仪器和软件；
[0035] 2)校准试剂选择滑块和校准10个柱子的滑块；
[0036] 3)开启自动冲洗功能将液体充满各个管子；
[0037] 4)用CPG填充所述滑块中的孔；并确定在合成开始前所填充的CPG正确以及所述 柱子中填充好的CPG含有对应的3'端的核苷酸，因为仪器合成寡核苷酸的顺序是从3'端 到5'端完成的；另外应当注意，加 CPG过程中不能突然触击滤膜，否则可能会有泄漏出现；
[0038] 5)将所述滑块安装到所述仪器上；
[0039] 6)合成开始前，输入所需要的序列作为主程序，按开始键开始运行；
[0040] 7)运行完后，将所述滑块从所述仪器卸下来，用戳子的细头端将所述柱子里的材 料和滤膜去除掉；操作人员将所述柱子滑块附到模型台架上，并安装稳固；用小收集管将 CPG收集好，进行下一步处理；
[0041] 8)将寡核苷酸与CPG分离，通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，用 PAGE方法纯化引物，用水稀释完后通过微量紫外分光光度计测定其含量。
[0042] 实施例4.阿尔海默氏症试剂盒的组建
[0043] 试剂盒包括如下组分：（1)引物；（2) DNA聚合酶；（3)聚合酶缓冲；(4) dNTP ; (5)探 针；（6)无菌去离子水；（7)DMS0。
[0044] 实施例5.荧光定量PCR反应体系的确定
[0045] 荧光定量PCR反应体系见下表，总体积为20 μ L。
[0046]
[0047] 实施例6.荧光定量PCR反应条件的确定
[0048] 经过反复实验，确定荧光定量PCR反应条件见下表：
[0049]
[0050]
[0051] 实施例7.试剂盒的操作及检测结果
[0052] 主要步骤如下：
[0053] (1)用血液基因组提取试剂盒提取样本的血液基因组DNA，用紫外分光光度计测 定DNA的浓度。
[0054] (2)以血液基因组DNA为模板，按照实施例5所提供的体系，分别加入试剂盒提供 的DNA聚合酶、引物等组分。
[0055] (3)打开荧光定量PCR仪，按照实施例6提供的反应条件设置程序，并设置加样顺 序（见图1)。
[0056] (4)运行程序，待程序结束后，从荧光定量PCR仪上读出结果，进行分析（见图2)。
[0057] 本文中使用的所有技术和科学术语，除非另有定义，具有本发明所属领域的普通 技术人员通常能够理解的含义。虽然与本文所述相似或等同的任何方法、装置和材料可以 被用于本发明的实施或检测，在此所描述的是优选的方法、装置和材料。
[0058] 在上述的说明书中针对一些优选实施方式进行了描述，并且为说明的目的而提供 了许多细节情况，然而本领域的技术人员应该能够理解到本发明可以有各种各样的变化和 更多不同的实施方式，而且本文所描述的细节可以有相当的变化而不会偏离本发明的精神 和范围。
【主权项】
1. 一种用于阿尔海默氏症基因检测的生物试剂，其包括：引物、探针、DNA聚合酶、聚合 P砲由rWTPnMqn丨〕丨》不苗古亩；7k_甘由_ 太31物I仞駐卞说31物I铂合.3. 根据权利要求2所述的试剂用于进行ApoE基因型检测的用途。4. 根据权利要求1或2所述的试剂，其中所述引物采用多核苷酸合成仪进行合成，包括 如下步骤： 1) 开启仪器和软件； 2) 校准试剂选择滑块和校准10个柱子的滑块； 3) 开启自动冲洗功能将液体充满各个管子； 4) 用CPG填充所述滑块中的孔，并确定在合成开始前所填充的CPG正确以及CPG含有 对应的3'端的核苷酸，另外，填充CPG过程中不能突然触击滤膜以免泄漏； 5) 将所述滑块安装到所述仪器上； 6) 合成开始前，输入所需要的序列作为主程序，并开始运行； 7) 运行完后，将所述滑块从所述仪器卸下来，去除所述柱子里的材料和滤膜，将所述柱 子滑块附到模型台架上并安装稳固，并将CPG收集于小收集管，进行下一步处理； 8) 将寡核苷酸与CPG分离，通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，用PAGE 方法纯化引物，用水稀释完后通过微量紫外分光光度计测定含量。5. 权利要求1或2所述的试剂的制备方法，其包括下述步骤： 1) 确定待测基因片段：根据科技文献的方向性报道初步选定候选基因片断，然后经研 发过程中与待检样本病理相关性的比较，最终确认与临床疾病最具相关性的待测基因片 断； 2) 根据所述待测基因片段设计所述引物和探针，并采用多核苷酸合成仪生产所述引 物； 3) 提取血液基因组DNA:用人血液基因组提取试剂盒提取病人组及对照组的基因组 DNA； 4) 确定荧光定量PCR扩增条件，其包括酶、引物、探针：不同组合的引物片断，根据实 验结果的特异性，敏感性等技术特征，反复试验，同时进行多条所述待测基因片断的检测反 应，最终确定包括所述引物、探针、所述酶的反应条件，其中，荧光定量PCR扩增的结果软件 来自动分析； 5) 进行重复性检测以进一步确定反应条件：通过大量实验，反复比较实验结果中包括 清晰度和灵敏性的因素，最终确定反应条件； 6)根据最终确定的所述反应条件，制备试剂盒，其组分包括：引物、探针、DNA聚合酶、 聚合酶缓冲、dNTP、DMSO以及无菌去离子水。6.采用权利要求1所述的试剂进行阿尔海默氏症基因检测的方法，其包括： 用血液基因组提取样本的血液基因组DNA，用紫外分光光度计测定DNA的浓度； 以所述血液基因组DNA为模板，按照荧光定量PCR反应体系分别加入试剂盒提供的DNA聚合酶、引物等组分； 打开荧光定量PCR仪，按照预定的荧光定量PCR反应条件设置程序，并设置加样顺序； 运行程序，待程序结束后，从荧光定量PCR仪上读出结果，进行分析。
【专利摘要】本发明提供了用于阿尔海默氏症基因检测的生物试剂及其制备方法和用于检测的用途。所述试剂的组分包括：引物、探针、DNA聚合酶、聚合酶缓冲、dNTP、DMSO以及无菌去离子水。所述试剂的制备方法包括：确定待测基因片段，根据所述待测基因片段设计并生产引物，提取血液基因组DNA，确定PCR扩增条件，进行重复性检测以最终确定反应条件，根据所述反应条件制备试剂。采用本发明的试剂可通过PCR基因扩增的方法进行阿尔海默氏症基因检测，实现对阿尔海默症的筛查和临床诊断。本发明的试剂用于基因检测的步骤简便、检测效率高、结果可靠。<pb pnum="1" />
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105018579
【申请号】CN201410175252
【发明人】钟建, 方平科
【申请人】天津安必森生物技术有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月28日