一种CHO‑Dhfr表达系统细胞株的高通量筛选方法与流程

文档序号:12577562阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种CHO-Dhfr表达系统细胞株的高通量筛选方法,包含以下步骤:(1)表达构建体的构建,(2)转染至宿主细胞,(3)氨甲喋呤加压筛选获得细胞池,(4)细胞池在半固体培养基上进行单克隆化,(5)利用高通量细胞筛选系统筛选细胞株,(6)细胞株的稳定性评估;其特征在于,步骤(4)所述的细胞池的细胞活力为40%~50%。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述的氨甲喋呤加压筛选分为三轮,氨甲喋呤的浓度依次为100nM、1000nM、5000nM。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述在半固体培养基上进行单克隆化,其中,半固体培养基中细胞终浓度为150cells/mL。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述的半固体培养基中含有条件培养基与甲基纤维素。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述条件培养基占半固体培养基总体积的10%。

6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述甲基纤维素在半固体培养基中的含量为0.9~1.5g/L。

7.根据权利要求4至6任一项所述的方法,其特征在于,条件培养基的制备方法为:取已经转染载体的稳定细胞株在添加8mM谷氨酰胺的OptiCHO Medium中进行批培养,细胞培养至密度在0.9×107~1.1×107cells/mL之间且细胞活力>95%时,经过离心分离上清和细胞,取上清过滤后即得;所述载体含有Dhfr基因,不含有其它外源蛋白的基因。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述载体为pOptiVEC,所述细胞株为DG44细胞。

9.根据权利要求4所述的方法,其特征在于步骤(4)所述的半固体培养基中还含有1%体积比的荧光抗体。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述表达构建体,为表达抗TNFα全人源抗体重链和轻链的载体。

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