解度明显改善。(2)本发明的盐具有改善的稳定性的特性。(3)本发明的盐具有更好的体外筛选生物活性。(4)本发明的盐在动物体内疗效低毒、作用时间长、副作用小，其药代动力学性质 明显改善，易吸收，生物利用度高，有较好的药代动力学曲线，其中乙醇胺盐、胆碱盐、哌嗪 盐、葡甲胺盐和氨基丁三醇盐具有较好的药代动力学性质。(5)本发明的盐以高收率、高纯度、快速、方便和低成本进行制备，其中乙醇胺盐、 胆碱盐、二乙胺盐和哌嗪盐在工艺路线中有优势，可以直接析出晶体。本发明的盐与其游离酸相比，其溶解度、稳定性、体外筛选活性和药代动力学等性 质都明显改善，优选为二乙胺盐、乙醇胺盐、胆碱盐、哌嗪盐、葡甲胺盐和氨基丁三醇盐，更 优选为乙醇胺盐、胆碱盐、葡甲胺盐和氨基丁三醇盐。发明的详细说明除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。“乙醇胺”指“2-氨基乙醇”。“胆碱”指“(2-羟基乙基)三甲基铵”。“葡甲胺”指“N-甲基-D-葡萄糖胺”。“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物药学上可接受的盐或前体药物与 其他化学组分的混合物，其他组分例如生理学/药学上可接受的载体。药物组合物的目的 是促进化合物对生物体的给药。“稳定性”化学稳定性和固态稳定性。“化学稳定性”包括标准储存条件下有可能以隔离形式或以掺合药学上可接受的 载体或稀释剂后获得的制剂形式(例如以口服剂型，如片剂、胶囊等)储存本发明的化合 物，具有微不足道程度的化学降解或分解。“固态稳定性”包括标准储存条件下有可能以隔离固态形式或以掺合药学上可接 受的载体或稀释剂后获得的固态剂型的形式(例如以口服剂型，如片剂、胶囊等)储存本发 明的化合物，具有微不足道的固态转变(例如结晶、重结晶、固态相变、水合、脱水、溶剂化 或脱溶剂化)。
“标准储存条件”的例子包括温度在-80V至+50V之间(优选在0°C至40°C之间， 更优选在室温下，例如15°C -30°C )，压力在0. 1帕至2帕之间(优选在大气压下)，相对湿 度在5%至95%之间(优选10% -60% )和/或暴露于460勒克斯UV/可见光下，经历更 长的时间(即大于或等于6个月)。“非肠胃给药”包括静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内、阴道内或腹膜内。通常 优选口服给药。本发明化合物的合成方法为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案按照本申请的申请人于2009年1月4日提交的申请PCT/CN2009/000001实施例 1、实施例9、实施例15、实施例28、实施例43和实施例52，所述的方法制备，因此将该内容 作为参考文献。通式(I)化合物药学上可接受的盐的制备方法，该方法包括(a)将游离酸(通式(I)化合物)溶解于有机溶剂中，优选为四氢呋喃；(b)搅拌下加入2 3当量的碱金属氢氧化物、碱性氨基酸、胺类或季铵类；(c)反应2 24小时后，分离出制备的盐；其中所述的无机碱包括碱金属氢氧化物选自钠、钾、钙、镁氢氧化物，所述的胺类 或季铵类化合物选自四甲基季铵、四乙基季铵、乙醇胺、胆碱、赖氨酸、精氨酸、甲胺、二甲 胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、二苄基乙二胺、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇。优选地，步骤(C)中，包括从反应液中直接过滤出固体，将反应液减压浓缩得到固 体产物粗品或用有机溶剂重结晶得到产物盐，然后干燥，如真空干燥或高温空气干燥。上述制备过程可以在冷却、常温或者加热条件下进行，值得注意的是反应温度的 选择对不同的成盐反应有一定的影响，这也是本领域技术人员技术所熟知的，本发明成盐 反应温度为常温至所用溶剂的沸点，优选0 40°C ；本领域技术人员通过本领域常规的技 术手段就能容易地确定具体成盐反应的最优选反应温度。
具体实施例方式以下实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围和精 神实质。实施例化合物的结构是通过核磁共振(1HNMR)或质谱(MS)来确定的。1HNMR的测定是用 Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代甲醇(⑶30D)，氘代氯仿(⑶Cl3),六氘代二甲 基亚砜(DMS0-d6)内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以l(T6(ppm)作为单位给出；MS 的测定用 FINNIGAN LCQAd (ESI)质谱仪(生产商Therm，型号Finnigan LCQ advantage MAX)；IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)；薄层硅胶使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板；硅胶柱层析一般使用烟台黄海硅胶200 300目硅胶为载体；HPLC测试使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150X4. 6mm色谱 柱)和Waters 2695_2"6高压液相色谱仪(Gimini C18 I5O X 4. 6讓色谱柱)；
加压氢化反应使用Pau 3916EKX型氢化仪和清蓝QL型氢气发生器；微波反应使用 CEM Discover-S 908860 型微波反应器；实施例中无特殊说明，反应均在氮气氛下进行；氮气氛是指反应瓶连接一个约IL容积的氮气气球；氢气氛是指反应瓶连接一个约IL容积的氢气气球；实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液；TLC是指薄层色谱；HPLC是指高效液相色谱；HPLC 测试条件运行时间30min 柱温30°C PDA :230nm流动相乙腈水(0. 三氟醋酸)=25 75流速1. OmL/分色谱柱C18，150*4.6mm Gemini实施例1(Z)-2'-羟基-3' -「N' -(1-茚滿-5-基-3-甲基-5-氧代-1,5-二氢吡 P半-4-亚某)-肼某1-联苯某-3-羧酸二乙醇胺盐 第一步2-溴-6-硝基苯酚将60mL浓硫酸稀释到186mL水中，冷却至室温后加入硝酸钠(79. 2g，0. 93mol)， 保持25°C以下，滴加邻溴苯酚la(60mL，0. 52mol)，室温反应2小时。TLC跟踪至原料消失， 加入320mL乙酸乙酯溶解析出的固体，分别用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过 滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到2-溴-6-硝基苯酚Ib (48. 2g，黄 色固体)。产率42. 8%。
15
MS m/z (ESI) :218[M+1]1HNMR(400M Hz, CDCl3) δ 11· 18 (s，1H)，8· 12—8. 15 (m，1H)，7· 89—7. 91 (d，J = 8Hz, 1H) ,6. 88-7. 02 (m, 1H)第二步1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯将2-溴-6-硝基苯酚lb(46. 55g，0. 214mol)溶解于500mL丙酮中，加入碳酸钾 (35. 36g，0. 26mol)和碘甲烷(20. ImL, 0. 32mol)，70°C加热回流40小时。TLC跟踪至原料消 失，减压浓缩，加入1300mL乙酸乙酯和500mL水，水相用乙酸乙酯萃取(300mLX 2)，合并有 机相，分别用4N盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯Ic (44. 59g，棕色固体)。 产率90. 0%。MS m/z (ESI) :234[M+1]第三步2'-甲氧基-3'-硝基联苯基-3-羧酸将1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯Ic (23. 25g,0. IOmol)、3_羧基苯基硼酸(19. 5g， 117mmol)和四(三苯基膦)钯(8. 86g,7. 7mol)溶解于IOOmL 2N碳酸钠溶液和500mLl， 4-二氧六环的混和溶剂中，105°C加热回流43小时。TLC跟踪至原料消失，减压浓缩，加 入300mL 6N盐酸溶液和400mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(200mLX 2)，合并有机相， 用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2'-甲氧基-3'-硝基联苯基-3-羧酸 Id (53. 93g，浅黄色固体)。MS m/z (ESI) :272[M_1]1HNMR (400MHz, CDCl3) δ 8. 11 (s，1Η)，8· 01-8. 03 (d，J = 8Hz，1Η)，7· 90-7. 92 (m， 1Η)，7. 82-7. 84 (m, 1H)，7. 21-7. 75 (m, 1H)，7. 63-7. 67 (m, 1H)，7. 42-7. 46 (m, 1H)， 3. 44-3. 46 (d, J = 8Hz，3H)第四步2'-甲氧基-3'-氨基联苯基-3-羧酸将2'-甲氧基-3'-硝基联苯基_3-羧酸1(1(0.488，1.7411111101)溶解于601^乙 醇中，加入0.5g钯-碳(10% )和甲酸铵(1. lg，17.4mmOl)，80°C加热回流20分钟。TLC 跟踪至原料消失，过滤，滤液减压浓缩，干燥，得到2'-甲氧基-3'-氨基联苯基-3-羧酸 le(0. 42g，白色固体)。产率93.3%。MS m/z (ESI) :242[M_1]第五步3'-氨基-2'-羟基联苯基-3-羧酸氢溴酸盐采用公知的方法(专利W00189457)，将2'-甲氧基-氨基联苯基_3_羧酸 Ie (2. 5g,10. 3mmol)溶解于IOOmL氢溴酸溶液(40% )中，120°C加热回流过夜。TLC跟踪 至原料消失，减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到3'-氨基-2'-羟基联苯 基-3-羧酸氢溴酸盐If (2. 4g，土黄色固体)，产率88. 8 %。MS m/z (ESI) :230[M+1]第六步
5-胼基茚满冰浴下将5-氨基茚满Ig (3. 59g，27. Ommo 1)溶解于20mL浓盐酸中，搅拌10分钟。 滴加入IOmL亚硝酸钠溶液(1. 86g，27. Ommol)，冰浴下继续搅拌15分钟备用。冰盐浴下将二水合氯化亚锡(24. 4g，108. Ommol)溶解于IOmL浓盐酸中，将备用 中间体溶液加入其中，升至室温反应1. 5小时。冰浴下用40%氢氧化钠溶液调pH = 9，加 入400mL乙酸乙酯萃取，减压浓缩，干燥，得到5-胼基茚满Ih (2. 05g，红棕色固体)。产率 51. 3%。MS m/z (ESI) 149[M+1]第七步2-茚满-5-基-5-甲基-2，4-二氢吡唑-3-酮将5-胼基茚满lh(2.05g，13.8mmol)溶解于50mL乙酸中，加入乙酰乙酸乙酯 (1. 76mL, 13. Smmol)，加热至100°C过夜。TLC跟踪至原料消失，减压浓缩，用硅胶柱色谱法 纯化所得残余物，得到2-茚满-5-基-5-甲基-2，4- 二氢吡唑-3-酮Ii (1. 84g，黄色固 体)。产率62. 3%0MS m/z (ESI) :215[M+1]1HNMR(400MHz, CDCl3) δ 7. 69 (s, 1H)，7· 60 (d, J = 8. OHz，1Η)，7· 24 (d, J = 8Hz, 1H)，3. 44 (s，2H)，2. 90-2. 97 (m, 4H)，3. 21 (s，3H)，2. 07-2. 14 (m, 2H)。第八步(Z)-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)_胼基]_联苯基-3-羧酸冰浴下将3'-氨基-2'-羟基联苯基-3-羧酸氢溴酸盐lf(267mg，l. 16mmol) 溶解于IOmLlN盐酸中，滴加入IOmL亚硝酸钠溶液(88mg，1. 28mmol)的，再加入2-茚 满-5-基-5-甲基-2，4- 二氢吡唑-3-酮Ii (249mg, 1. 16mmol)，用饱和碳酸氢钠溶液将反 应液调节PH = 8，加入IOmL乙醇，升至室温过夜。TLC跟踪至原料消失，过滤，干燥，用甲醇 重结晶，得到标题产物⑵-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-羰基-1， 5-二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-联苯基-3-羧酸lj(60mg，黄色固体)。产率11.4%。MS m/z (ESI) :453[M_1]1HNMR (400MHz, DMS0_d6) δ 13. 76 (br, 1Η)，13. 03 (br, 1Η)，9· 66 (br, 1Η)，8· 13 (s， 1Η) ,7. 96-7. 98 (d, J = 8. 1Hz，1Η)，7. 60—7. 82 (m，5Η)，7. 28—7. 30 (d，J = 8·1Ηζ，1Η)， 7. 13-7. 17 (m, 2Η)，2. 86-2. 93 (m, 4Η)，2. 34 (s, 3H)，2. 03-2. 10 (m, 2H)第九步(Z)-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)_胼基]_联苯基-3-羧酸二乙醇胺盐将⑵-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-羰基-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)_胼基]_联苯基-3-羧酸Ij (454mg, 1. Ommol)溶解于16mL四氢呋喃中，搅拌 下加入乙醇胺(143mg，2.35mm0l)，反应液在室温搅拌3小时。过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤 (2mLX3)，真空下干燥，得到标题产物2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-羰 基-1，5- 二氢吡唑-4-亚基)_胼基]_联苯基-3-羧酸二乙醇胺盐1 (553mg，暗红色固体)。 产率96. 0%。
MS m/z (ESI) :453[M_1]1HNMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 13 (s, 1H), 7. 92 (d, J = 7· 6Hz，1Η)，7· 69 (m，3Η)，
7.61 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 45 (t, J = 7. 6Hz, 1Η)，7. 25 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 17 (d, J =
8.0Hz, 1Η) ,6. 98 (t, J = 8· ΟΗζ，1Η)，3· 65 (t，J = 5. 2Hz，4Η)，2. 95 (m，4Η)，2. 86 (t，J = 5. 2Hz，4H)，2.41(s，3H)，2. 12(m，2H)实施例2(Z)-2'-羟基-3' -「N' -(1-茚滿-5-基-3-甲基-5-氧代-1,5-二氢吡 啤-4-亚某)-肼某1-联苯某-3-羧酸二(二乙胺)盐 将⑵-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-联苯基-3-羧酸Ij (150mg, 0. 33mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈暗红 色悬浊液，搅拌下滴加二乙胺(48mg，0. 66mmol)，呈紫红色溶液，室温下反应2小时。反应液 中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标题 产物(Z)-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚 基)_胼基]_联苯基-3-羧酸二(二乙胺)盐2(132mg，红色固体)，产率66.7%。HPLC 99. 23%MS m/z (ESI) :452. 9[M_1]1HNMR (400M Hz，CD3OD) δ 8. 083 (m, 4H) ,7. 94 (d, J = 7. 6Hz，1H)，7. 722 (m, 2H)， 7. 620 (m, 2H)，7. 549 (m, 1H)，7. 250 (d, J = 8. 4Hz, 1H)，7. 137 (d, J = 8Hz, 1H)，7. 069 (m, 1H)， 2. 930 (m, 8H)，2. 381 (s，3H)，1. 09 (m, 2H)，1. 335 (m, 12H)实施例3(Z)-2'-羟基-3' -「N' -(1-茚滿-5-基-3-甲基-5-氧代-15-二氢吡唑-4-亚
将⑵-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-联苯基-3-羧酸Ij (150mg, 0. 33mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈暗红色 悬浊液，搅拌下加入哌嗪(57mg，0. 66mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅拌2小时。反应液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标题产物 (Z)-2'-羟基-3' -[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚基)-胼 基]-联苯基-3-羧酸二哌嗪盐3 (130mg,暗红色固体)，产率62. 8%0 HPLC 98. 51%MS m/z (ESI) :452. 8[M_1]1HNMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 1 (s, 1Η) , 7. 92 (d, J = 7. 6Hz，1Η)，7. 678 (m，3Η)， 7. 61 (m, 1Η)，7. 432 (m, 1Η)，7. 239 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 147 (m, 1Η)，7. 001 (m, 1H)，3. 728 (m, 2H)，2. 966 (m, 12H)，2. 388 (s, 3H)，2. 105 (m, 2H)，1. 889 (m, 2H)实施例4(Z)-5-(3-{N' -「I-(3, 3- 二甲基茚滿 ~5~ 基)_3_ 甲基 _5_ 氧代 _1,5_ 二氢吡 P半-4- 1-肼某丨-2-羟某苯)--2-羧酸二乙醇胺盐 第一步1-(3，3_ 二甲基茚满-5-基)胼基-1，2-二羧酸二叔丁酯将6-溴-1，1- 二甲基茚满(采用公知的方法专利W02005066115制备而 得)4a(4. 32g，19. 27mmol)溶解于 40mL 四氢呋喃中，_78°C下滴加丁基锂(15. 67mL, 1. 6mol/ L，25. 05mmol)，反应40分钟，加入偶氮二甲酸二叔丁酯(5. 32g，23. 12mmol)的30mL四氢呋 喃溶液，_78°C下继续反应3小时。TLC跟踪至原料消失，加入5mL甲醇，反应液升至室温， 用硅胶过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱层析分离纯化所得残留物，得到1-(3，3_ 二甲基茚 满-5-基)胼基-1，2- 二羧酸二叔丁酯5b (2. 70g，黄色固体)。产率37. 2%。
第二步2-(3，3-二甲基茚满-5-基)-5-甲基_2，4_ 二氢吡唑_3_酮将1-(3，3-二甲基茚满-5-基)胼基-1，2-二羧酸二叔丁酯 4b (2. 70g，7. 18mmol) 溶解于IOOmL乙酸中，加入20mL三氟乙酸，室温反应2小时，加入乙酰乙酸乙酯(0. 98g， 7. 54mmol)，加热至100°C反应2小时。TLC跟踪至原料消失，冷却至室温，减压浓缩除去乙 酸，用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液中的酸，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到2- (3，3- 二 甲基茚满-5-基)-5-甲基-2，4- 二氢吡唑-3-酮5c (1. Og,淡褐色固体)。产率47. 7%。MS m/z (ESI) :243[M+1]第三步2-(2_甲氧基-3-硝基苯基)-4，4，5，5_四甲基_[1，3，2]硼酸乙二醇酯将1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯 lc(67g，289mmol)、4，4，4，，4，，5，5，5，，5，-八 甲基-2，2，-联-1，3，2-硼酸乙二醇酯(110g，433mmOl)、四(三苯基膦)钯(11.80g， 14. 44mmol)和乙酸钾(71g，724mmol)溶解于600mL乙二醇二甲醚中，加热回流17小时。 TLC跟踪至原料消失，减压浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，得到2-(2_甲氧基-3-硝基苯 基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]硼酸乙二醇酯4d(50. 5g，黄色晶体)。产率61. 9%。第四步5- (2-甲氧基-3-硝基苯基)-呋喃-2-羧酸将2-(2_甲氧基-3-硝基苯基)-4，4，5，5_四甲基-[1，3，2]硼酸乙二醇酯 4d(10g，35.85mmol)、5-溴-呋喃-2-羧酸(5. 47g，28. 66mmol)、四(三苯基膦)钯(2. 07g, 1. 79mmol)和碳酸钠(7. 60g，71. 66mmol)溶解于200mL 1，4-二氧六环和30mL水的混合溶 剂中，加热回流2. 5小时。TLC跟踪至原料消失，过滤，滤液减压浓缩，向残余物中加入150mL 水，用IN盐酸酸化至pH = 3，过滤，固体用50mL正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(V V = 1/1)洗涤，干燥，得到5- (2-甲氧基-3-硝基苯基)-呋喃-2-羧酸4e (4. 23g，灰白色固体)。 产率56. 1%。MS m/z (ESI) :262[M_1]第五步 5- (3-氨基-2-甲氧基-苯基)-呋喃-2-羧酸将5-(2_甲氧基-3-硝基苯基)_呋喃-2-羧酸4e(4. 23g，16.09mmol)溶解于 125mL乙酸乙酯中，再加入423mg钯-碳(10% )和甲酸铵(4. 054g,64. 35mmol)，加热回流 3. 5小时。TLC跟踪至原料消失，减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到5-(3_氨 基-2-甲氧基-苯基)_呋喃-2-羧酸4f (2. 79g，淡绿色固体)，产率74. 4%。MS m/z (ESI) :232[M_1]第六步5- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐将5-(3-氨基-2-甲氧基-苯基)-呋喃-2-羧酸4f(2. 79g，11.97mm0l)溶解于 25mL 二氯甲烷中，滴加入三溴化硼(23. 9mL, 2. Omo 1/L)，室温反应1小时。TLC跟踪至原料 消失，加入5mL甲醇，减压浓缩，向残余物中加入IOOmL乙酸乙酯，搅拌1小时，过滤，收集固 体，干燥，得到5- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐4g (1. 24g，黄色固体)。产率47. 2%。MS m/z (ESI) :218[M_1]第七步(Z)-5-(3-{N' -[l-(3，3-二甲基茚满-5-基)-3_ 甲基-5-氧代-1，5_ 二氢吡 唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧酸冰浴下将5-(3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐48(33311^，1. Immol) 溶解于盐酸(3. 7mL, lmol/L)中，滴加入1. 5mL亚硝酸钠溶液(85mg, 1. 22mmol)，反应20 分钟，再加入2- (3，3- 二甲基茚满-5-基)-5-甲基-2，4- 二氢吡唑-3-酮5c (242mg，
1.Ommo 1)，分批加入碳酸氢钠(1. 4g，16. 67mmol)和3mL乙醇，室温反应过夜。TLC跟踪至原 料消失，过滤，固体加入20mL水，用浓盐酸调节pH值至3 4，过滤出固体，固体干燥后经 柱层析得到标题产物(Z)-5-(3-{N' -[l-(3，3-二甲基茚满-5-基)-3_甲基-5-氧代-1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-2-羟基苯)_呋喃-2-羧酸4h(190mg，红色固体)，产率 40. 3%。MS m/z (ESI) :470. 9[M_1]1HNMR (400MHz, DMS0_d6) δ 13. 74 (br, 1H), 13. 15 (br, 1H), 9. 99 (br, 1Η), 7. 71 (m, 3Η)，7. 55 (d, J = 6. 8Hz, 1Η)，7. 37 (d, J = 3. 6Hz, 1Η)，7. 20 (m, 2Η)，7. 15 (m, 1Η)，2. 86 (t, J =7. 2Ηζ，2Η)，2· 33(s，3H)，1. 92 (t, J = 7. 2Hz，2H)，1. 26(s，6H)第八步(Z)-5-(3-{N' -[l-(3，3-二甲基茚满-5-基)-3_ 甲基-5-氧代-1，5_ 二氢吡 唑-4-亚基]-胼基}-2-羟基苯)_呋喃-2-羧酸二乙醇胺盐将⑵-5-(3-{N'-[1-(3，3_ 二甲基茚满-5-基)-3_ 甲基-5-氧代-1，5-二氢 吡唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧酸4h (2. 3g，4. 87mmol)溶解于20mL四 氢呋喃中，搅拌下加入乙醇胺(594mg，9. 75mmol)，反应液在室温搅拌1小时。过滤，滤饼用 四氢呋喃洗涤(lmLX3)，真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(3-{N' _[1_(3，3-二甲基茚 满-5-基)-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧 酸二乙醇胺盐4(2. 5g，黑色固体)。产率86.4%。MS m/z (ESI) :470. 8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) : δ 7. 57 (m，4H)，7. 19 (m，1H)，7. 03 (d，J = 3·2Ηζ，1Η)， 6. 95 (d, J = 3. 6Ηζ，1Η)，6. 71(t，J = 8. 0Hz，1Η)，3. 73 (t，J = 5. 2Hz，4Η)，2. 98 (m，4Η)，
2.88 (t, J = 7. 2Hz，2H)，2. 36(s，3H)，1. 96 (t, J = 7. 2Hz，2H)，1. 29(s，6H)实施例5(Z)-5-(3-IN' -「I-(3，3- 二甲基茚满 _5_ 基)_3_ 甲基 _5_ 氧代 _1，5_ 二氢吡 哔-4-亚基1-肼基丨-2-羟基苯)-呋喃-2-羧酸二( 二乙胺)盐 将⑵-5-(3-{N'-[l-(3，3-二甲基茚满-5-基)-3_ 甲基-5-氧代-1，5_ 二 氢吡唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧酸4h (150mg, 0. 32mmol)溶于5mL 四氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入哌嗪(55mg，0. 64mmol)，呈紫红色溶液，室温 下搅拌过夜。滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标题产物 (Z) -5-(3-{N' -[1-(3，3- 二 甲基茚满-5-基)-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚 基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃2-羧酸二哌嗪盐6 (158mg,红色固体)。产率77. 1 %。HPLC 99. 28%MS m/z (ESI) :471.8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 64(s，3H)，7· 55 (d, 1Η)，7· 21 (d, 1Η)，7· 04(m，2H)， 3. 01 (s，16Η)，2. 90 (t, 2Η)，2. 38 (s, 3H)，1. 97 (t, 2H)，1. 29 (s,6H)实施例7(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _「3_ 甲基 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢萘 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基1-肼基丨-苯基)-呋喃-2-羧酸二乙醇胺盐 将(Z)-5-(3-{N'-[1-(3，3_ 二甲基茚满-5-基)-3_ 甲基-5-氧代-1，5-二氧 口比唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧酸4h (150mg, 0. 32mmol)溶于5mL四氧 呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入二乙胺(46mg，0. 63mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅拌 过夜。将反应液在减压下浓缩，残留物通过硅胶层析进一步分离纯化(正己烷乙酸乙酯 =10 1)，得到的固体在真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(3-{N' -[l-(3，3-二甲基弗 满-5-基)-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基} -2-羟基苯)-呋喃-2-羧 酸二(二乙胺)盐5(170mg，暗红色固体)。产率86.7%。HPLC 94. 64%MS m/z (ESI) :471.9[M_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) δ 7. 60 (m，4H)，7. 19 (m, 1H)，7· 04 (m，1H)，6. 87 (m, 2H)， 2. 98 (q, 8H)，2. 89 (t, 2H)，2. 36 (s, 3H)，1. 96 (t, 2H)，1. 27 (t, 12H)，1. 25 (s,6H)实施例6(Z)-5-(3-{N' -「I-(3, 3- 二甲基茚滿 ~5~ 基)_3_ 甲基 _5_ 氧代 _1,5_ 二氢批 第一步2-胼基-5，6，7，8-四氢萘冰浴下将2-氨基-5，6，7，8-四氢萘7a (3. 68g，25. Ommol)溶解于20mL浓盐酸中， 搅拌10分钟。滴加入IOmL亚硝酸钠溶液(1. 72g，25. Ommol)，冰浴下继续搅拌15分钟备用。冰盐浴下将二水合氯化亚锡(22. 6g，IOOmmol)溶解于IOmL浓盐酸中，将备用中 间体溶液加入其中，升至室温反应1. 5小时。冰浴下用40%氢氧化钠溶液调pH = 9，加入 400mL乙酸乙酯萃取，减压浓缩，干燥，得到2-胼基-5，6，7，8-四氢萘7b (2. 19g，黄色油状 液体)。产率53. 7%。MS m/z (ESI) :163[M+1]第二步5-甲基-2-(5，6，7，8-四氢萘 _2_ 基)_2，4_ 二氢吡唑 _3_ 酮将2-胼基-5，6，7，8-四氢萘7b (2. 0g，12. 3謹ol)溶解于50mL乙酸中，再加入乙 酰乙酸乙酯(1.57mL，12. 3mmol)，加热至100°C过夜。TLC跟踪至原料消失，减压浓缩，用 硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到5-甲基-2-(5，6，7，8-四氢萘-2-基)-2，4_ 二氢吡 唑-3-酮7c(1.58g，无色油状液体)。产率56. 2%0MS m/z (ESI) :457[2M+1]1HNMr(CDCI3) : δ 7. 54-7. 58(m，2H)，7. 08-7. 10(d，J = 8Hz，1H)，3. 43 (s，2H)， δ 2. 77-2. 81 (m, 4H)，2. 21 (s，3H)，1. 80-1. 83 (m, 4H).第三步(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸
冰浴下将5- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐4g (292mg, 0. 98mmol) 溶解于3. 3mL IN盐酸中，滴加入1. 3mL亚硝酸钠溶液(74mg, 1. 07mmol)，搅拌20分钟，再加 Λ 5-甲基-2- (5，6，7，8-四氢萘-2-基)_2，4- 二氢吡唑 _3_ 酮 7c (200mg, 0. 88mmol)，分批 加入饱和碳酸氢钠溶液(1. 226g，14. 6mmol)调节pH = 8 9，用2mL乙醇淬灭气泡，升至室 温反应过夜。TLC跟踪至原料消失，过滤出固体，用20mL水溶解，搅拌均勻，用浓盐酸调节pH =3 4，过滤，干燥，粗品用HPLC分离纯化，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲 基-5-氧代-1- (5，6，7，8-四氢萘-2-基)-1，5- 二氢吡唑_4_亚基]-胼基}-苯基)-呋 喃-2-羧酸7d(160mg，红色固体)。产率39. 8%0MS m/z (ESI) :457[M_1]1HNMR (400MHz, DMS0_d6) δ 7. 71 (d, J = 8. 4Hz，1H)，7· 63 (m，2H)，7· 56 (d，J = 7. 6Hz, 1H) ,7. 37 (d, J = 3. 2Hz，1H)，7. 22 (t，J = 8. 0Hz，1H)，7. 13 (m，2H)，2. 75 (m，4H)， 2. 33(s，3H)，1. 76 (m, 4H)第四步(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢-萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二乙醇胺盐将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d (2. 8g，6. 31mmol)溶于40mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入乙醇胺(769mg，12. 61mmol)，呈紫红色溶液，室温 下搅拌2小时，有大量固体析出。在反应液中加入20mL四氢呋喃，过滤，滤饼用四氢呋喃 洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲 基-5-氧代-1- (5，6，7，8-四氢萘-2-基)-1，5- 二氢吡唑_4_亚基]-胼基}-苯基)-呋 喃2-羧酸二乙醇胺盐7 (1. 97g，暗红色固体)，产率55. 2%。HPLC 99. 33%MS m/z (ESI) :457[M_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) δ 7. 56 (d, J = 7. 6Hz，1H)，7. 49 (m, 3H)，6. 99 (m, 1H)， 6. 96 (d, J = 3.2Hz，lH)，6.91(d，J = 3. 2Hz, 1H) ,6. 75 (m, 1H), 3. 62 (t, J = 5. 2Hz，4H)， 2. 87 (t, J = 5. 2Hz，4H)，2· 70(t，4H)，2· 28(s，3H)，1. 74 (m, 4H)实施例8(Z)-5-(2-羟基-3-IN' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢-萘 基)_1， 5- 二氢吡哔-4-亚基]-肼基丨-苯基)-呋喃-2-羧酸二胆碱盐 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d (lOOmg，0. 22mmol)溶于5mL四氢 呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下滴加45%氢氧化胆碱甲醇溶液(45mg，0. 44mmol)，呈紫红 色溶液，室温下搅拌1小时。反应液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(ImLX 3)，得 到的固体在真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-1-(5， 6，7，8-四氢-萘-2-基)-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二胆碱 盐8(140mg，暗红色固体)，产率:96.6%0HPLC 98. 82%MS m/z (ESI) :457. 8[M_1]1HNMR(400MHz，CD3OD) δ 7. 74(d, J = 7. 6Hz，1H)，7. 60 (m, 3H)，7. 08 (m, 3H)， 6. 91 (t, J = 8. 0Ηζ，1Η)，3· 96(m，4H)，3. 45 (t, J = 4. 8Ηζ，4Η)，3· 18 (s, 18H) ,2. 80(t，4H)， 2. 38(s，3H)，1. 84(m，4H)实施例9(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢-萘 基)_1, 5- 二氢吡啤-4-亚某1-肼某丨-苯某)-呋喃-2-羧酸二( 二乙胺)盐将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d(100mg, 0. 22mmol)溶于5mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下滴加二乙胺(32mg，0. 44mmol)，呈紫红色溶液，室温下 搅拌过夜。反应液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真 空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-l-(5，6，7，8-四 氢-萘-2-基)-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二(二乙胺)盐 9(77mg，暗红色固体)，产率58. 3%0HPLC -.99.12%MS m/z (ESI) :457. 9[M_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) δ 7. 59 (m, 4H)，7· 08 (d，J = 8. OHz，1Η)，7· 04 (d，J = 3· 2Hz， 1H)，6· 94(d, J = 3. 6Hz, 1Η)，6· 82(t, J = 8. OHz, 1Η)，2. 99(q, J = 7. 2Ηζ，8Η)，2· 79(m，4H)， 2. 36(s，3H)，1. 82 (t, J = 3. 2Hz，4H)，1. 27 (t, J = 7. 2Hz, 12H)实施例10(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢-萘 基)_1， 5- 二氢吡啤-4-亚某1-肼某丨-苯某)-呋喃-2-羧酸二葡甲胺盐 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d(100mg, 0. 22mmol)溶于5mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入葡甲胺(85mg，0.44mmol)，室温下搅拌过夜。在溶 液中加入4mL甲醇，减压下浓缩，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基_5_氧 代-1-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-1，5-二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧 酸二 N-甲基葡萄糖胺盐10(168mg，暗红色固体)，产率90.8%。HPLC 97. 65%MS m/z (ESI) :457. 8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 56(m,4H) ,7. 06(m,2H) ,6. 98 (d, J = 3·2Ηζ，1Η)， 6. 75 (t, J = 7.6Hz，lH)，4.08(m，2H)，3.81(m，2H)，3.77(m，2H)，3.63(m，6H)，3. ll(m，4H)， 2. 76(m，4H)，2· 64(s，6H)，2· 33(s，3H)，1. 82 (t, J = 3. 2Hz，4H)，1. 79 (m, 4H)实施例11(Z)-5-(2-羟基-3-IN' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢-萘 基)_1， 5~ 二氢吡哔-4-亚基]-肼基丨-苯基)-呋喃-2-羧酸二哌嗪盐 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d(100mg, 0. 22mmol)溶于5mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入哌嗪(37mg，0.44mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅 拌2小时。反应液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真 空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-l-(5，6，7，8-四 氢-萘-2-基)-1，5_二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二哌嗪盐ll(120mg， 暗红色固体)，产率87. 6%。HPLC 98. 77%MS m/z (ESI) :457. 8[M_1] 1HNMR (400MHz，CD3OD) δ 7. 59 (m, 4H)，7· 08 (d，J = 8. 8Hz，1H)，7· 04 (d，J = 3. 6Hz，
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1H) ,6. 87 (d, J = 3. 2Hz, 1H)，6· 82 (t, J = 8. OHz, 1Η)，3. 00(s，8H)，2· 78(m，4H)，2· 36 (s, 3H)，1.81(m，4H)实施例12(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢-萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二氨基丁三醇盐 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d(100mg, 0. 22mmol)溶于5mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入氨基丁三醇(53mg，0. 44mmol)，呈褐色溶液，室温 下搅拌过夜。反应液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在 真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-l-(5，6，7，8-四 氢-萘-2-基)-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二氨基丁三醇盐 12(142mg，黑色固体)，产率:92.8%0HPLC 94. 0%MS m/z (ESI) :457·8[Μ_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) δ 7. 58 (m，4Η)，7. 05 (m, 2H) ,6. 96 (d, J = 3. 6Hz，1H)， 6. 90 (t, J = 8. 0Hz, 1H)，3· 65 (s, 12H)，2· 76(m，4H)，2· 33(s，3H)，1. 80 (m, 4H)实施例13(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -Γ3-甲基 _5_ 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢-萘 基)_1， 5- 二氢吡啤-4-亚某1-肼某丨-苯某)-呋喃-2-羧酸二( 二苄某乙二胺)盐将(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d (lOOmg，0. 22mmol)溶于5mL四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入二苄基乙二胺(104mg，0. 44mmol)，呈褐色溶液， 室温下搅拌2小时。在溶液中加入4mL甲醇，减压下浓缩，得到标题产物(Z)-5-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-l-(5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-l，5-二氢吡唑-4-亚基]-胼 基}-苯基)-呋喃-2-羧酸二( 二苄基乙二胺)盐13 (167mg,黑色固体)，产率81. 8%。HPLC 96. 81%MS m/z (ESI) :457. 8[M_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) : δ 7. 52 (m，3H)，7. 39 (m，1H)，7. 02 (m，20H)，7. 01 (m，2H)， 6. 72 (m, 1H) ,6. 67 (t, J = 8. OHz, 1Η)，3. 89 (s,8H)，3· 01 (s，8H)，2. 73 (m, 4H)，2. 32 (s, 3H)， 1. 78(m，4H)实施例14(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢-萘 基)_1， 5- 二氢吡卩半-4-亚某1 -肼某丨-苯某)-nm -2-羧酸#1 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d(110mg, 0. 24mmol)溶于4mL四氢 呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下滴加IN的氢氧化钠溶液(0. 4mL, 0. 44mmol)，室温下搅拌2 小时。过滤反应液，滤液中加入4mL甲醇，减压下浓缩反应液，得到的固体用正己烷洗涤，得 到标题产物(Z) -5- (2-羟基-3- {N ‘ - [3-甲基-5-氧代-1- (5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-1， 5-二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸钠14(115mg，黑色固体)，产率 81. 8%。HPLC 96. 81%MS m/z (ESI) :457. 8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 79 (dd, Jl = 7. 6Hz, J2 = 1. 2Hz, 1Η)，7. 52 (m, 3Η)， 7. 18 (d, J = 3. 6Hz, 1Η)，7. 05 (m, 2Η)，6. 70 (m, 1Η)，2. 78 (m, 4H)，2. 41 (s, 3H)，1. 82 (m, 4H)实施例15(Z)-5-(2-羟基-3-{N' _「3_ 甲基 _5_ 氧代 (5,6, 7,8_ 四氢-萘 基)_1， 5- 二氡』吡卩半-4-亚某1 -肼某丨-苯某)--2-羧酸(L-精氡避)盐 将(Z)-5-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢萘 _2_ 基)_1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸7d (lOOmg，0. 22mmol)溶于5mL 1四 氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入L-精氨酸(76mg，0. 44mmol)和2mL水，室温下搅拌 2小时。反应液在减压下浓缩，加入5mL乙酸乙酯，有固体析出，过滤，滤饼在真空下干燥，得 到标题产物(Z) -5- (2-羟基-3- {N ‘ - [3-甲基-5-氧代-1- (5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-1， 5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸(L-精氨酸)盐15 (168mg,黑色固 体)，产率95. 5%。HPLC 97. 45%MS m/z (ESI) :457. 9[M_1]1HNMR (400MHz，CD3OD) : δ 7. 59 (m，4H)，7. 06 (m, 2H) ,6. 98 (d, J = 3. 6Hz，1H)， 6. 92 (t, J = 8. OHz, 1Η)，3· 57 (t, J = 6. 4Ηζ，2Η)，3· 19(m，4H)，2· 78(m，4H)，2· 36(s，3H)， 1. 83 (m, 8Η)，1. 73(m，4H)实施例16 (Z)-5-{2-羟基-3-「N‘ ~(1~茚滿~5~基甲基氧代-1,5-二氢吡唑亚 某)-肼某ι - as某丨--2-羧酸二乙醇胺盐第一步(Z) -5- {2-羟基-3-[N' - (1_ 茚满 _5_基 _3_ 甲基 _5_氧代 _1，5_ 二氢吡唑 _4_ 亚 基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸冰浴下将5- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐4g (300mg, 1. Ommol) 溶解于盐酸(3. 4mL, lmol/L)中，滴加入1. 2mL亚硝酸钠溶液(73mg, 1. 05mmol)，反应10分 钟，再加入2-茚满-5-基-5-甲基-2,4- 二氢吡唑-3-酮Ii (193mg，0. 9mmol)，分批加入 碳酸氢钠(1. 26g，15mmol)和4. 4mL乙醇，室温反应24小时。TLC跟踪至原料消失，过滤， 固体用20mL水溶解，冰浴下用浓盐酸调节pH < 5，过滤，干燥，得到标题产物(Z)-5-{2-羟 基-3-[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-苯 基}-呋喃-2-羧酸16a(287mg,黄色固体)。产率71. 8%。MS m/z (ESI) :443[M_1]
1HNMR (400MHz, DMS0_d6) δ 13. 73 (br, 1H), 9. 97 (br, 1H), 7. 78 (br, 1Η), 7. 70 (m, 2Η)，7· 57 (m, 1Η)，7. 36(d, J = 3. 6Hz, 1Η)，7. 29(d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 22(t, J = 8. OHz, 1Η)， 7. 15 (m, 1Η)，2. 89 (m, 4Η)，2. 32 (s, 3Η)，2. 03 (m, 2H)第二步(Z) -5- {2-羟基-3-[N' - (1_ 茚满 _5_基 _3_ 甲基 _5_氧代 _1，5_ 二氢吡唑 _4_ 亚 基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸二乙醇胺盐将(Z)-5- {2-羟基-3- [N ‘ _ (1_ 茚满 _5_ 基-3-甲基 _5_ 氧代 ，5_ 二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸16a(1.825g，4. llmmol)溶解于20mL四氢 呋喃中，搅拌下加入乙醇胺(501mg，8.22mmol)，反应液在室温搅拌2小时。过滤，滤饼 用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，真空下干燥，得到标题产物(Z)-5-{2-羟基-3-[N' -(1-茚 满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸二 乙醇胺盐16(1.615g，暗红色固体)。产率69.4%。MS m/z (ESI) :443[M_1]1HNMR(400MHz, CD3OD) δ 7. 67 (s, 1H), 7. 53 (m, 3Η), 7. 21 (d, J = 8·0Ηζ，1Η)， 7. 02 (m, 1Η)，6. 97 (d, J = 3. 2Hz, 1Η)，6. 70 (m, 1Η)，3. 70 (m, 4Η)，2. 92 (m, 4Η)，2. 88 (m, 4H)， 2. 35(s，3H)，2. 08 (m, 2H)实施例17(Z)-5-{2-羟基-3-「N‘ ~(1~茚滿~5~基甲基氧代-1,5-二氢吡唑亚 某)-肼某1-苯某丨-呋喃-2-羧酸二(二乙胺)盐将5-{2-羟基-3-[N' _(1_茚满_5_基_3_甲基_5_氧代_1，5_ 二氢吡唑_4_亚 基)-胼基]-苯基} _呋喃-2-羧酸16a (150mg，0. 38mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈暗红色 悬浊液，搅拌下滴加二乙胺(49mg，0. 67mmol)，呈紫红色溶液，室温下反应2小时。反应液 中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标题 产物(Z)-5-{2-羟基-3-[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚 基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸二(二乙胺)盐17 (163mg,暗红色固体)，产率81. 9%。HPLC 99. 18%MS m/z (ESI) :442. 7[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 714 (s, 1Η), 7. 604(m,3H) ,7. 241 (d, J = 8Ηζ，1Η)， 7. 04 (d, J = 8Hz, 1Η)，6. 95 (d, J = 8. OHz, 1Η)，6. 818 (m，1Η)，3. 725 (m，2Η)，2. 95 (m, 8Η)， 2. 371 (s，3Η)，2. 128 (m, 2H)，1. 87 (m, 2H)，1. 283 (m, 12H)实施例18
30
(Z)-5-{2-羟基-3-「N‘ ~(1~茚滿~5~基甲基氧代-1,5-二氢吡唑亚
某)-肼某1-苯某丨-呋_ -2-羧酸二
将(Z)-5- {2-羟基-3- [N ‘ _ (1_ 茚满 _5_ 基-3-甲基 _5_ 氧代 ，5_ 二氢批 唑-4-亚基)-胼基]-苯基}-呋喃-2-羧酸16a (150mg，0. 38mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈 暗红色悬浊液，搅拌下加入哌嗪(58mg，0. 68mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅拌3小时。反应 液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标 题产物(Z)-5-{2-羟基-3-[N' - (1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚 基)_胼基]-苯基} _呋喃-2-羧酸二哌嗪盐18 (185mg,暗红色固体)，产率88. 9%。HPLC 96. 52%MS m/z (ESI) :443. 2[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) : δ 7· 727 (s，1H)，7· 617 (m，2H)，7· 545 (d，J = 8·4Ηζ，1Η)， 7. 231 (d，J = 8. 4Ηζ，1Η)，7. 05 (d, J = 8. 8Hz，lH)，6. 787 (m，2H)，3. 081 (m，12H)，2. 923 (m， 4H), 2. 366(s，3H)，2. 14(m，4H)实施例19(Z)-4-{2-羟基-3-「N‘ ~(1~茚滿~5~基甲基氧代-1,5-二氢吡唑亚某)-肼某1-苯丨－噻吩-2-羧酸二乙醇胺盐 第一步4-(3-硝基-2-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸将2-(2_甲氧基-3-硝基苯基)-4，4，5，5_四甲基-[1，3，2]硼酸乙二醇酯 4d(0.81g，2.9mmol)、4-溴-噻吩-2-羧酸(0. 3g，1. 45mmol)、四(三苯基膦)钯(80mg， 0. 073mmol)和碳酸钠(0. 31g,2. 9mmol)溶解于20mL 1，4-二氧六环和IOmL水的混合溶剂 中，加热回流0.5小时。TLC跟踪至原料消失，反应液用IN盐酸酸化至pH = 3，乙酸乙酯萃取 (20mLX3)，合并有机相，有机相减压浓缩后柱层析得到4- (3-硝基-2-甲氧基-苯基)-噻 吩-2-羧酸19a (0. 54g，棕色油状液体)，直接进行下一步反应。MS m/z (ESI) :277. 6[M_1]第二步4-(3-氨基-2-甲氧基-苯基)_噻吩-2-羧酸将4-(3-硝基-2-甲氧基-苯基)-噻吩-2_羧酸19￡1(4001^，1.4511111101)溶解于 30mL乙酸乙酯中，再加入IOOmg钯-碳(10% )和甲酸铵(360mg，5. Smmol)，加热回流3小 时。TLC跟踪至原料消失，反应液过滤除去钯/碳，减压浓缩得到4-(3_氨基-2-甲氧基-苯 基)-噻吩-2-羧酸19b (410mg,棕色油状液体)，直接进行下一步反应。MS m/z (ESI) :247. 8[M_1]第三步4- (3-氨基-2-羟基苯基)-噻吩-2-羧酸氢溴酸盐将4-(3-氨基-2-甲氧基-苯基)-噻吩-2_羧酸1913(3601^，1.45讓01)溶解于 5mL 二氯甲烷中，滴加入三溴化硼(2. 8mL, 5. 6mmol)，室温反应4. 5小时。TLC跟踪至原料消 失，加入5mL甲醇，减压浓缩，向残余物中加入IOmL乙酸乙酯，搅拌0. 5小时，过滤，收集固 体，干燥，得到4- (3-氨基-2-羟基苯基)-噻吩-2-羧酸氢溴酸盐19c (80mg,灰色固体)。 产率17. 5%。MS m/z (ESI) 236. 1[M+1]第四步(Z) -4- {2-羟基-3-[N' - (1_ 茚满 _5_基 _3_ 甲基 _5_氧代 _1，5_ 二氢吡唑 _4_ 亚 基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸冰浴下将4- (3-氨基-2-羟基苯基)-噻吩-2-羧酸氢溴酸盐19c (120mg, 0. 38mmol)溶解于2. 7mL IN盐酸中，滴加入0. 45mL亚硝酸钠溶液(29mg, 0. 42mmol)，反应 20分钟，再加入2-茚满-5-基-5-甲基-2,4- 二氢吡唑-3-酮Ii (73mg, 0. 34mmol)，用饱和碳酸氢钠溶液调节PH至8，加入2mL乙醇，室温反应过夜。TLC跟踪至原料消失，过滤，固 体加入到20mL水中，再用浓盐酸调节pH = 3 4，过滤，固体中加入5mL乙酸乙酯搅拌1小 时，过滤，所得固体干燥后得到标题产物(Z)-4-{2-羟基-3-[N' -(1-茚满-5-基-3-甲 基-5-氧代-1，5- 二氢吡唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸19d (45mg,黄色固体)。 产率28. 7%。MS m/z (ESI) :458. 8[M_1]1HNMR (400MHz, DMS0_d6) : δ 2. 05 (m，2H)，2. 32 (s，3H)，2. 87 (m，4H)，7. 13 (t，J = 8. 0Hz, 1H) ,7. 32(m,2H) ,7. 67(m,2H) ,7. 78 (s, 1H) ,8. 05 (d, J = 1. 6Hz，1H)，8. 13 (d，J =
1.2Hz, 1H) ,9. 68 (s，1H)，13. 79 (s, 1H)第五步(Z) -4- {2-羟基-3- [N' - (1_ 茚满 _5_ 基 _3_ 甲基 _5_ 氧代 _1，5_ 二氢吡唑 _4_ 亚 基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸二乙醇胺盐将(Z)-4- {2-羟基-3- [N ‘ _ (1_ 茚满 _5_ 基-3-甲基 _5_ 氧代 ，5_ 二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸19d (1. 3g，2. 83mmol)溶于40mL四氢呋喃中，呈 暗红色悬浊液，搅拌下加入乙醇胺(344mg，5. 65mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅拌2小时， 有大量固体析出。过滤反应液，滤饼用四氢呋喃洗涤(ImLX 3)，得到的固体在真空下干燥， 得到标题产物(Z)-4-{2-羟基-3-[N' -(1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸二乙醇胺盐19 (1. 513g，暗红色固体)。产率 92. 0%。HPLC 98. 65%MS m/z (ESI) :458. 7[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 94 (s，1H)，7· 88 (s，1Η)，7· 68 (s, 1Η)，7· 55(m，2H)， 7. 29 (d, 1H)，7· 22 (d, 1H)，6· 83(t，3H)，3· 67(t，4H)，2· 93(m，4H)，2· 91(t，4H)，2· 28(s，3H)，
2.10 (m, 2H)实施例20(Z) -4- {2-羟基-3-「N‘ _ (1 _ 茚满 基 甲基 氧代-1，5_ 二氢吡哔 亚 基)-肼基]-苯丨-噻吩-2-羧酸二(二乙胺)盐将(Z) -4- {2-羟基-3- [N ‘ _ (1_ 茚满 _5_ 基-3-甲基 _5_ 氧代 ，5_ 二氢吡 唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸19d (150mg，0. 33mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈暗 红色悬浊液，搅拌下滴加二乙胺(49mg，0. 66mmol)，呈紫红色溶液，室温下反应2小时。反应 液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标 将(Z)-4- {2-羟基-3- [N ‘ _ (1_ 茚满 _5_ 基-3-甲基 _5_ 氧代 ，5_ 二氢 口比 唑-4-亚基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸19d (150mg，0. 33mmol)溶于5mL四氢呋喃中，呈 暗红色悬浊液，搅拌下加入哌嗪(56mg，0. 65mmol)，呈紫红色溶液，室温下搅拌2小时。反应 液中有固体析出，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(lmLX3)，得到的固体在真空下干燥，得到标 题产物(Z)-4-{2-羟基-3-[N' - (1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚 基)_胼基]-苯} _噻吩-2-羧酸哌嗪盐21 (195mg,暗红色固体)。产率94. 7%。HPLC 98. 17%MS m/z (ESI) :458. 8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 85 (s，1H)，7· 75 (s，1Η)，7· 71 (s, 1Η)，7· 62 (m, 2Η)， 7· 26 (m，2Η)，6· 95 (t，1Η)，2· 96 (m，8Η)，2· 91 (m，4Η)，2· 37 (s，3Η)，2· 11 (m，2Η)实施例22(Z)-4-(2-羟基-3-{Ν ‘ _「3_ 甲基 _5_ 氧代-1-(5,6,7,8_ 四氢-萘亚甲 基-2-基)-1, 5- 二氢-吡唑-4-亚基1 -肼基丨-苯基)-呋喃-3-羧酸二乙醇胺盐
题产物(Z)-4-{2-羟基-3-[N' - (1-茚满-5-基-3-甲基-5-氧代-1，5-二氢吡唑-4-亚 基)-胼基]-苯}-噻吩-2-羧酸二(二乙胺)盐20(157mg，暗红色固体)。产率79.3%。HPLC 98. 98%MS m/z (ESI) :458. 8[M_1]1HNMR (400MHz, CD3OD) δ 7. 81 (s, 1H)，7· 73 (s，1H)，7· 68(m，2H)，7· 62 (d，1H)， 7. 24 (m, 2H)，7. 06 (t, 1H)，3. 03 (q, 8H)，2. 93 (m, 4H) ,2. 371 (s,3H)，2. 13 (m, 2H)，1. 29 (t, 12H)实施例21(Z)-4-{2-羟基-3-「N‘ ~(1~茚滿~5~基甲基氧代-1,5-二氢吡唑亚
卩扉分-2-羧酸哌卩泰盐 第一步4-溴-呋喃-2-羧酸室温下，将4，5-二溴-呋喃-2-羧酸22a (5. 5g，20. 3mmol)和18mL氨水加入到 63mL水中，加入锌粉(1.46g，22. 33mmol)，加毕室温搅拌6小时，TLC监测至原料反应完 全，停止反应。用盐酸(IN)调节反应液pH至3，有大量固体析出，过滤，滤饼用正己烷洗 涤(15mLX4)后干燥，得到标题产物4-溴-呋喃-2-羧酸22b (3. 2g，白色固体)，产率 83. 1%。MS m/z (ESI) :188. 7[M_1]第二步4- (3-硝基-2-甲氧基-苯基)-呋喃-2-羧酸将2-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]硼酸乙二醇酯4d(4g， 14. 34匪ol)、4-溴-呋喃-2-羧酸 22b (2. 18g, 11. 47mmol)、四(三苯基膦)钯(829mg， 0. 717mmol)和碳酸钾(3. 96g，28. 68mmol)溶解于80mL 1，4-二氧六环和30mL水的混合溶 剂中，加热回流2.5小时。TLC跟踪至原料消失，反应液用IN盐酸酸化至pH 3，乙酸乙酯 萃取(SOmLX 3)，合并有机相，有机相减压浓缩后柱层析得到标题产物4-(3-硝基-2-甲氧 基-苯基)-呋喃-2-羧酸22c (3. 42g，棕色油状液体)。产率90. 7 %。MS m/z (ESI) :261.8[M_1]第三步 4- (3-氨基-2-甲氧基-苯基)_呋喃-2-羧酸将4-(3_硝基-2-甲氧基-苯基)_呋喃-2-羧酸22C(500mg，1.9mmOl)溶解于 15mL乙酸乙酯中，再加入IOOmg钯-碳和甲酸铵(429mg，7. 6mmol)，加热回流3小时。TLC跟 踪至原料消失，反应液过滤除去钯/碳，减压浓缩得到标题产物4- (3-氨基-2-甲氧基-苯 基)“呋喃-2-羧酸22d (325mg,黄色油状液体)，产率73. 4% 0MS m/z (ESI) :231.8[M_1]第四步4- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐将4-(3_氨基-2-甲氧基-苯基)-呋喃-2-羧酸22d(325mg，1.4mm0l)溶解于 5mL 二氯甲烷中，滴加入三溴化硼(2. 8mL, 5. 6mmol)，室温反应4. 5小时。TLC跟踪至原料消 失，加入5mL甲醇，减压浓缩，向残余物中加入IOmL乙酸乙酯，搅拌0. 5小时，过滤，收集固 体，干燥，得到标题产物4- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸盐22e (174mg,灰
35色固体)。产率=57. 1%0MS m/z (ESI) :217·7[Μ_1]第五步(Z)-4-(2-羟基-3-{N ‘ _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8-四氢萘亚甲 基-2-基)-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸冰浴下将4- (3-氨基-2-羟基苯基)-呋喃-2-羧酸氢溴酸22e (170mg, 0. 57mmol) 溶解于盐酸(1. 9mL, lmol/L)中，滴加入0. 7mL亚硝酸钠溶液(43mg，0. 63mmol)，反应20 分钟，再加入5-甲基-2-(5，6，7，8-四氢萘-2-基)-2，4-二氢吡唑-3-酮7c(116mg， 0. 51mmol)，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8 9，加入2mL乙醇，室温反应24小时。TLC 跟踪至原料消失，过滤，固体中加入15mL水，冰浴下用浓盐酸调节pH = 2 3，过滤，滤饼 用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到标题产物(Z)-4-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-1-(5， 6,7,8-四氢萘亚甲基-2-基)-1，5- 二氢吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-2-羧酸 22f(13mg，红色固体)。产率5.5%。MS m/z (ESI) :456. 7[M_1]1HNMR(400MHz, DMS0_d6) δ 13. 73 (br, 1H)，9· 68 (br, 1H)，8· 43 (s, 1Η)，7· 78 (s, 1Η)，7· 62(m，2H)，7· 43(d，J = 7·6Ηζ，1Η)，7· 13 (m，2Η)，3. 86 (s，3Η)，2. 78 (m，4Η)，2. 31 (s， 3H)，1. 75(m，4H)第六步(Z)-4-(2-羟基-3-{N ‘ _[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8-四氢-萘亚甲 基-2-基)-1，5- 二氢-吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-3-羧酸二乙醇胺盐将(Z)-4-(2-羟基-3-{N'_[3_ 甲基 _5_ 氧代 (5，6，7，8_ 四氢-萘亚甲 基-2-基)-1，5- 二氢-吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-3-羧酸22f (1. 2g，2. 6mmol) 溶于20mL四氢呋喃中，呈暗红色悬浊液，搅拌下加入乙醇胺(399mg，6. 5mmol)，呈紫红色溶 液，室温下搅拌6小时，有大量固体析出。过滤反应液，滤饼用四氢呋喃洗涤(ImLX 3)，得到 的固体在真空下干燥，得到标题产物(Z)-4-(2-羟基-3-{N' -[3-甲基-5-氧代-1-(5，6， 7，8-四氢-萘亚甲基-2-基)-1，5- 二氢-吡唑-4-亚基]-胼基}-苯基)-呋喃-3-羧酸 二乙醇胺盐22(1.51g，红色固体)。产率72.8%。HPLC 97. 16%MS m/z (ESI) :456·7[Μ_1]1HNMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 31 (s, 1H), 7. 53 (s，1Η)，7· 38 (s，1H)，7. 33(dd，2H)， 7. 07 (d, 1H)，6. 78 (d, 1H)，3. 69 (m, 4H)，2. 99 (m, 4H)，2. 77 (t,4H)，2. 39 (s, 3H)，1. 82 (m, 4H)实施例23片剂组合物将乳糖、微晶纤维素、羟基乙酸淀粉钠、硬脂酸镁和实施例8化合物按照下表1的 比例掺合。然后将混合物压制成片剂。表 1 实施例24可注射的肠胃给药组合物可注射给药的实施例7制剂的制备方法为，将5. Omg化合物于1. OmL生理盐水中 搅拌。测试例溶解度测试按照常规溶解度测定方法，测试实施例化合物和其盐在三种不同的系统中测定其 溶解度水，0. 盐酸及甲醇中，结果如下所示
结果显示实施例lj、4h、7d、16a和19d化合物的盐与其相比溶解度明显增力卩，特别 是在水中和甲醇中的溶解度明显改善，其中实施例7化合物，其在0. 盐酸中也有较好的 溶解度。生物学评价测试例1本发明的化合物对BAF3-TP0R细胞的增殖作用1.材料和方法a. RPMl Medium 1640，Powder，10*1L，含 HEPES (Gibco Catalog no. 23400021)b. FBS 胎牛血清(Gibco Catalog no. 10099-141)c. PENICILLIN STREPTOMYCIN SOL(Gibco Catalog no. 15140-122)d. Geneticin(G418)(Gibco Catalog no. 11811-098)e. recombinant mouse IL-3(chemicon Catalog no.IL015)f. Human Thrombopoietin R Mab(TPO)(R&D Catalog no. MAB1016)g. DMSO(AppliChem Catalog no. A3672)h. QuikChange Multi Site Directed Mutagenesis Kit, 10 Runs (StratageneST200515)i, Cell Counting Kit_8 (同仁化学研究所 Catalog no. CK04-13)j, Ba/F3 细胞(协和细胞库 Catalog no. 0095)k. EX-EGFP-M02(FulenGen Catalog no. EX-EGFP-M02 Control)1. EX-B0010-M02(FulenGen Catalog no. ΕΧ-Β0010-M02)2.操作步骤(1)质粒构建根据 Entrez Gene ID :4325，Refseq :NM_005373 提供的 TPOR 基因 序列，对购买的 EX-B0010-M02 质粒(FulenGen)利用QuikChange Multi Site Directed Mutagenesis Kit(Stratagene)试剂盒进行2点突变。多点突变引物序列分别为g491a :5 ‘-gggaacttcagatcagctgggaggagccg-3‘ ,g491a_antisense 5' —cggctcctcccagctgatct gaagttccc-3‘ ；c965t :5' _caggaccatgctagctcccaaggcttcttct_3‘ , c965t_antisense 5 ‘ -agaagaagccttgggagctagcatggtcctg-3，。突变后质粒转化大肠杆菌 DH5 α，经 Amp 筛 选出阳性克隆，测序鉴定突变结果正确。(2) BAF3-TP0R细胞株构建构建稳定高表达功能性TPO受体的BaF3细胞株。将经 2点突变后的表达人TPO受体和筛选基因neomycin的EX-B0010-M02质粒25 μ g转染野生 型BaF3 细胞(1X107)，转染所用仪器为 Electro Square Porator ECM830 (BTX Division of Genetronic，Inc.US)，转染条件为250V，18ms。通过 G418 (Gibco，US)筛选获得 BAF3-TP0R 稳定细胞株。BAF3-TP0R 在 RPMI1640 (Gibco，US)培养基，10 % FB (Gibco，US) S, 800ng/ml G418，5ng/mL，rmIL-3 (Chemicon, US)中培养。3.化合物筛选(1)离心清洗细胞取适量细胞悬液lOOOrpm，离心5分钟，弃去上清，再用IOmL不 含IL3的细胞培养液将细胞重新悬起，IOOOrpm，离心5分钟，弃去上清；(2)加入Iml不含IL3的细胞培养液将细胞吹打均勻，取适量细胞悬液稀释后计 数；(3)根据细胞计数结果制备密度为100000个/mL的细胞悬液；(4)于96-well平板中每孔加入100 μ L细胞悬液，设置3个复孔，并设置空白对照 组⑶，阴性对照组(N)，TPO阳性对照组⑵和待测化合物组⑶；(5)用DMSO将待测化合物粉末配成IOmM的储存液，再用RPMl 1640稀释成不同浓 it 30 μ Μ, 10 μ Μ, 3 μ Μ, 1 μ Μ, 0. 3 μ Μ, 0. 1 μ Μ, 0. 03 μ Μ, 0. 01 μ Μ, 0. 003 μ Μ，0· 001 μ M ;(6)每孔加入10 μ L相应浓度的药液，阳性对照孔中加入1 μ LrhTPO (10 μ g/mL)；(7)置于5% C02，37°C细胞培养箱中培养24小时；(8)每孔加入10 μ LCCK-8，于细胞培养箱中培养4小时；(9)利用 VICT0R3 (Perkin Elmer 1420-120)仪器在 450nm 检测 OD 值。4.结果分析计算 (1)增值率定义[(S-B) / (P-B) ]*100%S 样品；B 空白对照；P 阳性对照(2)通过 Origin 7. 0 计算 EC5005.结果化合物TPO活性EC5tl值
39
结果表明本发明的盐与其游离酸相比，对于BAF3-TP0R细胞有较好的增殖作用， 排序为本发明的盐>游离酸> Eltrombopag，且本发明的盐与Eltrombopag的活性相比有 显著增加，其中实施例8化合物，即实施例7d化合物的胆碱盐活性最好。药代动力学测试测试例1本发明的化合物药代动力学测试1、试验目的以大鼠为受试动物，应用HPLC-UV法测定了大鼠分别灌胃给予实施例7d、7 15 后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价 其药动学特征。2、试验方案2. 1、试验药品实施例7d、7 15化合物2. 2、试验动物健康成年SD大鼠24只，雌雄各半，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动 物生产许可证号SCXK (沪)2003-0002。2. 3、仪器设备TSQ Quantum Ultra AM 三重四极杆质谱仪，美国 Thermo Finnigan 公司；Agilent 1200高效液相色谱系统，美国Agilent公司。2. 4、药物配制称取适量样品加羧甲基纤维素钠制成5mg/mL(以原形计)混悬液，临用时配 制。2. 5、给药健康成年SD大鼠24只，雌雄各半，平均分成5组，禁食过夜后分别灌胃给药，给药 剂量均为50. 0mg/kg(以原形计)，给药体积10mL/kg。2. 6、样品采集
SD大鼠24只，雌雄各半，禁食一夜后灌胃给药，剂量为5mg/kg。于给药前及给药后 0. 5，1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,8. 0，11. 0，14. 0,24. 0,36. 0,48. 0 小时由眼眶采血 0. 2mL, 置于肝素化试管中，3500rpm离心10分钟分离血浆，于_20°C保存给药后2h进食。2. 7、分析方法取给药后各时刻的大鼠血浆50yL，加入内标溶液50yL，甲醇水(80 20， ν/ν) 20 μ L，甲醇100 μ L，涡旋混合3min,离心IOmin (13500r/min)，取上清液40 μ L进行 HPLC-UV 分析。2. 8、标准曲线制备取大鼠空白血浆50yL，分别加入标准系列溶液，使血药浓度为1.0，5.0，25.0， 50. 0，100. 0，250. 0，500. Ong/mL,加入内标溶液20 μ L，按“血浆样品预处理”项下进行操作。 以血药浓度为横坐标，样品与内标色谱峰面积比为纵坐标，以加权最小二乘法(w = 1/x2) 进行线性回归，获得典型标准曲线方程。2. 9、药代动力学参数计算对受试化合物的药代动力学行为进行房室模型拟合，并计算主要药代动力学参 数，其中Cmax、tmax采用实测值。3、药代动力学参数结果本发明的化合物的药代动力学参数如下
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试验结果表明，大鼠分别灌胃给予上述化合物后，实施例7d化合物的盐与其相 比，药代动力学性质和生物利用度明显改善，其中实施例7、8、10、11和12化合物，即实施例 7d化合物的乙醇胺盐、胆碱盐、葡甲胺盐、哌嗪盐和氨基丁三醇盐的药代数据较好，有较好 的药代动力学曲线。
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综上所述，本发明的盐制备简单、收率高，其中乙醇胺盐、胆碱盐、二乙胺盐和哌嗪 盐，在工艺路线中有优势，可以直接析出晶体；本发明的盐与其游离酸相比，在常规溶剂中 的溶解度明显增加，特别是乙醇胺盐在0. 盐酸中的溶解度好，适用于常规制剂；本发明 的盐生物活性明显增加，动物体内疗效低毒、作用时间长、副作用小、易吸收，药代动力学性 质明显改善，有较好的药代动力学曲线，特别是乙醇胺盐、胆碱盐、哌嗪盐、葡甲胺盐和氨基 丁三醇盐。
权利要求
通式(I)所示化合物的药学上可接受的盐其中Het选自苯基、呋喃基或噻吩基；R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢原子或烷基；n为0、1或2；所述的盐为碱加成盐。F2009100529461C0000011.tif
2.根据权利要求1所述的盐，其中所述的盐选自钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、精氨酸 盐、赖氨酸盐、甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、乙胺盐、二乙胺盐、三乙胺盐、乙醇胺盐、哌嗪 盐、二苄基乙二胺盐、葡甲胺盐、氨基丁三醇盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐或胆碱盐，优 选为二乙胺盐、乙醇胺盐、胆碱盐、哌嗪盐、葡甲胺盐或氨基丁三醇盐，更优选为乙醇胺盐、 胆碱盐、葡甲胺盐或氨基丁三醇盐。
3.根据权利要求1或2所述的盐，其中所述的盐选自
4.一种制备如权利要求1 3任一项所述的盐的方法，该方法包括(a)将通式(I)化合物溶解于有机溶剂中，优选为四氢呋喃；(b)搅拌下加入2 3当量的碱金属氢氧化物、碱性氨基酸、胺类或季铵类；(c)反应2 24小时后，分离出盐。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述的碱金属氢氧化物选自钠、锂、钾、钙、镁氢氧化物； 所述的碱性氨基酸选自赖氨酸或精氨酸；所述的胺类选自甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、乙醇胺、哌嗪、二苄基乙二胺、葡甲胺或氨基丁三醇；所述的季铵类选自四甲基季铵、四乙基季铵或氢氧化胆碱。优选为二乙胺、乙醇胺、氢氧化胆碱、哌嗪、氨基丁三醇或葡甲胺，更优选为乙醇胺、氢 氧化胆碱、葡甲胺或氨基丁三醇。
6.根据权利要求1 3任一项所述的盐在制备血小板生成素受体激动剂中的用途。
7.根据权利要求1 3任一项所述的盐在制备治疗血小板减少症药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述药物进一步与选自下列的药物联合使用集 落刺激因子、细胞因子、趋化因子、白细胞介素或细胞因子受体激动剂或拮抗剂、可溶的受 体、受体激动剂或拮抗剂抗体或与一个或多个与所述药物具有相同的作用机理的肽或小分 子类物质。
9.一种药物组合物，其含有治疗有效量的如权利要求1 3任一项所述的盐及药学上 可以接受的载体或稀释剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述组合物进一步含有联合使用的治疗 有效量的选自下列的药物集落刺激因子、细胞因子、趋化因子、白细胞介素或细胞因子受 体激动剂。
11.根据权利要求9所述的药物组合物在制备治疗血小板减少症药物中的用途。
全文摘要
通式(I)所示的双环取代吡唑酮偶氮类衍生物药学上可接受的盐、其制备方法以及含有该药学上可接受盐的药物组合物、以及其作为治疗剂特别是作为血小板生成素(TPO)模拟物和血小板生成素受体激动剂的用途。
文档编号C07D405/12GK101921232SQ20091005294
公开日2010年12月22日 申请日期2009年6月11日 优先权日2009年6月11日
发明者吕贺军, 费洪博, 邓炳初, 陈一千 申请人:上海恒瑞医药有限公司;江苏恒瑞医药股份有限公司