本发明属于蚕丝加工领域，具体涉及一种桑蚕丝蛋白的提取方法。
背景技术：
桑蚕丝主要是由丝胶和丝素两种蛋白质组成的，总称为蚕丝蛋白。丝胶包围在丝素纤维表层，起胶粘作用。丝胶和丝素具有不同的结构和性能：丝胶为球状蛋白，二级结构以无规卷曲为主，稳定性差，可溶于热水、酸、碱、蛋白酶以及低浓度碳酸钠等溶液中；丝素为纤维状蛋白，含有大量的结晶结构，性能稳定，可溶于高浓度氯化钙、氯化钙乙醇水混合液和溴化锂等溶液中。因此，可以根据蚕丝蛋白在不同溶液中的溶解性差异和实际应用需求，选择合适的溶解液进行提取处理，获得各种具有不同结构与性能的蚕丝蛋白，用于加工制备化妆品和食品添加剂、生物组织修复材料、高吸水材料、药物载体和细胞培养基等不同形态功能材料。
目前，传统的蚕丝蛋白提取思路为：①将茧层或茧丝用丝胶溶解液（如沸水、高温
高压、酸、碱、蛋白酶液等）处理和纯化，获得部分或大部分丝胶蛋白；②先将茧层或茧丝用丝胶溶解液（如0.5% w/w Na2CO3 溶液等）进行脱胶处理，得丝素纤维；然后，将该丝素纤维用丝素溶解液（如50% w/w CaCl2 溶液等）处理、透析纯化，获得丝素蛋白。但是采用以上的方法提取蚕丝蛋白往往不彻底，不能将蚕茧中的蚕丝蛋白完全提取出来，从而造成了材料的浪费，因此需要开发一种能够尽可能完全提取蚕茧中蚕丝蛋白的方法，提高原材料的利用率。
技术实现要素：
本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足而提供一种蚕丝蛋白的提取方法，进一步提高蚕丝蛋白的提取率。
一种桑蚕丝蛋白提取方法，该方法包括以下步骤：
A、选取春桑蚕茧或夏秋桑蚕茧，将蚕茧用粉碎机粉碎成蚕茧碎片，将所述碎片放入带有加湿和排湿装置的真空容器中平衡水分，测定碎片的回潮率；称量碎片质量，根据回潮率计算其蚕茧干重；在蚕茧碎片中加入去离子水，通过浸泡使碎片中的蚕丝充分润湿溶胀；
B、将桑蚕脱胶细菌在25℃下 用琼脂固体培养基活化至少24小时，活化后的桑蚕脱胶细菌以脱胶容器中蚕茧碎片重量的3％为接种量接入到脱胶容器中，此时碎片中的蚕丝充分润湿溶胀，然后用去离子水加满脱胶容器，并加温至25℃～35℃，加温的同时向脱胶容器中加入500万单位的生理盐水和300万单位的糖原，40-60小时后，蚕茧脱胶结束；
C、将步骤B所制得的混合物进行离心分层，将上层清液转移到另一容器中，剩余的浓缩蚕茧蛋白悬浮液放入真空冷冻干燥仪中，使其冷冻干燥成型，制得粉态的蚕茧蛋白，最后将制得的蚕茧蛋白放入冷冻室储存。
所述步骤A中，粉碎的蚕茧碎片细度为400目，在碎片中加入蒸馏水使碎片在蒸馏水中质量百分比浓度为11％～15％，蒸馏水浸泡时间 为36h。
所述步骤B中，桑蚕脱胶细菌接种在富集培养基中，35℃静止培养， 36小时后，用无菌移液管吸取20mL菌液转至另外装有200mL富集培养基的三角瓶中培养24h，连续转接2～3次，所加的琼脂量随着转接逐渐增加；然后将菌液用平板稀释法在分离培养基上涂布，35℃静止培养48h，将获得的单菌落保存后在分离培养基上反复纯化后，即得到所述的桑蚕脱胶细菌。
所述步骤C中，通过离心机进行离心分层，离心机转速为15000rpm，离心次数为10次；采用液氮进行冷冻干燥成型，冷冻干燥成型的温度为-70℃，冷冻干燥成型的压力80Pa，冷冻干燥成型的时间为 15h。
使用本发明提供的方法能够最大程度的提取蚕茧中的蚕丝蛋白，经测定，本发明提供的蚕丝蛋白的提取方法的蚕丝蛋白提取率达到了99.8%以上。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以几个优选实施例，作详细说明如下。
实施例1
一种桑蚕丝蛋白提取方法，该方法包括以下步骤：
A、选取春桑蚕茧或夏秋桑蚕茧，将蚕茧用粉碎机粉碎成蚕茧碎片，将所述碎片放入带有加湿和排湿装置的真空容器中平衡水分，测定碎片的回潮率；称量碎片质量，根据回潮率计算其蚕茧干重；在蚕茧碎片中加入去离子水，通过浸泡使碎片中的蚕丝充分润湿溶胀；其中，粉碎的蚕茧碎片细度为400目，在碎片中加入蒸馏水使碎片在蒸馏水中质量百分比浓度为15％，蒸馏水浸泡时间 为36h。
B、将桑蚕脱胶细菌在25℃下 用琼脂固体培养基活化至少24小时，活化后的桑蚕脱胶细菌以脱胶容器中蚕茧碎片重量的3％为接种量接入到脱胶容器中，此时碎片中的蚕丝充分润湿溶胀，然后用去离子水加满脱胶容器，并加温至25℃～35℃，加温的同时向脱胶容器中加入500万单位的生理盐水和300万单位的糖原，40-60小时后，蚕茧脱胶结束；
其中，桑蚕脱胶细菌接种在富集培养基中，35℃静止培养， 36小时后，用无菌移液管吸取20mL菌液转至另外装有200mL富集培养基的三角瓶中培养24h，连续转接2～3次，所加的琼脂量随着转接逐渐增加；然后将菌液用平板稀释法在分离培养基上涂布，35℃静止培养48h，将获得的单菌落保存后在分离培养基上反复纯化后，即得到所述的桑蚕脱胶细菌。
在菌种活化之后进行扩大培养，其扩大培养过程为：a.一级菌种培养：将活化后的菌种用接种环分别接入装有工业扩大培养基300mL的10个三角瓶中，每个瓶中用一个接种环的菌种，30℃培养24小时，使菌体数量达到1×108以 上；b.二级菌种培养：以a步骤中1％菌液的接种量接种到装有工业扩大培养基 300L的培养容器中，30℃培养24小时，使菌体数量达到1×108以上；c.三级种子培养：再以b步骤中1％菌液的接种量接种到装有工业扩大培养基3t的培养 容器中，30℃培养24小时，即完成扩大培养过程。
C、将步骤B所制得的混合物进行离心分层，将上层清液转移到另一容器中，剩余的浓缩蚕茧蛋白悬浮液放入真空冷冻干燥仪中，使其冷冻干燥成型，制得粉态的蚕茧蛋白，最后将制得的蚕茧蛋白放入冷冻室储存；具体为通过离心机进行离心分层，离心机转速为15000rpm，离心次数为10次；采用液氮进行冷冻干燥成型，冷冻干燥成型的温度为-70℃，冷冻干燥成型的压力80Pa，冷冻干燥成型的时间为 15h。
使用本发明提供的方法能够最大程度的提取蚕茧中的蚕丝蛋白，经测定，本发明提供的蚕丝蛋白的提取方法的蚕丝蛋白提取率达到了99.8%以上。