一种木霉孢子制剂及其制备方法_2

文档序号:9830690阅读:来源:国知局
粒剂预期制备总重量-壳聚糖酶解渣干重-粘结剂干重-包衣剂重量”计算得出,其中粘结剂用量过小,所占干重可忽略不计。其中壳聚糖酶解渣作为添加剂增强木霉孢子制剂的促生和抗菌活性,在该剂型中,用量低于0.25%无法达到预期效果,高于1%在效果上的增强作用也难以更加显著,反而造成浪费。
[0041 ]在上述混合均勾的固体发酵载体中加入浓度为0.1-1 % (w/v)的淀粉楽、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素等常用粘结剂中的一种或几种的组合,粘结剂溶液所用体积为颗粒剂预期总重量的1-3% (v/w),充分混合均匀;
[0042]在上述混合均勾的固体发酵载体中加入米糠粉、麸皮粉、白炭黑、膨润土、娃藻土、轻质碳酸钙等常用包衣剂中一种或几种的组合,包衣剂重量占颗粒剂预期制备总重量的10-90 %,充分混合均匀,摊开,自然风干后包装,得木霉孢子颗粒剂;
[0043 ] B、木霉孢子可湿性粉剂制备工艺为:
[0044]将上述含木霉孢子的固体发酵物自然风干,用低温气流粉碎机粉碎;用量按照“可湿性粉剂预期总重量-壳聚糖酶解渣重量-分散剂重量-润湿剂重量-载体重量”计算得出;
[0045]将壳聚糖酶解渣与分散剂、润湿剂、载体一起用粉碎机粉碎。其中分散剂为十二烷基苯磺酸钠、N0、NN0、MF、木质素磺酸钠中的一种或几种的组合,分散剂重量为可湿性粉剂预期总重量的2-10 % ;润湿剂为茶枯、皂角、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、JFC、OP中的一种或几种的组合,润湿剂重量为可湿性粉剂预期总重量的卜5%;载体为硅藻土、白炭黑、膨润土、轻质碳酸钙、凹凸棒土、高岭土中的一种或几种的组合,载体重量为可湿性粉剂预期总重量的10-90% ;加入的壳聚糖酶解渣重量为可湿性粉剂预期总重量的0.5-2.5% ;其中壳聚糖酶解渣作为添加剂增强木霉孢子制剂的促生和抗菌活性,在该剂型中,用量低于0.5%无法达到预期效果,高于2.5%在效果上的增强作用也难以更加显著,反而造成浪费。
[0046]将上述粉碎好的含木霉孢子的固体发酵物、壳聚糖酶解渣和助剂在混合机中混合均匀,包装,得木霉孢子可湿性粉剂。
[0047]将上述两种制剂应用于大田试验,分别考察其对于西瓜枯萎病、白术白絹病、水稻纹枯病的生防活性,与未添加壳聚糖酶解渣的木霉孢子制剂对比,结果为添加壳聚糖酶解渣的木霉孢子制剂生防活性提高30 %以上,作物产量提高15 %以上。
[0048]综上所述,本发明有以下优点:
[0049]1、利用该方法生产的木霉孢子制剂,将壳聚糖和壳寡糖的促生、抗菌作用与木霉的抗菌作用相结合,生产出的木霉孢子制剂具有更高的生防活性和更广阔的应用范围,生防活性提尚30%以上,同时可明显促进植物生长,提尚作物广量达15%以上;
[0050]2、该方法采用壳寡糖生产过程中产生的酶解渣为原料,真正做到变废为宝,降低生产成本的同时解决了壳聚糖酶解渣的处理问题;
[0051]3、该方法由于使用壳聚糖作为添加剂,可改良土壤,提高土壤供肥能力,促进土壤中有益微生物的生长,使木霉在土壤中的定殖能力增强,从而提高木霉生防活性;
[0052]4、该方法产品毒性低,田间施用后无残留,具有良好的环境效益。
【附图说明】
[0053]图1为本发明所述的木霉孢子制剂的制备方法工艺流程图。
【具体实施方式】
[0054]以下通过实施例形式的【具体实施方式】,对本发明的上述内容做进一步的详细说明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0055]本发明所述的v/w的单位为ml/g,w/v的单位为g/ml。
[0056]本发明所述的木霉菌种均为市场上购买获得。
[0057]实施例1
[0058](I)木霉菌种活化:将4 °C下保存在PDA培养基上的试管斜面绿色木霉菌种转移至25°C下活化6h;
[0059](2)木霉液体种子制备:
[0060]液体种子培养基的组成,按重量计(w/w)为:蔗糖3%,酵母浸粉0.8%,硫酸镁0.08%,磷酸二氢钾0.04%,加水至100mL;
[0061 ]将装有上述培养基的三角瓶在高压灭菌锅中121°C灭菌30min,取出,冷却至室温;
[0062]在无菌操作台上,用1mL无菌水将经过活化的试管木霉斜面菌种制成菌体悬浮液,冲洗入装有液体种子培养基的三角瓶中,接种量为I支试管菌种接种I个三角瓶;
[0063]液体种子培养条件:pH值自然,培养温度为280C,摇床转速180r/min,培养时间为48h,得木霉液体种子液;
[0064](3)木霉固体发酵:
[0065]固体培养基组成为:豆柏Ikg,棉籽壳6kg,玉米粉3kg,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁5g,尿素20g,加水10L;
[0066]将装有上述培养基的固体发酵罐121°C灭菌30min,冷却至室温;
[0067]将培养后的木霉液体种子液按接种量8%接种到灭菌后的固体发酵罐中,调节含水率为45 %,pH值为5,在温度28 0C,湿度80 %下培养7d,自然风干,得含木霉孢子的固体发酵物;
[0068]发酵结束后测定固体发酵物pH值为6.89,孢子数为40亿/g;
[0069](4)壳聚糖酶解渣的处理:
[0070]将壳寡糖生产过程中对壳聚糖酶解后产生的絮凝沉淀经固液分离后调节pH至4.5;
[0071]将上述絮凝沉淀自然风干;
[0072]经检测,上述步骤处理后得到的固体主要成分为脱乙酰度60%以上的壳聚糖和少量残余的壳寡糖,壳聚糖含量为90% ;
[0073]将上述壳聚糖酶解渣溶解于体积百分比为2%的醋酸中,配制成8%(w/v)的溶液,调节PH为5;
[0074](5)制备绿色木霉孢子颗粒剂:
[0075]将上述8% (w/v)的壳聚糖酶解渣溶液按颗粒剂预期制备总重量的10% (v/w)加入含木霉孢子的固体发酵物,充分混合均匀,得固体发酵载体,即壳聚糖酶解渣干重占颗粒剂预期制备总重量的百分比为0.8%,含木霉孢子的固体发酵物用量占49.2% ;
[0076]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入浓度为0.5%的羧甲基纤维素钠,用量为I% (v/w),充分混合均匀;
[0077]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入米糠粉,充分混合均匀,摊开,自然风干后包装,得绿色木霉孢子颗粒剂;米糠粉的用量为颗粒剂预期制备总重量的50%(w/w)。
[0078]所述的绿色木霉孢子颗粒剂以重量百分比计,其原料配比为:壳聚糖酶解渣0.8%,含木霉孢子的固体发酵物49.2 %,助剂50 %。
[0079]将上述绿色木霉孢子颗粒剂用于大田试验,考察其对水稻纹枯病的生防活性,结果表明,与未添加壳聚糖酶解渣的绿色木霉孢子颗粒剂相比,生防活性提高48%,水稻产量提尚15% ο
[0080]实施例2
[0081 ] (I)木霉菌种活化:将4 °C下保存在PDA培养基上的试管斜面康氏木霉菌种转移至22°C下活化4h;
[0082](2)木霉液体种子制备:
[0083]液体种子培养基组成,按重量计(w/w)为:蔗糖4%,酵母浸粉I%,硫酸镁0.1%,磷酸二氢钾0.02%,加水至100mL;
[0084]将装有上述培养基的三角瓶在高压灭菌锅中121°C灭菌30min,取出,冷却至室温;
[0085]在无菌操作台上,用1mL无菌水将经过活化的试管斜面菌种制成菌体悬浮液,冲洗入装有液体种子培养基的三角瓶中,接种量为I支试管菌种接种I个三角瓶;
[0086]液体种子培养条件:pH值自然,培养温度为260C,摇床转速140r/min,培养时间为48h,得木霉液体种子液;
[0087](3)木霉固体发酵:
[0088]固体培养基组成为:豆柏0.8kg,棉籽壳7kg,玉米粉2kg,磷酸二氢钾0.6g,硫酸镁4g,尿素18g,加水12L;
[0089]将装有上述培养基的固体发酵罐121°C灭菌30min,冷却至室温;
[0090]将培养后的木霉液体种子液按接种量4%接种到灭菌后的固体发酵罐中,调节含水率为48 %,pH为4,在温度300C,湿度75 %下培养6d,48°C烘干,得含木霉孢子的固体发酵物;
[0091]发酵结束后测定固体发酵物pH为7.08,孢子数为35亿/g;
[0092]将上述固体发酵物用低温气流粉碎机粉碎,用量为可湿性粉剂预期制备总量的5.5% ;
[0093](4)壳聚糖酶解渣的处理:
[0094]将壳寡糖生产过程中对壳聚糖酶解后产生的絮凝沉淀经固液分离后调节pH至6.0;
[0095]将上述絮凝沉淀48Γ烘干;
[0096]经检测,上述步骤处理后得到的固体主要成分为脱乙酰度60%以上的壳聚糖和少量残余的壳寡糖,壳聚糖含量为92% ;
[0097]将上述壳聚糖酶解渣与分散剂、润湿剂、载体一起用粉碎机粉碎,其中分散剂为十二烷基苯磺酸钠,占可湿性粉剂预期制备总重量的重量百分比为8%,润湿剂为茶枯,重量百分比为5%,载体为硅藻土,重量百分比为79%,加入的壳聚糖酶解渣重量百分比为2.5% ;
[0098]将上述粉碎好的固体发酵物、壳聚糖酶解渣和助剂在混合机中混合均匀,包装,得康氏木霉孢子可湿性粉剂;
[0099]所述的康氏木霉孢子可湿性粉剂以重量百分比计,其原料配比为:壳聚糖酶解渣2.5%,含木霉孢子的固体发酵物5.5%,助剂92 %。
[0100]将上述康氏木霉孢子可湿性粉剂用于大田试验,考察其对西瓜枯萎病的生防活性,结果表明,与未添加壳聚糖酶解渣的康氏木霉孢子可湿性粉剂相比,生防活性提高32%,西瓜产量提高21 %。
[0101]实施例3
[0102](I)木霉菌种活化
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