一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法与流程

文档序号:12657746阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法,包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽,其特征在于:

(1)培养容器消毒:将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h,保存备用;

(2)培养基配制:诱导培养基为MS+2.0~5.0mg/L 6-BA+0.1~1.0mg/L NAA+40~100mg/L次氯酸钠+0.5~2.0mg/L环丝氨酸+10~50mg/L特美汀+50~100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8;增殖培养基为:MS+1.0~3.0mg/L 6-BA+0.1~1.0mg/L NAA+1.0~2.0mg/L KT+40~100mg/L次氯酸钠+0.5~2.0mg/L环丝氨酸+10~50mg/L特美汀+50~100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8;生根培养基为1/2MS+2.0~5.0mg/L NAA+40~100mg/L次氯酸钠+0.5~2.0mg/L环丝氨酸+10~50mg/L特美汀+50~100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8;所述MS,为1962年,Murashige和Skoog公开的MS培养基;所述6-BA,指6-苄氨基嘌呤;所述NAA,指α-萘乙酸;所述KT,指6-糠氨基嘌呤;配制培养基时,先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉,加培养基总重量1/2的自来水,加热至琼脂粉完全溶解,再按各培养基配方配齐其他原料后,定容,然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8,分装到消毒过的培养容器中,封口,冷却凝固后备用;

(3)无菌水的制备:采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水,终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠,现配现用;

(4)诱导培养:选择田间生长旺盛无病虫害的拔地拉植株,在茎中部取具有饱满芽点的双芽茎段,洗净,并用800倍稀释的多菌灵浸泡30min,然后用清水洗净后放入恒温水浴锅中,50~52℃热水处理30min,期间不断搅拌使拔地拉茎段受热均匀;然后,取出茎段用无菌泥炭土覆盖,厚度为刚露出蔗芽,保持湿润,并在35~37℃和1500Lx光照条件下培养;待发芽后,取健壮的植株,从最高肥厚带往下30cm处切下,用体积比为75%的酒精表面消毒,剥离外层叶鞘,取含生长点0.5~1.0cm的芽尖,接种到诱导培养基上,30d后可形成大量的丛生芽;培养室温度为26℃,光照12h,光照强度为1500Lx;

(5)增殖培养:将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基中,丛生芽逐步发育成不具根的幼苗,每15d转接一次,可以达到大量增殖的效果;培养室温度为26℃,光照12h,光照强度为1500Lx;

(6)生根培养:当丛生苗长到4~6cm高,且茎杆直径不小于0.2cm时,将丛生苗切成单株,接种到生根培养基上,25d后形成完整植株;培养室温度为26℃,光照12h,光照强度为1500Lx;

(7)瓶苗移栽:将生根培养获得的完整植株取出,洗净根部的培养基,用800倍的多菌灵浸泡30min后,移栽至透水性好的基质中,大棚上层用遮光网遮盖,移栽的环境温度为22~28℃;所述透水性好的基质,如草木灰:沙子:耕作土=1:1:1。

2.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法,其特征在于所述诱导培养基为MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+70mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8。

3.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法,其特征在于所述增殖培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.5mg/L KT+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+70mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8。

4.根据权利要求1所述的一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法,其特征在于所述生根培养基为1/2MS+3.0mg/L NAA+60mg/L次氯酸钠+1.0mg/L环丝氨酸+30mg/L特美汀+70mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉,pH5.8。

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