一种用于冻存固体培养丝状真菌的空心罩的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于菌种保藏技术研究领域，具体涉及一种用于冻存固体培养丝状真 菌的空心罩及冻存方法。
【背景技术】
[0002] 丝状真菌是重要的微生物菌种资源，许多类群的丝状真菌是科研或生产用菌株， 对人类生产生活产生了重要影响，具有较大的社会经济价值。对丝状真菌菌种资源的保藏 不仅保护了生物多样性，更为人类研究和利用这些菌种起到了重要作用。目前，微生物的保 藏主要有以下四种方法：（1)液氮超低温保藏法，该法同时适用于液体培养物和固体培养 物的保藏；（2)冷冻干燥保藏法，该法虽适用于液体和固体培养物的保藏，但两类培养物均 需先制备成符合保藏要求的菌悬液；（3)-80°C低温冻结保藏法，该法的操作同液氮超低温 保藏法类似，仅是保藏条件（主要是温度）不同；(4)定期移植保藏法，该法多用于固体培 养物的短期保藏，需定期对菌种复苏和再保藏，费时费力。其中，液氮超低温保藏法和-80°C 低温冻结保藏法因操作简易且保藏时间较长被广泛应用于各类微生物的保藏。
[0003] 用于保藏的丝状真菌多采用固体培养方式，主要因为固体培养易于真菌生长特 性的观察，便于发现污染，从而提高保藏的质量。目前，进行固体培养丝状真菌的保藏均 是划取或挑取菌块，或是制备成菌悬液然后进行冻存。PRO-LAB DIAGNOSTICS公司开发的 MICR0BANK冻存系统《用于固体培养丝状真菌的冻存时也是按照上述操作，需要先将划取 的菌块或菌悬液加入冻存溶液中，然后再加入有孔珠子进行混匀，细胞附着于有孔珠子内 部和外部的表面。这类冻存方法均存在一定的缺陷和局限性，主要是因为：①划取或挑取的 菌块用于菌种保藏时，菌块携带的培养基存在于冻存液中，进行菌种复苏时会将这些培养 基带入新的培养基中，对有特殊要求的菌种培养会产生不利影响；②固体培养的丝状真菌 在制备菌悬液时污染风险较大，易导致保藏失败。
[0004] 目前关于丝状真菌的冻存方法已有报道，但经文献检索，未发现与本实用新型内 容相类同的公开文献报道。 【实用新型内容】
[0005] 本实用新型的目的在于改进现有技术之不足，提供一种用于冻存固体培养丝状真 菌的空心罩及使用该空心罩的操作方便、成本低廉且能够满足特殊培养要求的固体培养丝 状真菌的冻存方法，为丝状真菌的保藏提供技术支持。
[0006] 本实用新型第一方面涉及一种用于冻存固体培养丝状真菌的空心罩3,其底部34 为一平面且其内部具有与所述底部34连通的空心33。
[0007] 在本实用新型优选的实施方案中，所述空心罩3为半球状空心罩、圆台状空心罩、 圆柱状空心罩、圆锥状空心罩或长方体状空心罩。
[0008] 在本实用新型优选的实施方案中，所述空心罩3的罩面32上布有棘刺31。该棘刺 31的形状不受限制，直立状、弯曲状或多枝杈状均可。
[0009] 在本实用新型优选的实施方案中，所述棘刺31的长度为lmm-4mm。
[0010] 在本实用新型优选的实施方案中，所述空心罩3的直径在3mm~6mm之间。
[0011] 在本实用新型优选的实施方案中，所述空心罩3由树脂材料制成。
[0012] 本实用新型第二方面涉及一种用于固体培养丝状真菌的冻存方法，该方法包括下 述步骤：
[0013] a.制备固体培养基平板并接种待保藏丝状真菌；
[0014] b.灭菌处理根据本实用新型第一方面所述的空心罩；
[0015] c.将所述空心罩底部向下置于待保藏丝状真菌接种点周围的固体培养基表面；
[0016] d.培养所述待保藏丝状真菌，至丝状真菌生长覆盖所述空心罩的罩面或所述空心 罩罩面上的棘刺，得到长有所述待保藏丝状真菌的空心罩；
[0017] e.将上述长有所述待保藏丝状真菌的空心罩3转移至冻存溶液中，混匀后将所述 待保藏丝状真菌菌种冻存。
[0018] 其中，该冻存方法中涉及的固体培养基平板制备、灭菌、菌种接种、菌种培养、菌种 冻存等均采用本技术领域常规操作，本文不再赘述。
[0019] 在本实用新型优选的实施方案中，在上述步骤c中，所述空心罩与所述待保藏丝 状真菌接种点的距离为0. 3cm~I. 0cm。
[0020] 在本实用新型优选的实施方案中，步骤e中转移的所述长有所述待保藏丝状真菌 的空心罩的数量为4-6个。
[0021] 当冻存的丝状真菌需要进行复苏时，按照常规操作复苏菌种后直接取出所述空心 罩接种至相应的培养基即可。
[0022] 与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于：
[0023] 1、本实用新型的用于冻存固体培养丝状真菌的所述空心罩3的罩面32上布满的 棘刺31既能够起到附着菌丝的作用，又能起到转移菌丝的作用，可直接用于菌种的液体冻 存，不需要划取或挑取菌块以及制备菌悬液等操作，有效避免了冻存时菌块对固体培养基 的携带和制备菌悬液可能带来的污染。
[0024] 2、本实用新型的用于冻存固体培养丝状真菌的所述空心罩3由树脂材料制成，可 以直接进行高温灭菌，且可以反复使用，环保价廉。
[0025] 3、本实用新型的冻存方法具有操作方便、成本低廉且能够满足特殊培养要求的优 点，为丝状真菌的保藏提供技术支持。
【附图说明】
[0026] 图1为本实用新型的用于冻存固体培养丝状真菌的空心罩的结构示意图。
[0027] 图2为丝状真菌在固体培养基上与所述空心罩共培养的示意图。
[0028] 其中，各附图标记具有以下含义：
[0029] 1-固体培养基；2-待保藏丝状真菌接种点；3-空心罩；4-平板；31-棘刺；32-罩 面；33-空心；34-底部。
【具体实施方式】
[0030] 以下结合附图和具体实施例进一步说明本实用新型的内容，但不应理解为对本实 用新型的限制。在不背离本实用新型精神和实质的情况下，对本实用新型方法、步骤或条件 所作的修改或替换，均属于本实用新型的范围。
[0031] 实施例1 :黄曲霉的冻存
[0032] 1.配制沙氏葡萄糖琼脂培养基，高温高压灭菌后在超净工作台内倒入适量上述培 养基至无菌平板中，待其自然冷却，得到沙氏葡萄糖琼脂培养基固体平板；
[0033] 2.从冻存管或固体培养基平板上接种黄曲霉至所述沙氏葡萄糖琼脂培养基固体 平板上；
[0034] 3.用镊子将灭菌后的所述空心罩放置于黄曲霉接种点的周围，得到共培养平 板（如图2所示）；其中所述空心罩直径4_，所述空心罩与所述黄曲霉接种点的距离为 1.0 cm ;其中，所使用的空心罩3如图1所示，其为半球状空心罩，其由树脂材料制成，其底部 34为一平面且其内部具有与所述底部34连通的空心33,其罩面32上布有棘刺31。
[0035] 4.将所述共培养平板放置于26°C恒温培养箱内培养3天~5天，至菌丝生长覆盖 至所述空心罩罩面上的棘刺，得到覆盖有菌丝的空心罩；
[0036] 5.吸取ImL 15% (v/v)甘油冻存液加入冻存管内，然后用无菌镊子取4个~6个 所述覆盖有菌丝的空心罩放入冻存液内；
[0037] 6.盖上所述冻存管的管盖，轻轻混匀数次后将所述冻存管放入程序降温盒内，进 行后续的冻存操作完成菌种的冻存。
[0038] 实施例2 :淡紫拟青霉的冻存
[0039] 1.配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基，高温高压灭菌后在超净工作台内倒入适量上述 培养基至无菌平板中，待其自然冷却，得到马铃薯葡萄糖琼脂培养基固体平板；
[0040] 2.从冻存管或固体培养基平板上接种淡紫拟青霉至所述马铃薯葡萄糖琼脂培养 基固体平板上；
[0041] 3.用镊子将灭菌后的所述空心罩放置于淡紫拟青霉接种点的周围，得到共培养平 板；其中所述空心罩直径3mm，所述空心罩与所述淡紫拟青霉接种点的距离为0. 5cm ;
[0042] 4.将所述共培养平板放置于26°C恒温培养箱内培养3天~5天，至菌丝生长覆盖 至所述空心罩罩面上的棘刺空，得到覆盖有菌丝的空心罩；
[0043] 5.将ImL 15% (v/v)甘油冻存液加入冻存管内，然后用无菌镊子取4个~6个所 述覆盖有菌丝的空心罩放入冻存液内；
[0044] 6.盖上所述冻存管的管盖，轻轻混匀数次后将所述冻存管放入程序降温盒内，进 行后续的冻存操作完成菌种的冻存。
[0045] 其中，本实用新型实施例中涉及的黄曲霉（Aspergillus flavus)和淡紫拟青霉 (Paecilomyces Iilacinus)为常见的丝状真菌，能够从国内外的菌种保藏机构购买得到。
【主权项】
1. 一种用于冻存固体培养丝状真菌的空心罩（3)，其特征在于，其底部（34)为一平面 且其内部具有与所述底部（34)连通的空心（33)。2. 根据权利要求1所述的空心罩，其特征在于，其为半球状空心罩、圆台状空心罩、圆 柱状空心罩、圆锥状空心罩或长方体状空心罩。3. 根据权利要求1或2所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩的罩面（32)上布有棘 刺（31)〇4. 根据权利要求3所述的空心罩，其特征在于，所述棘刺（31)的长度为lmm-4mm。5. 根据权利要求1所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩（3)的直径在3mm~6mm之 间。
【专利摘要】本实用新型涉及一种用于冻存固体培养丝状真菌的空心罩及冻存方法，属菌种保藏技术研究领域。本实用新型是在现有固体培养丝状真菌的冻存方法基础上的改进。改进点在于：采用直径大小在3mm～6mm之间、罩面布满棘刺的空心罩与待保藏丝状真菌在固体培养基表面共培养，至丝状真菌生长覆盖空心罩的罩面，将覆盖待保藏丝状真菌的空心罩移至冻存液中完成菌种冻存。本实用新型的罩面布满棘刺的空心罩按常规方法用树脂材料制成。本实用新型的有益效果在于：有效避免了菌块对固体培养基的携带和制备菌悬液可能带来的污染，具有操作方便，成本低廉，且能够满足特殊培养要求的优点，为丝状真菌的保藏提供技术支持。
【IPC分类】C12M1/00, C12N1/14
【公开号】CN204918558
【申请号】CN201520531639
【发明人】米其利, 李雪梅, 桂永发, 管莹, 朱洲海, 夭建华, 楼牧梦, 高茜, 陈建华
【申请人】云南中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年7月21日