专利名称：啤酒中氨基酸的对乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛细管电泳定量检测方法
技术领域：
本发明涉及啤酒中的氨基酸的鉴定方法，特别是通过毛细管电泳技术对啤酒中氨基酸进行分离和定量检测的方法。
背景技术：
氨基酸是啤酒中的主要营养成分。啤酒中的氨基酸的种类和含量的多少是评价啤酒质量好坏的一个重要指标。
目前用于测定啤酒中的氨基酸的方法主要有高效液相色谱法[1]、气相色谱和质谱联用方法[2]，也有文献报道用核磁共振方法测定[3]。但是这些方法有一些缺点，如高效液相色谱方法使用的流动相一般是甲醇和乙腈，它们对人体都有很大的伤害而且对环境造成污染，而后两种方法仪器复杂而且极其昂贵。采用毛细管电泳仪进行的毛细管电泳因其具有分离效率高、分离速度快、进样量少及操作成本低等优点，越来越多地被用来作为食品中氨基酸的常规分析手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用对乙酰氨基苯磺酰氟衍生啤酒中氨基酸及毛细管电泳分离、定量检测的方法，主要任务是衍生啤酒中的氨基酸，并且使衍生产物能在毛细管电泳上分离和测定。
本发明的是这样实现的，啤酒中氨基酸的对乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛细管电泳定量检测方法，其特征是在已调pH为9.0-9.6的啤酒，加入对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混匀，在30℃-40℃的水浴中衍生化反应25-35分钟；进样至含有SDS和NaCl的硼酸缓冲液的毛细管电泳上分离和测定氨基酸的种类和含量。
所述的啤酒中加入的对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分别为啤酒容积的1/4和1/800。
所述的硼酸缓冲液中含有的SDS(生化试剂，Alfa Aesar)为140mmol/L，含有的NaCl为20mmol/L(生化试剂，国药集团)。
所述的毛细管电泳的毛细管电泳仪的毛细管总长为60cm，有效柱长为50cm，内径为50μm。
所述的毛细管电泳条件参数为毛细管内径为50μm，毛细管长度为50cm，电压为30kV，温度为25℃，压力进样0.5psi，5sec。
为了能够连续检测样品和保证检测结果的重现性，所述的进行毛细管电泳时，要对毛细管进行冲洗压力为20psi冲洗，按照冲洗目的的需要，冲洗的程序为A、对于新的毛细管在使用前进行的冲洗CH3OH1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，缓冲液 2min。
B、进样前对毛细管进行的冲洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，缓冲液 2min。
C、检测结束后对毛细管进行的冲洗0.1mol/L NaOH2min，
H2O 2min，空气 2min。
所述的进样前用0.22μm膜过滤。
本发明方法简单，工艺先进，分离效率高、分离速度快、进样量少，操作成本低。一般只需一些常用的试剂，所有试剂用量均很少，与传统的使用高效液相色谱方法相比分析成本低得多。通过建立重要的标准氨基酸对照电泳谱图，进而形成对啤酒中的氨基酸进行分离和检测。其有益效果具体表现在(1)衍生反应条件温和，最佳衍生反应温度为35℃，特别适合于对啤酒等生物样品的分析。
(2)样品用量少按照上述毛细管分离条件，每次进样所需样品只有几个nL，这样可以大大节约资源(3)分离时间短利用上述电泳参数，一个样品在14min内分离完成，而一般高效液相色谱至少要30min。
(4)自动化程度高只要在电泳仪上输入好设定的冲洗程序，进样及分离程序，电泳仪可以自动操作，无须操作人员的存在。
图1是20种常见的氨基酸柱前衍生化后的高效毛细管电泳图；图2是青岛啤酒中氨基酸的高效毛细管电泳图。
具体实施例方式
仪器与条件毛细管电泳仪，毛细管总长60cm，有效柱长50cm，内径50μm。20种氨基酸(生化试剂，国药集团)。SDS(生化试剂，AlfaAesar)。
实验步骤定量移取每种氨基酸(0.05mmol/L)40μL或0.8mL已调pH为9.3的啤酒至2mL的具塞磨口试管内，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混匀，塞紧后将其放入35℃恒温水浴中衍生化反应30分钟，用0.22μm膜过滤后，进样至含有SDS和NaCl的硼酸缓冲液的毛细管电泳上分离和测定氨基酸的种类和含量。表1是用本发明的方法测定的青岛啤酒中氨基酸的含量。
表1
权利要求
1.一种啤酒中氨基酸的对乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛细管电泳定量检测方法，其特征是在已调pH为9.0-9.6的啤酒，加入对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混匀，在30℃-40℃的水浴中衍生化反应25-35分钟；进样至含有SDS和NaCl的硼酸缓冲液的毛细管电泳上分离和测定氨基酸的种类和含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的啤酒中加入的对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分别为啤酒容积的1/4和1/800。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的硼酸缓冲液中含有的SDS(生化试剂，Alfa Aesar)为140mmol/L，含有的NaCl为20mmol/L(生化试剂，国药集团)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的毛细管电泳的毛细管电泳仪的毛细管总长为60cm，有效柱长为50cm，内径为50μm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的毛细管电泳条件参数为毛细管内径为50μm，毛细管长度为50cm，电压为30kV，温度为25℃，压力进样0.5psi，5sec。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征是进行毛细管电泳时，要对毛细管进行冲洗压力为20psi冲洗，按照冲洗目的的需要，冲洗的程序为A、对于新的毛细管在使用前进行的冲洗CH3OH 1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，缓冲液 2min。B、进样前对毛细管进行的冲洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，缓冲液 2min。C、检测结束后对毛细管进行的冲洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，空气 2min。
全文摘要
本发明公开了一种啤酒中氨基酸的对乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛细管电泳定量检测方法，在已调pH为9.0－9.6的啤酒，加入对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS－F)的乙醇溶液和甲醇，混匀，在30℃－40℃的水浴中衍生反应25－35分钟；进样至含有SDS和NaCl的硼酸缓冲液的毛细管电泳上分离和测定氨基酸的种类和含量。本发明方法简单，工艺先进，分离效率高、分离速度快、进样量少，操作成本低。一般只需一些常用的试剂，所有试剂用量均很少，与传统的使用高效液相色谱方法相比分析成本低得多。通过建立重要的标准氨基酸对照电泳谱图，进而形成对啤酒中的氨基酸进行分离和检测。
文档编号G01N27/447GK1825111SQ20061003907
公开日2006年8月30日 申请日期2006年3月21日 优先权日2006年3月21日
发明者瞿其曙, 汤晓庆, 胡效亚, 刘尹, 陆晓 申请人:扬州大学