(加入氨基酸K)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.819gFmoc-Lys (Fmoc)-0H、2.473g PyB0P、0.642g HOBt 和 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经茚三酮显色反应检测，Fmoc-Lys (Fmoc) -OH反应完全后结束反应。
[0044](加入丙烯酸)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入0.56mL丙烯酸、2.473g PyB0P、0.642g HOBt和1.3mL DIEA，搅拌10分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经茚三酮显色反应检测，丙烯酸反应完全后结束反应。
[0045]d.(收集多肽)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤后，再用二氯甲烷洗涤，用真空泵抽干洗涤剂，干燥树脂，将树脂与1mL切肽试剂混合，切肽试剂为三氟乙酸(TFA)、三异丙基硅烷(TIPS)和水的混合液(TFA:TIPS = H2O = 95:2.5:2.5体积比)，室温下搅拌反应2小时后抽滤，用三氟乙酸洗涤树脂，收集滤液后将滤液逐滴滴入乙醚中，离心收集沉淀，冷冻干燥，得到(Ac) 2-KYIGSRG。
[0046]5)合成末端含双键的GIKAVAK-Ac多肽:末端含双键的GIKAVAK-Ac多肽的制备方法与多肽交联剂(Ac)2-KYIGSRG的制备方法相似，缩合反应过程中依次加入Fmoc-氨基酸 Fmoc-1le-OH、Fmoc-Lys (Boc)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys (Boc) -OH,以及丙稀酸，具体步骤如下:
[0047]将Fmoc-Gly-wang树脂(聚合物键合型Fmoc-甘氨酸4_节氧基节醋，吉尔生化的)浸泡于DMF中处理I小时，再用DMF、二氯甲烷充分洗涤，干燥后得到活化的Fmoc-Gly-wang树脂。
[0048]将上述活化的Fmoc-Gly-wang树脂与1mL 20%呢啶溶液混合，搅拌均勾后放入固相多肽合成仪中微波反应2分钟，进行脱保护反应，反应完成后用DMF充分洗涤得到脱保护的 Fmoc-Gly-wang 树脂。
[0049](加入氨基酸I)将上述所得脱保护的Fmoc-Gly-wang树脂与1.4g Fmoc-1le-OH、2.473g PyB0P、0.642g HOBtU.3mL DIEA混合，搅拌10分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经茚三酮显色反应检测，Fmoc-1 Ie-OH反应完全后结束反应。
[0050](加入氨基酸K)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.86gFmoc-Lys (Boc) -OH, 2.473g PyB0P、0.642g HOBt 与 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经茚三酮显色反应检测，Fmoc-Lys (Boc) -OH反应完全后结束反应。
[0051](加入氨基酸V)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.344gFmoc-Val-OH,2.473g PyB0P、0.642g HOBt 与 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经節三酮显色反应检测，Fmoc-Val-OH反应完全后结束反应。
[0052](加入氨基酸A)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.233gFmoc-Ala-OH,2.473g PyB0P、0.642g HOBt 与 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经節三酮显色反应检测，Fmoc-Ala-OH反应完全后结束反应。
[0053](加入氨基酸V)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.344gFmoc-Val-OH,2.473g PyB0P、0.642g HOBt 与 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经節三酮显色反应检测，Fmoc-Val-OH反应完全后结束反应。
[0054](加入氨基酸K)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤，加入1.86gFmoc-Lys (Boc) -0H, 2.473g PyB0P、0.642g HOBt 与 1.3mL DIEA，搅拌 10 分钟后移入多肽合成仪进行缩合反应，经茚三酮显色反应检测，Fmoc-Lys (Boc) -OH反应完全后结束反应。
[0055](收集多肽)上述缩合反应结束后取出树脂，用DMF洗涤后，再用二氯甲烷洗涤，用真空泵抽干洗涤剂，干燥树脂。加入1mL切肽试剂(TFA:TIPS:H20 = 95:2.5:2.5体积比)，室温下搅拌反应2小时后抽滤，用三氟乙酸洗涤树脂，收集滤液后将滤液逐滴滴入乙醚中，离心收集沉淀，冷冻干燥，得到末端含双键的GIKAVAK-Ac多肽。
[0056]6)制备具有生物活性的可生物降解水凝胶:称取94.5g步骤2)所得聚(丙交酯-CO-环氧乙烷-CO-富马酸)，12g步骤4)所得多肽交联剂(Ac)2-KYIGSRG,0.023g步骤5)所得末端含双键的GIKAVAK-Ac多肽，0.0014g丙烯酸丙炔酯；9g甲叉双丙烯酰胺，0.925g4，4’ -偶氮双(4-氰基缬草酸)和300mLDMF置于反应器中，质量比聚(丙交酯-co-环氧乙烷-Co-富马酸):多肽交联剂(Ac)2-KYIGSRG:GIKAVAK-Ac多肽:丙烯酸丙炔酯:甲叉双丙烯酰胺:4，4’ -偶氮双(4-氰基缬草酸)=945:120:0.23:0.0144:90:9.25，PLEOF 浓度为0.315g/mL，将反应装置抽真空30分钟，密封反应器，移至80°C的油浴锅中加热，反应10小时，反应完成后，加入0.0Olgg步骤3)所得代巯基的Nogo-66，室温反应6小时，将获得的凝胶浸泡在蒸馏水中，每隔2小时换一次水，2天后，将凝胶放在-20°C冰箱中冻冰处理12小时，然后真空冷冻干燥48小时，得到具有生物活性的可生物降解水凝胶。
[0057]实施例2
[0058]一种具有生物活性的可生物降解水凝胶的制备方法，步骤如下:
[0059]I)合成超低分子量聚乳酸:称取18克丙交酯加入硅烷化的玻璃聚合管中，加入0.0844克辛酸亚锡和1.105克的一缩二乙二醇(丙交酯与辛酸亚锡、一缩二乙二醇的摩尔比为28:0.02:1)在旋片真空泵作用下抽除二氯甲烷及残存的氧气、水汽后，真空封管，置于140°C油浴锅中反应24小时，制得超低分子量聚乳酸(数均分子量3994);
[0060]2)制备聚(丙交酯-co-环氧乙烷-co-富马酸):将18g聚乙二醇(数均分子量4000)和2g步骤I)所得超低分子量聚乳酸加入三口烧瓶中，加入150mL 二氯甲烷，然后置于_5°C的低温恒温反应浴中，搅拌的同时对体系充氮，待搅拌均匀形成溶液后依次滴加30mL三乙胺的二氯甲烷溶液(浓度为0.0377g/mL)和30mL富马酰氯的二氯甲烷溶液(浓度为0.0344g/mL)(摩尔比PEG:富马酰氯:三乙胺=2:3:5)，滴加完毕后于_5°C继续反应6小时，然后将三口烧瓶置于室温下反应12小时，反应完成后，旋转蒸发移除溶剂，将剩余物溶解在无水乙酸乙酯中，过滤除去沉淀，将滤液旋转蒸发分离出乙酸乙酯，剩余物质采用乙醚沉淀，沉淀物于室温下真空干燥移除溶剂乙醚得到聚(丙交酯-CO-环氧乙烷-CO-富马酸)，产物于-20°C保存，备用；
[0061]3)制备代巯基的Nogo-66:将Ig 2_巯基丙酸溶解于10mL四氢呋喃中得到0.01g/mL的巯基丙酸溶液，加入4.856g 二环己基碳二亚胺和2.7108gN-羟基琥珀酰亚胺，活化2小时后加入106.48g Nogo-66多肽和1.8266g N, N- 二异丙基乙胺，室温下反应6小时后加入正己烷，沉淀物分离、干燥得到代巯基的Nogo-66 ;
[0062]4)合成多肽交联剂(Ac)2-KYIGSRG(其氨基酸序列分别为KYIGSRG，GIKVAV，R为精氨酸，S为丝氨酸，G为甘氨酸，I为异亮氨酸，K为赖氨酸，Y为酪氨酸，V为缬氨酸，A为丙氨酸，Ac为丙烯酸残基):方法与实施例1相同。
[0063]5)合成末端含双键的GIKAVAK-Ac多肽:方法与实施例1相同。
[0064]