一种软骨细胞无血清培养基及其制备方法与流程

文档序号:12457154阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种软骨细胞无血清培养基,由基础培养基、血清替代物以及生长因子组成,其中:

所述基础培养基为DMEM培养基、F12培养基或者二者的混合物;

所述血清替代物包括:葡聚糖5-20g/L、脂类浓缩剂0.1-1ml/L、丙酮酸钠50-100mg/L、三碘甲状腺氨酸0.01-2uM、氢化可的松0.05-5mg/L、地塞米松0.1-10ug/L、亚硒酸钠1-5ug/L、β-巯基乙醇25-50uM、维生素C10-100mg/L、谷氨酰胺50-500ug/ml、转铁蛋白1-20mg/L、胰岛素或胰岛素样生长因子5-100ug/L、生长激素10-200ug/L、孕酮5-20nM、丁二胺20-100uM、氯化胆碱2.5-3.2mg/L、层粘连蛋白5-30ug/L、大豆蛋白酶抑制剂2-10mg/L;

L-精氨酸250.0-320.0mg/L、L-门冬氨酸12.00-25.00mg/L、L-谷氨酸15.0-25.0mg/L、甘氨酸8.0-12.0mg/L、L-组氨酸13.0-16.0mg/L、L-羟脯氨酸18.0-22.0mg/L、L-异亮氨酸35.0-55.0mg/L、L-亮氨酸40.0-60.0mg/L、L-甲硫氨酸12.0-18.0mg/L、L-苯丙氨酸12.0-18.0mg/L、L-脯氨酸18.0-22.0mg/L、L-丝氨酸25.0-32.0mg/L、L-苏氨酸18.0-22.0mg/L、L-色氨酸2.0-6.0mg/L、L-酪氨酸20.19-25.89mg/L、L-缬氨酸18.0-22.0mg/L;

所述生长因子包括:碱性成纤维生长因子5-60ug/L、表皮生长因子0.5-30ug/L、转化生长因子1-25ug/L、骨形成蛋白1-20ug/L、血小板衍生生长因子1-18ug/L、bHLH转录因子0.2-5ug/L、转录因子E2F-1 0.01-2ug/L。

2.根据权利要求1所述的软骨细胞无血清培养基,由基础培养基、血清替代物以及生长因子组成,其中:

所述基础培养基为DMEM培养基、F12培养基或者二者的混合物;

所述血清替代物包括:葡聚糖10g/L、脂类浓缩剂0.5ml/L、丙酮酸钠80mg/L、三碘甲状腺氨酸0.2uM、氢化可的松2mg/L、地塞米松0.2ug/L、亚硒酸钠2ug/L、β-巯基乙醇25uM、维生素C50mg/L、谷氨酰胺200ug/m L、转铁蛋白5mg/L、胰岛素或胰岛素样生长因子40ug/L、生长激素20ug/L、孕酮10nM、丁二胺50uM、氯化胆碱2.5mg/L、层粘连蛋白12ug/L、大豆蛋白酶抑制剂6mg/L;

L-精氨酸300mg/L、L-门冬氨酸20mg/L、L-谷氨酸20mg/L、甘氨酸10mg/L、L-组氨酸15mg/L、L-羟脯氨酸20mg/L、L-异亮氨酸40mg/L、L-亮氨酸60mg/L、L-甲硫氨酸15mg/L、L-苯丙氨酸15mg/L、L-脯氨酸20mg/L、L-丝氨酸30mg/L、L-苏氨酸20mg/L、L-色氨酸5mg/L、L-酪氨酸22mg/L、L-缬氨酸20mg/L;

碱性成纤维生长因子20ug/L、表皮生长因子5ug/L、转化生长因子10ug/L、骨形成蛋白5ug/L、血小板衍生生长因子18ug/L、bHLH转录因子0.2ug/L、转录因子E2F-1 0.05ug/L。

3.权利要求1或2所述的软骨细胞无血清培养基的制备方法,包括如下步骤:

选取基础培养基,DMEM培养基、F12培养基或者二者的混合物;

常温无菌环境下,向基础培养基中添加血清替代物和相关生长因子;

0.22um滤膜过滤除菌,得到软骨细胞无血清培养基。

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