荜茇酰胺类似物、制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类荜茇酰胺类似物、制备方法以及含有它 们的药物组合物，本发明的荜茇酰胺类似物可用于治疗或预防血栓栓塞性疾病。
【背景技术】
[0002] 荜茇酰胺（piplartine)为胡椒科胡椒属多年生草质藤木植物荜茇中的主要 活性成分。研宄发现，荜茇酰胺及其衍生物在不影响正常细胞生理功能的情况下，可以 显著的抑制肿瘤细胞的增殖（Raj L，Takao I，Aditi UG, et al.Selective killing of cancer cells by a small molecule targeting the stress response to ROS[J]. Nature，475(2011) :231~234 ;李绍路.荜茇酰胺衍生物在制备治疗癌症的药物中的用 途及其药物组合物CN102125552A(2011-07-20));荜茇酰胺及其衍生物对胶原蛋白、花生 四烯酸和血小板活化因子诱导的血小板聚集有显著的抑制活性（高源，余明辉.荜茇 酰胺类化合物抗血小板聚集的用途CN101810612A(2010-08-25) ;Fontenelea JB，Leal KAM, Edilberto RS, et al. Antiplatelet effects of piplartine, an alkamide isolated from Piper tuberculatum:possible involvement of cyclooxygenase blockade and antioxidant activity [J].J.Pharm. Pharmacol, 61 (2009) :511 ~515)。噻吩并P比啶类药 物如噻氯匹定、氯吡格雷和普拉格雷，为作用于P2Y12靶点的抗血小板聚集药物，临床上主 要用于预防和治疗由血小板异常聚集所致的栓塞性心脑血管疾病。但荜茇酰胺的肾毒性较 大，可以导致临近肾小管和肾小球上皮细胞水肿和肾小管出血，限制了其临床应用（参见张 鹏，黄启来，华子春.荜茇酰胺的药理作用研宄进展[J].中草药，2012, 43 (1):201-204.); 噻吩并吡啶类抗血小板聚集药物也存在延迟性出血和"氯吡格雷"抵抗的不足（参见杨宏 艳，王晓.抗血小板药物研宄进展[J].中国药学杂志，2012, 47 (4):250-254.)，因此寻找更 为安全有效的抗血小板聚集药物一直是人们不断研宄的目标。
【发明内容】
[0003] 本发明以荜茇酰胺为先导化合物，合成了一类荜茇酰胺类似物（I)或（II)，药效 学试验显示本发明化合物对ADP、AA诱导的血小板聚集具有显著的抑制活性。
[0004] 本发明化合物包括通式（I)和通式（II):
[0005]
[0006] 其中R1代表氢或甲氧基；1?2代表甲基、甲氧基、氯、硝基、羟基或-〇R 4;R3代表氢、甲 氧基或_〇R4;n = 1或2,其中R 4代表：
[0007]
[0008] R2优选代表硝基、羟基或甲氧基。
[0009] 1?2优选代表OR 4, R4优选代表乙酰基。
[0010] &优选代表氢或甲氧基。
[0011] 本发明的化合物，优先下列任一结构式的化合物：
[0012]
[0013]
[0014] 本发明更优选如下任一化合物：
[0015]
[0016] 其中所述的药学上可接受的盐为本发明的通式I或II的荜茇酰胺类似物的盐酸 盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸、富马酸、枸橼酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、酒石酸或醋酸盐。
[0017] LHC-13为例本发明化合物的制备方法包括如下步骤：
[0019] 本发明的其他化合物可以取对应的原料用参考上述方法制备。
[0020] 下面是部分化合物的药效学试验及结果：
[0021] 方法一：新西兰家兔，雄性，体重I. 8-2. 2kg，3. 8 %枸橼酸钠与IOmL生理盐水配制 成3. 8%的枸橼酸钠溶液，用1 %盐酸普鲁卡因局部麻醉，颈动脉插管放血，和枸橼酸钠溶 液以9:1混合，以1000r/min离心10min，取富血小板血衆（PRP)，剩余部分以3000r/min离 心，取贫血小板血浆（PPP)，聚集诱导剂用10ug/mL的二磷酸腺苷（ADP)。每管280uL PRP 中加入不同浓度的药物（荜茇酰胺和LHC-I~LHC-21均用DMSO溶解，加纯净水稀释至所 需浓度分别为 〇· 8 μ g/ml、4 μ g/ml、20 μ g/ml、100 μ g/ml、500 μ g/ml，阿司匹林用 DMSO 溶解，加纯净水稀释至浓度分别为 2· 88 μ g/ml、14. 4 μ g/ml、72 μ g/ml、360 μ g/ml、l. 8mg/ ml) 10uL，对照组PRP中加入生理盐水10uL，温育3min，然后加入上述诱导剂，用LG-PABER-I 型血小板聚集仪检测血小板聚集率，并计算IC5tl值。
[0022] 方法二：肝微粒体体外温孵方法：微粒体体外反应体系一共lmL，分别取NADP、 G-PD、G-PDH、MgCl2以及肝微粒体适量，加入KCl-磷酸盐缓冲液，使反应体系终体积为 lmL，反应体系中分别含 0.5mmol/L NADP、5.0mmol/L G-6-PD、1.0U/mL G-6-PDH、5.0mmol/L MgCl2U. Omg/ml肝微粒体。取需要进行孵育的筛选药物加入到微粒体反应体系中，于37°C 水浴中温孵振荡60min，放入-20°C冰箱内终止反应。取贫血小板血浆（PPP)，聚集诱导剂用 10ug/mL的二磷酸腺苷（ADP)。每管280uL PRP中加入不同浓度经微粒体反应体系处理的药 物10uL，对照组PRP中加入生理盐水10uL，温育3min，然后加入上述诱导剂，用LG-PABER-I 型血小板聚集仪检测血小板聚集率，并计算IC5tl值。
[0023] 本发明化合物LHC-I~LHC-12采用方法一进行抗血小板聚集活性测定；化合物 LHC-13~LHC-21采用方法二测定其抗血小板聚集活性。本发明中优势化合物对ADP诱导 的血小板聚集的抑制活性见表1。
[0024] 表1荜茇酰胺类似物对ADP诱导的血小板聚集的抑制活性
[0025]
[0026] 药理实验结果显示，本发明的荜茇酰胺类似物对ADP诱导的血小板聚集均具有较 好的抑制活性，强于阳性对照品荜茇酰胺。特别是化合物LHC-5、LHC-7和LHC-21显示出较 好的药用前景。
[0027] 本发明还提供了一种治疗或预防心脑血管疾病的药物组合物，其中含有治疗有效 量的通式I或II化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、 缓释片剂胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。
[0028] -般地，本发明的化合物用于治疗时，人用剂量范围为Img~1000 mg/天。也可根 据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。
【具体实施方式】
[0029] 实施例1
[0030] (E)-I-(6, 7-二氢噻吩并[3, 2-c]吡啶-5 (4H)-基）-3-(3, 4, 5-三甲氧基苯基） 丙-2_稀-1-酮（LHC-I)的合成
[0031] I. I(E)-3-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）丙烯酸的合成
[0032]
[0033] 在500mL三颈烧瓶，依次加入3, 4, 5-三甲氧基苯甲醛（10. 0g，51. Ommol)、丙二酸 (6. 41g，61.5mmol)、吡啶（35mL)、哌啶（2mL)和苯（150mL)，装上油水分离器，于110°C回流 6h。TLC[V(氯仿）：V(甲醇）=10:1为展开剂]检测显示反应基本完全，冷却至室温，加 入75 (mL)饱和碳酸钠水溶液，继续搅拌30min，分离，取水相，水相用3mol/L的盐酸调pH至 4，析出大量白色固体；抽滤，滤饼用无水乙醇重结晶，干燥得白色固体7.92g，收率65. 2 %， m. P. 124. 3 ~125. 7°C。
[0034] L 2 (E)-I-(6, 7-二氢噻吩并[3, 2-c]吡啶-5 (4H)-基）-3-(3, 4, 5-三甲氧基苯 基）丙-2_稀-1-酮（LHC-I)的合成
[0036] 在250ml圆底烧瓶中，依次加入（E)-3-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）丙烯酸 (3.0(^，12.6_31)、二氯亚砜（151]11^)和甲苯（451]11^)，于80°〇反应511。减压浓缩，并用甲苯 (20mL)带蒸三次除去残留的二氯亚砜，得3, 4, 5-三甲氧基苯丙烯酰氯，加入无水二氯甲烷 (15mL)溶解备用。
[0037] 另取一 250mL三颈烧瓶，依次加入4, 5, 6, 7-四氢噻吩[3, 2-c]吡啶盐酸盐 (1.86g，13. 4mmol)、二氯甲烧（50mL)和三乙胺（6mL)，常温条件下搅拌30min，于冰浴条 件下，缓慢滴加3, 4, 5-三甲氧基苯丙烯酰氯二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续反应2. 5h。 TLC[V(乙酸乙酯）：V(石油醚）=1:1为展开剂]检测显示反应基本完全，反应液分别用 水（1001111^2)、1%稀盐酸（1001111^3)和1111〇1/1碳酸钠溶液（501111^3)洗涤，无水硫酸 钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱分离，得LHC-I白色固体2. 43g，收率53. 3%，m.p. 151. 4~ 152.7 °C !1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) δ : 7. 63 (d，J = 15. 6Hz，1H，ArCH = )，7. 16(d，J = 5. 1Hz, 1H, ThH), 6. 85-6. 80 (m, 2H, -CH = and ThH), 6. 76 (s, 2H, ArH), 4. 78 (s, 2H, Py-C H2), 3. 98 (t, 2H, J = 4. 5Hz, Py-CH2), 3. 91 (s, 6H, OCH3X 2), 3. 88 (s, 3H, OCH3), 2. 96 (br s, 2H, Py-CH2) ;13C-NMR(CDC13, 75MHz) δ : 166. 0, 153. 4, 143. 0, 139. 6, 132. 4, 130. 8, 125. 2， 124. 5, 123. 6, 116. 6, 105. 1，61. 0, 56. 2, 46. 0, 43. 3, 26. I ;IR(KBr，cnf1) u :2998. 3, 2935. 6， 2833. 9, 1642. 7, 1587. 0, 1505. 6, 1437. 4, 1252. 2, 1266. 5, 1124. 4, 1058. I, 1008. I, 977. 9, 8 26. 2, 717. 9, 613. 2 ；ESI-Mass for C19H21NO4S: m/z (M++H) 360. 06.
[0038] 实施例2
[0039] (E) -I- (6, 7-二氢噻吩并[3, 2-c]吡啶-5 (4H)-基）-3- (4-甲氧基苯基） 丙-2-烯-1-酮（LHC-2)的合成
[0040]
[0041] (E)-3-(4-甲氧基苯基）丙烯酸按实施例1中I. 1方法操作合成，按实施例1中 1.2方法操作制得（E)-1-(6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)_基）-3-(4-甲氧基苯 基）丙-2-烯-1-酮（LHC-2)淡黄色固体，m. P. 131. 4 ~132. 7°C JH-NMR(O)Cl3, 400MHz) 5:7.67 (d, J = 15. 2Hz, 1H, ArCH = ), 7. 50 (d, J = 8. 0Hz, 2H, ArH), 7. 15 (d, J =5. 2Hz, 1H, ThH), 6. 90 (d, J = 8. 4Hz, 2H, ArH), 6. 83-6. 79 (m, 2H, ThH and-CH =)