1.一种有效制备果树高分子量DNA的方法,其特征在于包括以下制备步骤:
(1)取苹果或桃或杏或樱桃或柿的鲜叶;核提取缓冲液;
(2)将10g鲜叶在液氮中研成细粉,加入200ml核提取缓冲液,置于冰浴中,用磁力搅拌器搅拌l0分钟;该匀浆经两层纱布过后,以3000转/分钟的速度,离心20分钟;
(3)弃上清,将沉淀物中加入少量核洗涤缓冲液,用毛刷轻轻打散,再加入约200ml核洗涤缓冲液混匀,以60转/分钟的速度,离心5分钟,弃沉淀;
(4)将上清液于2000转/分钟的速度下离心20分钟;
(5)将该沉淀洗涤l-3次,用lml lHB(无β-mercaptoet hanol )将粗提核混匀,于45 C 下,与等量的l % LMP 琼脂糖混合均匀;
(6)将步骤(5)产物装入凝胶块模具中,在4摄氏度温度下凝固l小时,将包埋有细胞核的凝胶块推入20倍体积的核裂解缓冲液中,50摄氏度下裂解24小时,其间更换裂解液两次;
(7)将步骤(6)产物在4摄氏度下保存于0.5mol/L EDTA,lm mol/L PSMF 中;
(8)将上述凝胶块置于大量的0.5xTBE中透析两小时,然后包埋于l % 琼脂糖凝胶的加样孔中,进行脉冲电泳,电泳结束后染色l0 分钟后获得的(HMW)DNA胶块。
2.如权利要求1所述一种有效制备果树高分子量DNA的方法,其特征在于:电解液为:0. 5xTBE和浓度为l%(Bio- Rad)的琼纸糖凝胶混合物。
3.如权利要求1所述一种有效制备果树高分子量DNA的方法,其特征在于:所述电泳的环境为:脉冲电压:5V/cm, 脉冲角度:l20;脉冲温度:11摄氏度,脉冲交变时间为5-l5秒;脉冲电泳时间为l8小时。