-Ant1-CEA纳米复合材料的制备过程如下:首先，将ImL AuiBSA(3mg/mL)和ImL GA(12.5% )在室温的条件下，摇床3h。之后，将离心得到的产物利用超纯水洗三次，去除未反应的试剂。随后，将沉淀物超声溶解到ImL 0.1M PBS (pH 7.4)，并同ImL 0.1M的Iuminol溶液一起摇床3h。利用二次蒸馈水将得到的AuOBSA-1uminol纳米材料水洗三次之后，将该复合材料、4mg EDC和4mg NHS共同溶解在2mL 0.1M PBS (pH 7.4)中，不断搅拌反应2h，以便活化AuOBSA-1uminol表面的羧基。随后，40 μ L Ant1-CEA (2mg/mL)加入到上述的混合溶液中，冰水浴的条件下搅拌过夜。最终，将离心(lOOOOrpm, 4°C )得到的产物利用二次蒸馏水洗净。洗净之后，将得到的luminol-AuOBSA-Ant1-CEA纳米复合材料重新溶解在ImL PBS，放置于4°C冰箱中备用。
[0035]图2的Zeta电位证明Iuminol成功地结合到AuOBSA微球的表面。
[0036]四、电化学发光免疫传感器的组装
[0037]首先分别用0.3，0.05 μ m Al2O3抛光粉对裸玻碳电极(直径2.0mm)进行抛光。然后将抛光好的电极在分别在二次蒸馏水和乙醇中各超声2min，以除去残余在电极表面的Al2O3颗粒。将处理好的裸玻碳电极用N2W干之后，置于4mL HAuCl4溶液(1%)中。在恒电位为-0.2V的条件下，在电极表面电沉积一层金纳米层(DpAu)，电镀时间为300s。常温下，将5 μ L上面合成好的Iuminol-AuOBSA-Ant1-CEA纳米复合材料滴加到金纳米层表面，避光静置4h。利用Au-S的作用，将Iuminol-AuOBSA-Ant1-CEA纳米复合材料键合到金纳米层的表面。随后，常温下，滴加5yL BSAT溶液(0.5% BSA包含I % Tween-20)，封闭非特异性位点lh。接下来，利用抗原抗体的特异性识别，将抗原CEA连接到上述修饰电极的表面。最终，将构建好的GCE/DpAu/luminol-Au@BSA-Ant1-CEA/BSAT/CEA免疫传感器放置于4 °C冰箱中备用。
[0038]五、DpAu/luminol-AuiBSA-Ant1-CEA/BSAT修饰电极对CEA的电化学发光的定量检测
[0039]首先，将DpAu/luminol-Au@BSA-Ant1-CEA/BSAT 修饰电极组装好。然后将 4 μ L 不同浓度的抗原CEA修饰电极表面，放于恒温培育箱中培育2h。最后将电极用PBS溶液轻轻冲洗，以去除未吸附的CEA抗原。在最有条件下，将构建好的免疫传感器用于电化学发光定量检测。
[0040]经电化学发光测定，如图3所示，随着CEA抗原的浓度的增加(从a到1:0，0.001，
0.1, 0.5，I, 3.125，6.25，12.5，25，50，100，200ng/mL)，电化学发光强度不断减小。CEA 抗原的检测范围为0.001?200ng/mL。电化学发光强度和抗原的对数值呈线性关系，线性相关系数为0.998，检测限为0.0003ng HiL10该传感器适用于对肿瘤标志物的定量检测，与传统的免疫传感器相比操作更加简单，灵敏度更高、稳定性良好和特异性强。
[0041]六、构建好的免疫传感器对实际样品中抗原CEA的检测
[0042]利用标准加入法向正常人的血清中加入CEA抗原，将构建好的免疫传感器用来检测血清中抗原CEA的含量。其实际回收率在97.38%?104.46%范围内。
[0043]实施例2
[0044]一种纳米复合材料的电化学发光传感器的制备方法，采用以下步骤:
[0045](I)在室温搅拌下，将HAuCl4溶液和牛血清白蛋白溶液混合均匀，在剧烈搅拌的条件下，向混合的溶液中快速加入水合肼，HAuCl4、牛血清白蛋白和水合肼之间的重量比是20:10:5,反应完全之后，陈化12小时，将得到的产物离心分离后，用蒸馏水和乙醇交替洗涤，最终将洗后的产物冷冻干燥制备得到的AuOBSA纳米材料；
[0046](2)利用戊二醛的交联作用，将发光物质鲁米诺化学交联到AuOBSA纳米材料表面，进一步酸化AuOBSA表面的羧基以连接CEA抗体，制备得到复合材料Iuminol-AuOBSA-ant1-CEA，具体采用以下步骤:
[0047](2-1)将AuOBSA纳米材料与戊二醛按重量比为30:1混合后在室温的条件下，摇床反应2h，然后将离心得到的产物利用超纯水洗三次，去除未反应的试剂；
[0048](2-2)将得到的沉淀物超声溶解到pH为7.4的PBS溶剂中，加入鲁米诺溶液，沉淀物与鲁米诺的重量比为3:1，摇床反应2h，得到AuOBSA-1uminol纳米材料；
[0049](2-3)利用二次蒸馏水对得到的AuOBSA-1uminol纳米材料进行水洗，然后与EDC、NHS共同溶解在pH为7.4的PBS溶剂中，搅拌反应以活化AuOBSA-luminol表面的羧基，然后将Ant1-CEA加入到上述的混合溶液中，AuiBSA-1uminol纳米材料、EDC、NHS、Anti_CEA的重量比为400:40:40:1，水浴的条件下搅拌过夜，将离心得到的产物利用二次蒸馏水洗净，即得到复合材料 Iumino 1-AuiBSA-ant 1-CEA。
[0050](3)利用电沉积的方法，在工作电极裸玻碳电极表面电沉积一层金纳米层，通过Au-S键的作用将得到的复合材料luminol-Au@BSA-ant1-CEA连接到电极表面，得到对抗原CEA具有靶向作用的电化学发光免疫传感器，具体采用以下步骤:
[0051](3-1)用0.3 μπι及0.05 μπι Al2O3抛光粉对裸玻碳电极进行抛光，抛光好的电极在分别在二次蒸馏水和乙醇中各超声2min，除去残余在电极表面的Al2O3颗粒，再用N2吹干；
[0052](3-2)干燥的电极置于HAuCl4溶液中，在恒电位为-0.2V的条件下，在电极表面电沉积一层金纳米层，电镀时间为300s ；
[0053](3-3)常温下，将复合材料luminol-Au@BSA-ant1-CEA滴加到金纳米层表面，避光静置4h，利用Au-S的作用，将Iuminol-AuOBSA-Ant1-CEA纳米复合材料键合到金纳米层的表面，得到对抗原CEA具有靶向作用的电化学发光免疫传感器。
[0054]实施例3
[0055]—种纳米复合材料的电化学发光传感器的制备方法，采用以下步骤:
[0056](I)在室温搅拌下，将HAuCl4溶液和牛血清白蛋白溶液混合均匀，在剧烈搅拌的条件下，向混合的溶液中快速加入水合肼，HAuCl4、牛血清白蛋白和水合肼之间的重量比是25:15:7,反应完全之后，陈化12小时，将得到的产物离心分离后，用蒸馏水和乙醇交替洗涤，最终将洗后的产物冷冻干燥制备得到的AuOBSA纳米材料；
[0057](2)利用戊二醛的交联作用，将发光物质鲁米诺化学交联到AuOBSA纳米材料表面，进一步活化AuOBSA表面的羧基以连接CEA抗体，制备得到复合材料Iuminol-AuOBSA-ant1-CEA，具体采用以下步骤:
[0058](2-1)将AuOBSA纳米材料与戊二醛按重量比为30:1混合后在室温的条件下，摇床反应3h，然后将离心得到的产物利用超纯水洗三次，去除未反应的试剂；
[0059](2-2)将得到的沉淀物超声溶解到pH为7.4的PBS溶剂中，加入鲁米诺溶液，沉淀物与鲁米诺的重量比为3:1，摇床反应3h，得到AuOBSA-1uminol纳米材料；
[0060](2-3)利用二次蒸馏水对得到的AuOBSA-1uminol纳米材料进行水洗，然后与EDC、NHS共同溶解在pH为7.4的PBS溶剂中，搅拌反应以活化AuOBSA-luminol表面的羧基，然后将Ant1-CEA加入到上述的混合溶液中，AuiBSA-1uminol纳米材料、EDC、NHS、Anti_CEA的重量比为450:40:40:1，水浴的条件下搅拌过夜，将离心得到