专利名称：一种含有磺酰脲类农药残留的人参样品测定前的处理方法
技术领域：
本发明属于农药残留量的测定技术领域，涉及人参中15种磺酰脲类药物残留量 测定的方法。特别是一种含有15种磺酰脲类药物残留量的人参残留样测定前的处理方法。
背景技术：
农药残留指的是在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬 菜、果品、畜产品、水产品中以及土壤和水体中的现象。农药残留问题是随着农药大量生产 和广泛使用而产生的。目前使用的农药，有些在较短时间内可以通过生物降解成为无害物 质，而一些有机氯类农药却难以降解，是残留性强的农药。蔬菜农药残留超标，会直接危及 人体的神经系统和肝、肾等重要器官。同时残留农药在人体内蓄积，超过一定量度后会导致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至会诱发血管疾病、糖尿病和癌症等。由于农药残留 对人类和生物危害很大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并对食品中农药残留容许 量作了规定。在我国发生较多的引起农药残留中毒的农药品种主要是有机磷农药和氨基甲酸 酯类农药，如氧化乐果、乐果、马拉硫磷、甲胺磷、久效磷、倍硫磷、百克威、抗芽威和西维因 等。这些农药是通过抑制昆虫中枢神经中的胆碱酯酶使之死亡而发挥杀虫作用的。但这些 农药对人体内的胆碱酯酶也有抑制作用，它能阻断神经递质的传递，引起肌肉麻痹造成中 毒。国家虽明文规定剧毒、高毒农药不得用于蔬菜、瓜果、茶叶和中草药材，例如氧化乐果、 对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、水胺硫磷、呋哺丹等。但某些地区的菜农仍然使用甲胺磷、甲基对 硫磷等剧毒高毒农药于蔬菜，不时出现消费者因食用含有甲胺磷农药的蔬菜而急性中毒。近20年来问世的磺酰脲类除草剂具有高效、低毒、低残留等特点，已经成为当前 使用量最大的一类除草剂，在农作物种植和中草药栽培中被广泛应用于草害的防治。虽然 用量小，毒性较低，但由于大多数属于长残效除草剂，因此该类除草剂在作物及中药材中的 残留问题，对人类健康和环境造成的毒害以及其对后茬作物产生的危害都已经引起广泛关 注。美国、欧盟、日本等发达国家，相继对进出口农产品中该类除草剂残留制定了最大残留 限量标准(MRLs)，不过在中草药中的限量要求尚无相关规定，但在不久的将来也会被提上 记事日程。由于磺酰脲类除草剂极性强，沸点高，受热不稳定，一般不适合直接采用气相色谱 法分析。目前，检测该类药物残留最常用的方法是高效液相色谱法(HPLC)，但灵敏度低且缺 乏选择性，往往对样品的净化程度要求很高，多种药物同时检测时对净化的要求则更高。检 测的样品基质以大米、大豆、蔬菜等农产品和土壤，水等环境样品居多，尚无中药材中该类 药物测定方法的报道。高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MQ灵敏度高，选择性好， 能轻松检测多种药物残留量，已成为磺酰脲类药物多残留分析的首选方法，尤其对中药材 这种基质非常复杂的样品来说。超高效液相色谱(UPLC)基于1. 7 μ m的小粒径，比传统的HPLC具有更高的分离能 力，更快的分析速度，目前已经被成功应用于大豆中多种极性除草剂残留量的检测[10]。本专利采用UPLC-MS/MS技术对15种磺酰脲类除草剂进行了测定，旨在建立快速有效的检测 中药材中磺酰脲类除草剂残留量的方法，进而对国内市场上中药材受除草剂污染状况进行调查。是否能准确的检测出微量的残留其关键是样品的前处理方法，样品处理的好，可 以减少杂质干扰，减少杂质对仪器的污染，提高分析结果的灵敏度和准确度。本专利所建立 的样品前处理方法为我单位自行研制的方法，国内公开文献没有查到相关报道。
发明内容
本发明公开了一种含有含有磺酰脲类农药残留的人参样品测定前的处理方法，其 特征在于(1)准确称取粉碎样品2g，精确至O.Olg，加入20mL乙腈，涡旋aiiin，4000rpm离 心5min，取上清液于蒸发瓶中；残渣用10-20mL乙腈重复提取一次，涡旋anin，4000rpm离 心5min，合并上清液；将提取液在40°C蒸干，残渣用体积比甲醇-二氯甲烷10 90，5mL溶 解，待净化；(2)石墨化碳柱先用IOmL甲醇-二氯甲烷，体积比10 90活化，并用固相萃取柱 转接头将石墨化碳柱与50mL注射器相连；(3)将样品液转移至注射器中，再用体积比10 90的甲醇-二氯甲烷洗涤样品 瓶，每次5mL，洗两次，并将洗涤液全部转移至注射器中，收集所有流出液；待样品液全部流 完后，再用20mL，体积比20 80的甲酸甲醇-二氯甲烷洗脱，合并流出液；将其在40°C 下蒸干后，用体积比40 60的2mL乙腈-0. 甲酸水复容，并过0.22 μ m滤膜，待测。本发明更加详细的制备方法如下1仪器与试剂超高效液相色谱仪(Acquity UPLC，美国Waters公司)；三重四级杆质谱仪，配电喷雾离子源(Quattro Premier XE，美国Waters公司)； 旋涡混合器OiL-901，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司)；高速离心机(H1650，湘仪离心机仪器有限公司)；旋转蒸发仪(Laborota4000efficient，德国 Heidolph)；固相萃取仪(日本GL Sciences)；Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司)等。所有农药标准品纯度均不低于 99 %，购自德国 Dr. Ehrenstorfer 公司。前处理过程中使用的乙腈、甲醇、二氯甲烷、甲酸均为分析纯，购自天津科密欧化 学试剂有限公司。作为流动相使用的乙腈、甲酸为色谱纯，购自Fisher公司。水为超纯水。 PSA 柱(500mg，3mL)，ENVI-carb 柱(500mg，6mL)，购自美国 Varian 公司；C18 柱(lg，6mL)， 购自Agilent公司；50mL聚丙烯塑料离心管购自北京北方伟业有限公司。 分别称取标准品各5. OOmg于50mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制 成浓度为100 μ g/mL的标准储备液，于4°c条件下保存。分别吸取上述标准储备液各0. 5mL 于50mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，制成浓度为1 μ g/mL的混合标准工作液。2样品前处理方法2. 1 提取
准确称取粉碎样品2g(精确至0. Olg)于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入20mL乙 腈，于旋涡混合器上涡旋aiiin，4000rpm离心5min，取上清液于蒸发瓶中。残渣用IOmL乙 腈重复提取一次，涡旋2min，4000rpm离心5min，合并上清液于上述蒸发瓶中。将提取液在 40°C下于旋转蒸发仪上蒸干，残渣用5mL甲醇-二氯甲烷(10+90，V V)溶解，待净化。2. 2 净化石墨化碳柱(瓦里安ENVI-Carbon柱，500mg，6mL，)先用IOmL甲醇-二氯甲烷 (10+90, V V)活化，并用固相萃取柱转接头将石墨化碳柱与50mL注射器相连。将样品液 转移至注射器中，再用甲醇-二氯甲烷(10+90，V V)洗涤样品瓶，每次5mL，洗两次，并将 洗涤液全部转移至注射器中，收集所有流出液。待样品液全部流完后，再用20mLl%甲酸甲 醇-二氯甲烷O0+80，V V)洗脱，合并流出液。将其在40°C下蒸干后，用2mL乙腈-0. 甲酸水00+60，V V)复容，并过0.22 μ m滤膜。3、仪器条件3. 1色谱条件色谱柱=AcquityBEH C18 (2. ImmX 100mm, 1. 7 μ m)；流动相A相乙腈；B相0. 1 %甲酸水溶液；梯度洗脱条件见表1。进样量10yL;柱温30°C。表1梯度洗脱条件
权利要求
1. 一种含有磺酰脲类农药残留的人参样品测定前的的处理方法，其特征在于按如下的 步骤进行(1)准确称取粉碎样品2g，精确至O.Olg，加入20mL乙腈，涡旋anin，4000rpm离心 5min，取上清液于蒸发瓶中；残渣用10-20mL乙腈重复提取一次，涡旋anin，4000rpm离心 5min，合并上清液；将提取液在40°C蒸干，残渣用体积比甲醇-二氯甲烷10 90，5mL溶解， 待净化；(2)石墨化碳柱先用IOmL甲醇-二氯甲烷，体积比10 90活化，并用固相萃取柱转接 头将石墨化碳柱与50mL注射器相连；(3)将样品液转移至注射器中，再用体积比10 90的甲醇-二氯甲烷洗涤样品瓶，每 次5mL，洗两次，并将洗涤液全部转移至注射器中，收集所有流出液；待样品液全部流完后， 再用20mL，体积比20 80的甲酸甲醇-二氯甲烷洗脱，合并流出液；将其在40°C下蒸 干后，用体积比40 60的2mL乙腈-0. 甲酸水复容，并过0.22 μ m滤膜，待测。
全文摘要
本发明公开了一种含有磺酰脲类农药残留的人参样品测定前的处理方法，它是准确称取粉碎样品2g，精确至0.01g，加入20ml乙腈，涡旋2min，4000rpm离心5min，取上清液于蒸发瓶中；残渣用10ml乙腈重复提取一次，涡旋2min，4000rpm离心5min，合并上清液；将提取液在40℃蒸干，残渣用甲醇-二氯甲烷10∶90，5ml溶解，待净化；石墨化碳柱先用10ml甲醇-二氯甲烷，体积比10∶90活化，并用固相萃取柱转接头将石墨化碳柱与50mL注射器相连；并过0.22μm滤膜，待测。本发明公开的处理方法，测定速度快，设备简单、测定成本低，准确度、稳定性和可靠性高。
文档编号G01N30/14GK102128901SQ20101059691
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者刘磊, 张玉婷, 李娜, 李辉, 邵辉, 郭永泽 申请人:天津市农业科学院中心实验室