用于多重PCR检测致腹泻寄生虫的引物组及试剂盒的制作方法

文档序号:11126217阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种多重PCR检测腹泻寄生虫用引物组,其中,该引物组包括SEQ ID NO.1和3-18所示的引物;所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。

2.根据权利要求1所述的引物组,其中,所述引物组还包括SEQ ID NO.19-20所示的引物。

3.腹泻寄生虫的检测方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:

(1)提取待测样本的总DNA;

(2)以所述总DNA为模板,并使用权利要求1或2所述的引物组,进行多重PCR反应,获得多重PCR扩增后的物料;

(3)对所述多重PCR扩增后的物料进行核酸电泳检测,得到核酸电泳检测的结果;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有215bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有溶组织内阿米巴;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有423bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有贾第鞭毛虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有256bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有隐孢子虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有453bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有日本血吸虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有362bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有华支睾吸虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有334bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有粪类圆线虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有149bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有人芽囊原虫;

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有282bp的扩增产物,则指示所述待测样本中含有卫氏并殖吸虫。

4.根据权利要求3所述的检测方法,其中,SEQ ID NO.3-20所示的引物的最终使用浓度各自为0.1-0.8μM,SEQ ID NO.1所示的引物的最终使用浓度为0.4-0.8μM。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法,其中,多重PCR反应的条件包括如下a-h的步骤:

a:94-96℃,3-6min;

b:94-96℃,15-60s,

c:50-60℃,15-60s,

d:71-73℃,60-120s,进行10-15个b-d的循环;

e:94-96℃,15-60s,

f:55-65℃,15-60s,

g:71-73℃,30-60s,进行30-35个e-g的循环;

h:71-73℃,5-10min。

6.根据权利要求3或4所述的检测方法,其中,所述核酸电泳检测包括核酸凝胶电泳和/或核酸毛细管电泳。

7.一种多重PCR检测腹泻寄生虫的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组和DNA聚合酶;所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。

8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液和dNTP。

9.权利要求1或2所述的引物组在制备检测腹泻寄生虫的试剂盒中的用途;其中,所述腹泻寄生虫包括溶组织内阿米巴、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、粪类圆线虫、人芽囊原虫和卫氏并殖吸虫。

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