1.一种用于检测棕榈疫霉菌的引物对,其特征在于所述引物序列为:
上游引物PPF:5'- GCAAAAGTGTTGATGGTTTGG -3',
下游引物PPR:5'- CTTGACTAGGAACGCCTGGA -3'。
2.一种利用权利要求1所述引物对检测棕榈疫霉菌的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)提取待检测样品基因组DNA;
(2)PCR扩增反应:以步骤(1)提取的DNA为模板,利用PPF/PPR引物对进行PCR扩增,PCR扩增的条件为:PCR反应体系25 µL,包括2×Taq PCR Master Mix 12.5µL,10 µmol/L引物PPF及PPR各1.0µL,DNA 模板1.0µL,用无菌超纯水补足至25 µL;扩增参数为95 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸30 s,共35个循环,最后72 ℃延伸10 min;
(3)电泳检测:取5.0 µL步骤(2)的PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分离,电压为4-5V/cm,电泳40 min,经溴化乙锭染色后于紫外灯下观察;根据扩增产物的有无及其片段大小对结果进行判断,如果能特异性地扩增出约220bp大小的产物,即可判断所述的检测样品中存在棕榈疫霉菌,反之则判定为无棕榈疫霉菌。