一种多拉菌素的分离纯化方法
【专利摘要】本发明公开了一种多拉菌素的分离纯化方法。该方法包括通过浸提，将多拉菌素从发酵液中分离，然后通过活性炭脱色处理，结合程序降温结晶法等步骤，得到高纯度的多拉菌素产品。本发明的优点在于采用程序降温结晶法进行分离纯化多拉菌素，收率和纯度高，工艺简单易行，生产成本低，适合工业化生产。
【专利说明】一种多拉菌素的分离纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学领域，具体涉及一种多拉菌素的分离纯化方法。
【背景技术】
[0002] 多拉菌素（D〇rameCtin，DRM)是大环内酯类抗生素阿维菌素的第3代衍生物，由阿 维链霉菌)基因工程变异株加入环已烧基羧酸后生物合成获 得一种十六元大环内酯类半合成抗生素，与伊维菌素的差别在C 25位上具有环已烷基。化学 名25-环己烧基-5-0-去甲基-25-去（1-甲基丙基）阿维菌素 B1，其化学本质上属于大 环内酷类抗生素，分子式为C5tlH74O14，分子量为899. 11，熔点：116°C _119°C，脂溶性高，易溶 于有机溶剂，比如甲醇、乙醇、丙酮、1，2-丙二醇、乙酸乙脂、二甲基亚矾、乙酸异丙醋和己烷 等，在水中溶解度低（0.0006 - 0.0009mg/L);对酸敏感，如用稀酸处理，则可以引起C13位 上二糖基断开；对光敏感，用紫外线照射，可导致8,9和10,11之间双键异构化。其结构如 下式I所示：
【权利要求】
1. 一种多拉菌素的分离纯化方法，所述方法包括以下步骤： 1) 将发酵培养液加入助滤剂进行过滤，收集菌丝渣； 2) 将菌丝渣加入溶剂浸提，过滤，收集得到滤液I ; 3) 将滤液I浓缩成浸膏； 4) 用水溶性溶剂溶解步骤3)中的浸膏，然后加入活性炭，加热搅拌，过滤，收集得到滤 液II ; 5) 将滤液II加水稀释，降温，搅拌，析晶，过滤，收集得到滤饼I ; 6) 将滤饼I用醇的水溶液溶解，程序降温结晶，过滤，得到多拉菌素产品。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)所述的助滤剂为硅藻土或珍珠岩，用量为 发酵液体积的2~8% (g/ml)。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述的溶剂为909T100%的甲醇水溶液、 909T100%的乙醇水溶液、909T100%的丙酮水溶液、乙酸乙酯、醋酸丁酯或异丙醇；所述的将 菌丝渣加入溶剂浸提，是将步骤1)收集得到的湿菌丝渣直接加入到溶剂中浸提或者是将湿 菌丝渣烘干至水分含量在20%以内后加入到溶剂中浸提，溶剂用量与湿菌丝渣的体积重量 比为2~3:1，或与干菌丝渣体积重量比为3~5:1 ;浸提温度控制在4(T60°C，浸提时间控制在 5?15小时。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)所述的浓缩是在4(T60°C温度下进行。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)所述的水溶性溶剂为甲醇、乙醇或丙酮； 所述溶剂的质量浓度为609T70%，用量为浸膏重量的20~50倍。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤5)所述的降温是将温度降至2~15°C，搅拌时 间为2飞小时。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤6)所述的醇为甲醇、乙醇或异丙醇，所述的 醇的水溶液为醇含量在90%以上（V/V)，用量为滤饼重量的5~10倍（V/W)，溶解过程是在 40°C?60°C温度下搅拌2?4h进行。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤6)所述程序降温结晶为控制温度每30分钟 降低4°C ~8°C，直至温度降至5~10°C，停止降温，搅拌2~3小时；所得到的多拉菌素产品为 一次程序降温结晶获得或者是重复多次结晶获得。
【文档编号】C07H17/08GK104418927SQ201310383711
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月29日 优先权日:2013年8月29日
【发明者】袁建栋, 刘省伟, 郭明, 唐恒, 杨久林 申请人:重庆乾泰生物医药有限公司, 博瑞生物医药技术(苏州)有限公司