本发明涉及食用菌领域，特别涉及一种羊肚菌菌株老化的鉴定方法，本发明提供了一种简单有效的判断菌株老化的检测方法。
背景技术：
羊肚菌是一种名贵的食用菌，除具有味道鲜美，还具有抗肿瘤、抗癌、提高免疫力等功效，深受国内外广大消费者青睐。羊肚菌的人工栽培因此成为全世界蘑菇爱好者热衷追寻的工作。近年来，我国的菇民朋友，在其不懈的努力下，终于实现了羊肚菌的大面积人工栽培。截止2016年春季，我国的羊肚菌种植面积已达到24000亩，是2015年总面积的3倍，增速迅猛。然而，在羊肚菌产业迅猛发展的同时，也逐渐暴露出羊肚菌遗传基础薄弱对产业发展带来的影响，特别是菌种质量问题，每年因此至少造成50%的种植户遭受重大经济损失。这其中，最重要的的一点就是羊肚菌菌株的老化，老化的菌株吃料能力变差、营养转化减弱，出菇差或不出菇。
菌株老化是一种伴随着自噬、凋亡的自然生理现象，任何生物均发生着不可逆的老化现象，然而目前还未有一种针对羊肚菌菌株老化的检测方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于：提供一种简单有效快捷直观的方法检测羊肚菌菌株的老化程度，通过该检测方法能够准确判断菌株的老化状态，从而为后续的菌株筛选、复壮、培养等提供有效参考，为羊肚菌的栽培产业带来巨大的效益。
本发明的技术方案为：
一种羊肚菌菌株老化的检测方法，包括以下步骤：
1）菌株活化：将待测菌株活化培养，待用；
2)平皿制备：平皿倒入固体培养基，培养基冷却凝固后，铺一层无菌的玻璃纸；
3)接种：在玻璃纸的一侧距离平皿远缘一定距离，接种活化的菌种块；
4)培养和观察：培养，避免菌丝前端长到平皿的边缘；培养2.5~3d的菌落用于记录菌丝生长速度以及显微观察；培养两周的平皿用于观察记录菌落形态；
5)制片：将玻璃纸揭开，剪取附带有玻璃纸的菌落前端的区域，进行显微观察；
6)观察：观察菌落菌丝尖端的形态；
7)测量：测量菌丝的分支夹角；
8)结果分析：根据观察和测量结果进行菌丝生长阶段分析。
通过本判断标准能有效的在羊肚菌栽培前对菌种质量的好坏进行检测，以到达避免在栽培生产过程中食用菌劣质菌种，为生产带来危害，目前在羊肚菌栽培领域还未有相关报道。
附图说明
图1羊肚菌老化过程的菌落形态特征。
具体实施方式
实施例1
一种羊肚菌菌株老化的检测方法，具体为：
1）菌株活化：将待测菌株接入新鲜的灭过菌的cym培养基，培养基组成为：葡萄糖20g，蛋白胨2g，酵母粉2g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，琼脂粉20g，水1000ml，ph自然，在试管中进行活化，培养温度为23~25℃，培养5~7d待菌丝长满试管后，作为后续检测的菌种使用；
2）平皿制备：取直径9cm的平皿，灭菌后使用，无菌条件下，在平皿中倾倒12~15mlcym固体培养基，待培养基冷却凝固后，铺一层无菌的玻璃纸，玻璃纸呈圆形，直径略小于平皿直径；
3）接种：在玻璃纸的一侧距离平皿远缘0.5~1cm距离，接种直径约0.5cm的活化好的菌种块；
4）培养和观察：将平皿置于23℃恒温培养箱内避光培养，培养时间控制在2.5~3d内或14d，避免菌丝前端长到平皿的边缘；培养2.5~3d的菌落用于记录菌丝生长速度以及进行显微观察；培养两周的平皿用于观察记录菌落形态，包括菌落的颜色；
5）制片：用镊子小心的将玻璃纸揭开，用剪刀小心的剪取附带有玻璃纸的菌落前端的区域，置于滴加有10%~20%甘油的载玻片上，再在玻璃纸上的菌丝上滴加一滴10%~20%甘油水溶液，盖上盖玻片，进行显微观察；
6）观察：先用4×镜头粗调对焦，之后用10×、20×、40×镜头观察菌落菌丝尖端的形态，并拍照记录；
7）测量：根据拍照结果，通过软件自带的测量软件或测角器进行菌丝分支夹角的测量，测量数量不少于30个，求均值。
8）菌落形态分析
健壮菌丝阶段：菌落绒毛辐射状，菌丝粗壮，生长迅速（平均长速达0.35~0.5mm/h），边缘整齐，7~10d后产生色素，不同菌株产色素情况不同，导致每个菌株或品种之间有较大的差异。
前老化阶段：菌落绒毛辐射状，菌丝较粗壮，生长速度与前一阶段相似，边缘较整齐，产生色素比前一阶段提前3~5d。
老化阶段：菌落绒毛状，菌丝细弱、弯曲，生长速度下降（0.15mm/h左右）至停止生长，边缘不整齐。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明原料的前提下，可以做适当的改进，这些改进也在本发明的保护范围之内。