叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(II)配合物、制备方法及应用与流程

本发明涉及一种新的化合物、制备方法及应用，尤其是一种叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物、制备方法及其在抑制脲酶活性中的应用。

背景技术：

席夫碱化合物，含有–ch=n–官能团，它是由氨类化合物和醛或酮类化合物发生缩合反应而形成的产物。席夫碱化合物具有多种优良的生物活性，有报道表明其在抑制脲酶活性中也有良好的性能。部分金属盐也具有很强的抑制脲酶的活性，尤其是铜盐、银盐等，但是其作为重金属离子，因具有较强的毒副作用而难以推广应用。

席夫碱具有o、n等给体原子，易于与各种过渡金属离子（铜离子等）形成配合物。由于配合物是有机配体和金属离子的复合物，具有适当的稳定性，可以缓慢解离出相应的具有抑制脲酶活性的配体和金属离子，不仅配合物本身具有良好的抑制脲酶的活性且明显降低了铜离子毒副作用。

迄今为止，还没有关于在合成席夫碱铜配合物的过程中引入含邻位羰基的配体，形成新的具有抑制脲酶活性的配合物的相关报道。

技术实现要素：

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物、制备方法及其在抑制脲酶活性中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物，结构如下式所示：

一种上述叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物的制备方法，按照如下步骤进行：

步骤1：在20±10˚c搅拌下，将4-甲氧基水杨醛和2-氨甲基吡啶均溶于置于反应容器内的甲醇中充分反应，所述4-甲氧基水杨醛、2-氨甲基吡啶与甲醇的用量比为1.52g：1.08g：50ml；

步骤2：在20±10˚c搅拌下，继续向反应容器中加入溴化铜和叠氮化钠的甲醇溶液，所述溴化铜、叠氮化钠和甲醇的用量比为2.23g：0.65g：50ml，所述甲醇用量与步骤1甲醇用量相等；然后搅拌、去除溶剂后再用dmf溶解，用乙醚缓慢扩散，得到叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物。

一种上述叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物在抑制脲酶活性中的应用。

本发明在合成席夫碱铜配合物的过程中引入叠氮配体，生成一种新的配合物，有效整合了具有抑制脲酶活性的席夫碱和铜盐，对脲酶活性有较高的抑制能力，在浓度为50μg·ml^-1时抑制率为96.8%，其ic50值为0.13±0.05μg·ml^-1。

本发明可重复性强、稳定性好，反应条件简单且环境温和、产率高，可在较小投入情况下进行大量生产。

附图说明

图1是本发明实施例所得配合物抑制脲酶活性吸光度值曲线图。

图2是本发明实施例所得配合物不同浓度对脲酶活性抑制率曲线图。

具体实施方式

本发明的叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物的制备方法，按照如下步骤进行：

步骤1：在20˚c搅拌下，将1.52g（0.01mol）4-甲氧基水杨醛和1.08g（0.01mol）2-氨甲基吡啶均溶于置于反应容器内的50ml甲醇中反应1h；

步骤2：在20˚c搅拌下，继续向反应容器中加入溴化铜和叠氮化钠的甲醇溶液，溴化铜、叠氮化钠和甲醇的用量分别为2.23g（0.01mol）、0.65g（0.01mol）及50ml，然后搅拌、减压蒸馏去除溶剂后再用dmf溶解，用乙醚缓慢扩散，得到叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物。

实验：

一.对本发明实施例方法中的步骤1反应过程进行tlc跟踪，反应1h后，减压蒸馏除去溶剂，将得到的固体粗产物用冷的甲醇洗涤、干燥，粗产物溶于甲醇重结晶，得到结构如下式1所示的化合物，产率93%。hrms(esi):m/zcalcdforc14h15o2n2[m+h]⁺243.1128;found:243.1128.¹hnmr(cdcl3,300mhz)δ(ppm):9.64(s,1h,oh),8.50(d,1h,arh),8.32(s,1h,ch=n),7.63(q,1h,arh),7.29-7.08(m,3h,arh),6.38-6.33(m,2h,arh),4.81(s,2h,ch2),3.72(s,3h,ch3)。

二.步骤2反应1h后，减压蒸馏除去溶剂，将得到的固体用冷的甲醇洗涤，干燥，粗产物溶于50ml的dmf，然后用100ml乙醚缓慢扩散进配合物的dmf溶液中，得到结构如下式2所示的化合物的单晶（叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物），产率57%。irdata(kbr,cm^-1):2048(n3),1653(c=o),1612(c=n)。

反应过程如下：

三.叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物抑制脲酶活性

（1）缓冲溶液的配置：

称取31.2g磷酸二氢钠和71.6g磷酸氢二钠，分别配制成1000ml的溶液，然后利用体积比配置不同ph值的磷酸盐缓冲液。

配置ph=6.8的磷酸盐缓冲溶液，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的体积比为255：245。

配置ph=7.7的磷酸盐缓冲溶液，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的体积比为502.5：449.75。

（2）脲酶溶液和底物的配置：

称取24mg的脲酶放入经过高锰酸钾洗过的棕色瓶子中，加入6mlph=6.8的磷酸盐缓冲溶液，振荡使脲酶充分溶解，备用。

量取100mlph=6.8的磷酸盐缓冲溶液，加入0.002％（2mg）的苯酚红和500mmol尿素配制ph=6.8的底物溶液。

同样量取100mlph=7.7的缓冲溶液，加入0.002％（2mg）的苯酚红配制成ph=7.7的底物溶液。

（3）配置1mg·ml^-1的待测物溶液：

称量1mg本发明实施例最终产物（叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物），加入1mldmso，配制成浓度为1mg·ml^-1待测溶液（以下简称样品）。

（4）设计96孔板：

空白：用100μl微量移液管量取25μl脲酶，加入用10μl移液管量取的2.5μldmso，继续加入22.5μlph=6.8的磷酸盐缓冲溶液，预孵育3小时。

样品：用100μl微量移液管量取25μl脲酶，加入用10μl移液管量取的2.5μl样品，继续加入22.5μlph=6.8的磷酸盐缓冲溶液，预孵育3小时。

标准：用100μl微量移液管量取50μlph=7.7磷酸盐缓冲溶液。

其中样品和标准曲线分别做3次，空白曲线做6次，以减小实验误差。

（5）测量脲酶抑制活性：

孵育3小时后，向96孔板的空白和样品孔中加入200μlph=6.8的底物溶液，向标准孔中加入200μlph=7.7的底物溶液，立即放入酶标仪中，设置温度37℃，时间为40min，570nm波长吸收光，测试吸光度值。

（6）ic50测试：

ic50是指酶催化反应被抑制一半时抑制剂的浓度，可以用来衡量样品的抑制活性，ic50值越低，反应样品的抑制活性越好。

将样品分为5个梯度浓度(μg·ml^-1)：0.001，0.01，0.1，1，10。按照上一步同样的实验方法测试它们的吸光度值。

（7）抑制脲酶活性：

以时间（min）为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制曲线（图1）。脲酶与尿素反应产生氨，使底物溶液的ph值升高，含有苯酚红的底物溶液颜色从黄色变为红色。样品通过抑制脲酶的活性，使其催化尿素水解产生氨的速率减慢。用样品曲线斜率比上空白曲线斜率，比值越小说明吸光值变化越小，其抑制活性越好。

根据图1计算浓度为50μg·ml^-1样品对脲酶的抑制活性。

其计算公式为：抑制率（%）=（1–k样品/k空白）×100%=96.8%。

样品抑制脲酶活性的ic50值：

绘制不同浓度下抑制脲酶活性曲线。以浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制曲线（图2），其ic50值为0.13±0.05μg·ml^-1。

因此，本发明的叠氮桥连含邻位羰基的席夫碱双核铜(ii)配合物，可应用于有效抑制脲酶活性。