分子赋予有益属性，例如核酸酶抗性或 增大的跨细胞膜的能力。所述核酸或核苷酸序列可以是单链的、双链的，可能包含单链和双 链部分二者，并可能包含三链部分，但优选双链DNA。
[0054] 可以对DNA和RNA做出各种修饰；因此，术语"核酸分子"或"核酸序列"涵盖了经 化学、酶解或代谢的修饰形式。例如，本发明核酸分子或核酸序列可以通过翻译后或转录后 修饰。
[0055] 本发明核酸序列编码SEQ ID NO: 1的蛋白。由SEQ ID NO: 1编码的多肽序列可以 由于翻译后或转录后修饰而被修饰，这取决于表达由SEQ ID NO: 1编码的多肽的宿主细胞。
[0056] 在本文使用"SEQ ID Ν0:Χ的蛋白"时，其中X为1、2、3、4、5或9,其表示具有示于 SEQ ID Ν0:Χ或如SEQ ID Ν0:Χ中所描述的氨基酸序列的蛋白，其中X为1、2、3、4、5或9。
[0057] 本文使用术语"多肽"或"蛋白"时表示肽、蛋白或多肽，其可以互换使用，且包 含给定长度的氨基酸链，其中氨基酸残基由共价肽键连接。但是，本发明还包括所述蛋 白/多肽的拟肽（其中氨基酸和/或肽键已被功能类似物取代），并且除了 20种基因编 码的氨基酸，还包括如硒代半胱氨酸。肽、寡肽和蛋白可以被称为多肽。如所述，术语多 肽和蛋白在本文经常互换使用。术语多肽还指且不排除多肽的修饰。修饰包括糖基化、 乙酰化、酰化、磷酸化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素共价连接、血红素共价连接、核苷酸 或核苷酸衍生物共价连接、脂质或脂质衍生物共价连接、磷脂酰肌醇连接、交联、环化、形 成二硫键、脱甲基作用、形成共价交联、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸盐、formulation、γ 羧基化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水 解处理、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸盐化、转移RNA介导的添加氨基酸至蛋 白如精氨酰和泛素化；例如参见 PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd Ed. , T. E. Creighton, ff. H. Freeman and Company, New York (1993) ；POST-TRANSLATIONAL ⑶VALENT MODIFICATION OF PROTEINS，B.C.Johnson, Ed. ,Academic Press，New York (1983), pgs. 1-12 ；Seifter,Meth. Enzymol. 182(1990) ；626-646, Rattan, Ann. NY Acad. Sci. 663(1992) ;48-62。
[0058] 本发明所述蛋白示于SEQ ID NO: 1、2、3、4、5或9。因此，本发明提供示于SEQ ID N0:l、2、3、4、5 或 9 的蛋白。
[0059] 术语"表达"或"核酸序列表达"意为特定核酸或特定基因构建体的转录。术语"表 达"或"核酸表达"尤其意为核酸序列或基因构建体的转录，如包含SEQ ID NO: 1的核酸的 载体转录为结构RNA(rRNA，tRNA)或mRNA，具有或不具有随后将后者翻译为蛋白。优选地， 所述蛋白随后被翻译。所述过程包括DNA的转录以及对产生的RNA产物的处理。所述mRNA 随后被翻译为多肽链，多肽链最终被折叠为最终的多肽/蛋白。蛋白表达通常被蛋白组学 研宄者用来指示特定细胞或组织中一种或多种蛋白的存在和丰度的测量。可通过多种方 法测量细胞的蛋白表达。例如采用免疫组织化学和蛋白印迹分析。本文所得结果可以通过 用载体转染的细胞相比于模拟转染的细胞来评估，所述载体包含本发明的核酸。较高表达 (宿主）细胞显示染色，其与在相同条件下的对照细胞（模拟）相比，在例如强度方面提高 了。mRNA表达也可以通过例如RT-PCR衡量。本领域技术人员已知如何测定细胞的某一蛋 白或mRNA表达的不同技术。同样预见到由于翻译后或转录后修饰得到的蛋白。
[0060] 多肽的"变体"涵盖多肽，其中一个或多个氨基酸残基被置换，相比于所述多肽，优 选保守置换，其中所述变体优选能够与抗体的Fc部分结合（参见Fe YR结合）以及可能 与淋巴细胞结合。此类变体包括缺失、插入、倒位、重复以及根据本领域已知一般规则选择 的置换。例如Bowie, Science 247:(1990) 1306-1310中提供了关于如何制成表型沉默的 氨基酸置换的教导，其中该作者指明，研宄氨基酸序列耐受性变化有两个主要策略。优选的 FcγRIIB变体示于SEQIDN0:l、2、3、4、5或9，优选为示于SEQIDN0:l的FcγRIIB。
[0061] 这里使用的术语"Fc伽马受体"可以与"FcgR"或"Fey受体"或"FcyR"互换， 其包括膜性Fcy R和可溶的（即Fcy受体的细胞外部分）Fcy R。Fc伽马受体属于蛋白的 免疫球蛋白超家族，其发现在许多造血谱系上。如它们的命名所表明，Fc受体识别和结合 于抗体Fc (片段、结晶）部分，即与抗体的两个重链的两个C-端结构域相对应并且通常与 效应分子和细胞相互作用的片段。
[0062] 优选地，根据SEQ ID NO: 1的蛋白是可溶性Fcy R。同样优选地，根据SEQ ID N0:2、 3、4、5或9的蛋白是可溶性FcyR。还优选地，根据SEQ ID N0:l、2、3、4、5或9的蛋白在合 适液体中可溶，例如水性液体。
[0063] Fe γ R识别IgG抗体。人体中存在4个IgG亚类，按照它们在血清中的丰度命名 (1861，1862，1863，1864，其中1861为丰度最大的1 86类型）。人体中存在的？(^1?分为 三类：Fcy RI (CD64)，Fcy RII (CD32)和 Fcy RIIIA(CD16)。进一步地，FcyR 出现各种同 工型，即功能相似的Fcy受体，该受体具有类似但不相同的氨基酸序列。所述同工型包括 Fe γ RIA、Bl、Β2、C ;Fc γ RIIA1-2、Bl-3、C 以及还包括若干等位基因 （Fe γ RIIal-HR、-LR ; Feγ RIIlb-NAl、-NA2) (van de Winkel 和 Capel，Tmmunol, Today 1993,14:215-221)〇 FcyR的不同种类和同工型在它们对IgG的亲和力方面，尤其在对不同IgG亚类的亲和力 方面，可能并不相同。通常，FcyR作为I型跨膜蛋白或者以可溶形式出现，但是还存在 Fe γ RIII (Fe γ RIIIB)的糖基化磷脂酰肌醇锚定形式。
[0064] "可溶Fey R"还表示为"sFeyR"。如本文使用的术语"可溶Fcy受体"和类似术 语指的是Fcy受体的细胞外部分。这部分能够溶解于液体。一般而言，任何Fcy类的溶 解形式、同工型或等位基因能够通过前面的"s"识别，例如，s⑶32或sFc γ RII是指可溶的 Fe γ RII受体。通常，与膜性（即膜结合的）Fe γ R不同，可溶的Fe γ R不包含跨膜区或胞质 尾。
[0065] 优选地，本发明的Fe YR具有人起源或是人的Fcy R。术语"人起源"以其最广义 解释。一般而言，从氨基酸序列和/或结构上看，该术语表示Fe YR(或其区域或片段）效 仿或类似人Fe γ R (例如，人体内发现的蛋白）。
[0066] 或者，所述"具有人起源的"Fe γ R可以是重组Fe γ R，其通过在宿主细胞中重组核 酸表达得到，例如，记载于 Sondermann 和 Jacob (1999)，Bioll，Chem, 380 (6)，717-721。简 单来说，从生物体得到感兴趣的基因，然后引入载体如质粒或病毒中，然后其用于将基因转 递至表达重组基因并产生重组蛋白产物的宿主细胞中。本领域技术人员能够容易地获知选 择哪个宿主细胞以获得例如适用于制备药物组合物的Fe γ R。例如在一些实施方案中，非 糖基化的Fe γ R可能是所需的。而后本领域技术人员可以选择原核宿主细胞用于Fe γ R表 达，所述原核宿主细胞中Fe YR避免了蛋白质糖基化所必需的酶机制。在一个实施方案中， 根据WO 00/32767所述，所述Fe γ R能够在原核生物中表达，随后经纯化和再折叠。
[0067] 在另一个实施方案中，在真核表达系统中能够简单而廉价地生产高纯度Fe γ R。可 以利用的系统包括拥有用于生产细胞外蛋白的专用装置的真核生物如B细胞。其它可选的 真核表达系统包括并不限于CHO或HEK细胞。因此，所述可溶的Fe γ R为重组的、可溶的、 糖基化的Fey R。
[0068] 本文所述的Fe γ R还包括这样的Fe γ R，与野生型Fe γ R比较，所述Fe γ R已在氨 基酸序列上被修饰或改变，包括例如添加的糖基化位点或类似情况。此外，还设想了 Fe γ R 的非糖基化形式，并作为Fe γ R的优选实施方案。
[0069] 本发明所述Fe γ受体包括如示于SEQ ID NO: I (SM101的氨基酸序列，本文还指为 变体3)中的至少一个氨基酸序列。根据SEQ ID N0:6(核酸序列编码SM101，本文还指为变 体3)的核酸序列的至少一个编码本发明所述Fcy R。能够在表达载体中克隆这些序列，从 而通过重组表达产生相应的Fe γ R。
[0070] 本发明还涉及包含编码根据SEQ ID NO: 1的蛋白的核酸序列的载体。此类载体可 以是，如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或另外例如在遗传工程中惯常使用的载体，手术载体可以 包含其他基因例如标记基因，所述标识基因允许所述载体在合适条件下和合适宿主细胞中 选择和/或复制。在一个优选实施方案中，所述载体为表达载体，其中本发明核酸分子被可 操作地连接至表达控制序列，所述表达控制序列允许在如本文所述的原核或真核宿主细胞 中表达。如本文使用的术语"可操作地连接"是指在一个或多个表达控制序列和多核苷酸 中的编码区之间的连接，所述连接的方式使得在与表达控制序列相容的条件下实现表达。
[0071] 因此本发明核酸分子可被插入到若干可购买得到的载体中。非限制性实例包括 与哺乳动物细胞相容致的质粒载体，例如pUC、pBluescript (Stratagene)、pET (Novagen)、 pREP (Invitrogen)、pCRTopo (Invitrogen)、pcDNA3 (Invitrogen)、pCEP4 (Invitrogen)、 pMClneo (Stratagene)、pXTl (Stratagene)、pSG5 (Stratagene)、EB〇-pSV2neo、pBPV-1、 pdBPVMMTneo、pRSVgpt、pRSVneo、pSV2-dhfr、pUCTag、pIZD35、pLXIN 和 pSIR(Clontech)和 PlRES-EGFP(Clontech)。优选地，本发明核酸分子被插入到载体"pET"中处于IPTG诱导型 T7-启动子控制下。杆状病毒载体例如pBlueBac、BacPacz杆状病毒表达系统（CL0NTECH) 和MaxBacTM杆状病毒表达系统、昆虫细胞和方案（Invitrogen)，能够购买得到并且也 可用于高产量生产生物活性蛋白。（还参见，Miller(1993), Curr. Op. Genet. Dev.，3, 9 ; 0' Reilly, Baculovirus Expression Vectors ：A Laboratory Manual, p. 127) 〇 另外，原核 载体如pcDNA2 ;以及酵母载体如pYes2均为本发明其它适用载体的非限制性实例。
[0072] 本申请优选的其它表达载体是本领域熟知的在果蝇属细胞中表达蛋白的那些， 例如Invitrogen的DES2-系列。优选地，所述果幡属细胞表达载体是pMTBiP/V5-His B(Invitrogen)。所述pMT/BiP/V5-His载体提供下述另外的特点。所述载体尺寸小 (93.