专利名称：一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置和方法
技术领域：
本发明涉及一种真菌的纯化装置和方法，特别涉及一种纯化被细菌污染的真菌的
装置和方法。
背景技术：
在自然界中，微生物经常是混生的，包括真菌与细菌的混生，但在科学研究和生产 上需要单一的微生物的纯培养物。对于被细菌污染的真菌菌丝体，现有的去除细菌的方法 有两类，第一类，可在培养基中加入抗生素等以化学方法抑制细菌。第二类，可使用一定的 装置去除真菌上的细菌，方法有3个，1、先将真菌接在琼脂平板上，然后加上一层琼胶培养 基，菌丝体可以穿透这层琼胶培养基在表面生长。这样可以把细菌和真菌分开。2、将真菌接 种在琼胶平板上，然后在上面加一片灭菌的盖玻片稍微向下压紧，使盖玻片和培养基之间 没有空隙，真菌的菌丝体可以穿过琼胶培养基而在盖玻片四周生长。3、利用玻璃环使真菌 和细菌分开，即用一般孢子萌发实验使用的玻璃环，用三根细短玻璃棒架空在培养皿的中 央，真菌的菌丝就从玻环的下面穿过培养基而生长到外面来，细菌则限制在环内(方中达 《植病研究法》)。 但上述方法对于严重污染和与真菌结合紧密的细菌的去除，效果不好。
发明内容
本发明为了解决现有技术存在的对严重污染和与真菌结合紧密的细菌的去除效 果差的问题，本发明提供了一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置和方法，可以有效、简便 的纯化被细菌严重污染的丝状真菌。 本发明的技术方案为一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置，该装置由封口膜、 纯化杯、纯化真菌收集层和生物纯化柱组成，封口膜覆盖在纯化杯的上口，纯化杯中悬挂设 有生物纯化柱，纯化杯的底部设有纯化真菌收集层；所述的生物纯化柱与纯化杯的侧璧、纯 化真菌收集层、生物封口膜之间留有0. 5 2cm的间隙。纯化杯可以采用烧杯、玻璃杯或耐 高温塑料杯等容器。 所述的封口膜是由防尘膜和一层中间设有接种口的耐高温塑料薄膜组成，接种口 直径小于纯化杯上口的直径，比如为直径1 3cm的小孔。所述的防尘膜可以为组织培养 封口膜或6 8层的纱布或6 8层的无纺布。 所述的生物纯化柱由基材和真菌培养液组成，基材为多孔材料，基材与真菌培养 液按照l : 1 2(W/W)的比例混合。所述的真菌培养液为植物组织浸出液、水、糖的混合 物。制成后尽快灭菌，112 115t:，灭菌30min待用，或短时冷藏(1 5tO，备用。所述 的基材为干燥树枝、珍珠岩、耐高温海绵或木屑中的一种。若用干燥树枝作为基材，则将干 燥树枝浸入真菌培养液10 24小时后即可，树枝的纵向垂直纯化杯底面。若采用珍珠岩、 海绵或木屑制备生物纯化柱时，则按基材与真菌培养液的l : 1 2(W/W)的比例将基材和 真菌培养液混合。
所述的纯化真菌收集层为植物组织浸出液、水、琼脂和/或糖组成。植物组织浸出 液可以是植物浸提或榨汁得到。将植物组织浸出液加入水、琼脂和/或糖制成。植物材料 可选用植物的块根、块茎、果实、茎叶等。所用糖为葡萄糖或蔗糖。纯化真菌收集层制成后 尽快灭菌，112 115t:，灭菌30min待用，或短时冷藏(1 5°C )，备用。
所述的纯化装置装配完成后，须立即将以112 115t:，灭菌30min，灭菌时纯化装 置竖放于灭菌锅内，灭菌完毕冷却备用。 使用所述的纯化被细菌污染的丝状真菌的装置纯化丝状真菌的方法，步骤为 第一步，以无菌操作方式，打开防尘膜，将被污染的丝状真菌从接种口接种入生物
纯化柱的顶端，重新盖上防尘膜，将接种了真菌的纯化装置在20 25t:下培养； 第二步，待真菌从生物纯化柱长出并在纯化真菌收集层上生长出时，以无菌操作
方式打开封口膜，将生物纯化柱取走或保留，将纯化真菌收集层上的真菌接种入斜面或平
板，完成丝状真菌的纯化。 原理本发明利用丝状真菌和细菌在对培养基养料的选择性利用和在物料间生长 特性的差异，将丝状真菌及其所带的细菌一同接种于特制的生物纯化柱上，通过一段时间 的生长，细菌留在生物纯化柱，而真菌长出生物纯化柱并生长于纯化真菌收集层，从而达到 方便有效的纯化被细菌污染的真菌的目的。
有益效果 (1)被细菌污染的真菌用本发明的方法和装置纯化后可达到完全无菌，特别适合 被细菌严重污染的真菌的纯化。
(2)纯化装置制作方法简单，制作材料价廉易得。
(3)对大批量真菌样品的纯化更能体现高效。
图1为本发明的纯化装置示意图， 其中1封口膜，2接种口 ， 3接种口外密封圈，4接种口内密封圈，5生物纯化柱吊 线，6生物纯化柱，7纯化杯，8纯化真菌收集层。
具体实施例方式
以下通过具体的实施例子结合附图对本发明作进一步描述。
实施例1
1制作纯化装置 (1)制取纯化真菌收集层选用马铃薯制取植物组织浸出液。将马铃薯去皮， 切成约1.0cmX1.0cm的小丁，按马铃薯与自来水以1 : 5 10 (W/W)的比例，加水煎 煮，沸腾30min，用纱布过滤煎出液，加水至原来水量，再按马铃薯煎出液蔗糖琼脂以
ioo : 2 : i.5(w/w)的比例混合溶化，即成固体真菌培养基，也就是纯化真菌收集层。配制
完成后尽快灭菌，115t:灭菌30min即可待用，或短时冷藏(1 5°C )，备用。 (2)制取真菌培养液与固体真菌培养基相比，只是不需要加入琼脂，也就是按马
铃薯煎出液蔗糖以IOO : 2(W/W)的比例配制即得到真菌培养液，灭菌后备用。 (3)制作生物纯化柱取直径1. 5 3cm长2 4cm的树段，若为活树段或潮湿的，则先行烘干，浸没入真菌培养液中10 24h，为防治微生物生长，可冷藏浸液。
(4)取直径5cm、高7cm的玻璃杯用作纯化杯7，放入厚约0. 5 2cm的纯化真菌收 集层8，用市售20 22号镀锌细铁丝作为生物纯化柱吊线5绕于生物纯化柱6上，将生物 纯化柱6悬挂于纯化杯7中，纵向竖立悬挂于纯化杯7中，生物纯化柱6距离纯化杯7的侧 璧、纯化真菌收集层8的表面和纯化杯口 0. 5 2cm，以耐高温的塑料薄膜如市售保鲜袋的 薄膜包盖在纯化杯口 ，用橡皮圈作为接种口内密封圈4将口扎紧，在纯化柱上方剪出或烫 出小孔形成接种口 2，再覆盖以6 8层的纱布或6 8层的无纺布或组织培养封口膜作为 防尘膜，用橡皮圈作为接种口外密封圈3将防尘膜扎紧在纯化杯7的口上。装配好的纯化 装置尽快灭菌，112 115t:灭菌30min，灭菌时纯化装置竖放于灭菌锅内，灭菌完毕冷却备 用。 2纯化方法 取上述制成的纯化装置，打开防尘膜，将待纯化的真菌培养物从接种口处接种于 生物纯化柱上，再次盖上防尘膜，将纯化杯放于20 25t:下培养。待真菌从生物纯化柱底 端伸出，并在纯化真菌收集层上长出后，打开封口膜1 ，将生物纯化柱取走或保留，将纯化真 菌收集层上的真菌接种入斜面或平板，完成丝状真菌的纯化。采用上述方法可以方便有效 的获得纯化的真菌。
实施例2 与实施例1类似，其不同的是，生物纯化柱6的制作方法。选用珍珠岩自来水煮沸 IO分钟后烘干或晾干，加入1 : 1(W/W)的真菌培养液，塞入1.5 2.5cm粗的耐高温塑料 管，管底一端以耐高温的塑网包住，防止珍珠岩流出，采用这一方法可以获得纯化的真菌。
实施例3 与实施例1类似，其不同的是，固体真菌培养基和真菌培养液的制作方法。取黄豆
芽研磨，用布挤出豆芽汁，按i : 5 : 100的比例加入豆芽汁、糖和自来水制成真菌培养液，
选用普通食用蔗糖。在真菌培养液中加入2% (W/W)琼脂制成固体真菌培养基。采用这一
方法可以获得纯化的真菌。 实施例4 与实施例1类似，其不同的是，固体真菌培养基和真菌培养液的制作方法。取苹果
或梨榨汁，纱布过滤后，按i : io的比例加入苹果汁或梨汁和自来水制成真菌培养液，不加
糖。在真菌培养液中加入2% (W/W)琼脂制成固体真菌培养基。采用这一方法可以获得纯
化的真菌。 实施例5 与实施例1类似，其不同的是，真菌纯化装置的封口膜8选用8层纱布。采用这一 方法可以获得纯化的真菌。
权利要求
一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置，其特征在于，该装置由封口膜(1)、纯化杯(7)、纯化真菌收集层(8)和生物纯化柱(6)组成，封口膜(1)覆盖在纯化杯(7)的上口，纯化杯(7)中悬挂设有生物纯化柱(6)，纯化杯(7)的底部设有纯化真菌收集层(8)；所述的封口膜(1)是由防尘膜和一层中间设有接种口(2)的耐高温塑料薄膜组成，接种口直径(2)小于纯化杯(7)上口的直径；所述的纯化真菌收集层(8)为植物组织浸出液、水、琼脂和/或糖组成。所述的生物纯化柱(6)由基材和真菌培养液组成，基材与真菌培养液按照1∶1～2(W/W)的比例混合，所述的基材为多孔材料。
2. 如权利要求1所述的一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置，其特征在于，所述的 基材为干燥树枝、珍珠岩、耐高温海绵或木屑中的任意一种。
3. 如权利要求1所述的一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置，其特征在于，所述的 防尘膜为组织培养封口膜或6 8层的纱布或6 8层的无纺布。
4. 如权利要求1所述的一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置，其特征在于，所述的 生物纯化柱(6)与纯化杯(7)的侧璧、纯化真菌收集层(8)、生物封口膜(1)之间留有O. 5 2cm的间隙。
5. 使用如权利要求1所述的纯化被细菌污染的丝状真菌的装置纯化丝状真菌的方法， 其特征在于，步骤为第一步，以无菌操作方式，打开防尘膜，将被污染的丝状真菌从接种口 (2)接种入生物 纯化柱(6)的顶端，重新盖上防尘膜，将接种了真菌的纯化装置在20 25t:下培养；第二步，待真菌从生物纯化柱(6)长出并在纯化真菌收集层(8)上生长出时，以无菌操 作方式打开封口膜(l)，将生物纯化柱(6)取走或保留，将纯化真菌收集层(8)上的真菌接 种入斜面或平板，完成丝状真菌的纯化。
全文摘要
本发明公开了一种纯化被细菌污染的丝状真菌的装置和方法。该装置由封口膜和纯化杯将真菌纯化层和生物纯化柱包装构成。其步骤为以多孔材料加入真菌培养液后制作生物纯化柱，以真菌固体培养基制作纯化真菌收集层，将被细菌污染的真菌接种于生物纯化柱上，利用丝状真菌和细菌在对培养基养料的选择性利用和在物料间生长特性的差异，将细菌滞留于生物纯化柱，而真菌长出生物纯化柱并生长于纯化真菌收集层，从而对被细菌污染的真菌实现方便有效的纯化。
文档编号C12R1/645GK101701179SQ20091023508
公开日2010年5月5日 申请日期2009年11月13日 优先权日2009年11月13日
发明者张建平 申请人:江苏科技大学