专利名称：α－(N－磺酰氨基)乙酰胺衍生物作为β－淀粉样蛋白抑制剂的制作方法
发明的领域本发明提供新的具有药物和生理作用的α-(N-磺酰氨基)乙酰胺化合物，其药物组合物和使用方法。特别是本发明涉及α-(N-芳基磺酰氨基)乙酰胺，这种化合物具有独特的抑制β淀粉样肽(β-AP)产生的作用，因此能够防止在大脑中沉积的淀粉样蛋白质的累积。更具体地说，本发明涉及阿尔茨海默氏病(AD)的治疗。
发明的背景阿尔茨海默氏病是渐进性的神经变性疾病，其特征是记忆损伤和识别功能障碍。在病理学上AD以老年(神经)斑、神经原纤维缠结、在神经组织和脉管中淀粉样蛋白的沉积、突触体损失和神经元死亡为特征。这种疾病最普遍的形式是痴呆，目前被认为是继心血管疾病和癌症之后第三个导致死亡的疾病。用于阿尔茨海默氏病的费用是巨大的(在美国每年大约花费$1000亿)，包括病人和家属遭受痛苦及患者的生产力损失和管理费用。随着长寿人群的增加，AD的发病率将会明显增加，据估计到2020年美国将有超过一千万人患AD病，假如没有预防和治疗方法的话。最近估计65岁以上将有10％，85岁以上将有50％人口患病，目前还没有办法有效地预防AD或逆转临床症状和可以利用的有效的病理生理学(参见Selkoe，D.J.Ann.Rev.Cell Biol.，1994，10373-403)。
有很多理论涉及AD的病因学和病理学，这些理论或者是基于和其它疾病和症状的类似理论(例如慢病毒和铝理论)，或者基于病理学观察(例如胆碱能的，淀粉样的或缠结理论)。遗传学分析能够有效地区别这些竞争的理论，易于早期发病的AD和相关疾病的个体中β-淀粉样母体蛋白质(β-APP)突变的鉴定强烈地支持淀粉样变性基因理论。
对患者个体尸体解剖的脑组织或从神经外科标本得到的病理组织学检查揭示了在患者大脑皮质中存在淀粉样斑和神经纤维缠结，类似的变化也在21三体综合症(唐氏综合症)的患者中发现。生物化学和免疫学研究揭示淀粉样蛋白斑的主要蛋白成分是约39-43个氨基酸的4.2千道尔顿(kD)蛋白。这种蛋白称为Aβ，β-淀粉样肽，有时称为β/A4，本文称为Aβ。除了沉积于淀粉样斑以外，Aβ还在脑膜和主质动脉壁，小动脉，毛细血管中发现，和有时在小静脉中发现。近十年积累的使人确信的证据说明，Aβ是从类型1的整体膜蛋白，所谓的β-淀粉样母体蛋白(APP)(Selkoe，D.Physiol.Rev.2001，81，741-766；Wolfe，M.J.Med.Chem.2001，44，2039-2060)衍生的内部多肽。βAPP通常通过来自各种动物和人类体内或培养的细胞中的许多细胞产生。APP的某些解蛋白片段由称为分泌酶(secretases)的蛋白酶产生。这些解蛋白片段的亚族称为β-淀粉样肽(Aβ)，含有39-43个氨基酸，并且由β分泌酶(β-secretase)和γ分泌酶(γ-secretase)的结合作用产生。β分泌酶是膜结合的天冬氨酰基蛋白酶，它形成Aβ肽的N-末端，Aβ肽的C-末端通过明显是包括早老-1和/或早老-2的低聚配合物的γ分泌酶形成，早老-1和早老-2是多面跨膜蛋白质，它可以含有γ分泌酶的催化成分(Seiffert，D.；Bradley，J.et al.J.Biol.Chem.2000，275，34086-34091)。
许多证据一起强烈地表明降低大脑中的Aβ水平将能够预防AD的发病和进展。首先Aβ是在所有AD患者中发现的主质斑以及90％AD患者中发现的大脑血管系统淀粉样沉积的主要成分(参见Selkoe，D.Physiol.Rev.2001，81，741-766；Wolfe，M.J.Med.Chem.2001，44，2039-2060)。所述斑由可溶性Aβ的聚集形成；其在大脑中的水平与AD神经变性的严重性高度相关(McLean，C.，Cherny，R.et al.Ann.Neurol.1999，46，860-866)，其次，提高Aβ的三个基因的突变(APP，PS-1，或PS-2)能够引发家族的AD(FAD)，其中AD的发病至少加快了十年。在提高Aβ的突变中包括染色体21三体综合症，后者引发唐氏综合症；第三，表达一个或多个突变体FAD基因的转基因小鼠提高了Aβ水平，形成主质斑及含有Aβ的大脑血管沉积，表现出记忆障碍(Chapman，P.；White，G.et al.Nature Neurosci.1999，2，271-276)，并且在小鼠体内增加了神经纤维变性，小鼠还过度表达突变T型物(Lewis，J.；Dickson，D.et al.Science 2001，293，1487-1491)；第四，Aβ对于培养细胞是毒性的(Dahlgren，K.；Manelli，A.et al.J.Biol.Chem.2002 277，32046-32053)，能够在小鼠体内诱导神经纤维和突变体T型物缠结(Gotz，J.，Chen，F.et al.Science 2001，293，1491-1495)，并且能够干扰记忆类似成分长期增强(Walsh，D.，Klyubin，I.et al.Nature 2002，416，535-539，作为本文参考)。综合上述，这些信息使本领域技术人员作出以下结论即过度产生Aβ和/或减少Aβ清除将导致AD。因此通过抑制γ分泌酶降低大脑Aβ水平将能够预防AD的发病和进程。
除了AD以外，过度产生Aβ和/或减少Aβ清除将引起大脑淀粉样血管病(CAA)(参阅Thal，D.，Gherbremedhin，E.et al.J.Neuropath.Exp.Neuro.2002，61，282-293)。在这种患者中血管淀粉样沉积引起血管壁变性和动脉瘤，这可能引发老年患者10-15％的出血突然发作。和AD一样，基因编码Aβ的突变导致老年CAA的发病，称为Dutch类型的与淀粉样变有关的大脑出血，表达这个突变蛋白的小鼠发生类似患者的CAA。
假设抑制AD的产生可预防和减少神经病学变性，减少神经毒性，和通常能够调节与Aβ产生有关的病理学。治疗方法的目标是通过包括在β-淀粉样母体蛋白中的蛋白分解过程中的酶形成Aβ。直接或间接抑制β-或γ-分泌酶活性的化合物能够控制Aβ的产生。有利地是特别靶向γ-分泌酶的化合物能够控制Aβ的产生，因此抑制β-或γ-分泌酶能够减少Aβ的产生，即能够降低或预防与Aβ蛋白有关的神经病学疾病。
Smith等人在国际申请WO 00/50391(2000年8月31日公开)中公开了一系列磺酰胺化合物，它们能够调节淀粉样Aβ蛋白的产生作为治疗各种疾病的方法，特别是阿尔茨海默氏病和其他涉及淀粉样蛋白沉积的疾病。日本专利No.l1343279(1999年12月14日)公开了一系列磺酰胺衍生物，它们是用于治疗自体免疫疾病的TNF-α抑制剂。
上述文献资料没有公开或者建议本发明的新的化合物以及它们抑制β-AP产生的用途。
发明的概述合成了一系列α-(N-磺酰氨基)乙酰胺衍生物，这些化合物特别能够抑制来自β-淀粉样母体蛋白(β-APP)的β-淀粉样肽(β-AP)的产生，这些化合物的药理学作用使它们用于治疗患者与抑制β-AP有关的疾病，例如阿尔茨海默氏病和唐氏综合症。用所述化合物对遭受或怀疑有这种疾病的患者给药的治疗方法包括适当减少β-AP在患者大脑中的积累和沉积。
发明的详细说明本发明包括式I化合物，其药物制剂，以及它们在遭受或怀疑AD病或在大脑组织中由于β-AP积累的其他疾病的患者中抑制β-AP的用途。式I化合物包括无毒性的药学上可接受的盐和/或其水合物，有以下通式和含意 其中R1选自(a)直链或支链C1-6烷基，或C2-6链烯基，它们任选被选自以下的取代基取代羟基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基和卤素；(b)C3-7环烷基，任选被羟基或卤素取代；R是H或R1和R一起是C2-5亚烷基；R2选自(a)直链或支链C1-6烷基，或C3-6链烯基，它们任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷氧基和NR4R5；(b)C3-7环烷基甲基，它任选被以下基团取代氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，C1-4烷基C(＝O)NH-和C1-4烷基OC(＝O)NH-；(c)直链或支链C1-6烷基-C(＝O)-A；(d)-B-萘基；(e) D和E每个独立地是直接键，直链或支链C1-6烷基，C2-6链烯基，或C3-7环烷基；Z选自H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，卤素，氰基，羟基，-OCHF2，-OCF3，-CF3和-CHF2；X和Y各自独立地选自H，羟基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，C1-4烷基S-，C1-4烷基S(O)-，C1-4烷基SO2-，硝基，F3S-和氰基；-OR6；-NR4R5；-NR7C(＝O)R8；-NR7C(＝O)OR8；-NHSO2C1-4烷基；-N(SO2C1-4烷基)2；-C(＝O)W，其中W选自羟基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，苯氧基和-NR4R5；-OC(＝O)C1-4烷基；-苯基，其中所述苯基任选被被氰基，卤素，C1-4烷氧基，C1-4烷基S-，CH3C(＝O)，C1-4烷基S(O)-或C1-4烷基SO2-取代；和杂环基，其中所述杂环基选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环基任选被以下取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，(卤素)C1-4烷基和CO2C1-4烷基；(f)-B(-杂环)，其中所述杂环选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环任选被以下取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，CO2C1-4烷基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；(g)-B-(哌啶-4-基)，其中所述哌啶-4-基任选被以下取代基取代直链或支链C1-6烷基，CH2C(＝O)苯基，苯基和苯基甲基，其中所述C1-6烷基和所述苯基任选被以下取代基取代氰基，卤素，苯并咪唑-2-基，吡啶基和四氢呋喃-2-基；和-C(＝O)W′，其中W′选自C1-4烷氧基，R9和-NR4R5；A是羟基，C1-4烷氧基或NR4R5；B是直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基；R3是苯基或吡啶基，它们任选被以下取代基取代卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-；R4和R5每个独立地是H，直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，C3-6炔基，C3-7环烷基，C3-7环烷基甲基，CI-4烷氧基，苯基，苄基，吡啶基，哌啶-4-基，茚满-1-基，茚满-2-基，四氢呋喃-3-基，或吡咯烷-3-基；其中每个被选自以下的取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，羟基甲基，苄氧甲基，苯基，吡啶基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(卤素)3C-O-，(卤素)2CH-O-，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基，4-苯基哌嗪-1-基，4-苄基哌嗪-1-基，4-吡啶基哌嗪-1-基，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R4和R5一起可以是吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，1，2，3，4-四氢异喹啉-2-基，十氢喹啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，[1，4]-氧氮杂-4-基，氮杂环丁烷-1-基，2，3-二氢-1H-异吲哚-2-基或2，3-二氢-1H-吲哚-1-基，其中每个被选自以下的取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，苯基，吡啶基，苄基，C1-6烷基，C3-7环烷基，C1-4-烷氧基，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基，和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R6是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，或苯基，其中每个任选被以下取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，(C1-4烷基)(苯基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；R7是H，直链或支链C1-6烷基；R8是直链或支链C1-6烷基，C3-7环烷基，苯基，吡啶基或呋喃基，其中每个被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；R9是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，苯基，噁唑基或吡啶基，其中每个被选自以下的取代基取代卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-l-基；或其非毒性的药学上可接受的盐。
本发明还提供一种治疗或减轻与β-淀粉样肽有关的疾病的方法，特别是阿尔茨海默氏病，包括使用和常规的辅剂，载体或稀释剂一起的治疗有效量的式I化合物或其非毒性药学上可接受的盐或溶剂化物或水合物给药。
本文和权利要求书使用的术语″C1-6烷基″(除了上下文另外指出的以外)是指直链或支链烷基，如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，戊基，3-甲基丁基，己基等；本文和权利要求书使用的术语″C2-6链烯基″(除了上下文另外指出的以外)是指直链或支链链烯基如乙烯基，丙烯基，烯丙基，丁烯基，3-甲基丁烯基，戊烯基，己烯基等。除非另有说明本文和权利要求书使用的术语″卤素″包括溴，氯，碘和氟；本文和权利要求书使用的术语″卤化物″包括溴化物，氯化物和碘化物阴离子。
术语″C3-7环烷基″是指碳环体系如环丙基，环丁基，环戊基，环己基和环庚基。
术语″C1-4卤烷基″是指含有1-3个卤素原子的直链或支链C1-4烷基如三氟甲基，1，2-二氟乙基，1，2-二氯乙基，三氯乙基等。
术语″C2-5亚烷基″是指直链或支链亚烷基如亚甲基，亚乙基，亚丙基，甲基亚乙基，亚丁基，甲基亚丙基，亚戊基，甲基亚丁基和乙基亚丙基。
当本发明化合物具有不对称碳原子时，本发明包括如本文和权利要求书所述的式I化合物的外消旋体和个别的对映体形式。使用单一的符号如(R)或(S)表示主要包括一种立体异构体，异构体混合物能够按照本领域公知的方法分离为单一的异构体，例如分级结晶，吸附色谱或其他适宜的分离方法。
得到的外消旋体在引入合适的形成盐的基团以后能够使用通常的方法分离为对映体，例如通过和形成旋光活性盐的试剂形成非对映异构体混合物，将该混合物分离为非对映体盐，再将被分离的盐转化为游离化合物。可能的对映体形式也可以通过手性高压液体色谱柱分级而分离。
本文和权利要求书使用的术语″非毒性药学上可接受的盐″包括非毒性碱加成盐。合适的盐包括从有机酸或无机酸得到的，不限于盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸，甲磺酸，乙酸，酒石酸，乳酸，亚磺酸，柠檬酸，马来酸，富马酸，山梨酸，乌头酸，水杨酸，苯二甲酸等得到的那些盐。
在本发明方法中术语″治疗有效量″是指足以使患者得到有益利益的、该方法的每一活性组分的总量，即通过抑制β-淀粉样肽产生治愈急性症状。当以单一活性成分给药时，即单独给药，该术语是指单独的成分；当与其他辅剂结合给药时，该术语是指产生治疗效果的活性成分的结合数量，无论是结合给药，连续或同时给药。本文和权利要求书使用的术语″治疗，处理，疗法″是指预防或改善与β-淀粉样肽有关的疾病。
一般的反应流程合成式I化合物所用的一般方法记载于反应流程1-23。对于本领域技术人员来说，明显合理的变化包括在本发明范围之内。
反应流程1 式II的原料(α-氨基)乙酰胺以外消旋体或对映体纯形式使用和可商购或通过公知的文献方法从市场上可以买到的(α-氨基)酸制备(制备酰胺的一般参考R.C.Larock″有机反应转化大全，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976；还参见反应流程18式XLVIII的酸转化为式XLIX的酰胺)。式II化合物用合适的碱和磺化剂如磺酰氯在非质子溶剂如二氯甲烷中于室温下处理，得到(α-磺酰氨基)乙酰胺式III，合适的碱包括三乙基胺和吡啶。
在式III化合物转化为式I磺酰胺的一个方法中，将式III化合物用合适的碱和烷基化剂在非质子溶剂中处理转化为式I的磺酰胺，加热或不加热均可以。用于该反应的合适的碱包括碳酸钾或碳酸铯。烷基化剂包括烷基卤化物(例如烷基氯化物，烷基溴化物或烷基碘化物)和烷基磺酸酯(甲苯磺酸酯，甲磺酸酯，三氟甲磺酸酯)。优选的溶剂包括DMF和乙腈。反应温度一般为20℃-100℃。
转化式III化合物成为式I化合物的另一方法包括用三苯基膦，偶氮二羧酸二烷基酯，和乙醇在惰性溶剂中加热或不加热处理式III化合物。
反应流程1-固体支持物
化合物式I也能够使用固相方法制备。例如将FMOC-保护的Rink酰胺树脂在DMF中用哌啶处理除去FMOC基团，然后将该树脂和保护氨基的(α-氨基)酸在偶合剂如1-羟基苯并三唑和二烷基碳二亚胺存在下，在惰性溶剂如DMF中加热或不加热进行偶合。α-氨基基团脱保护得到连接在聚合物上的式IV的酰胺。在FMOC-保护的氨基酸情况下，脱保护可通过在DMF中用哌啶处理完成。
化合物式IV与合适碱如吡啶和磺化剂如磺酰氯在惰性溶剂中的反应提供树脂连接的磺酰胺式V。化合物式V的烷基化用烷基卤化物(例如烷基氯化物，烷基溴化物或烷基碘化物)或烷基磺酸酯(例如甲磺酸酯，甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯)在碱存在下在惰性溶剂中于室温下进行。优选的碱是2-叔丁基亚胺-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮杂膦。从树脂分离得到磺酰胺式I，在Rink酰胺树脂情况下，分离优选使用三氟乙酸在惰性溶剂如二氯甲烷中进行。
反应流程2 化合物式I也能够如反应流程2所示制备。将式I的胺还原烷基化得到胺式VI，再用醛和氢化物还原剂于酸催化剂存在下加热或不加热处理。优选的还原剂是氰基硼氢化钠，优选的酸催化剂是Lewis酸如ZnCl2，反应溶剂优选甲醇。胺式VI然后用磺酰化剂如磺酰氯在胺如三乙基胺存在下处理。反应在惰性溶剂中如二氯甲烷中加热或不加热进行，得到产品式I，反应通常在室温下进行。
反应流程3
其中linker＝直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基；LG＝离去基团制备化合物式VIII如反应流程3所示进行，化合物式VII和胺在酸清除剂如三乙基胺存在下在惰性溶剂如二氯甲烷中于加热或不加热下进行反应。化合物式VII通过反应流程1或反应流程2所示的顺序制备。
反应流程4 化合物式XI和XII按照反应流程4所示制备。化合物式IX(通过反应流程1或反应流程2所示的顺序制备)的硝基用氢气在钯催化剂，酸存在下和在溶剂如甲醇中还原，得到苯胺衍生物式X，化合物式X的单甲基化通过和1.1当量的甲基卤化物或磺酸甲酯，例如二甲基硫酸酯，在碱如三乙基胺存在下和在惰性溶剂如DMF中反应完成，得到化合物式XI。单甲基化反应一般在20℃至40℃之间进行。制备二甲基苯胺式XII使用过量的甲基卤化物如甲基碘化物或磺酸甲酯在碱例如碳酸铯存在下，在溶剂如DMF中处理式X的苯胺完成，加热或不加热。
反应流程5 其中linker＝直链或支链(C1-6烷基)反应流程5概括了酯式XIII，酸式XIV和酰胺式XV的合成。化合物式III和卤代烷基羧酸酯例如叔丁基溴代乙酸酯在碱如碳酸钾存在下和在惰性溶剂如DMF中反应得到酯式XIII。该酯通过本领域技术人员公知的方法进行脱保护(参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，Wiley Interscience，New York，1999，pp.373-442)。例如对于叔丁基酯，分解为酸式XIV通过用三氟乙酸在溶剂如二氯甲烷中处理而进行。该酸转化为酰胺式XV使用本领域技术人员公知的酰胺偶合方法进行(参见R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976)。在一个优选方法中，酸式XIV在1-羟基苯并三唑和1，3-二环己基碳二亚胺存在下，在非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中使用伯胺或仲胺处理。
反应流程6
酸式XVII和酰胺式XVIII的制备表示在反应流程6中。酯式XVI(制备方法见反应流程1或2)转化为酸式XVII使用本领域技术人员公知的标准酯分解方法进行(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，Wiley Interscience，New York，1999，pp.373-442)。在甲基酯式XVI的情况下，使用含水氢氧化钠在溶剂如甲醇或甲醇/THF混合物中于20℃-40℃处理，得到酸式XVII。转化该酸式XVII为酰胺式XVIII是使用本领域技术人员公知的常规的酰胺偶合方法(参见R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976)。在一个优选的方法中，酸式XVII在1-羟基苯并三唑或碳二亚胺，例如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在下，在溶剂如DMF或CH2C2中使用伯胺或仲胺处理，加入碱例如二异丙基乙基胺作为酸清除剂。
反应流程7
哌啶衍生物式XIX，XX，XXI，XXII和XXIII的合成记载于反应流程7。化合物式III和4-卤代烷基或4-磺酰氧基烷基取代的N-保护的哌啶，例如4-(甲苯磺酰氧基甲基)-1-(叔丁氧羰基)哌啶，在碱如碳酸铯存在下和在溶剂如DMF中加热或不加热进行反应，得到氨基甲酸酯式XIX。分解化合物式XIX中的氨基甲酸酯基团在本领域技术人员公知的标准条件下进行(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，Wiley Interscience，New York，1999，pp.503-550)，得到哌啶式XX。在(叔丁氧羰基)哌啶衍生物的情况下，分解通过使用三氟乙酸在二氯甲烷中处理而进行。
转化哌啶式XX为酰胺式XXI使用本领域技术人员公知的酰胺偶合方法进行(参见R.C.Larock″有机反应转化大全，VCHPublishers，New York，1989，pp.972-976)。在一个优选的方法中，哌啶式XX使用酰氯在胺如三乙基胺存在下在惰性溶剂如二氯甲烷中加热或不加热处理。另一方法是哌啶式XX和酸在偶合剂如羟基苯并三唑和碳二亚胺存在下进行偶合，得到酰胺式XXI。脲式XXII的制备通过使用异氰酸酯和碱如三乙基胺处理胺式XX完成，在溶剂如二氯甲烷中加热或不加热。烷基化哌啶式XX得到N-取代的哌啶式XXIII。在一个典型的方法中，哌啶在碱如三乙基胺存在下和在溶剂如二氯甲烷中使用烷基卤或烷基磺酸酯处理。
反应流程8 PG＝醇保护基D是除了键以外的醇式XXV和胺式XXVI的合成通过反应流程8表示的顺序进行。被保护的醇式XXIV按照反应流程1或2的方法制备。对于所选择的保护基(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，第2章)在合适条件下使醇脱保护得到醇式XXV。例如当保护基是四氢吡喃基部分时，使用对甲基苯磺酸在溶剂如甲醇中处理化合物式XXIV游离出醇。将醇式XXV转化为离去基团(例如卤化物或磺酸盐)，然后使用伯胺或仲胺处理得到胺式XXVI。例如醇可通过和甲基磺酰基氯和碱如三乙基胺在溶剂二氯甲烷中反应被转化为甲基磺酸酯衍生物。随后甲基磺酸酯和伯胺或仲胺在碱如三乙基胺存在下在溶剂如二氯甲烷中反应得到胺XXVI。
反应流程9 胺式XXVIII从胺式XXVII按照反应流程9所示制备。其中D是直接键的胺式XXVII按照反应流程1或4制备。其中D不是直接键的胺式XXVII按照反应流程8制备。将胺式XXVII转化为胺XXVIII使用本领域技术人员公知的酰胺偶合条件进行(参见R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976)。例如胺式XXVII和酰氯在碱如三乙基胺存在下在溶剂二氯甲烷中反应得到胺式XXVIII。胺式XXVII转化为氨基甲酸酯衍生物使用本领域技术人员公知的条件进行(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，P.5030550)。从胺式XXVII制备磺酰胺衍生物也可使用转化中间体式II为磺酰胺式III所述的方法。
反应流程10
合成吡啶衍生物式XXX按照反应流程10所示进行。氯代吡啶衍生物式XXIX使用反应流程1或2所述的化学过程制备。使用伯胺或仲胺在溶剂如THF中于温度20℃-100℃下处理化合物式XXIX，并且需要时使用封闭的压力容器，得到氨基吡啶式XXX。
反应流程11 胺取代的酚醚式XXXII从(O-烯丙基)苯酚按照反应流程11所示制备。原料烯丙基醚式XXXI按照反应流程1或2所示制备。使用四氧化锇和三甲基胺N-氧化物在溶剂如丙酮中处理化合物式XXXI，然后用高碘酸钠处理得到中间体醛，后者的使用一般不需要提纯。未提纯的醛和伯胺或仲胺及还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠在溶剂如乙醇中加热或不加热反应得到胺式XXXII。
反应流程12 转化酯式XXXIII为叔醇式XXXIV按照反应流程12所示进行。酯式XXXIII和过量的甲基有机金属试剂如甲基镁溴化物在溶剂如THF中于温度0℃-25℃反应得到醇式XXXIV。
反应流程13 制备1，3，4-噁二唑式XXXVI按照反应流程13所示使用本领域技术人员公知的方法进行(参见Joule，J.A.；Mills，K.；Smith，G.F.Heterocyclic Chemistry，3rd ed.，Chapman & HallLondon，1995；452-456以及本文所列的参考文献)。例如酯式XXXV使用肼在甲醇中加热到回馏点处理。得到的酰基肼中间体不需要提纯，在随后用于和烷基乙酰亚胺酸酯在吡啶中加热到回馏反应得到噁二唑式XXXVI。
反应流程14 1，2，4-噁二唑式XXXVII按照反应流程14所示使用本领域技术人员公知的方法合成(参见Joule，J.A.；Mills，K.；Smith，G.F.Heterocyclic Chemistry，3rd ed.，Chapman & HallLondon，1995；452-456以及本文所列参考文献)。例如使用羟基苯并三唑，碳二亚胺和乙酰基酰胺肟(N-羟基乙基亚胺酸酯)在碱如三乙基胺存在下处理酸式XVII得到中间体，将其在回馏的吡啶中加热得到噁二唑式XXXVII。
反应流程15 1，2，4-噁二唑式XXXIX从腈式XXXVIII使用本领域技术人员公知的方法制备(反应流程15)(参见Joule，J.A.；Mills，K.；Smith，G.F.Heterocyclic Chemistry，3rd ed.，Chapman & HallLondon，1995；452-456以及本文所列的参考文献)。例如腈式XXXVIII和羟胺在在溶剂如乙醇中在加热到回馏的温度下反应得到中间体N-羟基脒，然后使用乙酰基氯在碱如三乙基胺存在下在溶剂如二氯甲烷中处理得到1，2，4-噁二唑式XXXIX。
反应流程16 反应流程16表示酰胺式XL转化为酮式XLI。按照反应流程6所述制备的酰胺式XL使用甲基有机金属试剂如甲基镁溴化物在溶剂如THF中处理得到酮式XLI，反应温度范围是-20℃-25℃。
反应流程17 β-氨基酰胺式XLIII从丙烯酰胺式XLII按照反应流程17所示制备。例如按照反应流程9所示制备的丙烯酰胺式XLII使用伯胺或仲胺在溶剂如甲苯中处理得到β-氨基酰胺式XLIII。
反应流程18 制备磺酰胺中间体式XLIX(化合物式III的单一的对映体)概括于反应流程18。中间体式XLIV的α-阴离子(参见Josien，H.；Martin，A.；Chassaing，G.Tetrahedron Lett.1991，32，6547)和烷基化试剂如烷基卤化物(例如烷基氯化物，烷基溴化物或烷基碘化物)或烷基磺酸酯(例如烷基甲磺酸酯，烷基甲苯磺酸酯或烷基三氟甲基磺酸酯)反应得到中间体式XLV。化合物式XLIV的α-阴离子通过使用强碱如烷基锂(例如正丁基锂)或二烷基酰胺(例如二异丙基酰胺锂)在溶剂如THF中，使用或不使用助溶剂如HMPA处理而生成，反应温度一般为-78℃-25℃。
化合物式XLV的二苯亚甲基保护基团的除去在本领域技术人员公知的条件下进行(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，Wiley Interscience，New York，1999，pp.587-588)。例如化合物式XLV使用酸如水中的HCl在溶剂如THF中处理，使二苯亚甲基保护基团水解。得到的胺式XLVI使用磺酰化试剂如反应流程1所述处理，得到磺酰胺式XLVII。乙酰基磺酰胺式XLVII的水解得到酸式XLVIII是通过用氢氧化物离子处理完成，例如氢氧化锂，在溴化锂和四丁基溴化铵存在下进行。酸式XLVIII转化为酰胺式XLIX在本领域技术人员公知的条件下进行(制备酰胺的一般参考R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976)。例如化合物式XLVIII和氯化铵的反应在1-羟基苯并三唑，碳二亚胺试剂和胺碱如二异丙基乙基胺存在下进行，得到酰胺式XLIX。该反应通常在极性溶剂如DMF中进行，反应温度为0℃-40℃。酰胺式XLIX转化为化合物式I化合物通过反应流程1所示的方法进行。
反应流程19 反应流程19说明了从活性甘氨酸衍生物式L开始合成α-取代的(N-磺酰氨基)乙酰胺中间体式III的一个方法。化合物式L和烷基化试剂如烷基卤化物(例如烷基氯化物，烷基溴化物或烷基碘化物)或烷基磺酸酯(例如烷基甲磺酸酯，烷基甲苯磺酸酯或烷基三氟甲磺酸酯)的反应(参见Haufe，G.；Laue，K.W.；Triller，M.U.；Takeuchi，Y.；Shibata，N.四面体1998，54，p.5929-5938；Kroger，S.；Haufe，G.氨基酸，1997，12，p.363-372)在碱如碳酸钾和添加剂如四丁基溴化铵存在下于惰性溶剂如乙腈中进行，反应温度25℃-70℃之间，得到化合物式LI。除去二苯亚甲基保护基是在本领域技术人员公知的条件下进行(参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，WileyInterscience，New York，1999，pp.587-588)。例如化合物式LI在溶剂如二乙醚中的溶液使用酸水溶液(例如含水HCl)处理，一般反应温度为0℃-30℃之间，得到胺酯式LII。转化酯式LII为酰胺式II使用本领域技术人员公知的方法进行。例如当化合物式LII是乙酯时，酯的水解通过用酸如HCl的乙醚溶液处理完成，一般是在回馏溶剂中加热反应混合物。得到的酸中间体然后通过在标准条件下(例如用亚硫酰氯和甲醇处理)转化为酰氯，随后在溶剂如甲苯中和氨水反应被转化为甲基酯式LII(参见R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCHPublishers，New York，1989，pp.972-976)。胺式II转化为化合物式I按照反应流程1所述进行。
反应流程20 制备化合物式LVII如反应流程20所示。烯烃LIII如反应流程18所述从中间体式XLIV和l-溴-2-甲基-2-丙烯制备。使用HF-吡啶在溶剂如THF中于反应温度0℃-25℃之间处理烯烃式LIII，得到氟烷基化合物式LIV。转化化合物式LIV为酰胺式LV按照反应流程18所示进行。转化酰胺式LV为化合物式LVI按照反应流程I所述进行。
反应流程21 化合物式LXII和式LXIV的合成在反应流程21中说明。2-氨基-4-甲基-4-戊烯酸乙酯(在反应流程19中从(二苯亚甲基氨基)乙酸乙基酯和l-溴-2-甲基-2-丙烯制备)用磺酰化试剂如磺酰氯在碱如三乙基胺存在下和在惰性溶剂如二氯甲烷中处理，得到酯式LVII。酯式LVII和HF-吡啶的反应在溶剂如THF中于反应温度0℃-25℃之间进行，得到氟烷基衍生物式LVIII和内酯式LIX的混合物。分离这些产品，分别进行以下的反应。
使用本领域技术人员公知的方法将酯式LVIII水解为酸式LX(参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″有机合成中的保护基″，WileyInterscience，New York，1999，pp.373-442)。例如用氢氧化钠水溶液在溶剂如甲醇中处理酯式LVHI得到酸式LX。酸式LX使用反应流程18所述用于制备酰胺式XLIX的方法转化为酰胺式LXI。从化合物式LXI制备酰胺式LXII按照反应流程1所述进行。
对于内酯式LIX，使用氨水处理得到酰胺式LXIII。该反应特别在封管中加热进行。反应温度在40℃-80℃之间。进一步转化中间体式LXIII为磺酰胺式LXIV按照反应流程1所述进行。
反应流程22 制备二氟烷基酰胺式LXIX的合成工序表示于反应流程22。化合物式L使用4-溴-1-丁烯在碱如碳酸钾和四烷基铵卤化物盐如四丁基溴化铵存在下，在溶剂如CH3CN中于温度20℃-70℃下处理。二苯亚甲基保护基的除去如反应流程19所述，得到中间体胺，然后用磺酰化试剂如磺酰氯对其进行处理得到酯式LXV。烷基化磺酰胺上的N使用反应流程1的方法进行，得到化合物式LXVI。转化烯烃式LXVI为醛式LXVII是通过该烯烃和四氧化锇及三甲胺N-氧化物在溶剂如丙酮中的反应，随后用高碘酸钠处理，反应温度一般为20℃-40℃。醛式LXVII和氟化试剂如DAST的反应在溶剂如二氯甲烷中进行，得到二氟烷基衍生物式LXVIII。
化合物式LXVIII转化为酰胺式LXIX通过使用碱如氢氧化钠水解该酯成为酸，在溶剂如甲醇中进行。中间体酸被转化为酰胺使用本领域技术人员公知的条件(参见R.C.Larock″有机反应转化大全″，VCH Publishers，New York，1989，pp.972-976)。例如该酸和氯化铵在羟基苯并三唑和碳二亚胺试剂及胺碱如二异丙基乙基胺存在下的反应得到酰胺式LXIX，该反应一般在极性溶剂如DMF中于反应温度0℃-40℃进行。
反应流程23 α-氨基酰胺式LXXI使用反应流程23所示的反应制备。酰胺式LXX按照反应流程9所述制备。使用伯胺或仲胺在溶剂如THF中于反应温度20℃-40℃之间处理化合物式LXX得到胺式LXXI。
在一个优选的实施方案中本发明包括化合物式la或其药学上可接受的盐。
其中R1选自(a)直链或支链C1-6烷基或C2-6链烯基，它们任选被以下取代基取代羟基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基和卤素；(b)任选被羟或卤素取代的C3-7环烷基；R2选自(a)直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基，它们任选被以下取代基取代卤素，C1-4烷氧基和NR4R5；(b)任选被以下基团取代的C3-7环烷基甲基氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，C1-4烷基C(＝O)NH-和C1-4烷基OC(＝O)NH-；(c)直链或支链C1-6烷基-C(＝O)-A；(d)-B-萘基；(e) D和E每个独立地是直接键，直链或支链C1-6烷基，C2-6链烯基，或C3-7环烷基；Z选自H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，卤素，氰基，羟基，-OCHF2，-OCF3，-CF3，和-CHF2；X和Y每个独立地选自H，羟基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，C1-4烷基S-，C1-4烷基S(O)-，C1-4烷基SO2-，硝基，F3S-和氰基；-OR6；-NR4R5；-NR7C(＝0)R8；-NR7C(＝O)OR8；-NHSO2C1-4烷基；-N(SO2C1-4烷基)2；-C(＝O)W，其中W选自羟基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，苯氧基和-NR4R5；-OC(＝O)C1-4烷基；-苯基，其中所述苯基任选被以下基团取代氰基，卤素，C1-4烷氧基，C1-4烷基S-，CH3C(＝O)，C1-4烷基S(O)-或C1-4烷基SO2-；和杂环基，其中所述杂环基被选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环基任选被选自以下的取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，(卤素)C1-4烷基，和CO2C1-4烷基；(f)-B-(杂环)，其中该杂环选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环任选被选自以下的取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，CO2C1-4烷基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；(g)-B-(哌啶-4-基)，其中所述哌啶-4-基任选被以下取代基取代直链或支链C1-6烷基，CH2C(＝O)苯基，苯基和苯基甲基，其中所述C1-6烷基和所述苯基任选被以下取代基取代氰基，卤素，苯并咪唑-2-基，吡啶基和四氢呋喃-2-基；和-C(＝O)W′，其中W′选自C1-4烷氧基，R9和-NR4R5；A是羟基，C1-4烷氧基或NR4R5；B是直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基；R3是苯基或吡啶基，它们任选被选自以下的取代基取代卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-；R4和R5每个独立地是H，直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基，C3-6炔基，C3-7环烷基，C3-7-环烷基甲基，C1-4烷氧基，苯基，苄基，吡啶基，哌啶-4-基，茚满-1-基，茚满-2-基，四氢呋喃-3-基或吡咯烷-3-基，其中每个任选地被以下取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，羟基甲基，苄氧基甲基，苯基，吡啶基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(卤素)3C-O-，(卤素)2CH-O-，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，4-(C1-6烷基)哌嗪-l-基，4-苯基哌嗪-1-基，4-苄基哌嗪-1-基，4-吡啶基哌嗪-1-基，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R4和R5一起可以是吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，1，2，3，4-四氢异喹啉-2-基，十氢喹啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，[1，4]-噁嗪-4-基，氮杂环丁烷-1-基，2，3-二氢-1H-异吲哚-2-基或2，3-二氢-1H-吲哚-1-基，其中每个任选地被以下取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH2-，卤素CH2-，苯基，吡啶基，苄基，C1-6烷基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R6是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基或苯基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，(C1-4烷基)(苯基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(CI-6烷基)哌嗪-1-基；R7是H，直链或支链C1-6烷基；R8是直链或支链C1-6烷基，C3-7环烷基，苯基，吡啶基或呋喃基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(CI-6烷基)哌嗪-l-基；R9是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，苯基，噁唑基或吡啶基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-l-基；或其非毒性的药学上可接受的盐。
在另一优选的实施方案中，本发明包括化合物式Ia或其药学上可接受的盐，其中R3是任选被选自以下的取代基取代的苯基卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-。
在另一优选的实施方案中，本发明包括化合物式Ia或其药学上可接受的盐，其中R2是 生物学试验方法化合物式(I)被期望具有γ-分泌酶抑制活性。鉴定γ-分泌酶活性要求可信和精确的试验方法，并能方便地鉴定γ-分泌酶的分裂产物，特别是Aβ。本发明化合物的γ-分泌酶抑制活性已由例如使用以下所述的该活性的试验证实。正如使用该活性的试验所测定的，本发明范围内的化合物显示出能够抑制γ-分泌酶活性。
本发明提供的化合物也可用作测定抑制Aβ产生的潜在药物学能力的标准和试剂。这将以包括本发明化合物的在商业用的药包的形式提供。
体外鉴定γ-分泌酶抑制剂的结合试验可以使用竞争结合试验鉴定抑制放射性标记的γ-分泌酶抑制剂结合的分子，和因此抑制γ-分泌酶活性。例如[3H]-化合物A能够用于与来自THP-1细胞的膜的结合试验(Seiffert，D.；Bradley，J.et al.，J.Biol.Chem.2000，275，34086-34091)。化合物A是(2R，3S)Nl-[(3S)-六氢-1-(3-苯氧基苄基)-2-氧-1H-氮杂-3-基]-2-(2-甲基丙基)-3-(丙基)-丁二酰胺，其合成记载于美国专利US 6331408(12/18/2001)；PCT公开的WO00/28331；PCT公开的WO 00/07995；和Seiffert，D.，Bradley，J.等人，J.Biol.Chem.2000，275.34086-34091。
化合物A在这些试验中THP-1细胞在旋转培养基RPMI 1640中生长，其中含有L-谷氨酰胺和10μM β-巯基乙醇，密度为5×105细胞/ml。离心回收细胞，将细胞小丸在干冰/乙醇中迅速冻结，使用前储存于-70℃。大约2×104THP-1细胞的小丸使用Brinkman Polytron在位置6均化10秒钟。匀浆于48,000xg离心12分钟，得到的小丸通过反复均化和离心被洗涤，最后将细胞小丸再悬浮于缓冲液中，得到的蛋白质浓度约0.5mg/ml。试验通过将150μl膜悬浮液加入到150μl试验缓冲液中开始，后者含有0.064μ Ci放射性配体和各种浓度的未标记化合物。结合试验在96穴聚丙烯板中进行，一式两份，最终体积0.3ml含有50mM Hepes，pH＝7.0，和5％二甲基亚砜。非特定结合使用300nM化<p>
a基于IC50值的活性+++＝＜50nM++＝50-500nM+＝＞500nM和＜10,000nM
基于抑制从膜制剂形成的Aβ鉴定γ-分泌酶抑制剂的体外试验含有功能活性γ-分泌酶和β-APP底物的离析出的膜部分能够产生包括Aβ的γ-分泌酶分裂产物(Roberts，S.B.；Hendrick，J.P.；Vinitsky，A.；Lewis，M.；Smith，D.W.；Pak，R.PCT公开WO01/0175435；Fechteler，K.；Kostka，M.；Fuchs，M.专利申请No.DE 99-19941039；Shearman，M.；Beher，D.etal.，Biochemistry，2000，39，8698-8704；Zhang，L.Song，L.et al.，生物化学2001，40，5049-5055)。离析出的膜部分能够从人体得到的细胞株如HeLa和H4制备，它们已用野生类型的或变异形式的β-APP或人体碱性磷酸酯酶β-APP融合结构转染，并且稳定地表达高水平的γ-分泌酶底物。当膜从0-4转移至37℃时，内源的γ-分泌酶存在于0-4℃分裂β-APP底物制备的离析出的膜中。鉴定包括Aβ的分裂产物可使用标准技术监测，例如免疫沉淀反应(Citron，M.；Diehl，T.S.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93，13170-13175)；西部斑(Klafki，H.-W.；Ambramowski，D.et al.，J.Biol.Chem..1996，271，28655-28659)；被Seubert，P.；Vigo-Pelfrey，C.等人(Nature，1992，359，325-327)阐明的酶结合的免疫吸附试验(ELISA)；或使用含有膜和Aβ的均匀试样的时间-解析荧光法的优选方法(Roberts，S.B.；Hendrick，J.P.；Vinitsky，A.；Lewis，M.；Smith，D.W.；Pak，R.PCT Publication WO 01/0175435；Shearman，M.；Beher，D.et al.，Biochemistry，2000，39，8698-8704)。存在于含有膜的均匀试样中的Aβ能够通过时间-解析荧光法使用认为有不同表位Aβ的两个抗体鉴定。抗体之一能够识别存在于Aβ中的、但是不存在于母体片断中的表位；优选抗体结合于由γ-分泌酶分裂产生的Aβ的羧基末端。另一抗体结合于存在于Aβ中的任何其他表位。例如结合于Aβ肽的N末端区域(例如26D6-B2-B3；SIBIA Neurosciences，La Jolla，CA)或C-末端(例如9S3.2抗体，生物溶液，Newark，DE)的抗体是公知的。抗体使用一对荧光加成物标记，当加成物和结合到N-和C-末端或Aβ区域的结果极接近时，荧光加成物转移荧光能量。没有荧光说明不存在分裂产物，是由于抑制γ-分泌酶的结果。离析出的膜试验能够用于鉴定抑制γ-分泌酶分裂活性和Aβ产生的候补试剂。
典型的基于膜的试验需要在96-或384-穴的培养皿中有45μg膜蛋白质/穴。在中性缓冲液中的膜和试验化合物结合，并且在0-4至37℃之间转移。试验试剂一般可由合成的化合物，来自细菌或真菌发酵提取物的次级代谢产物或来自植物或矿物试样的提取物组成。全部合成试剂最初在剂量范围10-100μM或在足以稀释到最低细胞毒性的提取液情况下筛选。使用试验试剂培育膜继续约90分钟，此时将荧光标记的抗体加入到每一穴中，以便测定Aβ的数量。(时间-解析荧光测定方法和Aβ的定量在其他地方描述(Roberts，S.B.；Hendrick，J.P.；Vinitsky，A.；Lewis，M.；Smith，D.W.；Pak，R.PCT公开WO01/0175435；Shearman，M.；Beher，D.等人.，生物化学，2000.39，8698-8704)。通过分析培养皿在荧光板上的读数得到结果，并且和模拟处理的膜及已知Aβ的数量的试样进行比较构成标准浓度曲线。有确定作用的化合物是相对于对照试样抑制Aβ至少50％最初试验浓度的化合物。假如发现化合物有活性，则进行剂量依赖试验以确定抑制Aβ产生所必需的最低剂量。假如Ki值低于10μM，化合物作为活性γ-分泌酶抑制剂被记录。
本发明化合物进行上述试验得到的实施例结果列于表2。在表2中抑制浓度(IC50)低于或等于50nM以+++表示；50nM-500nM以++表示；500nM-10000nM以+表示。
表2基于抑制从膜制剂形成的Aβ体外试验的实施例活性
a基于IC50值的活性+++＝或＜50nM++＝50-500nM+＝＞500nM和＜10,000nM基于抑制在培养细胞中形成的Aβ的体外试验鉴定γ-分泌酶抑制剂培养的人体细胞株如HEK293和H4细胞，它们表达APP和γ-分泌酶活性，或者过度表达野生型APP，变异APP或APP的融合蛋白质转染衍生细胞株，后者的转染衍生细胞株将分泌Aβ肽到培养介质中，能够如前所述定量(Dovey，H.，John，V.et al.，J.Neurochem.2001，76，173-181)。使用γ-分泌酶抑制剂培育的细胞能够降低Aβ肽的产生。例如稳定地转染过度表达上述HPLAP-APP融合蛋白质的H4细胞如上所述生长，分离，并且调节到2×105细胞/ml。得到的100μl悬浮液加入到96-穴培养皿的每一穴中。4小时以后移去介质，用含有各种稀释度的试验化合物的100μl无血清介质代替。培养皿于37℃培育18小时，移出整分100μl组织培养上清液，以便如上所述使用均匀试样的时间-解析荧光法测定Aβ水平。另外也可以使用上述测定Aβ的其他方法。Aβ的抑制程度用于计算试验化合物的IC50值。当上述试验中测定的IC50值低于50μM时，本发明的化合物被认为是有活性的。
本发明化合物进行上述试验得到的实施例结果列于表3。在表3中抑制浓度(IC50)低于或等于50nM以+++表示；50nM-500nM以++表示；500nM-50000nM以+表示。
表3基于抑制在培养细胞中形成的Aβ体外试验的实施例活性
a基于IC50值的活性+++＝＜50nM++＝50-500nM+＝＞500nM和＜10,000nM在一个或所有上述试验中说明本发明化合物具有IC50值低于10μM，因此化合物式I或其药物组合物可以用于治疗，缓解或消除与抑制β-淀粉样肽有关的疾病或其他疾病。
除了分裂APP，γ-分泌酶还分裂其他底物，包括Notch族的跨膜受体(参见Selkoe，D.Physiol.Rev.2001，81，741-766；Wolfe，M.J.Med.Chem.2001 44，2039-2060)；LDL与蛋白质相关的受体(May，P.，Reddy，Y.K.，Herz，J.J.Biol.Chem.2002，277，18736-18743)；ErbB-4(Ni，C.Y.，Murphy，M.P.，Golde，T.E.，Carpenter，G.Science 2001，294，2179-2181)；E-钙黏连素(Marambaud，P.，Shioi，J.，et al.，EMBO J.2002，21，1948-1956)和CD44(Okamoto，I.，Kawano，Y.，et al.，J.Cell Biol.2001，155，755-762)。假如抑制非APP底物的分裂在人体中引起不理想的效果，所需的γ-分泌酶抑制剂能够优选抑制APP分裂为不需要的底物。Notch分裂能够直接通过测定分裂产物数量或间接通过测定分裂产物对转录的效果来监测(Mizutani，T.，Taniguchi，Y.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2001，98，9026-9031)。
通过γ-分泌酶抑制剂测定Aβ减少的体内试验体内试验可用于说明γ-分泌酶活性的抑制作用。在这种试验中，动物例如小鼠表达正常APP和γ-分泌酶水平，或者被设计表达更高APP水平，因此Aβ能够用于说明γ-分泌酶抑制剂的效用(Dovey，H.，John，V.，et al.，J.Neurochem.2001，173-181)。在这种试验中将γ-分泌酶抑制剂对动物给药，在许多区域例如血浆，大脑脊髓液，脑提取物中的Aβ水平能够使用上述方法对Aβ水平进行监测。例如过度表达人体APP的Tg2576小鼠用γ-分泌酶抑制剂通过口服管饲法以，可以测量到Aβ减少的剂量给药，一般低于100mg/kg。给药3小时以后收集血浆，大脑和CSF，在液体氮中冷冻，储存于-80℃直到进行分析。对于测定Aβ，在PBS中使用0.1％的Chaps将其稀释15倍，而对于测定CSF，在1％Chaps中使用蛋白酶抑制剂(5μg/ml亮肽素，30μg/ml抑肽酶，1mM苯基甲基磺酰基氟，1μM胃酶抑素)将其稀释15倍。大脑以24ml溶液/g脑组织在1％Chaps中使用蛋白酶抑制剂均化，将匀浆于4℃在100,000xg下离心1小时。得到的上清液使用蛋白酶抑制剂在1％Chaps中稀释10倍。血浆，CSF和脑溶胞产物中的Aβ水平使用均匀样品的时间-解析荧光法或上述方法之一进行测定。
假如在剂量100mg/kg下至少减少Aβ50％，认为γ-分泌酶抑制剂在上述体内试验之一中是有活性的。
因此式I化合物或其药物组合物可以用于治疗，缓解或消除与β-淀粉样肽有关的疾病或其他疾病。
在另一实施方案中，本发明包括含有和药学上可接受的辅剂，载体或稀释剂结合的至少一种化合物式I的药物组合物。
在另一实施方案中，本发明涉及在哺乳动物中需要抑制β-淀粉样肽从而治疗或预防疾病的方法，包括使用治疗有效量的化合物式I或其非毒性的药学上可接受的盐，溶剂化物或其水合物对所述哺乳动物给药。
在另一实施方案中，本发明涉及在哺乳动物中需要治疗阿尔茨海默氏病或唐氏综合症的方法，包括使用治疗有效量的化合物式I或其非毒性的药学上可接受的盐，溶剂化物或其水合物对所述哺乳动物给药。
对于治疗应用，药理学活性化合物式I通常以药物组合物给药，该药物组合物包括(或)作为基本活性成分的至少一种上述化合物，并且结合固体或液体状的药学上可接受的载体，并且任选结合药学上可接受的、标准的或常规技术中使用的辅剂和赋形剂。
该药物组合物包括各种合适的制剂形式，如口服，非肠道给药(包括皮下，肌内，真皮内和静脉内给药)，支气管或鼻内给药。假如使用固体载体，制剂可以是片剂，以粉末放置在硬胶囊中，或丸剂，或者是锭剂或糖锭。固体载体可以含有普通的赋形剂如黏合剂，填充剂，成片润滑剂，崩解剂和润湿剂等。假如需要，片剂可以通过普通技术包衣；假如使用液体载体，制剂可以是糖浆，乳液，软胶囊，注射用的无菌载体，水或非水液体悬浮液形式，或者可以是干产品，使用前用水或其他合适的媒介物配制。液体制剂可以含有常规的添加剂如悬浮剂，乳化剂，润湿剂，非水赋型剂(包括食用油)，防腐剂以及调味剂和/或着色剂。对于非肠道给药，赋形剂通常包括至少大部分的无菌水，不过可以使用食盐水溶液，葡萄糖水溶液等。也可以使用注射悬浮液，此时可以使用普通的悬浮剂。常规的防腐剂，缓冲剂等也可以加入到非肠道给药制剂形式中。该药物组合物通过对所需含有适量活性成分(即本发明的式I化合物)制剂的合适的常规技术制备。参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA，17th edition，1985。
达到治疗效果的化合物式I的剂量不仅依赖于如患者的年龄，体重，性别和给药方式各种因素，还依赖于所需的β-AP抑制程度和对于涉及的特殊疾病症状使用的特定化合物的效力。另外还要关注特定化合物的治疗和剂量可以以单位剂量形式给药，单位剂量形式由本领域技术人员调节，以便反映相对活性水平。决定被使用的特定剂量(每天给药的次数)属于医师决定的范围，并且可以根据本发明的特定情况通过剂量滴定法改变，以产生所需的治疗效果。
化合物式I或其药物组合物对于患如本文所述的与β-AP产生有关的疾病的哺乳动物包括人适宜的日剂量当肠道度给药时是约0.05mg/kg到约10mg/kg，优选约0.1到2mg/kg；对于口服给药，剂量范围是约1到约75mg/kg，优选0.1到10mg/kg体重。活性成分优选以相同剂量给药，每天一次到四次。但是通常以小剂量给药，剂量逐渐增加直到在确定治疗的情况下对患者的最佳剂量。根据优良的临床实践，优选使用本发明化合物以产生有效抗淀粉样蛋白效果而不引起有害或不希望的副反应的浓度水平给药。但是应该理解实际上给药的化合物数量由医师决定，并且考虑相关情况如所治疗的疾病状态，所选择的给药化合物，选择的给药方式，患者的年龄，体重和个体反应以及患者综合症的严重程度。
给出以下实施例用以说明本发明，不以任何方式构成对本发明的限制，因为在本发明精神范围内对本发明的许多变化是可能的。
具体的实施方式在以下实施例中所有给出的温度是摄氏度，熔点使用ThomasScientific Unimelt的毛细管熔点仪测定，没有校正；质子核磁共振光谱(1H NMR)使用Bruker Avance300，Bruker Avance 400，或BrukerAvance 500光谱仪记录；所有光谱在指定的溶剂中测定，化学位移以δ为单位从内标四甲基硅烷(TMS)向低磁场移动，质子偶合常数以赫兹(Hz)记录。分裂图形规定如下s表示单峰；d表示双峰；t表示三重峰；q表示四重峰；m表示多重峰；br表示宽峰；dd表示双重双峰；br d，宽双峰；dt表示双重三峰；br s宽单峰；dq表示四重双峰。红外(IR)光谱使用溴化钾(KBr)或氯化钠膜，用Jasco FT/IR-410或Perkin Elmer 2000FT-IR光谱仪测定，从4000cm-1-400cm-1，校准到1601cm-1聚苯乙烯膜的吸收，以厘米倒数(cm-1)记载。旋光度[α]D使用RudolphScientific Autopol IV旋光仪在指定溶剂中测定，浓度以mg/mL给出。低分辨质谱(MS)和表观分子(MH+)或(M-H)+使用Finnegan SSQ7000测定。高分辨质谱使用Finnegan MAT900测定。液相色谱(LC)/质谱使用Shimadzu LC结合Water Micromass ZQ进行。
使用以下缩写字DMF(二甲基甲酰胺)；THF(四氢呋喃)；DMSO(二甲亚砜)，Leu(亮氨酸)；TFA(三氟乙酸)；DAST[(二乙基氨基)硫三氟化物]，HPLC(高压液体色谱法)；rt(室温)；aq.(含水的)。
反应流程1的举例 (2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺往(D)-亮氨酸酰胺盐酸化物(0.25g，1.5mmol)和Et3N(0.43mL，3.0mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中加入4-氯苯磺酰基氯(380mg，1.8mmol)。将得到的溶液于室温搅拌18小时，反应用二氯甲烷(200mL)稀释，用H2O，0.5N HCl，食盐水洗涤，在MgSO4上干燥，得到标题化合物(410mg)，为白色固体，产率90％。MS(ESI)，(M+H)+305.2；1HNMR(DMSO-d6)δ7.77(d，2H，J＝8.7)，7.62(d，2H，J＝8.7)，6.90(brs，1H)，3.67(m，1H)，1.54(m，1H)，1.31(m，2H)，0.81(d，3H，J＝7.0)，0.71(d，3H，J＝7.0)。
转化III为I的方法A (2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-甲氧基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例1)(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺(300mg，1mmol)，K2CO3(170mg，1.2mmol)，和4-甲氧基苄基氯(170mg，1.1mmol)在DMF(25mL)中被加热到60℃18小时。反应用EtOAc(150mL)稀释和用H2O，食盐水洗涤，在MgSO4上干燥，浓缩得到粗的白色蜡状物，进一步用快速色谱法提纯(SiO2，25％ EtOAc/己烷)得到标题化合物(297mg)为白色固体，产率70％。[a]D＝+44.2(c1.00，MeOH)；MS(ESI)，(MH)-422.9；1H NMR(CDCl3)δ7.63(d，2H，J＝7.0)，7.42(d，2H，J＝7.0)，7.25(d，2H，J＝8.0)，6.79(d，2H，J＝8.0)，6.25(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.36(dd，2H，J＝50，15)，4.26(t，1H，J＝7.2)，3.78(s，3H)，1.83(m，1H)，1.18-1.34(m，2H)，0.75(d，3H，J＝7.0)，0.67(d，3H，J＝7.0)；IR(KBr)3480，2959，1693，1674，1514，1333，1158cm-1。
转化III为I的方法B
6-二甲基氨基烟酸甲酯6-氯烟酸甲酯(4.0g，23mmol)在二甲基胺/MeOH(2M，80mL，160mmol)中的溶液在压力容器中于95℃搅拌2小时，冷却到室温，浓缩。将残留物溶解在EtOAc(250mL)中，用水洗涤(2×150mL)，在Na2SO4上干燥，浓缩得到标题化合物为褐色固体(4.1g，98％)。MS(ESI)，(M+H)+181.24；1H NMR(CDCl3)δ8.79(s，1H)，7.99(d，1H，J＝9.2)，6.45(d，1H，J＝9.2)，3.85(s，3H)，3.15(s，6H)。
2-二甲基氨基-5-羟甲基吡啶6-二甲基氨基-烟酸甲酯(4.14g，23.0mmol)在无水乙醚(80mL)中的溶液于0℃用氢化锂铝处理(1M，乙醚中，20mL，20mmol)。将该混合物室温搅拌0.5小时，再冷却到0℃，使用NaHCO3(10mL)饱和水溶液猝灭，得到的混合物于室温搅拌0.5小时，过滤，用乙醚洗涤。合并的滤液在Na2SO4上干燥，浓缩后得到标题化合物为米色蜡状固体(3.5g，100％)。MS(ESI)，(M+H)+153.4；1H NMR(CDCl3)δ8.06(d，1H，J＝2.4)，7.47(dd，1H，J＝2.4，8.8)，6.45(d，1H，J＝8.8)，4.50(s，2H)，3.06(s，6H)，1.98(br s，1H)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(2-二甲基氨基吡啶-5-基)氨基]-4-氟-4-甲基戊酰胺TFA盐(实施例459)往(2R)-2-[(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基戊酰胺(按照反应流程20制备或从γ-氟-D-Leu-OH甲酯制备，Papageorgiou等人.，Bioorg.& Med.Chem.Lett.1994，Vol.4，p.p.267-272；0.060g，0.18mmol)，2-二甲基氨基-5-羟基甲基吡啶(71mg，0.46mmol)，三苯基膦(122mg，0.464mmol)在二氯甲烷(9.5mL)的浑浊溶液中于室温滴加偶氮二羧酸二异丙基酯(75μL，0.46mmol)。得到的淡黄色溶液于室温搅拌2小时，于真空下浓缩。将残留物溶解在甲醇中，使用反相制备HPLC(YMC S5，ODS，+MeOH-水-TFA)提纯，得到标题化合物白色泡沫(90mg，85％)。MS(ESI)，(M+H)+457.2；1H NMR(CDCl3)δ8.11(s，1H)，7.95(d，1H，J＝9.6)，7.77(d，2H，J＝6.8)，7.51(d，2H，J＝6.8)，6.76(d，2H，J＝9.6)，6.34(s，1H)，6.02(s，1H)，4.58(br d，1H，J＝8.4)，4.46(d，1H，J＝16.0)，4.06(d，1H，J＝16)，3.29(s，6H)，2.50(m，1H)，1.39(m，1H)，1.25(d，3H，J＝22.0)，1.17(d，3H，J＝22.0)。
反应流程1-固体支持物的举例 聚合物-连接的D-Leu-NH2FMOC-保护的Rink酰胺树脂(30g，0.61mmol/g，18mmol)用哌啶/DMF溶液(250mL)处理。混合物于室温振荡24小时，干燥，用DMF(5×200mL)，二氯甲烷(5×200mL)洗涤，于真空下干燥。树脂然后用FMOC-D-Leu-OH(22g，62mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(2.5g，18mmol)，1，3-二异丙基碳二亚胺(9.8mL，62mmol)和DMF(250mL)处理。混合物被振荡20小时，沥干，用DMF(4×200mL)，DMF-水(1∶1，3×200mL)，DMF(3×200mL)，MeOH(3×200mL)，二氯甲烷(3×200mL)洗涤，干燥。反应完成和树脂连接的FMOC-D-Leu-NH2(0.56mmol/g)的荷载通过用10％(v/v)TFA/二氯甲烷(2mL)处理52mg树脂，得到11mg FMOC-D-Leu-NH2确定，树脂连接的FMOC-D-Leu- NH2用20％(v/v)哌啶/DMF溶液(250mL)脱保护，得到聚合物连接的D-Leu-NH2(20g)。
聚合物连接的(R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺上述聚合物连接的D-Leu-NH2(20g)使用二氯甲烷(150mL)，吡啶(100mL)和4-氯苯基磺酰基氯(20.0g，94.8mmol)处理。将该混合物振荡24小时，沥干，用DMF(4×200mL)，二氯甲烷(4×200mL)洗涤，浓缩，得到聚合物连接的(R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺，是黄色树脂(22g)。反应完成和树脂(0.57mmol/g)的荷载通过用10％(v/v)TFA/二氯甲烷(2mL)处理50mg树脂，得到8.7mg的(R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺确定。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-甲基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例60)往聚合物连接的(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基戊酰胺(负载0.45mmol/g，50.0mg，0.0225mmol)，4-甲基苄基溴(44mg，0.24mmol)和DMF(1.5mL)的混合物中加入2-叔丁基亚胺-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮杂-膦(0.10mL，0.34mmol)。得到的混合物于室温被振荡2天沥干，用DMF(4×2mL)，MeOH(4×2mL)和二氯甲烷(4×2mL)洗涤。然后树脂用10％(v/v)TFA/二氯甲烷处理。将混合物振荡1小时，过滤，用二氯甲烷(2×0.5mL)洗涤，合并的滤液于真空下浓缩，得到标题化合物为米色固体(7.7mg，100％，HPLC纯度＞95％)。HRMS(ESI)，(M-H)-，C20H24SClN2O3计算值407.1206，测定值407.1201；1H NMR(CDCl3)δ7.64(d，2H，J＝8.0)，7.44(d，2H，J＝8.0)，7.22(d，2H，J＝8.0)，7.08(d，2H，J＝8.0)，6.29(br s，1H)，5.34(brs，1H)，4.53(d，1H，J＝15.2)，4.34(d，1H，J＝15.2)，4.27(t，1H，J＝7.2)，2.32(s，3H)，1.84(m，1H)，1.30(m，1H)，1.21(m，1H)，0.75(d，3H，J＝6.8)，0.67(d，3H，J＝6.8)；IR(KBr)3467，3367，2956，2869，1694，1670，1340，1160cm-1。
反应流程2的举例 (2R)-2-(4-甲氧基苄基氨基)-4-甲基戊酰胺D-亮氨酸酰胺盐酸化物(2.8g，16.8mmol)和p-茴香醛(2.29g，16.8mmol)于甲醇(150mL)中的溶液用无水ZnCl2(538mg，5mmol)处理。得到的悬浮液用一份NaCNBH3(1.05g，16.8mmol)处理，加热回馏3小时。将反应冷却到室温，使用饱和NaHCO3(3mL)猝灭，用EtOAc(500mL)稀释，用食盐水洗涤。浓缩得到粗苄基胺为白色蜡状物，不需要进一步提纯。(3.57g，84％).MS(ESI)，(M+H)+251.4；1H NMR(CDCl3)δ7.20(d，2H，J＝6.6)，7.10(br s，2H)，6.88(d，2H，J＝8.4)，5.30(br s，1H)，3.80(s，3H)，3.63(dd，2H，J＝4.5，12)，1.44-1.65(m，3H)，0.95(d，3H，J＝6.3)，0.80(d，3H，J＝6.3)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-甲氧基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例1)(2R)-2-[N-(4-甲氧基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(3.57g，14.3mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)中，用Et3N(4.2mL，29mmol)和4-氯苯磺酰基氯(3.6g，17mmol)于室温处理18小时。除去溶剂，将残留物溶解于EtOAc(500mL)中。有机溶液用H2O，食盐水洗涤，在MgSO4上干燥和浓缩，得到的产物进一步用快速色谱法提纯(SiO2，1％ MeOH/二氯甲烷)得到标题化合物(2.4g)为浅色固体，40％产率。MS(ESI)，(M-H)-422.9；1H NMR(CDCl3)δ7.63(d，2H，J＝7.0)，7.42(d，2H，J＝7.0)，7.25(d，2H，J＝8.0)，6.79(d，2H，J＝8.0)，6.25(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.36(dd，2H，J＝5.0，15)，4.26(t，1H，J＝7.2)，3.78(s，3H)，1.83(m，1H)，1.18-1.34(m，2H)，0.75(d，3H，J＝7.0)，0.67(d，3H，J＝7.0)；IR(KBr)3480，2959，1693，1674，1514，1333，1158cm-1。
反应流程3的举例 (2R)-2-[N-(4-吗啉代己基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例25)(2R)-2-[N-(4-溴己基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例24；按照反应流程1制备；0.20g，0.44mmol)，Et3N(0.25mL，1.7mmol)和吗啉(150mg，1.7mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液于室温搅拌18小时，浓缩反应得到白色粗蜡状物，用快速色谱法(SiO2，85％EtOAc/5％己烷/10％ MeOH)提纯，得到标题化合物(112mg)为白色固体，54％产率。MS(ESI)，(M+H)+474.4；1H NMR(DMSO-d6)δ7.82(d，2H，J＝8.0)，7.64(d，2H，J＝8.0)，7.42(br s，1H)6.99(s，1H)，4.25(m，1H)，3.51-3.60(br s，4H)，3.18-3.41(m，2H)，2.25-2.35(br s，4H)，2.27(m，
2H)1.15-1.62(m，9H)，0.80(d，6H，J＝6.0)。
反应流程4的举例 (2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-氨基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例48)(2R)-(2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-硝基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(化合物实施例24；按照反应流程1制备；2.8g，6.6mmol)与10％Pd/C(1g)和浓HCl(1mL)悬浮于MeOH(100mL)中，于氢气氛下在40psi放置1小时。悬浮液通过C盐过滤，浓缩后得到标题化合物为褐色固体(2.4g，88％产率)。MS(ESI)，(M+H)+410.1；1H NMR(CDCl3)δ7.80(d，2H，J＝8.5)，7.63(d，2H，J＝8.5)，7.52(br s，1H)，7.46(d，1H，J＝8.0)，7.26(d，1H，J＝8.0)，7.02(br s，1H)，4.70(dd，2H，J＝50，18)，4.30-4.41(m，1H)，3.67(br s，2H)，1.28-1.33(m，3H)，0.86(d，3H，J＝7.0)，0.57(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-甲基氨基苄基)安基]-4-甲基戊酰胺(实施例51)(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-氨基苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例48,400mg，1mmol)，Et3N(0.16mL，1.1mmol)，硫酸二甲酯(139mg，1.1mmol)于25mL甲苯中的溶液于室温搅拌18小时。浓缩反应，置入EtOAc中用H2O，食盐水洗涤，K2CO3上干燥和浓缩，得到粗的原料和产物的混合物。使用快速色谱法(SiO2，35％ EtOAc/己烷)进一步提纯，得到标题化合物195mg，46％产率。MS(ESI)，(M+H)+424.1；1H NMR(CDCl3)δ7.65(d，2H，J＝8.0)，7.58(d，2H，J＝8.2)，7.47(d，2H，J＝8.0)，7.31(d，2H，J＝8.5)，6.24(br s，1H)，5.16(br s，1H)，4.50(dd，2H，J＝50，17)，4.27(t，1H，J＝10)，2.44(s，3H)，1.74-1.83(m，1H)，1.25-1.33(m，1H)，0.93-1.01(m，1H)，0.74(d，3H，J＝7.0)，0.63(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-二甲基氨基苄基)氨基]-4-甲基戊酰胺(实施例65)(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-氨基苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例48，0.10g，0.22mmol)溶解于DMF(5mL)中。往该溶液中加入碘甲烷(62mg，0.44mmol)和碳酸铯(220mg，0.66mmol)。于40℃搅拌反应18小时。将反应物倒入EtOAc和水中，收集有机相，在MgSO4上干燥，浓缩得到油状残留物，残留物被进一步提纯(Biotage40S，负载于二氯甲烷中，用25％ EtOAc/己烷洗脱)得到黄色粉末(15mg，16％)。MS(ESI)，(M+H)+438.1；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ7.74(dd，2H，J＝1.9，6.7)，7.54(dd，2H，J＝1.9，6.8)，7.43(s，1H)，7.16(d，2H，J＝8.6)，7.01(s，1H)，6.61(d，2H，J＝8.8)，4.59(q，2H，J＝16，25)，4.34(dd，1H，J＝5.0，9.3)，2.85(s，6H)，1.27-1.47(m，3H)，0.80(d，3H，J＝5.9)，0.52(d，3H，J＝6.1)。
反应流程5的举例 {N-[(1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基]-N-(4-氯苯磺酰基)氨基}乙酸叔丁基酯(实施例46)(2R)-2-(4-氯苯基磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺(3.00g，9.87mmol)溶解于DMF(50mL)中。往该溶液中加入碳酸钾(6.0g，39mmol)，溴代乙酸叔丁基酯(6.0mL，39mmol)。将溶液加热到70℃3小时，反应用EtOAc和饱和NaHC03猝灭。有机层用食盐水洗涤，在MgSO4上干燥和浓缩。粗油状物进一步在Biotage 40M上提纯(负载于二氯甲烷，30％EtOAc/己烷洗脱)，得到白色粉末(1.2g，35％)。MS(ESI)，(M+H)+446.3；1H NMR(CDCl3)δ7.76(d，2H，J＝8.0)，7.52(d，2H，J＝8.0)，6.61(br s，1H)5.45(s，1H)，4.15-4.18(m，1H)，3.09-3.24(m，2H)，2.50-2.58(m，4H)，2.31-2.39(m，2H)，1.92-1.99(m，1H)，1.15-1.59(m，8H)，1.00-1.04(m，7H)，0.71-0.74(m，6H)。
{N-[(1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基]-N-(4-氯苯磺酰基)氨基}乙酸(实施例59)将三氟乙酸(15mL)加入到{N-[(1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基]-N-(4-氯苯磺酰基)氨基}乙酸叔丁酯(0.50g，1.2mmol)于二氯甲烷(15mL)中的溶液中，于室温搅拌反应4小时。浓缩反应得到白色固体(0.40g，92％)，不需要进一步提纯可以使用。MS(ESI)，(M+H)+363.1；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ7.90(dd，2H，J＝2.0，6.8)，7.65(dd，2H，J＝2.0，6.8)，7.60(s，1H)，7.06(s，1H)，4.32(d，1H，J＝18)，4.12(t，1H，J＝8.0)，4.02(d，1H，J＝18)，1.55-1.65(m，1H)，1.35-1.45(m，2H)，0.78(d，3H，J＝6.1)，0.73(d，3H，J＝6.1)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(环丙基氨基甲酰基甲基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例88)往N-[(1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基]-N-(4-氯苯磺酰基)氨基}乙酸(实施例59，175mg，0.480mmol)，环丙基胺(41μL，0.58mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入1-羟基苯并三唑(47mg，0.72mmol)和1，3-二环己基碳二亚胺(144mg，0.720mmol)，于室温搅拌反应18小时，倒入EtOAc/水混合物中。分离有机层，在MgSO4上干燥和浓缩为清澈的油状残留物，残留物用Biotage 40S进一步提纯(40％ EtOAc洗脱，己烷中)，得到白色固体(54mg，29％)。MS(ESI)，(M+H)+402.2；1HNMR(CDCl3，500MHz)δ7.85(dd，2H，J＝1.9，8.9)，7.50(dd，2H，J＝2.0，8.7)，7.40(br s，1H)，6.55(br s，1H)，6.30(br s，1H)，4.23(dd，1H，J＝2.9，8.9)，3.92(d，1H，J＝17)，3.83(d，1H，J＝17)，2.68-2.73(m，1H)，1.75-1.83(m，1H)，1.50-1.57(m，1H)，1.40-1.49(m，1H)，0.88(d，3H，J＝6.4)，0.87(d，3H，J＝6.7)，0.80(d，2H，J＝7.0)，0.51(t，2H，J＝4.0)。
反应流程6的举例
4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]甲基}-苯甲酸(实施例89)实施例61的化合物[4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯，[354mg，0.782mmol]溶解于甲醇(4mL)中，加入5N NaOH溶液(1mL)，再加入足量的THF(1mL)达到均匀。1小时以后，加入另一份5N NaOH(1mL)，继续搅拌2.5小时，溶液用1N HCl酸化到pH2，用CHCl3萃取(2x)。干燥合并的有机层(Na2SO4)，浓缩得到白色固体(343mg，100％)。MS(ESI)，(M+H)+439.17；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.91(d，2H，J＝8.2)，7.81-7.84(m，3H)，7.56(d，2H，J＝8.6)，7.49(d，2H，J＝8.2)，6.55(br s，1H)，5.10(d，1H，J＝15.4)，4.23(dd，1H，J＝4.6，9.7)，4.05(d，1H，J＝15.4)，2.04-2.14(m，1H)，1.20-1.31(m，1H)，0.80-0.89(m，1H)，0.74(d，3H，J＝6.6)，0.68(d，3H，J＝6.6)。
(2R)-2-{[N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(吗啉-4-羰基)-苄基]氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例101)往4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}苯甲酸(50.0mg，0.114mmol)于DMF(0.3mL)中的0℃溶液中加入吗啉(12.9mg，0.148mmol)，随后加入1-羟基苯并三唑(18.5mg，0.137mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(26.2mg，0.137mmol)和iPr2NEt(26μL，0.15mmol)。2小时以后将溶液温热到室温，4小时以后将溶液倒入10％柠檬酸水溶液中，用EtOAc(2x)萃取，合并的有机层连续用水和饱和NaHC03洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩。快速柱色谱法提纯(SiO2，40-100％EtOAc/己烷)，得到标题化合物为白色固体(46.0mg，79％)。MS(ESI)，(M+H)+508.22；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.68(d，2H，J＝8.6)，7.29-7.47(m，6H)，6.38(br s，1H)，5.75(br s，1H)，4.65(d，1H，J＝16.0)，4.42(d，1H，J＝16.0)，4.32(t，1H，J＝7.5)，3.30-3.85(br m，8H)，1.69-1.78(m，1H)，1.28-1.37(m，1H)，1.08-1.14(m，1H)，0.76(d，3H，J＝6.5)，0.63(d，3H，J＝6.6)。
反应流程7的举例 4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基l-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(实施例92)往(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺(4.2g，14mmol)于DMF(50mL)的溶液中加入碳酸铯(13.6g，417mmol)。再往反应中加入4-(甲苯-4-磺酰氧基甲基)-哌啶1-甲酸叔丁基酯(参见Gilissen，C.；Bormans，G.；De Groot，T.；Verbruggen，A.J.Labeled Cmpd.Radiopharm.1999，42，1289；10.4g，282mmol)。于70℃搅拌反应18小时。使用饱和NaHCO3水溶液猝灭，用EtOAc萃取。收集有机层，用食盐水洗涤，在MgSO4上干燥，浓缩得到清澈油状物，该油状物用Biotage 40S提纯(用30％EtOAc洗脱，己烷中)得到白色固体(3.0g，44％)。MS(ESI)，(M+H)+502.1；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ7.86(dd，2H，J＝2.0，6.8)，7.65(dd，2H，J＝2.0，6.8)7.37(br s，1H)，7.07(brs，1H)，4.19(t，1H，J＝7.6)，3.92(br s，2H)，3.35(dd，1H，J＝15，6.8)，3.05(dd，1H，J＝15，8.1)，1.85(br s，1H)，1.50-1.70(m，4H)，1.38(s，9H)，1.10-1.20(m，1H)，0.80-1.00(m，3H)，0.82(d，6H，J＝7.6)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(哌啶-4-基甲基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例126)往4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(实施例92，2.6克，5.2mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入三氟乙酸(10mL)。于室温搅拌反应1小时，浓缩得到白色固体(1.6g，84％)。MS(ESI)，(M+H)+402.15；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)，δ7.87(d，2H，J＝8.5)，7.66(d，2H，J＝8.6)，7.41(s，1H)，7.04(s，1H)，4.17(t，1H，J＝7.3)，3.40-3.50(m，1H)，3.20-3.25(m，1H)，3.03-3.10(m，1H)，2.65-2.80(m，2H)，1.85-2.00(m，1H)，1.20-1.85(m，2H)，1.45-1.60(m，1H)，1.30-1.40(m，1H)，1.10-1.30(m，4H)，0.75-0.90(m，1H)，0.82(d，3H，J＝7.3)，0.80(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[1-(吡啶-4-羰基)-哌啶-4-基甲基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例278)往(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例126，0.10g，0.22mmol)和Et3N(0.06mL，0.5mmol)于二氯甲烷(3.0mL)中的溶液中加入异烟酰氯盐酸化物(56mg，0.32mmol)，于室温搅拌反应18小时，倒入EtOAc和饱和NaHCO3水溶液的混合物中，分离有机溶液，用食盐水洗涤，在MgSO4上干燥，浓缩得到油状残留物，残留物用Biotage 10M提纯(用80％EtOAc/己烷洗脱)，得到白色固体(36mg，30％).MS(ESI)，(M+H)+509.20；1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.66(brs，2H)，7.80(d，1H，J＝8.6)，7.73(d，2H，J＝8.5)，7.51(d，2H，J＝7，6)，7.41(br s，1H)，6.64(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.70(br s1H)，4.10(br s 1H)，3.71(br s 1H)，3.33(br s，1H)，3.02(dd，2H，J＝4.8，16)，2.70-2.85(br s，1H)，1.50-2.09(m，5H)，1.18-1.33(m，4H，0.73(d，3H，J＝6.7)，0.68(d，3H，J＝6.5)。
4-{[N-(1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-哌啶-1-甲酸乙氧苯基酰胺(实施例256)向(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(哌啶-4-基甲基)氨基]-4-甲基丙酰胺(实施例126，0.10g，0.22mmol)和Et3N(32μL，0.25mmol)在CH2Cl2(3.0mL)中的溶液加入(2-异氰酰-乙基)苯(0.040mL，0.30mmol)。反应于室温下搅拌18小时，然后倒入饱和NaHCO3水溶液中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，在MgSO4上干燥，浓缩得到油状残留物。将残留物用Biotage体系进一步纯化(用75％EtOAc/己烷洗脱)，得到所需产物为白色固体(67mg，52％)。MS(ESI)，(M+H)+549.00；1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.71(d，2H，J＝8.6)，7.71(d，2H，J＝8.9)，7.15-7.35(m，5H)，6.64(s，1H)，5.86(s，1H)，4.15(dd，1H，J＝5.2，9.5)，3.88(d，1H，J＝13)，3.76(d，1H，J＝13)，3.46(t，2H，J＝6.7)，3.21-3.29(m，1H)，2.97(dd，1H，J＝4.6，14)，2.65-2.85(m，4H)，1.75-1.95(m，3H)，1.00-1.30(m，5H)，0.75-0.80(m，1H)，0.72(d，3H，J＝6.7)，0.67(d，3H，J＝6.7)。
(2R)-2-(N-(4-氯苯磺酰基)-N-{1-[2-(4-氰基苯基)-2-氧-乙基]-哌啶-4-基甲基}-氨基)-4-甲基-戊酰胺(实施例286)往(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(哌啶-4-基甲基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例126，0.050g，0.12mmol)和Et3N(0.040mL，0.30mmol)于二氯甲烷(2.0mL)的溶液中加入4-(2-氯乙酰基)-苄腈(55mg，0.30mmol)。于室温搅拌反应18小时，浓缩得到残留物，残留物用Biotage体系(用80％EtOAc/己烷洗脱)提纯，得到29mg(48％)所需的产物为白色固体。MS(ESI)，(M+H)+545.16；1HNMR(CDCl3，500MHz)δ7.72(d，2H，J＝8.5)，7.50-7.65(m，2H)，7.50(d，2H，J＝7.0)，7.35-7.45(m，2H)，6.67(s，1H)，5.32(s，1H)，4.14(dd，1H，J＝5.0，9.0)，3.52(br s，1H)，3.28(t，1H，J＝14)，2.97(dd，1H，J＝3.5，14)，2.82(br s，1H)，1.00-2.00(m，10H)，0.71(d，3H，J＝6.5)，0.66(d，3H，J＝6.5)。
反应流程8的举例 (2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(四氢吡喃-2-基氧甲基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基戊酰胺(6.35g，196mmol)，Cs2CO3(5.62g，196mmol)和2-[(4-溴甲基)苄基]氧)四氢吡喃(5.62g，196mmol)在乙腈(200mL)中加热回馏1小时。反应通过C盐空吸热过滤，滤液在真空下浓缩得到白色泡沫(9.5g，96％)，用于下一步反应。MS(ESI)，(M+H)+510.9，1H NMR(CDCl3)δ7.83(d，2H，J＝8.0)，7.75(d，2H，J＝8.0)，7.39(d，2H，J＝8.0)，7.24(d，2H，J＝8.0)，6.25(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.82(d，1H，Jab＝12)，4.65(m，1H)，4.52(d，1H，Jab＝12)，4.30(d，1H，Jab＝16)，4.20(d，1H，Jab＝16)，3.74(m，2H)，3.46(m，1H)，1.89(m，1H)，1.66(m，6H)，0.97(d，3H，J＝7.0)，0.94(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-羟甲基)苄基氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例95)往(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(四氢吡喃-2-基氧甲基)苄基氨基]-4-甲基-戊酰胺(9.5g，186mmol)的甲醇(200mL)溶液中加入催化量的对甲苯磺酸，于室温将混合物搅拌过夜。真空下除去溶剂，得到的泡沫溶解在二氯甲烷(100mL)中，用1N NaOH，H2O，食盐水洗涤，在MgSO4上干燥，真空下除去滤液中的溶剂。得到的泡沫从热己烷中结晶，得到产物为白色固体(7.7g)，92％产率。MS(ESI)，(M+H)+425.17，1H NMR(CDCl3)δ7.68(d，2H，J＝7.0)，7.46(d，2H，J＝7.0)，7.33(d，2H，J＝8.0)，7.28(d，2H，J＝8.0)，6.26(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.67(br s，2H)，4.59(d，1H，Jab＝16)，4.37(d，1H，Jab＝16)，4.26(t，1H，7.0)，1.86-1.80(m，2H)，1.34-1.28(m，1H)，1.16-1.10(m，1H)，0.96(d，3H，J＝7.0)，0.93(d，3H，J＝7.0)。
甲磺酸4-{[N-((1R)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)-氨基]甲基}苄基酯往(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-羟甲基-苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(1.5g，3.5mmol)于二氯甲烷(15mL)中的冷却到0℃的搅拌着的溶液中加入Et3N(0.74mL，5.3mmol)。滴加甲磺酰氯(0.29mL，3.5mmol)于5mL二氯甲烷中的溶液，于0℃搅拌反应1小时。反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，迅速用1N HCl，食盐水洗涤，有机相通过棉塞干燥。真空下除去溶剂，以定量产率得到标题化合物。得到的泡沫用于下一步反应。MS(ESI)，(M-95)+，409.151H NMR(CDCl3)δ7.70(d，2H，J＝8.0)，7.48(d，2H，J＝8.0)，7.41(d，2H，J＝8.0)，7.38(d，2H，J＝8.0)，6.27(br s，1H)，5.32(br s，1H)，5.24(s，2H)，4.64(d，1H，Jab＝16)，4.43(d，1H，Jab＝16)，4.33(t，1H，J＝6)，2.90(s，3H)，1.90(m，1H)，1.60(m，2H)，0.96(d，3H，J＝7.0)，0.91(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-二甲基氨基甲基-苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例110)往甲磺酸4-{[N-((1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-苄基酯(150mg，0.298mmol)于二氯甲烷(3mL)中的冷却到0℃的搅拌着的溶液中加入1当量Et3N，再加入二甲胺(0.3mL，2M，THF中)，于室温搅拌反应过夜，混合物用二氯甲烷稀释，用H2O，食盐水洗涤，在MgSO4上干燥和浓缩，得到琥珀色玻璃状物。快速色谱法提纯(SiO2，10％MeOH/CH2CI2)，得到标题化合物(95mg)，71％产率。MS(ESI)，(M+H)+452.23，1H NMR(CDCl3)δ7.94(d，2H，J＝8.0)，7.74(d，2H，J＝8.0)，7.63(d，2H，J＝8.0)7.38(d，2H，J＝8.0)，6.23(brs，1H)，5.35(br s，1H)，4.22(d，1H，Jab＝16)，4.14(d，1H，Jab＝16)，3.28-3.23(m，3H)，2.17(br s，6H)，1.95(m，1H)，1.55(m，2H)，0.96(d，3H，J＝7.0)，0.93(d，3H，J＝7.0)。
反应流程9的举例 (2R)-2-[N-(4-乙酰基氨基苄基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例163)实施例48化合物[(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-氨基苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(250mg，0.60mmol)和Et3N(120mg，1.2mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液使用乙酰氯(56mg，0.72mmol)处理。搅拌18小时以后浓缩反应，使用硅胶快速色谱法(1％甲醇/二氯甲烷)提纯，得到标题化合物(110mg，41％)。MS(ESI)，(M-H)-422.9；1HNMR(CDCl3)δ7.67(d，2H，J＝8.0)，7.28-7.46(m，6H)，7.12(br s，1H)，6.24(br s，1H)，5.19(br s，1H)，4.48(dd，2H，J＝50，15)，4.27(t，1H，J＝7.0)，2.18(s，3H)，1.80-2.01(m，1H)，1.12-1.32(m，2H)，0.75(d，3H，J＝7.0)，0.67(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-{4-[(2-二甲基氨基-乙酰基)-甲基-氨基]-甲基}-苄基)-氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例272)(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-甲基氨基甲基-苄基)-氨基]-4-甲基-戊酰胺(75mg，0.17mmol)，(α-二甲基氨基)乙酸(18mg，0.17mmol)，1-羟基苯并三唑(24mg，0.17mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(33mg，0.17mmol)混合于3mL二氯甲烷中，搅拌过夜。反应混合物用5mL二氯甲烷稀释和用1N NaOH和食盐水洗涤。有机相通过棉花过滤干燥，真空除去溶剂。通过制备HPLC提纯，得到标题化合物(61mg)，68％产率。MS(ESI)，523.4(M+H)+1H NMR(CDCl3)δ8.02(d，2H，J＝8.0)，7.71(d，2H，J＝8.0)，7.37(d，2H，J＝8.0)，7.28(d，2H，J＝8.0)，6.23(br s，1H)，5.51(br s，1H)，4.46(s，2H)，4.70(d，1H，Jab＝16)，4.33(d，1H，Jab＝16)，3.25(t，1H，J＝6.0)，2.69(s，3H)，2.63(s，2H)，2.20(s，6H)，1.95(m，1H)，1.60(m，2H)，0.98(d，3H，J＝7.0)，0.94(d，3H，J＝7.0)。
反应流程10的举例 (2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(2-二甲基氨基吡啶-5-基甲基)氨基]-4-甲基戊酰胺TFA盐(实施例254)(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(2-氯吡啶-5-基甲基)氨基]-4-甲基戊酰胺(由反应流程1制备，18mg，41mmol)于二甲基胺/THF(2M，20mL，40mmol)中的溶液在压力容器中于95℃搅拌30小时。5mL反应混合物(总反应体积的25％)用反相制备HPLC(YMC S5，ODS，MeOH-水-TFA)提纯，得到标题化合物为白色泡沫(17mg，30％产率)。HRMS(ESI)，(M-H)-，C20H26SClN4O3计算值437.1426，测定值437.1420；1H NMR(CDCl3)δ8.04(s，1H)，8.03(d，1H，J＝9.8)，7.76(d，2H，J＝7.6)，7.54(d，2H，J＝7.6)，6.83(d，1H，J＝9.8)，6.62(br s，1H)，6.40(br s，1H)，4.64(d，1H，J＝15.9)，4.29(m，1H)，4.18(d，1H，J＝15.9)，3.30(s，6H)，1.84(m，1H)，1.29(m，1H)，0.93(m，1H)，0.77(d，3H，J＝6.5)，0.72(d，3H，J＝6.5)。
反应流程11的举例 (2R)-2-[N-(4-烯丙氧基-3-氟苄基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基-戊酰胺往(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基-戊酰胺(1.00g，3.29mmol)和Cs2CO3(1.29g，3.95mmol)于DMF(25mL)的溶液中加入l-烯丙氧基-4-溴甲基-2-氟苯(参见Graham，Samuel L等人，Eur.Pat.Appl.(1992)EP 487270；0.88g，3.67mmol)。得到的溶液于室温搅拌18小时，反应用9∶1 EtOAc己烷(350mL)稀释，用H20(4×200mL)，食盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，得到标题化合物(393mg)为白色固体，26％产率。MS(ESI)，(M+H)+469.1；1H NMR(CDCl3)δ7.66(d，2H，J＝8.1)，7.45(d，2H，J＝8.1)，7.11(d，1H，J＝12.0)，6.98(m，1H)，6.84(t，1H，J＝8.0)，6.22(br s，1H)，6.04(m，2H)，5.42(m，1H)，5.16(br s，1H)，4.59(m，2H)，4.40(m，3H)，1.83(m，1H)，1.32(m，1H)，1.14(m，1H)，0.76(d，3H，J＝7.0)，0.68(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[3-氟-4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例427)上述烯丙氧基中间体(0.39g，0.84mmol)，四氧化锇(0.01g，0.04mmol)和三甲基胺N-氧化物(0.140g，1.81mmol)的混合物溶解在丙酮(10mL)中，室温搅拌4小时，真空浓缩溶液，重新溶解于1.5∶1二噁烷H2O(15mL)中。加入高碘酸钠(0.22g，1.0mmol)，溶液于室温搅拌18小时，反应用EtOAc(200mL)稀释和用H2O，食盐水洗涤，Na2SO4上干燥和浓缩，得到(2R)-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[3-氟-4-(2-氧-乙氧基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺为粗米色固体，该粗产物不用提纯用于下一步反应。(2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[3-氟-4-(2-氧-乙氧基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(0.16g，0.34mmol)和吗啉(0.090g，1.0mmol)溶解于EtOH(5mL)中，加热到80℃约15分钟。移去油浴，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.290g，1.36mmol)。浆状物于室温搅拌16小时，溶液浓缩至干，溶解在食盐水中，使用EtOAc(2×100mL)萃取，Na2SO4上干燥，真空浓缩得到粗橙色残留物，进一步用制备HPLC(20×100mm YMC S5 ODS C-18柱，25mL/min，0-100％MeOH/H20 0.1％TFA 15min)提纯，得到作为TFA盐的标题化合物(69.5mg)，为淡黄色固体，31％产率。[a]D+23(c 6.4，二氯甲烷)；LCMS(M+H)+542.25；1H NMR(CDCl3)δ7.71(d，2H，J＝8.0)，7.50(d，2H，J＝8.0)，7.16(d，1H，J＝12.0)，7.05(d，1H，J＝8.0)，6.87(t，1H，J＝8.0)，6.38(br s，1H)，5.91(brs，1H)，4.41(ABq，2H，J＝16，Jab＝176)，4.45(m；2H)，4.27(t，1H，J＝8.0)，4.03(m，4H)，3.70(m，2H)，3.51(m，2H)，3.10(m，2H)，1.83(m，1H)，1.29(m，1H)，1.05(m，1H)，0.75(d，3H，J＝8.0)，0.68(d，3H，J＝8.0)。
反应流程12的举例
(2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(l-羟基-1-甲基-乙基)-苄基]-氨基{-4-甲基-戊酰胺(实施例287)实施例61化合物[4-{[N-((lR)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯，101mg，0.221mmol]于THF(2mL)的溶液冷却到0℃，滴加甲基镁溴化物(1.4M甲苯/THF中，0.50mL，0.71mmol)的溶液。暗黄色溶液于0℃搅拌30分钟，再加入另一份甲基镁溴化物溶液(0.25mL，0.353mmol)。1小时以后，将溶液温热到室温，3.5小时以后，反应加入饱和NH4Cl水溶液猝灭，用EtOAc(2x)提取。干燥(Na2SO4)合并的有机相，浓缩，快速柱色谱法提纯(SiO2，20-100％ EtOAc/己烷)，得到标题化合物为白色泡沫(62mg，62％)。MS(ESI)，(M+H)+453.16；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.61(d，2H，J＝8.7)，7.40(d，2H，J＝8.7)，7.37(d，2H，J＝8.4)，7.26(d，2H，J＝8.4)，6.28(br s，1H)，5.25(br s，1H)，4.49(d，1H，J＝15.9)，4.41(d，1H，J＝15.9)，4.33(t，1H，J＝6.6)，1.73-1.80(m，1H)，1.55(s，6H)，1.28-1.35(m，1H)，1.20-1.25(m，1H)，0.77(d，3H，J＝6.5)，0.66(d，3H，J＝6.6)。
反应流程13的举例 (2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-[4-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例436)步骤1实施例61化合物[4-1{[N-((lR)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯基磺酰基)氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯，0.500g，1.10mmol]的溶液用甲醇(10mL)稀释，加入肼(2mL)，原料慢慢在5分钟内溶解。30分钟以后，将溶液加热回馏，22小时以后将溶液冷却到室温，加入水(15mL)形成白色沉淀，混合物用EtOAc(2x)萃取，合并的有机层用食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩得到相应的乙酰基肼，为白色泡沫，不用提纯直接进行环化步骤。
步骤2粗乙酰基肼(0.150g，0.331mmol)溶解在吡啶(2.2mL)中，加入乙酰亚氨酸乙酯盐酸化物(60.0mg，0.364mmol)，将混合物加热回馏1.25小时，溶液被冷却到室温，浓缩除去吡啶。残留物溶解在EtOAc中，连续用水，1N HCl(2x)，饱和NaHC03和食盐水洗涤。干燥(MgS04)溶液和浓缩，快速柱色谱法提纯(SiO2，50-100％EtOAc/己烷)，得到列举的化合物为白色固体(138mg，88％，对于个2步骤)。[α]D+11.1(c7.0mg/ml，CHCl3)；MS(ESI)，(M+H)+477.22，1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.94(dd，2H，J＝1.8，8.4)，7.69(dd，2H，J＝1.8，8.7)，7.45-7.50(m，4H)，6.23(br s，1H)，5.19(br s，1H)，4.65(d，1H，J＝15.9)，4.46(d，1H，J＝15.9)，4.31(dd，1H，J＝6.6，7.8)，2.61(s，3H)，1.75-1.85(m，1H)，1.28-1.35(m，1H)，1.08-1.15(m，1H)，0.76(d，3H，J＝6.6)，0.64(d，3H，J＝6.6)。
反应流程14的举例 (2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(3-甲基-[l，2，4]噁二唑-5-基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例437)步骤1于室温往实施例89化合物[4-{[N-((1R)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯基磺酰基)-氨基]-甲基}-苯甲酸，520mg，1.2mmol]于DMF(2.4mL)和二氯甲烷(7.1mL)的溶液中加入1-羟基苯并三唑(192mg，1.42mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(272mg，1.42mmol)和iPr2NEt(0.31mL，1.8mmol)。再加入N-羟基乙酰胺(105mg，1.42mmol)，21小时以后仍然有明显的原料，所以定期性地加入所有试剂的追加部分促进反应，3天以后将混合物浓缩，在饱和NaHCO3水溶液和EtOAc(2x)之间分配，合并的有机层用食盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得到黄色油状物，不用提纯进行下一步反应。
步骤2粗乙酰胺肟溶解于甲苯(10mL)中，将溶液加热回馏，1小时以后加入吡啶(2mL)，继续加热15小时，浓缩混合物并且用EtOAc稀释，有机相连续用水，1N HCl(2x)，饱和NaHCO3水溶液和食盐水洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩。快速柱色谱法提纯(二氧化硅，10-40％EtOAc/己烷)，得到标题化合物为淡黄色固体。(238mg，42％，两步).[α]23D+9.30(c5.93，CHCl3)；MS(ESI)，(M+H)+477.18；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝8.4)，7.70(dd，2H，J＝1.8，8.4)，7.45-7.52(m，4H)，6.23(br s，1H)，5.19(br s，1H)，4.67(d，1H，J＝16.2)，4.47(d，1H，J＝15.9)，4.31(t，1H，J＝7.2)，2.47(s，3H)，1.75-1.85(m，1H)，1.28-1.35(m，1H)，1.08-1.15(m，1H)，0.76(d，3H，J＝6.6)，0.64(d，3H，J＝6.6)。
反应流程15的举例 (2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(5-甲基-l，2，4]噁二唑-3-基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例465)实施例6化合物[(2R)-2-[N-(4-氯苯磺酰基)-N-(4-氰基苄基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(0.20g，0.47mmol)于乙醇(6mL)中的溶液使用羟胺(50％水溶液，0.050mL，0.71mmol)处理。反应加热到80℃18小时，浓缩反应得到残留物，从EtOAc/己烷中重结晶，得到白色固体(136mg，51％)。将该固体(0.18mmol)溶解于氯仿中用Et3N(0.030mL，0.24mmol)和乙酰基氯(0.020mL，0.18mmol)处理，于室温搅拌反应2小时，倒入EtOAc和食盐水中。分离有机层，MgSO4干燥，浓缩残留物，将残留物溶解在甲苯中加热回馏24小时，浓缩反应得到残留物，使用Biotage体系提纯(1∶1EtOAc/己烷洗脱)，得到所需产品为白色固体(35mg，39％产率)。MS(ESI)，(M+H)+477.13；1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.98(d，2H，J＝8.2)，7.68(d，2H，J＝8.9)，7.45(d，4H，J＝8.5)，6.21(s，1H)，5.19(s，1H)，4.62(d，1H，J＝15)，4.48(d，1H，J＝16)，4.31(t，1H，J＝7.0)，2.65(s，3H)，1.75-1.85(m，1H)，1.20-1.35(m，4H)，1.10-1.17(m，1H)，0.85-0.90(m，1H)，0.75(d，3H，J＝6.7)，0.64(d，3H，J＝6.4)。
反应流程16的举例 (2R)-2-[N-(4-乙酰基苄基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(实施例273)实施例251化合物[4-{[N-((lS)-l-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)-氨基]-甲基}3-N-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺，0.100g，0.207mmol]于THF(2.1mL)的溶液冷却到0℃。滴加甲基镁溴化物(1.4M甲苯/THF中，0.178mL，0.249mmol)溶液，将得到的溶液于0℃搅拌3小时，。在此期间再加入甲基镁溴化物溶液(0.178mL，0.249mmol)，30分钟以后，加入最后一部分Me-MgBr溶液(0.3mL)。15分钟以后加入饱和NH4Cl水溶液和1N HCl猝灭反应，混合物用EtOAc(2x)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩。快速柱色谱法提纯(SiO220-60％EtOAc/己烷)，得到所需的化合物为灰白色泡沫(79mg，87％)。[α]23D+20.4(c 7.57，CHCl3)；MS(ESI)，(M+H)+437.13；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.87(d，2H，J＝8.4)，7.67(dd，2H，J＝1.8，8.7)，7.42-7.46(m，4H)，6.21(br s，1H)，5.28(br s，1H)，4.64(d，1H，J＝15.9)，4.45(d，1H，J＝15.9)，4.31(t，1H，J＝6.6)，2.58(s，3H)，1.73-1.80(m，1H)，1.25-1.35(m，1H)，1.05-1.14(m，1H)，0.74(d，3H，J＝6.5)，0.65(d，3H，J＝6.6)。
反应流程17的举例 (2R)-2-{N-(4-氯苯磺酰基)-N-[4-(3-哌啶-1-基-丙酰氨基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例274)往N-(4-{[N-((1S)-1-氨基甲酰基-3-甲基-丁基)-N-(4-氯苯磺酰基)氨基]-甲基}-苯基)-丙烯酰胺(0.10g，0.22mmol)于甲苯(5mL)中的溶液中加入哌啶(20mg，0.24mmol)。混合物温和回馏加热1小时，真空除去溶剂，快速色谱法提纯(SiO2，10％MeOH/二氯甲烷)，得到标题化合物(105mg)，86％产率。MS(ESI)，(M+H)+449.16，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.69(d，2H，J＝8.0)，7.63(d，2H，J＝8.0)，7.38(d，2H，J＝8.0)，7.23(d，2H，J＝8.0)，6.25(br s，1H)，5.35(br s，1H)，4.75(d，1H，Jab＝16)，4.38(d，1H，Jab＝16)，3.25(t，1H，J＝6.0)，2.65(t，2H，J＝6.0)，2.56-2.44(m，6H)，1.95(m，1H)，1.68-1.45(m，8H)，0.98(d，3H，J＝7.0)，0.94(d，3H，J＝7.0)。
反应流程18的举例
(2R)-2-(二苯亚甲基-氨基)-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-，3’λ6硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮往N-2-(二苯亚甲基-氨基)-1-{(l′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}乙酮(参见Josien，H.；Martin，A.；Chassaing，G.四面体通讯1991，32，6547；30.0g，68mmol)于HMPA(60mL)和THF(300mL)的-78℃溶液中滴加n-BuLi(1.6M，己烷中，42.4mL，68mmol)，维持温度低于-65℃。使反应升至室温，此时于室温滴加1-溴-3-氟乙烷(17.4g，137mmol)于THF(30mL)中的溶液。18小时以后将反应倒入H2O/HOAc(200mL/2mL)中，使用EtOAc稀释，有机层用饱和NH4Cl，食盐水洗涤，MgSO4干燥和浓缩。得到的橙色油状物，进一步用硅胶色谱法提纯(25％EtOAc/己烷)，得到白色固体，将其自15％EtOAc/己烷中重结晶，得到所需产品(24.3g，70％)。MS(ESI)(M+H+)483.27；1H NMR(CDCl3)δ7.66(d，2H，J＝7.2)，7.13-7.44(m，8H)，4.82-4.83(m，2H)，4.39-4.81(m，2H)，3.84-3.87(m，1H)，3.28(ABq，2H，J＝18，10)，2.33-2.41(m，2H)，2.02-2.04(m，2H)，1.84-1.87(m，2H)，1.32-1.39(m，2H)，1.10(s，3H)，0.91(s，3H)。
(2R)-2-氨基-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮(2R)-2-(二苯亚甲基-氨基)-1-{(1′S)，(5′s)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮(20.0g，41.0mmol)于THF(400mL)中的溶液使用1N HCl(200mL)处理。3小时以后反应用H2O稀释，用Et2O萃取。水相加入0.5N NaOH中和。基本相用二氯甲烷萃取，MgSO4干燥和浓缩，得到白色固体(11.9g，90％)。1H NMR(CDCl3)δ4.56-4.71(m，2H)，4.23-4.31(m，1H)，3.40-3.49(m，3H)，3.11(d，2H，J＝4.4)，1.17-2.23(m，8H)，1.13(s，3H)，0.93-1.12(m，3H)。
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮往(2R)-2-氨基-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮(12g，36mmol)和Et3N(10.4mL，72.0mmol)于二氯甲烷(350mL)中的溶液中一次加入4-氯苯磺酰基氯(9.1g，43mmol)，18小时以后浓缩反应，得到的残留物溶于EtOAc，用H2O，食盐水洗涤，MgSO4干燥上和浓缩，进一步用硅胶色谱法提纯(30％ EtOAc/己烷)，得到标题化合物(16.0g，92％)为白色蜡状物。1H NMR(CDCl3)δ7.79(d，2H，J＝8.0)，7.43(d，2H，J＝8.0)，5.69(br d，8.0)，4.42-4.77(m，4H)，3.71-3.72(m，1H)，3.10(ABq，2H，J＝9，4.4)2.11-2.29(m，2H)，1.33-1.99(m，6H)，1.04(s，3H)，0.91(s，3H)。
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟丁酸往(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-1-{(1′S)，(5′s)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟丁-1-酮(16g，32mmol)于乙腈中的(200mL)迅速搅拌的溶液中加入LiBr(13.9g，16mmol)，四丁基溴化铵(4.13g，12.8mmol)和LiOH(5.45g，0.130mol)，4.5小时以后浓缩反应到一半体积，用H2O稀释，用二氯甲烷萃取，水相用1N HCl酸化，用EtOAc萃取，合并EtOAc萃取液，MgSO4干燥和浓缩得到白色固体，其中9.4g直接进行下一步反应。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.39(d，1H，J＝9.0)，7.76(d，2H，J＝6.8)，7.64(d，2H，J＝6.8)，7.00(br s，1H)，4.29-4.48(m，2H)，3.80-3.88(m，1H)，1.66-1.96(m，2H)。
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟丁酰胺于N2气氛下往(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟丁酸(9.0g，31mmol)于DMF(250mL)的溶液中连续加入1-羟基苯并三唑水合物(6.2g，46mmol)，N，N-二异丙基乙基胺(23mL，124mmol)，氯化铵(3.34g，62mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(8.8g，46mmol)，得到的溶液于室温搅拌18小时。将溶液倒入冰水中(500mL)和过滤出固体，干燥，从10％ EtOAc/己烷中沉淀，得到清亮白色固体(4.5g)，50％产率。[α]D＝-21.0(c1.00，DMF)；MS(ESI)(M-H)-293.01；1H NMR(DMSO-d6)δ8.12(d，1H，J＝8.8)，7.77(d，2H，J＝7.0)，7.62(d，2H，J＝7.0)，7.38(brs，1H)，7.03(br s，1H)，4.22-4.47(m，2H)，3.71-3.85(m，1H)，1.65-1.92(m，2H)。
(2R)-2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-4-氟丁酰胺(实施例360)(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟丁酰胺(20mg，0.7mmol)按照反应流程1方法A转化为标题化合物，得到标题化合物(208mg)，73％产率。MS(ESI)(M-H)-407.99；[α]D＝+39.13(c 1.00，MeOH)；1HNMR(CDCl3)δ7.72(d，2H，J＝8.4)，7.58(d，2H，J＝8.4)，7.50(d，2H，J＝8.4)，7.45(d，2H，J＝8.4)，6.29(br s，1H)，5.21(br s，1H)，4.19-4.67(m，5H)，2.17-2.28(m，1H)，1.49-1.61(m，1H)。
反应流程19的举例 2-(4-氯苯磺酰基氨基)-6-氟-己酰胺(III)(二苯亚甲基-氨基)乙酸乙酯(8.6g，32mmol)，4-溴-1-氟丁烷(10.0g，64.5mmol)，K2CO3(13.4g，96.9mmol)，四丁基溴化铵(2.1g，6.5mmol)和乙腈(300mL)的混合物加热回馏72小时，反应冷却到室温，使用烧结玻璃漏斗过滤，真空浓缩滤液。残留物溶解于乙醚(250mL)中，沉淀出白色固体。真空过滤移去固体，将1N HCl溶液(100mL)加入到滤液中，其中含有粗产品(2-(二苯亚甲基氨基)-6-氟-己酸乙酯)。得到的两相混合物激烈搅拌3小时，将混合物转移到分液漏斗中，收集水相。有机层用1N HCl(30mL)萃取。合并的水相用200mL乙醚洗涤，加入浓HCl(10.8mL)，得到的溶液加热回馏6小时。将反应混合物冷却到室温，真空浓缩，往残留物中加入甲苯，再真空浓缩混合物，得到2-氨基-6-氟-己酸盐酸化物为白色固体。该粗氨基酸盐不需要提纯或鉴定即可以使用。将2-氨基-6-氟己酸盐酸化物(32.3mmol，理论量)悬浮于无水甲醇(300mL)中，冷却到0℃，于5分钟内慢慢加入亚硫酰氯(10.3mL，129mmol)，将得到的溶液温热至室温搅拌18小时，真空浓缩反应混合物，得到2-氨基-6-氟-己酸甲酯盐酸化物。将甲苯(100mL)和28％氨水(75mL)加入到该粗氨基酯中，于室温激烈搅拌得到的两相混合物24小时，真空浓缩反应混合物，残留固体悬浮于甲苯(200mL)中，再真空浓缩，得到6-氟己酰胺(II)为白色固体。该粗氨基酸酰胺溶解于无水DMF(50mL)和二氯甲烷(350mL)中，与4-氯苯磺酰基氯(82g，32.3mmol)和Et3N(13.5mL，96.9mmol)反应，2小时以后加入第二份4-氯苯磺酰基氯(1.70g，8.1mmol)。18小时以后，将得到的混合物倒入1NHCl(500mL)中，收集有机层，用水(2×500mL)洗涤。往有机层中加入己烷(600mL)，形成白色沉淀，真空过滤收集固体，用冷乙醇(50mL)淋洗，真空干燥，得到4.95g(48％产率，6步)2-(4-氯苯基磺酰基氨基)-6-氟-己酰胺(III)LCMS(M+Na)+345.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99(d，1H，J＝8.8)，7.77(d，2H，J＝8.8)，7.62(d，2H，J＝8.8)，7.29(s，1H)，6.95(s，1H)，4.34(dt，2H，Jd＝47.5，Jt＝6.1)，3.65(dt，1H，Jd＝5.6，Jt＝8.6)，1.60-1.39(m，4H)，1.36-1.15(m，2H)；元素分析计算值(C12H16ClFN2O3S)C，44.65；H，4.99；N，8.67；测定值C，44.61；H，5.08；N，8.75。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-6-氟-己酰胺(实施例333)2-(4-氯苯磺酰基氨基)-6-氟-己酰胺(0.500g，1.55mmol)按照反应流程1方法A转化为标题化合物(360mg，50％产率)。LCMS(M+Na)+459.9；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.82(d，2H，J＝8.8)，7.79(d，2H，J＝8.5)，7.63(d，2H，J＝8.8)，7.58(d，2H，J＝8.3)，7.52(s，1H)，7.09(s，1H).4.82(ABq，2H，Δν＝37.2，Jab＝17.6)，4.34(dd，1H，J＝8.0，6.6)，4.25(dt，2H，Jd＝47.2，Jt＝5.7)，1.58(m，1H)，1.49-1.12(m，5H)；元素分析，计算值(C20H21ClFN3O3S)C，54.85；H，4.83；N，9.59；测定值C，54.92；H，4.76；N，9.54。
反应流程20的举例
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟-4-甲基-戊-1-酮往(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟-4-甲基-4-戊-1-酮[500mg，1mmol，按照反应流程18从N-2-(二苯亚甲基-氨基)-1-{{(1′S)，(5′s)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}乙酮(参见Josien，H.；Martin，A.；Chassaing，G.四面体通讯1991，32，6547)和1-溴-2-甲基-2-丙烯制备]于THF(5mL)中的溶液中于0℃下加入氢氟酸-吡啶(10mL)，将反应混合物温热到室温，搅拌18小时，小心将反应内容物加入到NaHCO3饱和水溶液(300mL)中，含水混合物用EtOAc(3×100mL)萃取，合并的有机层连续用1N HCl(200mL)和食盐水(100mL)洗涤，有机层在MgSO4上干燥，过滤，真空浓缩得到490mg(94％)标题化合物为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.83(d，2H，J＝8.8)，7.45(d，2H，J＝8.8)，5.37(d，1H，J＝8.1)，4.65(m，1H)，3.64(t，1H，J＝6.4)，3.43(ABq，2H，Δν＝5.4，Jab＝13.7)，2.19-1.83(m，7H)，1.41-1.31(m，8H)，1.04(s，3H)，0.94(s，3H)。
(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酰胺(2R)-2-(4-氯苯磺酰基氨基)-1-{(1′S)，(5′S)-10′，10′-二甲基-3′，3′-二氧-3’λ6-硫杂-4′-氮杂-三环-[5.2.1.01，5]癸-4′-基}-4-氟-4-甲基-戊-1-酮按照反应流程18以两步转化为标题化合物(165mg，55％产率)。LCMS(M+Na)+345.1；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.10(d，1H，J＝9.2)，7.77(d，2H，J＝8.5)，7.62(d，2H，J＝8.9)，7.34(s，1H)，6.92(s，1H).3.85(m，1H)，1.89(m，1H)，1.74(m，1H)，1.31(d，3H，J＝21.7)，1.29(d，3H，J＝21.9)。
反应流程21的举例 2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基-4-戊烯酸乙酯2-氨基-4-甲基-4-戊烯酸乙酯(2.84g，18.1mmol，按照反应流程19从(二苯亚甲基氨基)乙酸乙酯和1-溴-2-甲基-2-丙烯制备)于二氯甲烷(250mL)中的溶液使用4-氯苯磺酰氯(4.20g，19.9mmol)和Et3N(3.78mL，27.2mmol)处理。4小时以后，将得到的混合物倒入1N HCl水溶液(500mL)中，用EtOAc(3×150mL)萃取。有机层用食盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法提纯(10∶1-5∶1梯度，己烷/EtOAc)，得到3.04g(25％产率，3步)2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基-4-戊烯酸乙酯。LCMS(M+Na)+354.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.77(d，2H，J＝9.1)，7.46(d，2H，J＝8.8)，5.07(d，1H，J＝9.0)，4.84(s，1H)，4.73(s，1H)，4.05(m，1H)，3.95(q，2H，J＝7.1)，2.40(m，2H)，1.66(s，3H)，1.13(t，3H，J＝7.1)。
2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯和4-氯-N-(5，5-二甲基-2-氧-四氢呋喃-3-基)-苯磺酰胺将氟化氢-吡啶(10mL)加入到2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-甲基-4-戊酸乙酯(1.0g，3.0mmol)于THF(15mL)中的0℃溶液中。将反应混合物温热到室温，5小时以后加入另一份(10mL)氟化氢-吡啶。搅拌混合物24小时，加入第三份氟化氢-吡啶(10mL)。共53小时以后，反应用片状冰(20mL)猝灭，将粗混合物倒入冰水(500mL)中，用二氯甲烷(2×200mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3饱和水溶液(100mL)洗涤，真空浓缩。粗浓缩物用硅胶柱色谱法提纯(10∶1-5∶1梯度，己烷/EtOAc)，得到0.395g(37％产率)2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯和0.425g(46％产率)4-氯-N-(5，5-二甲基-2-氧-四氢呋喃-3-基)-苯磺酰胺。对于2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯的数据LCMS(M+Na)+374.1；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.78(d，2H，J＝8.9)，7.47(d，2H，J＝8.5)，5.19(d，1H，J＝7.9)，4.08(m，1H)，3.93(m，2H)，2.09-1.94(m，2H)，1.42(d，3H，J＝21.6)，1.37(d，3H，J＝21.6)，1.12(t，3H，J＝7.0)；对于4-氯-N-(5，5-二甲基-2-氧-四氢呋喃-3-基)-苯磺酰胺的数据LCMS(M+Na)+326.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8.41(d，1H，J＝9.1)，7.86(d，2H，J＝8.6)，7.67(d，2H，J＝8.8)，4.57(m，1H)，2.22(dd，1H，J＝12.4，9.0)，1.72(t，1H，J＝12.0)，1.33(s，3H)，1.31(s，3H)。
2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酰胺2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸乙酯(457mg，1.30mmol)于MeOH(20mL)中的溶液用10N NaOH(780，μL，7.8mmol)于室温处理18小时。真空浓缩粗反应混合物。残留物用水(50mL和1NHCl(20mL)处理。水溶液使用EtOAc(3×100mL)萃取。合并的有机层用食盐水(50mL)洗涤，MgSO4上干燥，过滤和真空浓缩，得到白色固体，含有2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酸。粗固体，1-羟基苯并三唑(263mg，1.95mmol)，二异丙基乙基胺(670mg，5.2mmol)，氯化铵(140mg，2.6mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(373mg，1.95mmol)和DMF(20mL)的混合物于室温搅拌24小时。粗混合物倒入水(500mL)中，水溶液用EtOAc/己烷(90∶10，3×150mL)萃取。合并的有机层用食盐水(50mL)洗涤，MgSO4上干燥，过滤，真空浓缩。粗浓缩物使用硅胶柱色谱法提纯(95∶5，氯仿/MeOH)，得到0.426g(100％产率)标题化合物LCMS(M+Na)+345.3；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.10(d，1H，J＝9.2)，7.77(d，2H，J＝8.5)，7.62(d，2H，J＝8.9)，7.34(s，1H)，6.92(s，1H).3.85(m，1H)，1.89(m，1H)，1.74(m，1H)，1.31(d，3H，J＝21.7)，1.29(d，3H，J＝21.9)。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-4-氟-4-甲基-戊酰胺(实施例357)2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-氟-4-甲基-戊酰胺按照反应流程1方法A转化为标题化合物。LCMS(M+Na)+460.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.83(d，2H，J＝8.5)，7.75(d，2H，J＝8.3)，7.68(s，1H)，7.64(d，2H，J＝8.6)，7.49(d，2H，J＝8.1)，7.20(s，1H)，4.67(ABq，2H，Δν＝28.3，Jab＝17.3)，4.54(dd，1H，J＝9.3，3.2)，2.23(m，1H)，1.42(m，1H)，1.25(d，3H，J＝21.6)，1.21(d，3H，J＝21.7)。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-4-羟基-4-甲基-戊酰胺(实施例443)封管中的含有4-氯-N-(5，5-二甲基-2-氧-四氢呋喃-3-基)-苯磺酰胺(0.20g，0.66mmol)和28％氨水(3mL)的混合物在微波反应器中于80℃加热40分钟。将反应混合物冷却到室温，真空浓缩至干，得到白色固体，含有2-(4-氯苯磺酰基氨基)-4-羟基-4甲基-戊酰胺。粗固体按照反应流程1方法A被转化为标题化合物(98mg，34％产率)LCMS(M+Na)+458.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84(d，2H，J＝8.6)，7.76(d，2H，J＝8.3)，7.62(d，2H，J＝8.8)，7.51(d，2H，J＝8.3)，7.40(s，1H)，7.11(s，1H)，4.63(ABq，2H，Δν＝5.9，Jab＝17.6)，4.56(dd，1H，J＝8.3，2.5)，4.54(s，1H)，1.95(dd，1H，J＝13.7，8.6)，1.26(dd，1H，J＝13.6，2.4)，1.04(s，3H)，0.99(s，3H)；元素分析计算值C20H22CIN3O4SC，55.10；H，5.08；N，9.64，测定值C，54.96；H，5.14；N，9.58。
反应流程22的举例 2-(4-氯苯磺酰基氨基)-5-己烯酸乙酯(二苯亚甲基氨基)乙酸乙酯(20g，74.8mmol)，4-溴-1-丁烯(10.1g，74.8mmol)，K2CO3(31.0g，224mmol)，四丁基溴化铵(2.41g，7.48mmol)和乙腈(150mL)的混合物加热回馏6小时，将反应冷却到室温，通过烧结玻璃漏斗过滤，真空浓缩滤液。将残留物溶解于乙醚(250mL)中沉淀白色固体，真空过滤移出固体，往滤液中加入1N HCl(150mL)溶液，它含有粗产品(2-(二苯亚甲基-氨基)-己-5-烯酸乙酯。得到的两相混合物激烈搅拌18小时，将混合物转移到分液漏斗中，收集水相，真空浓缩。将残留物溶解于甲苯(2×200mL)中再浓缩。将粗氨基酯溶解于二氯甲烷和4-氯苯磺酰基氯(15.8g，74.8mmol)及Et3N(31.2mL，224mmol)反应。18小时以后，将得到的混合物倒入1N HCl(500mL)中，收集有机层，连续用1N HCl(500mL)和食盐水(50mL)洗涤，有机层在MgSO4上干燥，过滤和真空浓缩。粗浓缩液使用硅胶柱色谱法提纯(5∶1，己烷/EtOAc)，得到5.57g(23％产率，3步)标题化合物LCMS(M+Na)+354.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(d，1H，J＝8.8)，7.76(d，2H，J＝8.8)，7.66(d，2H，J＝8.8)，5.69(m，1H)，4.95-4.88(m，2H).3.86(q，2H，J＝7.1)，3.76(m，1H)，1.98(m，2H)，1.71-1.54(m，2H)，1.03(t，3H，J＝7.1)。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-己-5-烯酸乙酯按照和反应流程1类似方法从2-(4-氯苯磺酰氨基)-己-5-烯酸乙酯制备2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-己-5-烯酸乙酯，以粗黄色固体分离出该产物(1.14g)，不用提纯可以用于下一步反应。1H NMR(CDCl3)δ7.71(d，2H，J＝8.0)，7.61(d，2H，J＝8.0)，7.53(d，2H，J＝8.0)，7.46(d，2H，J＝8.0)，5.54(m，2H)，4.90(m，2H)，4.74(d，1H，J＝16.0)，4.48(m，2H)，3.90(m，1H)，1.95(m，2H)，1.81(m，1H)，1.48(m，1H)，1.11(t，3H，J＝8.0)。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5-氧-戊酸乙酯将(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-己-5-烯酸乙酯(1.14g，2.56mmol)，四氧化锇(0.030g，0.13mmol)和三甲基胺N-氧化物(0.41g，5.5mmol)溶解于丙酮(50mL)中，室温搅拌4小时，然后真空浓缩溶液，再溶解于1.5∶1二噁烷∶H2O(50mL)中，往该溶液加入高碘酸钠(0.66g，3.07mmol)，于室温搅拌18小时，反应用EtOAc(500mL)稀释，用H2O，食盐水洗涤，Na2SO4上干燥和浓缩，得到粗无色油状物，使用快速色谱法(SiO2，5-75％EtOAc/己烷)进一步提纯，得到2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5-氧-戊酸乙酯(0.26g)为无色油状物，23％产率。1H NMR(CDCl3)δ9.57(s，1H)，7.69(d，2H，J＝8.0)，7.51(m，6H)，5.99 ABq，2H，Δν＝16，Jab＝168)，4.47(m，1H)，3.89(m，2H)，2.53(m，1H)，2.32(m，1H)，2.11(m，1H)，1.61(m，1H)，1.06(t，3H，J＝8.0)。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5，5-二氟-戊酸乙酯将2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5-氧-戊酸乙酯(0.05g，0.11mmol)慢慢加入到DAST(0.020mL，0.11mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液中，于室温搅拌16小时，反应用二氯甲烷(20mL)稀释，用H2O(2×25mL)萃取，合并的有机层用H2O，食盐水洗涤，Na2SO4上干燥和浓缩，得到2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5，5-二氟-戊酸乙酯为粗黄色残留物(61mg)。不用提纯该粗残留物可以用于下一步反应。
2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5，5-二氟-戊酰胺(实施例377)将粗的2-[(4-氯苯磺酰基)-(4-氰基苄基)-氨基]-5，5-二氟-戊酸乙酯(0.061g，0.13mmol)溶解于MeOH(2mL)中，往该混合物中加入10N NaOH(0.052mL，0.52mmol)，得到的溶液于室温搅拌16小时。反应用H2O(25mL)稀释，用1N HCl酸化，用二氯甲烷(4×100mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥和真空浓缩，得到羧酸部分为粗无色油状物。将羧酸中间体溶解于DMF(10mL)中和1-羟基苯并三唑(0.030g，0.20mmol)，iPr2NEt(0.090mL，0.52mmol)，NH4Cl(0.01g，0.26mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸化物(0.04g，0.20mmol)混合，于室温搅拌72小时。反应用EtOAc(150mL)稀释，用H2O(4×50mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥和真空浓缩，得到粗灰白色固体。使用快速色谱法(SiO2，5-85％ EtOAc/己烷)进一步提纯，得到标题化合物(10.7mg)为白色固体，19％产率。LCMS(M+Na)+464.01；1H NMR(CDCl3)δ7.69(d，2H，J＝8.3)，7.60(d，2H，J＝8.3)，7.49(m，4H)，6.18(br s，1H)，5.67(tt，1H，J＝56，4.0)，5.22(br s，1H)，4.52(ABq，2H，Δν＝16，Jab＝100)，4.34(m，1H)，2.03(m，1H)，1.68(m，1H)，1.38(m，1H)，0.86(m，1H)。
反应流程23的举例 (2R)-2-[[4-(2-溴乙酰基氨基)-苄基]-(4-氯苯磺酰基)-氨基]-4-甲基-戊酰胺往(2R)-2-[(4-氨基苄基)-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(248mg，0.56mmol)和Et3N(176mg，1.74mmol)于二氯甲烷(3mL)的溶液中加入溴代乙酰基氯(105mg，0.67mmol)，室温搅拌反应混合物过夜。用二氯甲烷(5mL)稀释，用1N HCl，食盐水洗涤，通过棉花塞干燥。真空除去溶剂，快速色谱法(SiO2，10％丙酮/二氯甲烷)提纯，得到标题化合物(124mg)，42％产率。MS(ESI)，(M+H)+531.86，1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.87(br s，NH)，7.95(d，2H，J＝8.0)，7.82(d，2H，J＝8.0)，7.42(d，2H，J＝8.0)，7，33(d，2H，J＝8.0)，6.20(br s，1H)，5.20(br s，1H)，4.30(s，2H)，4.22(d，1H，Jab＝16)，4.14(d，1H，Jab＝16)，3.25(t，1H，J＝6.0)，1.95(m，1H)，1.60(m，1H)，0.98(d，3H，J＝7.0)，0.94(d，3H，J＝7.0)。
(2R)-2-{(4-氯苯磺酰基)-[4-(2-二甲基氨基乙酰基氨基)-苄基]-氨基}-4-甲基-戊酰胺(实施例308)往(2R)-2-[[4-(2-溴乙酰氨基)苄基]-(4-氯苯磺酰基)氨基]-4-甲基-戊酰胺(41mg，0.77mmol)于二氯甲烷(2mL)的溶液中加入过量于THF中的2.0M二甲基胺。将反应混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，快速色谱法提纯(SiO2，10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(24mg)，63％产率。MS(ESI)，(M+H)+495.14，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.85(s，1H)，8.02(d，2H，J＝8.0)，7.75(d，2H，J＝8.0)，7.38(d，2H，J＝8.0)，7，29(d，2H，J＝8.0)，6.23(br s，1H)，5.39(br s，1H)，4.62(m，4H)，3.25(t，1H，J＝6.0)，2.95(s，6H)1.95(m，1H)，1.60(m，2H)，0.98(d，3H，J＝7.0)，0.94(d，3H，J＝7.0)。
原料以下α-氨基酰胺从市场上买到或从市场上买到的氨基酸使用标准方法制备
5，5，5-三氟-2-氨基戊酰胺和6，6，6-三氟-2-氨基己酸按照Ojima，I.；Kato，K.；Nakahashi，K.J.Org.Chem.1989，54，4511方法制备。
合成实施例100和155化合物使用的苄基溴按照Ishihara，Y.；Fujisawa，Y.；Furuyama，N.PCT Int.Appl.WO9846590；Senanayake，C.H.；Fang，Q.K.；Wilkinson，S.H.PCT Iht.Appl.WO 9833789方法制备。
合成实施例91，248，249，289，290和300(见反应流程2)需要的醛以4-(哌啶-1-基)苯甲醛为例制备。4-氟苯甲醛(0.48mL，4mmol)，K2CO3(522mg，4mmol)，哌啶(340mg，4mmol)于DMSO(5mL)中的悬浮液在封管中于150℃加热18小时，然后浓缩反应，使用硅胶色谱法提纯(二氯甲烷，2％MeOH/二氯甲烷)，得到4-(哌啶-l-基)苯甲醛748mg，98％产率。
合成实施例317，318和320化合物使用的醛以4-(哌啶-1-基)-3-氟苯甲醛为例制备4，3-二氟苯甲醛(500mg，3.5mmol)，K2CO3(483mg，3.5mmol)，哌啶(298mg，3.5mmol)于DMSO(5mL)中的悬浮液在封管中于130℃加热18小时，将反应混合物冷却到室温，浓缩和使用硅胶色谱法提纯(二氯甲烷，2％MeOH/二氯甲烷)，得到4-(哌啶-1-基)3-氟苯甲醛，740mg，99％产率。
制备实施例433，474，480和500化合物使用的苄基氯按照以下方法制备往2-[(4-氯甲基)苯基]丙-2-醇(769mg，4.16mmol)(参见Creary，X.；Mehrsheikh-Mohammadi，M.E.；McDonald，S.J.Org.Chem.1987，52，3254.)于二氯甲烷(14mL)中的溶液中于-78℃下加入DAST(0.72mL，5.4mmol)，1.5小时以后溶液用水猝灭，温热到室温，混合物用二氯甲烷(3x)萃取，干燥合并的有机层(Na2SO4)，浓缩，快速色谱法提纯(SiO2，0-5％EtOAc/己烷)，得到氯化物为淡黄色液体(512mg，66％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.30-7.48(m，4H)，4.58(s，2H)，1.70(s，3H)，1.63(s，3H)。
用于合成实施例470化合物的4-溴甲基苯甲酸的2-三甲基甲硅烷基乙酯按照Graffner-Nordberg，M.；Sjoedin，K.；Tunek，A.；Hallberg，A.Chem.Pharm.Bull.1998，46，591.记载的方法制备。
对映体混合物的色谱分离条件条件1实施例345使用以下方法分离4.6×250mm，10μM，Chiracel OJ柱，1.0mL/min，85％己烷/EtOH 0.1％DEA，20min。
条件2实施例346使用以下方法分离4.6×250mm，10μM，Chiralpak AD柱，1.0mL/min，80％己烷/EtOH 0.15％DEA，20min。
条件3实施例347使用以下方法分离4.6×250mm，10μM，Chiralpak AD柱，1.0mL/min，65％己烷/IPA 0.1％DEA，18min。
条件4实施例365和366使用以下方法分离4.6×250mm，10μM，Chiralpak AD柱，1.0mL/min，75％己烷/EtOH 0.15％DEA，25min。
条件5实施例408和409使用以下方法分离4.6×250mm，10μM，Chiracel OD柱，1.0mL/min，90％己烷/EtOH，0.15％DEA，36min。
表4
方法A＝4.6×3.3mm ODS-AC-18柱，5mL/min，10∶90∶0.1(MeOH/H2O/TFA-90∶10∶0.1(MeOH/H2O/TFA)，2min，梯度；方法B＝3×50mm ODS-AC-18柱，5mL/min，10∶90∶0.1(MeOH/H2O/TFA)-90∶10∶0.1(MeOH/H2O/TFA)，2min，梯度；方法C＝3×50mm ODS-AC-18柱，5mL/min，10∶90∶0.1(MeOH/H2O/TFA)-90∶10∶0.1(MeOH/H2O/TFA)，3min，梯度；方法D＝4.6×50mm Phenomenex Luna C-18 S5柱，5mL/min，0-100％MeOH/H2O，0.1％TFA，2min，梯度；方法E＝4.6×50mm Xterra C-18 S5柱，5mL/min，0-100％MeOH/H2O，0.1％TFA，2min，梯度；方法F＝4.6×50mm Phenomenex Luna C-18 S5柱，5mL/min，10∶90∶0.1(MeOH/H2O/TFA)-90∶10∶0.1(MeOH/H2O/TFA)，2min，梯度；方法G＝3.0×50mm Xterra C-18 S7柱，5mL/min，10∶90∶0.1(MeOH/H2O/TFA)-90∶10∶0.1(MeOH/H2O/TFA)，2min，梯度。
权利要求
1.式I化合物或其旋光异构体， 其中R1选自(a)直链或支链C1-6烷基，或C2-6链烯基，它们任选被选自以下的取代基取代羟基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基和卤素；(b)C3-7环烷基，任选被羟基或卤素取代；R是H或R1和R一起是C2-5亚烷基；R2选自(a)直链或支链C1-6烷基，或C3-6链烯基，它们任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷氧基和NR4R5；(b)C3-7环烷基甲基，它任选被以下取代基取代氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，C1-4烷基C(＝O)NH-和C1-4烷基OC(＝O)NH-；(c)直链或支链C1-6烷基-C(＝O)-A；(d)-B-萘基；(e) D和E每个独立地是直接键，直链或支链C1-6烷基，C2-6链烯基，或C3-7环烷基；Z选自H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，卤素，氰基，羟基，-OCHF2，-OCF3，-CF3和-CHF2；X和Y各自独立地选自H，羟基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，C1-4烷基S-，C1-4烷基S(O)-，C1-4烷基SO2-，硝基，F3S-和氰基；-OR6；-NR4R5；-NR7C(＝O)R8；-NR7C(＝O)OR8；-NHSO2C1-4烷基；-N(SO2C1-4烷基)2；-C(＝O)W，其中W选自羟基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，苯氧基和-NR4R5；-OC(＝O)C1-4烷基；苯基，其中所述苯基任选被氰基，卤素，C1-4烷氧基，C1-4烷基S-，CH3C(＝O)，C1-4烷基S(O)-或C1-4烷基SO2-取代；和杂环基，其中所述杂环基选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环基任选被以下取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，(卤素)C1-4烷基和CO2C1-4烷基；(f)-B(-杂环)，其中所述杂环选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环任选被以下取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，CO2C1-4烷基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；(g)-B-(哌啶-4-基)，其中所述哌啶-4-基任选被以下取代基取代直链或支链C1-6烷基，CH2C(＝O)苯基，苯基和苯基甲基，其中所述C1-6烷基和所述苯基任选被以下取代基取代氰基，卤素，苯并咪唑-2-基，吡啶基和四氢呋喃-2-基；和-C(＝O)W′，其中W′选自C1-4烷氧基，R9和-NR4R5；A是羟基，C1-4烷氧基或NR4R5；B是直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基；R3是苯基或吡啶基，它们任选被以下取代基取代卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-；R4和R5每个独立地是H，直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，C3-6炔基，C3-7环烷基，C3-7环烷基甲基，CI-4烷氧基，苯基，苄基，吡啶基，哌啶-4-基，茚满-1-基，茚满-2-基，四氢呋喃-3-基，或吡咯烷-3-基；其中每个被选自以下的取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，羟基甲基，苄氧甲基，苯基，吡啶基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(卤素)3C-O-，(卤素)2CH-O-，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基，4-苯基哌嗪-1-基，4-苄基哌嗪-1-基，4-吡啶基哌嗪-1-基，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R4和R5一起可以是吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，1，2，3，4-四氢异喹啉-2-基，十氢喹啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，[1，4]-氧氮杂-4-基，氮杂环丁烷-1-基，2，3-二氢-1H-异吲哚-2-基或2，3-二氢-1H-吲哚-1-基，其中每个被选自以下的取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，苯基，吡啶基，苄基，C1-6烷基，C3-7环烷基，C1-4-烷氧基，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基，和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R6直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，或苯基，其中每个任选被以下取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，(C1-4烷基)(苯基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；R7是H，直链或支链C1-6烷基；R8是直链或支链C1-6烷基，C3-7环烷基，苯基，吡啶基或呋喃基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；R9是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，苯基，噁唑基或吡啶基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；或其非毒性的药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物有以下通式 其中R1选自(a)直链或支链C1-6烷基或C2-6链烯基，它们任选被以下取代基取代羟基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基和卤素；(b)任选被羟或卤素取代的C3-7环烷基；R2选自(a)直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基，它们任选被以下取代基取代卤素，C1-4烷氧基和NR4R5；(b)任选被以下基团取代的C3-7环烷基甲基氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，C1-4烷基C(＝O)NH-和C1-4烷基OC(＝O)NH-；(c)直链或支链C1-6烷基-C(＝O)-A；(d)-B-萘基；(e) D和E每个独立地是直接键，直链或支链C1-6烷基，C2-6链烯基，或C3-7环烷基；Z选自H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，卤素，氰基，羟基，-OCHF2，-OCF3，-CF3，和-CHF2；X和Y每个独立地选自H，羟基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，C1-4烷基S-，C1-4烷基S(O)-，C1-4烷基SO2-，硝基，F3S-和氰基；-OR6；-NR4R5；-NR7C(＝O)R8；-NR7C(＝O)OR8；-NHSO2C1-4烷基；-N(SO2C1-4烷基)2；-C(＝O)W，其中W选自羟基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，苯氧基和-NR4R5；-OC(＝O)C1-4烷基；-苯基，其中所述苯基任选被以下基团取代氰基，卤素，C1-4烷氧基，C1-4烷基S-，CH3C(＝O)，C1-4烷基S(O)-或C1-4烷基SO2-；和杂环基，其中所述杂环基被选自以下基团取代呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环基任选被选自以下的取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，(卤素)C1-4烷基，和CO2C1-4烷基；(f)-B-(杂环)，其中杂环选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环任选被选自以下的取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，CO2C1-4烷基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；(g)-B-(哌啶-4-基)，其中所述哌啶-4-基任选被以下取代基取代直链或支链C1-6烷基，CH2C(＝O)苯基，苯基和苯基甲基，其中所述C1-6烷基和所述苯基任选被以下取代基取代氰基，卤素，苯并咪唑-2-基，吡啶基和四氢呋喃-2-基；和-C(＝O)W′，其中W′选自C1-4烷氧基，R9和-NR4R5；A是羟基，C1-4烷氧基或NR4R5；B是直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基；R3是苯基或吡啶基，它们任选被选自以下的取代基取代卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-；R4和R5每个独立地是H，直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，C3-6炔基，C3-7环烷基，C3-7-环烷基甲基，C1-4烷氧基，苯基，苄基，吡啶基，哌啶-4-基，茚满-1-基，茚满-2-基，四氢呋喃-3-基或吡咯烷-3-基，其中每个任选地被以下取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，羟基甲基，苄氧基甲基，苯基，吡啶基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(卤素)3C-O-，(卤素)2CH-O-，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基，4-苯基哌嗪-1-基，4-苄基哌嗪-1-基，4-吡啶基哌嗪-1-基，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R4和R5一起可以是吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，1，2，3，4-四氢异喹啉-2-基，十氢喹啉-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，[1，4]-噁嗪-4-基，氮杂环丁烷-1-基，2，3-二氢-1H-异吲哚-2-基或2，3-二氢-1H-吲哚-1-基，其中每个任选地被以下取代基取代羟基，氰基，卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH2-，卤素CH2-，苯基，吡啶基，苄基，C1-6烷基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，CO2H，CO2C1-4烷基，C(＝O)NHC1-4烷基和C(＝O)N(C1-4烷基)2；R6是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基或苯基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，(C1-4烷基)(苯基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(CI-6烷基)哌嗪-1-基；R7是H，直链或支链C1-6烷基；R8是直链或支链C1-6烷基，C3-7环烷基，苯基，吡啶基或呋喃基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，C1-4烷基，C1-4烷氧基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(CI-6烷基)哌嗪-1-基；R9是直链或支链C1-6烷基，C3-6链烯基，苄基，苯基，噁唑基或吡啶基，其中每个任选被选自以下的取代基取代卤素，(卤素)3C-，(卤素)2CH-，卤素CH2-，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基；或其非毒性的药学上可接受的盐。
3.权利要求2的化合物，其中R1是直链或支链C1-6烷基或C2-6链烯基，它们任选被以下取代基取代羟基，C3-7环烷基，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基和卤素。
4.权利要求2的化合物，其中R1是任选被羟基或卤素取代的C3-7环烷基。
5.权利要求3的化合物，其中R1是任选被C3-7环烷基取代的直链或支链C1-6烷基。
6.权利要求3的化合物，其中R1是任选被卤素取代的直链或支链C1-6烷基。
7.权利要求2的化合物，其中R3是任选被以下取代基取代的苯基卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-。
8.权利要求2的化合物，其中R3是任选被以下取代基取代的吡啶基卤素，羟基，C1-4烷氧基，C1-4烷基，(卤素)3C-，(卤素)2CH-和卤素CH2-。
9.权利要求7的化合物，其中R3是任选被卤素取代的苯基。
10.权利要求2的化合物，其中R2是直链或支链C1-6烷基或C3-6链烯基，它们任选被以下取代基取代卤素，C1-4烷氧基和NR4R5。
11.权利要求2的化合物，其中R2是任选被以下取代基取代的C3-7环烷基甲基氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，C1-4烷基C(＝O)NH-，和C1-4烷基OC(＝O)NH-。
12.权利要求2的化合物，其中R2是直链或支链C1-6烷基-C(＝O)-A。
13.权利要求2的化合物，其中R2是-B-萘基。
14.权利要求2的化合物，其中R2是
15.权利要求2的化合物，其中R2是-B-(杂环)，其中所述杂环选自呋喃基，噻吩基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，噁二唑基，噁唑基，异噁唑基，噻二唑基和噻唑基，其中所述杂环任选被以下取代基取代氰基，卤素，C1-4烷基，CO2C1-4烷基，氨基，(C1-4烷基)NH-，二(C1-4烷基)N-，吗啉-4-基，硫代吗啉-4-基，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，和4-(C1-6烷基)哌嗪-1-基。
16.权利要求2的化合物，其中R2是-B-(哌啶-4-基)，其中所述哌啶-4-基任选被以下取代基取代直链或支链C1-6烷基，CH2C(＝O)苯基，或苯基甲基，其中所述C1-6烷基和所述苯基任选被以下取代基取代氰基，卤素，苯并咪唑-2-基，吡啶基和四氢呋喃-2-基；和-C(＝O)W’，其中W’选自C1-4烷氧基，R9和-NR4R5。
17.权利要求14的化合物，其中B是直链C1-4烷基。
18.权利要求17的化合物，其中Z是H。
19.权利要求17的化合物，其中X是C(＝O)W，E是直接键和Y是H。
20.权利要求17的化合物，其中X是-NR4R5，E是直接键和Y是H。
21.权利要求17的化合物，其中X是-OR6，E是直接键和Y是H。
22.权利要求17的化合物，其中X是-NR7C(＝O)R8，E是直接键和Y是H。
23.治疗与抑制β-淀粉样肽产生有关的疾病的药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1的化合物结合药学上可接受的载体或稀释剂。
24.治疗哺乳动物所需的与抑制β-淀粉样肽产生有关的疾病的方法，包括使用治疗有效量的权利要求1的化合物对所述哺乳动物给药。
25.权利要求24的方法，其中所述疾病是阿尔茨海默氏病和唐氏综合症。
全文摘要
本发明提供一系列新的式(I)的α－(N－磺酰氨基)乙酰胺化合物，其中R，R
文档编号C07D207/32GK1617852SQ02827869
公开日2005年5月18日 申请日期2002年12月20日 优先权日2001年12月20日
发明者M·F·帕克, K·E·麦克尔霍恩, R·A·马特, J·J·布伦松, Y·盖, C·P·贝里斯特伦, L·R·马钦, J·E·麦科尔 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司