一种吉祥草中的化合物及其制备与应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体来说，涉及到一种吉祥草中的化合物及其制备与应用。

背景技术：

吉祥草为百合科植物吉祥草属的全草。主要分布在我国华东、中南、西南各省区，在贵州、湖南、云南、广西、四川等苗族人口主要聚居区，对吉祥草的使用都较广泛，是我国西南苗族地区常用的传统草药之一。味甘，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽等功效，民间常用于治疗支气管炎、肺炎、肺结核、阴虚哮喘、吐血、咯血、黄疸、治跌打损伤、扭挫伤、遗精、急惊风、日翳、疳积、肝癌、胆结石、风湿关节炎疼痛、水肿等病症。吉祥草在中医临床中应用广泛，近年来对吉祥草化学和药理的深入研究，对认识吉祥草及其成分多方面的药理作用及临床传统应用提供了理论依据。

现代科学研究证明，吉祥草中含有甾体类、黄酮类、木脂素类、萜类、有机酸、挥发油等多种化学成分。其药理作用主要表现在抗溶血、止咳、化痰及抗炎作用、杀灭钉螺作用、cAMP磷酸二酯酶抑制作用、降血糖作用、镇痛等作用。目前，吉祥草大部分的功效都得到了相关物质基础的支持，但在抗真菌活性还有所欠缺，有待进行深入的研究。

技术实现要素：

针对上述问题，通过实验与研究，本发明提供了一种吉祥草中的化合物及其制备与应用。

本发明所述的吉祥草中的化合物命名为3,8-二羟基-β-蒎烯，分子式为：C₁₀H₁₆O₂，结构式如下：

本发明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羟基-β-蒎烯的制备方法，所述方法具体为：取吉祥草干燥全草，用95％的乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏；取浸膏，用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取物，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(50:1→2:1)进行梯度洗脱，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脱部分，用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮(20:1→5:1)进行梯度洗脱，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脱部分，浓缩回收溶剂，得到3,8-二羟基-β-蒎烯。

本发明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羟基-β-蒎烯的应用，所述化合物3,8-二羟基-β-蒎烯用于抗真菌药物的制备。

附图说明

图1：表示3,8-二羟基-β-蒎烯的结构式。

图2：表示3,8-二羟基-β-蒎烯的MS质谱图。

图3：表示3,8-二羟基-β-蒎烯的¹H-NMR和¹³C-NMR数据。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明所述的制备方法做进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。

实施例1

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇30L加热回流提取3次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏650g；取浸膏，用2.5L水混悬后依次用2.5L石油醚、2.5L乙酸乙酯萃取两次；取乙酸乙酯萃取物173g，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，比例依次为：50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、2:1，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脱部分，用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，比例依次为：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脱部分，浓缩回收溶剂，得到3,8-二羟基-β-蒎烯7mg。

实施例2

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇40L加热回流提取3次，每次3h，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏680g；取浸膏，用3L水混悬后依次用3L石油醚、3L乙酸乙酯萃取两次；取乙酸乙酯萃取物188g，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，比例依次为：50:1、35:1、30:1、25:1、15:1、5:1、2:1，，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脱部分，用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，经硅胶柱色谱分离，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，比例依次为：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脱部分，浓缩回收溶剂，得到3,8-二羟基-β-蒎烯9mg。

吉祥草单萜化合物3,8-二羟基-β-蒎烯:无色油状；(c 0.68,CHCl₃)；¹H and ¹³C-NMR(CDCl₃),见图3；HR-EIMS m/z:168.1150[M+H]⁺(100)；(calcd for C₁₀H₁₆O₂,168.1148)，见图2。

药理实验

吉祥草单萜化合物3,8-二羟基-β-蒎烯对白色念珠菌的体外抑制作用。用生理盐水将白色念珠菌标准菌株ATCC90028制备成浓度为0.5麦氏单位，再用RPMIl640液体培养基按1：2000比例进行稀释，用作接种菌液；参照美国临床实验室标准化委员酵母菌的液体培养基稀释法抗真菌药物敏感性试验标准方案(NCCLS M27-A2方法)，将受试菌株分组并进行实验，阴性对照组加入1mLRPMll640液体培养基；生长对照组加入0.9mL接种菌液及0.1mLRPMI l640液体培养基；药物组分别加入0.9mL的接种菌液和经用RPMIl640液体培养基稀释的不同浓度吉祥草单萜化合物3,8-二羟基-β-蒎烯供试液0.1mL(终浓度：12.5、25、50、100、200、400mg·L^-1)，轻轻混和并盖上带孔的盖子，放入35℃温箱，培养48h。参考NCCLS的M27-A2的常量法判读MIC结果，即培养基清亮所对应的最低药物浓度判定为MIC，读取吉祥草单萜化合物3,8-二羟基-β-蒎烯对白色念珠菌标准菌株ATCC90028的MIC值。

经试验，阴性对照组均未见生长现象，生长对照组生长良好，药物组吉祥草单萜化合物3,8-二羟基-β-蒎烯对ATCC90028菌株的最小抑菌浓度(MIC)为200mg·L^-1，因此，化合物3,8-二羟基-β-蒎烯具有抗真菌作用。