本发明属于微生物领域,涉及一种具有高黏附力的植物乳杆菌。
背景技术:
:益生菌是一类对人体有益的微生物的总称,包括乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。其中,乳酸菌是指发酵糖类并且主要产物为乳酸的一类革兰氏阳性菌的总称,广泛分布在动物体的肠道中,具有维持肠道菌群平衡、增强免疫力、促进营养物质利用等功效。由于乳酸菌具有上述有益健康的作用,多个国家和组织将含有乳酸菌的食品视为健康食品或保健食品加以推广,例如,日本卫生部就将含有乳杆菌、双歧杆菌等的食品定义为有特殊健康意义用途的食品。目前,研究界普遍认为乳酸菌在维持肠道菌群平衡方面的作用是通过抑制有害菌生长来实现的。有研究表明,乳酸菌能够利用自身与肠道内壁黏液或上皮细胞的黏附作用来定植在肠道内壁上,从而占据黏附位点,并且通过空间位阻作用阻止有害菌在肠道内壁上的黏附和生长。因此,乳酸菌的黏附力高低是评价乳酸菌的对肠道的有益作用的重要指标,其黏附力越高,则越容易在肠道内壁上定植,发挥更好的保健作用。技术实现要素:为了提供一种具有高黏附力的乳酸菌,本发明通过菌种分离和筛选,得到了一种具有高黏附力的植物乳杆菌AR326,其特征在于,该植物乳杆菌菌株AR326在中国普通微生物菌种保藏管理中心进行保藏,其保藏编号为CGMCCNo.12469。进一步地,本发明还提供了上述植物乳杆菌菌株在发酵制备活性乳酸菌产品中的应用。发明作用与效果根据本发明提供的植物乳杆菌菌株,由于具有高黏附力,能够在肠道中很好地定植,抑制肠道有害菌的生长,因此具有的肠道菌群调节作用,有利于机体健康。具体实施方式以下结合实施例来说明本发明的具体实施方式。下述实施例中所使用的HT-29细胞为人结肠癌细胞,由江南大学馈赠;泡菜及黄酒酒糟从市售食品中取样;其他试剂从普通商业途径获得,未提及的实验条件均参照常规实验条件或供应商建议。<实施例>首先,从泡菜及黄酒酒糟中采样,经过富集、初筛,得到了19株乳酸菌。然后,对上述19株乳酸菌进行筛选,具体步骤如下:步骤1,制备HT-29细胞爬片。在12孔板的每个孔中都放入无菌的空白细胞爬片,加入2ml1640完全培养基,在每个孔中加入0.5ml浓度为1×106个/ml的HT-29细胞悬液,过夜培养,得到含有80%~90%细胞的HT-29细胞爬片。其中,1640完全培养基的配方为1640培养基:胎牛血清=9:1。步骤2,制备19株菌株的菌悬液,每种菌株的菌悬液制备步骤如下:将菌接种到MRS培养基中制备种子液,再按1%(体积比)的接种量将种子液接种入100mlMRS培养基。37℃培养12小时后,在3000G条件下离心10分钟,弃去上清并用PBS缓冲液洗两次,再用PBS缓冲液将菌体沉淀悬浮,加入适量PBS缓冲液调节菌体浓度,直到菌悬液吸光度为0.6。此时,菌体浓度约为109cfu/ml。其中,MRS培养基的制作方法为:取酪蛋白胨10g、牛肉浸出粉10g、酵母浸粉5g、葡萄糖20g、CH3COONa·3H2O8.3g、柠檬酸氢二胺2g、MnSO4·H2O0.25g、K2HSO42g、MgSO4·7H2O0.58g、吐温-801mL、1000mL去离子水,混合溶解后115℃灭菌20min。PBS缓冲液的制作方法为:取NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.56g、KH2PO40.2g,去离子水溶解后定容至1000ml,调PH至7.4,115℃灭菌20min。步骤3,将步骤2制备得到的19种菌株的菌悬液各取1ml,分别加入步骤1得到的12孔板的孔中,再向每个孔中加入1ml1640完全培养基,放入细胞培养箱培养2小时。PBS缓冲液洗两次后,加入适量无水甲醇固定20分钟,用革兰氏染色法进行染色,取出细胞爬片,1000倍显微镜下随机选择20个视野进行拍照,结果如表1所示。表1不同菌株的黏附性能菌株名称每百个细胞平均黏附数菌株名称每百个细胞平均黏附数AR150160AR269411AR187254AR303136AR277205AR289151AR237234AR132372AR287218AR179267AR319384AR371322AR340366AR387390AR345206AR333298AR326430AR226291AR195253由表1可知,在每100个细胞上黏附有430个AR326菌,AR326菌株的黏附数量明显高于其他菌株,说明在上述19个菌株中,AR326菌株具有最高的黏附力。通过利用通用引物27F和1492R扩增AR326菌株的16SrDNA序列,测序后经blast比对,发现与植物乳杆菌有99%的相似性,可以确认该菌株AR326为植物乳杆菌(LactobacillusplantarumAR326)。另外,该菌株AR326已经于2016年5月20日在中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号)进行保藏,其保藏编号为CGMCCNo.12469。实施例作用与效果根据本发明提供的植物乳杆菌菌株AR326,由于具有高黏附力,其黏附力达到了每100个细胞可黏附430个菌,因此该菌株AR326能够在肠道中很好地定植,抑制肠道有害菌的生长,具有良好的肠道菌群调节作用,有利于机体健康。此外,本发明提供的植物乳杆菌菌株从泡菜和黄酒酒糟中筛选获得,其来源均为食物,因此具有高安全性,能够应用在食品发酵当中,其活菌也能够直接食用而对人体不产生有害效果。当前第1页1 2 3