0mL乙腊清洗。 阳100] (4)用氮气吹扫去除固相萃取小柱中残留的有机溶剂后，于60°C溫度下真空干燥 9h，制得氯酪石墨締基分子印迹固相萃取柱。 阳101] 上述实施例1~8中填料物质、填料配方及制备条件参数见表1。
[0102] 表1 :本发明实施例1~8填料组分及配方 阳 103]
[0104] 实施例9 :氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱的性能评价 阳105] 本实施例应用上述各实施例1~8制备的氯酪石墨締基分子印迹固相萃取柱对环 境水样中痕量2-氯酪、2, 4-二氯酪、2, 4, 6- Ξ氯酪和五氯酪进行富集与净化处理。分别准 确称取各氯酪化合物标准品10.0 mg于6个lOmL容量瓶中，用少量甲醇溶解并定容至刻度， 制备成1. Omg/血的氯酪标准储备液，置于4°C冰箱保存备用。分别采集100~lOOOmL环 境水样，加入适量1. Omg/血的氯酪标准储备液，使其浓度分别为0. 01 μ g/l，上样，保持流 速为1. 0血/min,用5血甲醇/水混合溶液（1:10, V/V)淋洗，除去杂质，再用10血5mmol/ L氨水甲醇溶液进行洗脱，洗脱液经氮气吹至近干，用甲醇溶解并定容至ImU采用液相色 谱-串联质谱化C-MS/M巧进行分析，结果如图1所示。 阳106] 为进一步评价本发明所述的氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱的性能，分别选 择Oasis?;HLB固相萃取柱和Clean-1扔石墨化炭黑固相萃取柱对水样中4种氯酪进行富集 检测，保持其它实验条件与氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱一致，结果如表2所示，相 比于商品化的固相萃取柱（Oasis* HLB固相萃取柱和Ciean-哗?石墨化炭黑固相萃取柱）， 采用本发明所述的氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱具有富集倍数高（100~1000倍）、 检出限低（0.01~0. 1 μ g/L)、回收率高巧1.2~108. 3% )、稳定性好（精密度为0.5~ 3. 6% )和重复利用率高等优点。 阳107] 表2 :氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱与商品化固相萃取小柱对4种氯酪的 富集性能比较 阳10引
[0109] 色谱条件： 阳 110]色谱柱：Shim-pack XR-0DS II (75mmX 2. 0mm i. d. , 2. 5 μ m);流速：0. 4mL/min ; 进样量：5. 0 μ L ;流动相：A相：5mmol/L醋酸锭水溶液，B相：乙腊/甲醇（4:1，V/V)。梯度 洗脱程序：0-4. 50min，35-90% 度）；4. 50-5. 50min，90% 度）点 50-6. 50min，90-35% 度）； 6. 50-7. 50min，35% 度）。 阳111] 质谱条件：
[0112] 离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；定量检测方式：多反应监测模 式（MRM);电喷雾电压（IS) :4500V;雾化气压力（GS1) :344. 8kPa(50.0 psi);辅助气流 速（GS2) :344. 8kPa(50.0 psi);气帘气压力（CUR) :275. 9kPa(40.0 psi);碰撞气（CAD): 41.4kPa(6. Opsi);离子源溫度灯EM) :650°C ;扫描时间：20mS;碰撞室出口电压（CXP): 10. 0V;碰撞室入口电压巧巧：10. 0V。上述四种氯酪类化合物的Q1/Q3离子对、碰撞能量 (C巧及去簇电压值巧数据见表3。
[0113] 表3 :4种氯酪类化合物的Q1/Q3离子对、去簇电压、碰撞能量及保留时间 阳114]
阳11引注：*定量离子。
[0116] 本发明所述的氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱，通过实验证明：该发明制备 工艺简单，成本低廉，得到的氯酪石墨締基分子印迹固相萃取小柱性能稳定，对环境水样中 残留的痕量2-氯酪、2, 4-二氯酪、2, 4, 6- Ξ氯酪和五氯酪具有良好的富集净化作用，且能 显著降低基质效应。
【主权项】
1. 一种氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱，包括空柱、筛板和填料，其特征在于：所 述填料由氯酚石墨烯分子印迹纳米粒子和常规固相萃取填料以质量比1:1~10混合而成， 该氯酸石墨稀分子印迹纳米粒子以石墨稀表面负载磁性Fe 304高分子材料为功能单元，以 待吸附的目标氯酚类化合物为模板分子。2. 如权利要求1所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱，其特征在于：所述常规 固相萃取填料为C1S、苯乙烯-聚苯乙烯共聚物、中性三氧化二铝和脂肪族季铵盐键合硅胶 中的至少一种。3. -种如权利要求1所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法：其特征 在于包括以下步骤： (1) 氯酸石墨烯基分子印迹纳米粒子的制备： (1. 1)制备高磁响应的单分散核壳结构磁性高分子微球：米用溶剂热法，将1. 0~ 3. 5gFeCl3 ·6Η20、70 ~100g 乙二醇、5. 0 ~6. 5g 乙酸纳和 1. 0 ~2. 0g 聚乙二醇混合，50°C 下搅拌溶解〇. 5~lh，随后将混合溶液加入至聚四氟乙烯高压釜中于200°C反应4~10h， 得到磁性四氧化三铁微球，然后称取50~100mg磁性四氧化三铁微球，加入80~120mL乙 腈超声分散〇. 5~lh，随后加入0. 2~0. 8g二乙烯苯（DVB)、0. 2~0. 8g甲基丙烯酸缩水 甘油酯（GMA)作为聚合单体和0. 01~0. lg偶氮二异丁腈（ABIN)作为引发剂，采用沉淀聚 合反应于60~100°C反应0. 5~5h，制备得到高磁响应的单分散核壳结构磁性高分子微 球； (1. 2)氧化石墨稀表面羧基活化：将100~150mg氧化石墨稀加入水中，超声分散3~ 4h，然后加入100~150mg 1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和80~90mg N-羟基 琥?白酰亚胺，室温下机械搅拌30~40min ; (1. 3)分子自组装：将20~50mL 10~50mmol/L待吸附的目标氯酚类化合物与50~ 100mL 100~200mmol/L乙二胺溶液混合，50°C温度下超声搅拌1~2h ; (1. 4)氯酚石墨烯基分子印迹复合材料的合成：将所述步骤（1. 1) (1. 2) (1. 3)所得的 反应溶液混合置于三口烧瓶中，80~85°C温度下超声搅拌2. 5~3h，此后采用乙酸/甲醇 混合液三次洗脱材料表面模板分子，经真空干燥即得到氯酚石墨烯基分子印迹复合材料； (2) 将10~100mg所述步骤⑴制得的氯酸石墨稀分子印迹纳米粒子与10~30mL有 机溶剂混合，超声分散10~30min至混合均匀后，转移至固相萃取空柱中，装填均匀后用筛 板封堵两端； (3) 将常规固相萃取填料与10~30mL有机溶剂混合，超声分散10~30min至混合均 匀后，转移至由步骤（2)获得的装有氯酚石墨烯分子印迹纳米粒子的固相萃取小柱中，并 使固相萃取小柱中氯酚石墨烯分子印迹纳米粒子与常规固相萃取填料的质量比1:1~10， 为装填均匀后，顶端用筛板封堵，用10~20mL酸性有机溶剂上柱清洗，然后用10~20mL 有机溶剂清洗； (4) 用氮气吹扫去除固相萃取小柱中残留的有机溶剂后，于20~60°C温度下真空干燥 1~12h，制得氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱。4. 如权利要求2所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述常规固相萃取填料为C1S、苯乙烯-聚苯乙烯共聚物、中性三氧化二铝和脂肪族季铵 盐键合硅胶中的至少一种。5. 如权利要求4所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述常规固相萃取填料为C1S。6. 如权利要求2所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、正己烷和丙酮中的至少一种。7. 如权利要求6所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述的有机溶剂为乙腈。8. 如权利要求2所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述酸性有机溶剂为甲酸、乙酸和三氟乙酸中的至少一种与乙腈的混合溶液。9. 如权利要求8所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在 于：所述酸性有机溶剂为甲酸与乙腈的混合液，并且甲酸与乙腈的体积比为1:10~50。10. -种如权利要求1所述的氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱在环境水样中痕量 氯酚类化合物的富集和净化中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱，包括空柱、筛板和填料，所述填料由氯酚石墨烯分子印迹纳米粒子和常规固相萃取填料以质量比1:1～10混合而成，该氯酚石墨烯分子印迹纳米粒子以石墨烯表面负载磁性Fe3O4高分子材料为功能单元、以待吸附的目标氯酚类化合物为模板分子；同时还涉及该氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱的制备方法和应用。该氯酚石墨烯基分子印迹固相萃取小柱比表面积大，吸附位点多，特异选择性强，富集效果好，能用于富集环境水样中残留的痕量氯酚类化合物，能达到较高的富集倍数并可显著降低基质效应，同时该分子印迹固相萃取小柱制备方法简单，工艺条件稳定，生产成本较低。
【IPC分类】G01N1/34, B01J20/26, G01N1/40, B01D15/20, B01J20/30
【公开号】CN105688444
【申请号】CN201410704548
【发明人】潘胜东, 金米聪, 陈晓红, 赵永纲
【申请人】宁波市疾病预防控制中心
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2014年11月27日