4· 88 (2H, s, s)，3· 73 (3H, s)，2· 94 (2 Η, s), 2. 54 - 2. 33 (9Η, m), 2. 30 (3Η, s), 2. 30 - 2. 03 (4Η, m), 1. 96 - 1. 83 (1Η, m), 1. 58 - 1. 44 (1Η, m).
[0041]
[0042] 化合物 5 :淡黄色油状物。MS(EI) [M+H]+m/z :307. 2380.1 H NMR(300MHz, CDCl3) δ (ppm) : 7. 00 (1H, br s), 4. 98, 4. 87 (2H, s, s), 3. 73 (3Η, s, ), 2. 93 (2Η, s), 2. 73- 2. 54 (1Η, m), 2. 59 - 2. 41 (8Η, m), 2. 41 - 2. 03 (5Η, m), 1. 93 - 1. 85 (1Η, m), 1. 56 -1. 43 (1Η, m), 1. 06 (6Η, d, J=6. 5Ηζ).
[0043]
[0044] 化合物 6 :淡黄色油状物。MS(EI) [M+H]+m/z:321. 2536. IH NMR(300MHz, CDCl3) δ (ppm) : 6. 99 (1H, br s), 4. 99, 4. 90 (2H, s, s), 3. 73 (3H, s), 2. 98 (2H, s), 2. 76-2 .45 (10H, m), 2. 42 - 2. 35 (1H, m), 2. 35 - 2. 03 (4H, m), 1. 96 - 1. 85 (1H, m), 1. 66 -I. 29 (5H, m), 0. 93 (3H, t, J=7. 3Hz).
[0045]
[0046] 化合物 7 :白色固体。熔点 33-34 °C。MS(EI) [M+H]+m/z :305. 2223. IH NMR (300MHz, CDCl3) δ (ppm) : 6· 99 (1H, br s)，5· 96 - 5· 80 (1H, m)，5· 26 - 5· 10 (2H, m)，4· 98， 4.87(2H，s，s)，3.73(3H，s)，3.01(2H，d，J=6.6Hz)，2.94(2H，s)，2.65 - 2.40(8H，m)，2.40-2· 04 (5Η，m)，L 95 - L 83 (1Η，m)，L 58 - L 43 (1Η，m) ·
[0047]
[0048] 化合物 8 :淡黄色固体。熔点 55-57 °C。MS(EI) [M+H]+m/z :309. 2174. IH MMR(300MHz，CDCl3)S(ppm):7.00(lH，brs)，4.98,4.89(2H，s，s)，3.73(3H，s)，3.66-3. 53 (2H，m)，2. 95 (2H，s)，2. 60 - 2. 36 (10H，m)，2. 36 - I. 87 (6H，m)，I. 58 - I. 42 (1H，m) ·
[0049]
[0050] 化合物 9 :白色固体。熔点 53-55 °C。MS(EI) [M+H]+m/z :355. 2381. IH NMR(300MHz，CDC13) δ (ppm) :7. 33-7. 28 (5H，m) ,7.01 (lH，br s)，4.99, 4.88 (2H，s，s) ,3.74( 3H，s)，2. 95 (2H，s)，2. 62-2. 40 (10H，m)，2. 40-2. 05 (5H，m)，I. 94-1. 85 (1H，m)，I. 57-1. 43 (I H, m).
[0051]
[0052] 化合物 10 :淡黄色油状物。MS(EI) [M+H]+m/z:250. 1801. IH NMR(300MHz, CDCl3) δ (ppm) : 6. 99 (1H, br s), 5. 00, 4. 84 (2H, s, s), 3. 73 (3H, s), 3. 07 (2H, s), 2. 55-2. 43 (4H, m) ，2· 43-2. 04 (5H, m,)，I. 95-1. 85 (1H, m)，I. 81-1. 67 (4H, m)，I. 56-1. 44 (1H, m) ·
[0053]
[0054] 化合物 11 :淡黄色油状物。MS(EI) [M+H]+m/z:224. 1645. IH NMR(300MHz, CDCl3) δ (ppm) :7. 00 (1H, br s), 4. 98, 4. 88 (2H, s, s), 3. 73 (3H, s), 2. 87 (2H, s), 2. 51 -2· 24 (4H, m)，2· 19 (6H, s)，2· 14-2. 15 (1H, m)，I. 95 - I. 84 (1H, m)，I. 54 - I. 45 (1H, m) ·
[0055] 实施例5
[0056] 用MTT法测定了目标化合物对人宫颈癌细胞HeLa，人肝癌细胞H印G2,人结肠癌细 胞HCT116,人肺癌细胞A549,人黑色素瘤细胞A375-S2,人纤维肉瘤细胞HT1080和人原髓细 胞白血病细胞HL60七类肿瘤细胞的增殖抑制作用。
[0057] 1)贴壁细胞选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰酶消化后，用含10%小牛血清 的RPMI 1640培养基配成5 X IO4Ail的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔100 μ I，37°C， 5% CO2培养24h。实验组更换新的含不同浓度被测样品（10~100 μ mol · L-1)的培养液， 对照组则更换含等体积溶剂的培养液，每组设3个平行孔，37°C，5% CO2培养48h。弃去上 清液，用PBS小心洗2次，每孔加入100 μ 1新鲜配制的含0. 5mg/ml MTT的培养基，37°C继 续培养4h。小心弃去上清，并加入150 μ I DMS0,用微型振荡器混匀IOmin后，用酶标仪在 492nm处测定光密度值（OD)。
[0058] 2)悬浮细胞选用对数生长期的细胞，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基配成 IXioVml的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔50 μ 1，37°C，5% CO2培养24h。实验组 加入含不同浓度被测样品（10~IOOymol · L-1)的培养液50μ 1，对照组则加入含等体积 溶剂的培养液，每组设3个平行孔，37°C，5% CO2培养48h，每孔加入10 μ 1新鲜配制的含 511^/1111]\0'1'的培养基，371：继续培养411。用三联液（5051(^，101!1(：10.11^，异丁醇51^，用 蒸馏水稀释至IOOmUlOO μ 1溶解结晶，37°C孵育12h。用酶标仪在492nm处测定光密度值 (OD)。
[0059] 按以下公式计算药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率（Inhibition Rate, IR%):
[0060] IR%= (l-〇Dsample/ODcontrol) X 100%
[0061] 用ICPL 0. 0软件计算药物的半数抑制浓度（IC5Q)。
[0062] 结果见下表，所有目标化合物抑制七种肿瘤细胞株的IC5tl值均小于紫苏酸甲酯， 因此，在紫苏酸甲酯结构中引入含氮基团可提高化合物的体外抗肿瘤活性。
[0063] 表1式I化合物和紫苏酸甲酯对肿瘤细胞的IC5tl值
【主权项】
1. 一种紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐，具有式I的结构：其中，Ri、R2选自烷基，Q-C；烷氧基；或NR^为5-10元含氮杂环；或NR^为带 有取代基的哌嗪基，所述取代基为CfQ烷基、CfQ烷氧基苯基、含有烯键的q-c;烷基、含 有炔键的CfQ烷基、含有羟基的CfQ烷基、含有苯基的CfQ烷基；带有取代基的氨基，所 述取代基选自烷基、(：3-(：7环烷基。2. 如权利要求1所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐，其特征在于，&、R2选自A-C； 烷基，Q-C；烷氧基；或NR^为5-10元含氮杂环；或NR&为带有取代基的哌嗪基，所述取 代基为q-C；烷基、CfC4烷氧基苯基、含有烯键的q-C；烷基、含有炔键的CfC4烷基、含有羟 基的CfC4烷基、含有苯基的CfC4烷基；带有取代基的氨基，所述取代基选自：CfC4烷基、 (：3-(：6环烷基。3. 如权利要求1所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐，其特征在于，Ri、R2选自：甲基、 乙基；或NR^为5元含氮杂环；或NR^为带有取代基的哌嗪基，所述取代基为甲基、乙基、 丙基、异丙基、丁基、稀丙基、羟基乙基、苯基甲基、苯基乙基、甲氧基苯基、乙氧基苯基。4. 如权利要求1所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐，其特征在于，选自5. 如权利要求1所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其药用盐，其特征在于，所述的盐指 常规的酸加成盐。6. 如权利要求5所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其药用盐，其特征在于，所述的酸为 有机酸或无机酸，选自：盐酸，溴酸，氢碘酸，硫酸，磷酸，硝酸，乙酸，酒石酸，水杨酸，甲磺 酸，丁二酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸，马来酸。7. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-6任何一项所述的紫苏酸甲酯含氮 衍生物及其药用盐和药学上可被接受的赋形剂。8. -种如权利要求1所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐的制备方法，其特征在于： 合成路线如下：NR^如权利要求1所述。9. 权利要求1-6任何一项所述紫苏酸甲酯含氮衍生物及其盐或权利要求8所述的药物 组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为宫颈癌、肝癌、纤维肉瘤、 结肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、淋巴癌、慢性髓原白血病、原髓细胞白血病。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及一系列紫苏酸甲酯含氮衍生物及其制备和应用，具有如式Ⅰ结构特征。本发明还包括所述紫苏酸甲酯含氮衍生物药学上可接受的盐和溶剂化物，以及含有所述紫苏酸甲酯含氮衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物，并可用于治疗癌症。本发明所述的紫苏酸甲酯含氮衍生物及其药用盐类具有较好的抗癌活性，其制备方法简单可行，易操作。
【IPC分类】C07C229/46, A61P35/02, C07D241/04, C07C227/08, A61K31/215, A61K31/495, A61K31/40, C07D295/155, A61P35/00
【公开号】CN104945336
【申请号】CN201410120191
【发明人】惠子, 夏明钰, 张美慧, 徐莉英, 董金华
【申请人】沈阳药科大学
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2014年3月27日