专利名称：紫竹组织培养基及组培快繁方法
紫竹组织培养基及组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种中小径散生竹的组织培养基及组培快繁方 法，尤其是紫竹的组织培养基及组培快繁方法。背景技术：
紫竹(户Ar〃o^acA^/7/^ra乂又名黑竹、乌竹，禾本科竹 亚科刚竹属，散生竹种，新杆绿色，二年生杆渐变为紫黑色，绿 叶青翠，姿态飘逸，具有很高的观赏价值，又是制作家具、乐器 和工艺品的优良材料， 一直以来靠移栽母竹或竹鞭来繁殖，速度 慢、用地多、运输不便、成本高和受季节制约。近年，探索竹类 组织培养和快繁技术的有志者日益增多，各有建树。综合竹类组 织培养研究现状，幼嫩材料诱导出愈伤组织比诱导出再生植林容 易，取自成熟竹的外植体组织诱导成胚性组织和再生植抹，难度 更大，采自于散生成熟竹外植体组织诱导出再生植抹，相对于丛 生竹而言，更是难上加难。经检索和市场调查，至今未见用成熟 紫竹的外植体组织诱导出再生植抹的资料^^道和相关实物问世。
发明内容
针对至今未见成熟的散生竹尤其是紫竹外植体组织诱导成 功再生植株的现实状况，本发明的任务有三 一是提供一种诱导 丛生芽的培养基，二是提供一种诱导生根的培养基，三是提供整 套紫竹组织培养快速繁殖方法。上述任务可通过如下措施实现
本紫竹组织培养基，分为诱导丛生芽培养基与诱导生根培养 基，都以MS为基本培养基，是由MS加上0. 3或1或3或10mg/L 的BA即千氨基腺嘌呤再加入0. 001或0. 01或0. 1或lmg/L的 TDZ即噻二唑苯基脲，附加占总重量0. 25°/。的水晶洋菜、3%的蔗 糖配制成诱导丛生芽培养基；由MS加上0. 3或1或3或lOmg/L 的BA再加入1. Omg/L的NAA即ct-奈乙酸，附加占总重量0. 25% 的水晶洋菜、3%的蔗糖配制成诱导生根培养基。两培养基的pH 值为3或4或5或5. 7或6或7。
本紫竹组织培养基的优选方案是诱导丛生芽培养基中BA的 加入量为3mg/L、 TDZ的加入量为0. Olmg/L;诱导生根的培养基 中的BA的加入量为3mg/L,两培养基的pH值为5。
用本紫竹组织培养基进行组培快繁经过下列步骤
(1) 外植体的采集与消毒采集温室盆栽紫竹的春天萌发 嫩茎芽，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h,在稀释10倍 的5WaC10溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗两次， 再在相同浓度的NaCIO溶液中浸泡4min，无菌水冲洗三次后， 显微镜下切取长约0. 5mm的茎尖组织；
(2) 丛生芽的诱导将切得的茎尖组织接种到如权利要求 1所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度25土 2°C、光照16h/d条件下，7d后芽始萌，45d后基部生出新的丛 生芽；
(3) 不定芽增殖与快繁将上述丛生芽切下，接种于如权 利要求l所述的诱导丛生芽培养基中，光照强度2500Lux,光照 16h/d, 25士2。C条件下，15d后伸长，继代培养，100d后增殖系 数达13倍；
(4)诱导生根与移栽将伸长后的丛生芽3-4个为一丛， 分别置于300、 1000、 3000ppm的IBA即吲咮丁酸溶液中5-15min， 再分别接种到如权利要求1所述的生根培养基中，光照强度 2500Lux，光照16h/d， 25士2X:条件下，20d后开始生才艮，培养 125d后，生根率达70-90%，取生长良好的再生植株置于驯化室， 强光20000Lux下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基， 种植于体积比为蛭石珍珠岩泥炭-l:l:l的基质中，单个花 盆套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口， 一周后弃袋移入温室栽 种即成。
本发明的有益效果是突破了成熟的中小径散生竹，尤其是紫 竹的茎尖外植体组织诱导出再生植抹的难题， 一改传统的母竹移 栽、'竹鞭移栽的方法，节省了母竹、用地面积、培植时间和运输 成本，且不受季节的制约，为景点用竹、大面积绿化用竹提供了 快速而充足地繁殖紫竹苗的有效途径。
具体实施方式
本发明下面结合实施例作进一步详述我国的竹类组织培养 出再生植抹，尚处于起步阶段，散生竹又因其器官再生能力弱， 比丛生竹更难成功。有所成就的是以芽繁芽，未经过脱分化的方 式实现，而且选用的是幼年植抹、胚等组织，未见有用成年植抹 外植体组培成再生植抹的报导，众多竹类组培实践者公认散生竹 种组培苗生根困难。因此，本发明的主攻方向是创造优良的人工 环境，从改善紫竹的组织细胞增殖、生根条件着手，来攻克散生
竹组培难点。为此，对培养基房料的选用、选配，浓度、pH值、 光照、温度做了一系列对比试验，如在配制诱导丛生芽的培养基 中，采用了七种培养基对紫竹茎尖组织进行接种，筛选出诱导率 高达42%的培养基；筛选出增殖系数高达13倍的培养基，从而 为组织细胞的增殖提供了物质^5出。针对散生竹种组培苗生根困 难的问题，先后用300卯m、 1000ppm、 3000ppm三种不同浓度的 IBA溶液中浸泡5-15min，再接种到MS+BA 3mg/L+NAA lmg/L的 生根培养基中，生根率达70-90%，对比后选择1000ppm浓度、 浸泡10min的方案。将伸长后的丛芽先在IBA中浸泡的目的是因 为紫竹是最易褐化的竹种，高浓度的IBA刺激后接种到含BA细 胞分裂素的培养基中，能减轻褐化程度，以增强生^L能力，因此 还需再接种到本诱导生根的培养基中，才实现90%的生根率。总 之，紫竹组培出再生植抹，是对外植体的处理条件、培养基、基 质等进行严格篩选的结果。
本紫竹培养基以MS为基本培养基，附加生长素和细胞分裂 素、水晶洋菜和蔗糖，添加量选定为占培养基总重量O. 25%的水 晶洋菜，3%的蔗糖，培养基的pH值定为5.0。再在其它成分及 添加量相同情况下，按生长素与细胞分裂素成分与添加量的不 同，配制成两种不同诱导阶段的培养基 一是诱导丛生芽的培养 基为MS+BA 3+TDZ 0. 01 (单位mg/L，下同)，二是诱导生根的培 养基为MS+BA 3+NAA 1。上述培养基按常规方法配制。培养基的 pH值卜5. 7的芽增殖效果比3、 6-7的好，最佳为5。
用紫竹的茎尖组织作外植体，进行组培快繁方法的步骤如下
(采用的各数值为最佳方案的数值，因此，可视为最佳实施例):
(1) 外植体的采集与消毒采集温室盆栽紫竹的春天萌发 嫩茎芽，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h,在稀释10倍 的5。/。NaC10溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗两次， 再在相同浓度的NaClO溶液中浸泡4min，无菌水冲洗三次后， 显微镜下切取长约0. 5咖的茎尖组织；
(2) 丛生芽的诱导将切得的茎尖组织接种到如权利要求 1、 2所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度 25土2。C、光照16h/d条件下，7d后芽始萌，45d后基部生出新 的丛生芽；
(3) 不定芽增殖与快繁:将上述丛生芽切下，接种于如权 利要求l、 2所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux， 光照16h/d，25土2。C条件下，15d后伸长，继代培养，100d后增 殖系数达13倍；
(4) 诱导生根与移栽将伸长后的丛生芽3-4个为一丛， 置于1000ppm的IBA即叼l味丁酸溶液中浸泡10min,再接种到如 权利要求1、 2所述的生根培养基中，光照强度2500Lux，光照 16h/d， 25土2。C条件下，20d后开始生根，培养125d后，生根 率达90%,取生长良好的再生植株置于驯化室，强光20000Lux 下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基，种植于体积比为 蛭石珍珠岩泥炭-l:l:l的基质中，每单个花盆套透明塑料 袋，该袋每二天剪一小口， 一周后弃袋移入温室栽种即成。
在对比试验中，将细胞分裂素BA的加入量分别选择 0. 3mg/L、 lmg/L、 3mg/L、 10mg/L，以及加与不加生长素NAA，
进行了对比试验。在不加NAA情况下，丛生芽i秀导率达42。/。；加 入BA为3mg/L的出现10个丛生芽，表现是佳；加入NAA后均不 出芽，因此诱导丛生芽培养基中不能加NAA。
对细胞分裂素TDZ的加入量对比试验中，加入量分别为 0. 001mg/L、 0. 01mg/L、 0, lmg/L、 lmg/L,都能诱导出丛生芽， 以加入量为0. Olmg/L的芽最多，因此，综合两种生长素加入后 诱导效果的情况，决定诱导丛生芽培养基选择最佳配比为3mg/L 的BA+O. Olmg/L的TDZ。
在诱导生根培养基中，选细胞分裂素BA的加入量还是 3mg/L，生长素NAA的加入量为lmg/L,浸泡用的生长素IBA浓 度选1000ppm，浸泡时间10min;培养基最佳pH值5. 0芽的增殖 情况最好。
其它MS、水晶洋菜、蔗糖为定值，不一一细述。 用上述诸条件的培养下，125天后测试，紫竹组培的丛生芽 为2-4个，芽长13-16mm，才艮长10-12cm，才艮数4才艮。
权利要求
1、一种紫竹组织培养基，分为诱导丛生芽培养基与诱导生根培养基，都以MS为基本培养基，其特征是由MS+0.3或1或3或10mg/L的BA即苄氨基腺嘌呤和0.001或0.01或0.1或1mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲，附加占总重量0.25％的水晶洋菜、3％的蔗糖配制成诱导丛生芽培养基；由MS+0.3或1或3或10mg/L的BA和1.0mg/L的NAA即α-奈乙酸，附加占总重量0.25％的水晶洋菜、3％的蔗糖配制成诱导生根培养基。两培养基的pH值为3或4或5或5.7或6或7。
2、 如权利要求1所述的紫竹组织培养基，其特征是所说的诱 导丛生芽培养基中BA的加入量为3mg/L、 TDZ的加入量为 0. Olmg/L;诱导生根的培养基中的BA的加入量为3mg/L，两培养 基的pH值为5。
3、 如权利要求1或2所述的紫竹组织培养基进行组培快繁的 方法，其特征是经过下列步骤(1) 外植体的采集与消毒采集温室盆栽紫竹的春天萌发嫩 茎芽，带回实验室，剥去杆箨，自来水冲洗2h，在稀释10倍的 S。/。NaC10溶液中，真空条件下浸泡10min，用无菌水冲洗两次，再 在相同浓度的NaClO溶液中浸泡4min，无菌水冲洗三次后，显微 镜下切取长约0. 5mm的茎尖组织；(2) 丛生芽的诱导将切得的茎尖组织接种到如权利要求1 所述的诱导丛生芽的培养基中，光照强度2500Lux、温度25士2。C、 光照l化/d条件下，7d后芽始萌，45d后基部生出新的丛生芽； (3) 不定芽增殖与快繁将上述丛生芽切下，接种于如权利 要求1所述的诱导丛生芽培养基中，光照强度2500 Lux，光照 16h/d，25土2。C条件下，15d后伸长，继代培养，100d后增殖系数 达13倍；(4) 诱导生根与移栽将伸长后的丛生芽3-4个为一丛，分 别置于300、 1000、 3000ppm的IBA即"引咮丁酸溶液中浸泡5-15min， 再接种到如权利要求1所述的生根培养基中，光照强度2500 Lux， 光照16h/d， 25士2。C条件下，20d后开始生根，培养125d后，生 根率达90%，取生长良好的再生植林置于驯化室，强光20000 lux 下驯化2周移栽，先用清水洗去根部的培养基，种植于体积比为蛭 石珍珠岩泥炭-l:l:l的基质中，单个花盆套透明塑料袋，该 袋每二天剪一小口， 一周后弃袋移入温室栽种即成。
全文摘要
一种紫竹组织培养基，由MS+3.0mg/L的BA+0.01mg/L TDZ+占总重量0.25％的水晶洋菜、3％的蔗糖配制成诱导丛生芽培养基；由MS+3mg/L的BA+1mg/L的NAA，再附加占总量0.25％的水晶洋菜、3％的蔗糖配制成诱导生根培养基，两培养基的pH值为5.0。运用上述培养基对紫竹组培快繁的方法按四个步骤进行外植体的采集与消毒、丛生芽的诱导、不定芽的增殖与快繁、诱导生根与移栽。采用本培养基与配套的组培快繁方法，丛生芽诱导率达42％，不定芽增殖系数高达13倍，生根率达90％，试管苗移栽成活率达90％左右。本发明突破了成熟散生竹组培出再生植株的难题，为紫竹的庭院与景点栽种、大面积绿化，奠定了快速而充足生产竹苗的基础。
文档编号A01G31/00GK101336613SQ20081006338
公开日2009年1月7日 申请日期2008年8月12日 优先权日2008年8月12日
发明者伟 方, 杨海芸, 林新春, 桂仁意, 王晓芹, 黄丽春 申请人:浙江林学院