BS缓冲溶液中添加有0. 05%防腐剂Proclin-300,所述涡流和超声 的具体条件为：采用探头超声波破碎仪1秒进行10个短脉冲。
[0030] 优选的，所述步骤1中，Alpha受体微球采用PBS缓冲液洗涤，洗涤后离心除去上 清液。在本发明一优选实施例中，离心条件为16, 000Xg，离心15分钟。
[0031] 优选的，所述步骤1中，所述磷酸缓冲溶液为pH8.0的0.13M磷酸缓冲溶液。
[0032] 优选的，所述步骤1中，吐温20水溶液的浓度为10wt%，加入量为1. 25yL， NaBH3CN水溶液的浓度为25mg/mL，加入量为10yL。
[0033] 优选的，所述步骤3中，封闭液为65mg/mL的氨氧乙酸（CM0)溶液，所述溶液通过 0. 8MNaOH溶液制备。
[0034] 更优选的，所述步骤3中，封闭液的使用量为100yL。
[0035] 优选的，所述步骤4中，离心条件为：在彡16,OOOXg的条件下离心15分钟。
[0036] 优选的，所述步骤4中，Tris-HCl溶液为pH8. 0的0. 1MTris-HCl溶液。
[0037] 优选的，所述步骤4中，将微球溶于Tris-HCl溶液中时，每mg微球使用 200 y LTris-HCl溶液。
[0038] 更优选的，所述步骤4重复两次。
[0039] 优选的，所述亲和素包被的供体微球为链霉亲和素包被的Alpha供体微球，亲和 素与供体微球按重量比1 :8_12进行包被。
[0040] 更优选的，所述Alpha供体微球直径为166-210nm，表面覆盖多糖水凝胶。
[0041] 在本发明一优选实施例中，所述链霉亲和素包被的供体微球由perkinelmer公司 (Massachusetts，USA)提供。
[0042] 优选的，当Alpha供体微球和Alpha受体微球相互接近时，激光激发级联反应，从 而产生极大放大的信号，具体来说，在680nm的激光照射下，供体微球上的光敏剂将周围环 境中的氧气转化为更为活跃的单体氧，单体氧扩散至受体微球，产生一系列的化学发光反 应，最后将能量传递到铕，发射波长为615nm;在生物分子不存在特异的互相作用时，单体 氧无法扩散到受体微球，则不会有信号的产生。
[0043] 优选的，所述生物素标记的抗IL-12抗体中，抗体与生物素按摩尔比例1:25-35进 行标记。
[0044] 更优选的，所述生物素为NHS-ChromaLink-生物素。
[0045] 具体为将NHS-ChromaLink-生物素加入到抗体溶液中，抗体与生物素的摩尔比例 为 1:25-35。
[0046] 在本发明一优选实施例中，所述生物素标记的抗IL-12抗体购自R&DSystems公 司（上海，中国）。
[0047] 本发明第二方面提供所述IL-12检测试剂盒在IL-12检测领域的用途。
[0048] 优选的，所述IL-12检测领域的用途具体为将IL-12作为免疫调节治疗反应性指 标，预测复发性流产免疫调节治疗的疗效中的用途。
[0049] 本发明第三方面提供IL-12在制备预测复发性流产免疫调节治疗的疗效的检测 试剂盒中的用途。
[0050] 优选的，所述预测复发性流产免疫调节治疗的疗效的检测试剂盒通过将IL-12作 为免疫调节治疗反应性指标，预测复发性流产免疫调节治疗的疗效。
[0051] 所述预测复发性流产免疫调节治疗的疗效具体为：当免疫调节治疗后血清IL-12 水平有所下降，则认为免疫调节治疗起到良好效果，流产发生可能性对应降低，活产率对应 提高；如血清IL-12水平没有变化或者升高，则认为免疫调节治疗未取得实质效果，流产发 生可能性并未降低。
[0052] 本发明第四方面提供一种IL-12的检测方法，使用所述IL-12检测试剂盒进行检 测，所述检测方法具体包括如下步骤：
[0053] 1)将抗IL-12抗体包被的受体微球加入到白色不透明微孔板的各微孔中；
[0054] 2)加入IL-12抗原标准品或血清样品到各自的微孔中，然后各孔顺序加入生物素 标记的抗IL-12抗体，接着在暗处加亲和素包被的供体微球，孵育后在光激化学发光检测 仪上检测光信号，以加入IL-12抗原标准品的检测数据绘制标准曲线，以加入被测样品的 检测数据从标准曲线计算样品中的IL-12含量。
[0055] 本发明所提供的与复发性流产相关的IL-12检测试剂盒结构简单、操作简便、成 本低廉。此外，所述试剂盒还具有检测时间短、灵敏度高、检测线性宽等有益效果。本发明 的检测试剂盒可以反映体机细胞免疫功能状态，用于复发性自然流产病因筛查，辅助诊断 复发性自然流产，以及复发性自然流产免疫调节治疗中的治疗反应性监测等，作为个体化 综合治疗中关键循证医学依据。此外，本发明的试剂盒属不用洗板的均相免疫反应特点，具 有快速，灵敏度高、检测范围宽、可实现全自动化检测等特点，在方法学上较放射免疫分析 和酶联免疫吸附法能达到更高的灵敏度和更优的检测范围。
【附图说明】
[0056] 图1显示为本发明检测IL-12的试剂盒示意图；1、白色不透明微孔板，2、抗IL-12 抗体包被的受体微球，3、IL-12标准，4、生物素标记的抗IL-12抗体冻干品，5、分析缓冲液， 6、包被有链霉亲和素的供体微球。
[0057] 图2显示为本发明IL-12-Alphalisa反应示意图。
[0058] 图 3 :IL-12_Alphalisa标准曲线图。
[0059] 图4 :复发性自然流产患者血清IL-12水平。
【具体实施方式】
[0060] 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书 所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实 施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0061] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中 另外明确指出，单数形式"一个"、"一"和"这个"包括复数形式。
[0062] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0063] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术 领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技 术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook 等MOLECULAR CLONING :A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001;Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John ffiley&Sons,New York,1987and periodic updates ；the series METHODS IN ENZYMOLOGY,Academic Press,San Diego；ffolffe,CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego,1998；METH0DS IN ENZYMOLOGY, Vol. 304,Chromatin(P. M. ffassarman and A. P. ffolffe,eds.), Academic Press，Sa