用于纯化蛋白质的方法和试剂与流程

文档序号:12505755阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于从样品纯化蛋白质的方法,所述方法包括:

将所述样品负载至色谱柱上,

用洗涤缓冲液洗涤所述柱,其中所述洗涤缓冲液具有80mS/cm或更高的电导率,以及

用洗脱缓冲液从所述柱洗脱所述蛋白质。

2.如权利要求1所述的方法,其中所述洗涤缓冲液包含选自由(NH4)2SO4、Na2SO4和CH3COONa组成的组的盐。

3.如权利要求2所述的方法,其中所述洗涤缓冲液包含约0.8M(NH4)2SO4的浓度。

4.如权利要求1所述的方法,其中所述洗脱缓冲液具有80mS/cm或更高的电导率。

5.如权利要求1所述的方法,其中所述洗脱缓冲液包含选自由NaCl、KCl和NaOAc组成的组的盐。

6.如权利要求5所述的方法,其中所述洗脱缓冲液包含约1MNaCl的浓度。

7.如权利要求1所述的方法,其中所述方法包括至少两个洗涤步骤。

8.如权利要求7所述的方法,其中第一洗涤步骤包括用具有2mS/cm或更小电导率的缓冲液洗涤所述柱。

9.如权利要求8所述的方法,其进一步包括第三洗涤步骤,其中所述第三洗涤步骤包括用具有2mS/cm或更小电导率的缓冲液洗涤所述柱。

10.如权利要求1所述的方法,其中所述蛋白质是酶。

11.如权利要求10所述的方法,其中所述酶是DNA酶或RNA酶。

12.如权利要求11所述的方法,其中所述DNA酶是重组DNA酶。

13.如权利要求10所述的方法,其中所述酶是DNA酶,并且其中所述方法中使用的所述缓冲液包含CaCl2

14.如权利要求13所述的方法,其中所述方法中使用的所述缓冲液包含1mM CaCl2

15.如权利要求1所述的方法,其中所述色谱柱是离子交换或混合模式的色谱柱。

16.如权利要求15所述的方法,其中所述混合模式的柱是多模式阴离子交换器。

17.如权利要求16所述的方法,其中所述混合模式的柱是Capto Adhere柱。

18.如权利要求1所述的方法,其中所述样品是细胞培养物样品。

19.如权利要求1所述的方法,其中所述负载样品的pH介于5.0与9.0之间。

20.如权利要求19所述的方法,其中所述负载样品的pH介于6.0与8.0之间。

21.如权利要求20所述的方法,其中所述负载样品的pH是约7.0。

22.如权利要求1所述的方法,其中所述负载样品的pH与所述蛋白质的pI相同或高于所述蛋白质的pI。

23.如权利要求1所述的方法,其中所述洗涤缓冲液的pH介于约5.0与约9.0之间。

24.如权利要求23所述的方法,其中所述洗涤缓冲液的pH是约7.0。

25.如权利要求1所述的方法,其中所述洗脱缓冲液的pH介于约5.0与约9.0之间。

26.如权利要求25所述的方法,其中所述洗脱缓冲液的pH是约7.0。

27.如权利要求1所述的方法,其中所述方法还包括在将所述样品负载至所述色谱柱上之前向所述样品添加清洁剂。

28.如权利要求27所述的方法,其中所述清洁剂是Triton X-100。

29.如权利要求28所述的方法,其中将所述清洁剂以0.5%的最终浓度添加至所述样品。

30.一种从细胞培养物样品纯化DNA酶的方法,所述方法包括:

向所述细胞培养物样品添加清洁剂;

将所述样品直接负载至混合模式的色谱柱;

用第一洗涤缓冲液洗涤所述柱;

用第二洗涤缓冲液洗涤所述柱;以及

用洗脱缓冲液从所述柱洗脱DNA酶。

31.如权利要求30所述的方法,其中所述第二洗涤缓冲液和所述洗脱缓冲液各自具有80mS/cm或更大的电导率。

32.如权利要求30所述的方法,其中所述第二洗涤缓冲液包含0.8M(NH4)2SO4

33.如权利要求30所述的方法,其中所述洗脱缓冲液包含1MNaCl。

34.一种试剂盒,其包括具有约80mS/cm或更大电导率的洗涤缓冲液以及具有约80mS/cm或更大电导率的洗脱缓冲液。

35.如权利要求34所述的试剂盒,其中所述洗涤缓冲液包含约0.8M(NH4)2SO4,并且所述洗脱缓冲液包含约1M NaCl。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1