:将4 °C下保存在PDA培养基上的试管斜面哈茨木霉菌种转移至23°C下活化8h;
[0103](2)木霉液体种子制备:
[0104]液体种子培养基组成，按重量计(w/w)为:蔗糖4%，酵母浸粉0.6%，硫酸镁0.04%，磷酸二氢钾0.03%，加水至100mL;
[0105]将装有上述培养基的三角瓶在高压灭菌锅中121°C灭菌30min，取出，冷却至室温；
[0106]在无菌操作台上，用1mL无菌水将经过活化的试管斜面菌种制成菌体悬浮液，冲洗入装有液体种子培养基的三角瓶中，接种量为I支试管菌种接种I个三角瓶；
[0107]液体种子培养条件:pH值自然，培养温度为240C，摇床转速160r/min，培养时间为36h，得木霉液体种子液；
[0108](3)木霉固体发酵:
[0109]固体培养基组成为:豆柏1.5kg，棉籽壳5kg，玉米粉3kg，磷酸二氢钾0.4g，硫酸镁3区，尿素25〖，加水81^;
[0110]将装有上述培养基的固体发酵罐121°C灭菌30min，冷却至室温；
[0111 ]将培养后的液体种子液按接种量10%接种到灭菌后的固体发酵罐中，调节含水率为50 %，pH为6，在温度26 0C，湿度70 %下培养8d，45 °C烘干，得含木霉孢子的固体发酵物；
[0112]发酵结束后测定固体发酵物pH为7.17，孢子数为28亿/g;
[0113](4)壳聚糖酶解渣的处理:
[0114]将壳寡糖生产过程中对壳聚糖酶解后产生的絮凝沉淀经固液分离后调节pH至5.5；
[0115]将上述絮凝沉淀45°C烘干；
[0116]经检测，上述步骤处理后得到的固体主要成分为脱乙酰度60%以上的壳聚糖和少量残余的壳寡糖，壳聚糖含量为91% ;
[0117]将上述壳聚糖酶解渣溶解于体积百分比为2%的醋酸中，配制成5%(w/v)的溶液，调节PH为4.5;
[0118](5)制备哈茨木霉孢子颗粒剂:
[0119]将上述5%(w/v)的壳聚糖酶解渣溶液按颗粒剂预期制备总重量的5% (v/w)加入含木霉孢子的固体发酵物，充分混合均匀，得固体发酵载体，即壳聚糖酶解渣干重占颗粒剂预期制备总重量的百分比为0.25%，含木霉孢子的固体发酵物用量占59.75%;
[0120]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入浓度为0.1%的淀粉浆，用量为3%(v/w)，充分混合均匀；[0121 ]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入麸皮粉，充分混合均匀，摊开，自然风干后包装，得哈茨木霉孢子颗粒剂;麸皮粉的用量为颗粒剂预期制备总重量的40%(w/w)。
[0122]所述的哈茨木霉孢子颗粒剂以重量百分比计，其原料配比为:壳聚糖酶解渣
0.25%,含木霉孢子的固体发酵物59.75%,助剂40 %。
[0123]将上述哈茨木霉孢子颗粒剂用于大田试验，考察其对白术白絹病的生防活性，结果表明，与未添加壳聚糖酶解渣的哈茨木霉孢子颗粒剂相比，生防活性提高35%，白术产量提尚18% ο
[0124]实施例4
[0125](I)木霉菌种活化:将4 °C下保存在PDA培养基上的试管斜面绿粘帚霉菌种转移至20°C下活化7h;
[0?26] (2)木霉液体种子制备:
[0127]液体种子培养基组成，按重量计(w/w)为:蔗糖2%，酵母浸粉0.2%，硫酸镁
0.03%，磷酸二氢钾0.01%，加水至100mL;
[0128]将装有上述培养基的三角瓶在高压灭菌锅中121°C灭菌30min，取出，冷却至室温；
[0129]在无菌操作台上，用1mL无菌水将经过活化的试管斜面菌种制成菌体悬浮液，冲洗入装有液体种子培养基的三角瓶中，接种量为I支试管菌种接种I个三角瓶；
[0130]液体种子培养条件:pH值自然，培养温度为20°C，摇床转速80r/min，培养时间为48h，得木霉液体种子液；
[0131](3)木霉固体发酵:
[0132]固体培养基组成为:豆柏0.5kg，棉籽壳4kg，玉米粉2kg，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁
2.5g，尿素16g，加水8L ；
[0133]将装有上述培养基的固体发酵罐121°C灭菌30min，冷却至室温；
[0134]将培养后的液体种子液按接种量10%接种到灭菌后的固体发酵罐中，调节含水率为40 %，pH为6，在温度22 °C，湿度70 %下培养8d，自然风干，得含木霉孢子的固体发酵物；
[0135]发酵结束后测定固体发酵物pH为7.28，孢子数为31亿/g;
[0136](4)壳聚糖酶解渣的处理:
[0137]将壳寡糖生产过程中对壳聚糖酶解后产生的絮凝沉淀经固液分离后调节pH至4.5；
[0138]将上述絮凝沉淀48°C烘干；
[0139]经检测，上述步骤处理后得到的固体主要成分为脱乙酰度60%以上的壳聚糖和少量残余的壳寡糖，壳聚糖含量为92% ;
[0140]将上述壳聚糖酶解渣溶解于体积百分比为2%的醋酸中，配制成10 % (w/v)的溶液，调节pH为6.0;
[0141](5)制备绿粘帚霉孢子颗粒剂:
[0142]将上述10%(w/v)的壳聚糖酶解渣溶液按颗粒剂预期制备总重量的5%(v/w)加入含木霉孢子的固体发酵物，充分混合均匀，得固体发酵载体，即壳聚糖酶解渣干重占颗粒剂预期制备总重量的百分比为0.5%，含木霉孢子的固体发酵物用量占59.75%;
[0143]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入浓度为1%的甲基纤维素，用量为1%(ν/w)，充分混合均匀；
[0144]在上述混合均匀的固体发酵载体中加入膨润土，充分混合均匀，摊开，自然风干后包装，得绿粘帚霉孢子颗粒剂;膨润土的用量为颗粒剂预期制备总重量的10%(w/w)。
[0145]所述的绿粘帚霉孢子颗粒剂以重量百分比计，其原料配比为:壳聚糖酶解渣
0.5%,含木霉孢子的固体发酵物89.5 %，助剂1 %。
[0146]将上述绿粘帚霉孢子颗粒剂用于大田试验，考察其对水稻纹枯病的生防活性，结果表明，与未添加壳聚糖酶解渣的绿粘帚霉孢子颗粒剂相比，生防活性提高38%，水稻产量提局16 % ο
【主权项】
1.一种木霉孢子制剂，其特征在于:其有效成分主要为壳聚糖酶解渣和木霉孢子。2.根据权利要求1所述的一种木霉孢子制剂，其特征在于:所述的木霉为绿色木霉或哈茨木霉或康氏木霉或绿粘帚霉。3.根据权利要求1所述的一种木霉孢子制剂，其特征在于:所述壳聚糖酶解渣主要成分为脱乙酰度60%以上的壳聚糖，壳聚糖含量在90%以上。4.根据权利要求1所述的一种木霉孢子制剂，其特征在于:以重量百分比计，其原料配比为:壳聚糖酶解渣0.25-2.5%,含木霉孢子的固体发酵物4.5-89.75%,助剂10-93 %。5.根据权利要求1所述的一种木霉孢子制剂，其特征在于:所述的木霉孢子制剂的剂型为颗粒剂或可湿性粉剂。6.一种木霉孢子制剂的制备方法，其特征在于:其具体步骤为: (1)木霉菌种活化:将试管斜面木霉菌种活化； (2)木霉液体种子制备:在无菌操作台上，用无菌水将经过活化的试管斜面木霉菌种制成菌体悬浮液，接种至液体种子培养基中，振荡培养，得木霉液体种子液； (3)木霉固体发酵:将木霉液体种子液按接种量4-10%接种到固体培养基中，调节含水率为40-50 %，pH为4-6，在温度20-30 °C，湿度65-90 %下培养6_8d，自然风干或低于50 °(:烘干，得含木霉孢子的固体发酵物； (4)壳聚糖酶解渣的处理:将壳寡糖生产过程中对壳聚糖酶解后产生的絮凝沉淀经固液分离后调节pH至4.5-6.5，自然风干或低于50°C烘干； (5)壳聚糖酶解渣和助剂添加到含木霉孢子的固体发酵物中制备木霉制剂。7.根据权利要求6所述的一种木霉孢子制剂的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述的液体种子培养基的组成为蔗糖2-4%，酵母浸粉0.2-1 %，硫酸镁0.02-0.1%，磷酸二氢钾.0.01-0.05%,加水至I OOOmL;所述百分比为质量百分比。8.根据权利要求6所述的一种木霉孢子制剂的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述的培养条件为pH值自然，培养温度24-28°C，摇床转速75-200r/min，培养时间为24-48h。9.根据权利要求6所述的一种木霉孢子制剂的制备方法，其特征在于:步骤(3)中所述的固体培养基组成为:豆柏0.5-1.5kg，棉籽壳4-8kg，玉米粉2-4kg，磷酸二氢钾0.25-.0.75g，硫酸镁 2.5-7.5g，尿素 15-25g，水 8-12L。
【专利摘要】本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种木霉孢子制剂及其制备方法。本发明所述的木霉孢子制剂有效成分为壳聚糖酶解渣和木霉孢子。本发明将壳聚糖的促生、抗菌作用与木霉的抗菌作用相结合，生产出的木霉孢子制剂不仅生防活性提高30％以上，明显促进植物生长，提高作物产量达15％以上，而且还可改良土壤，提高土壤供肥能力，促进土壤中有益微生物的生长，使木霉在土壤中的定殖能力增强，从而提高木霉生防活性。本发明采用壳寡糖生产过程中产生的酶解渣为原料，真正做到变废为宝，降低生产成本的同时解决了壳聚糖酶解渣的处理问题。本发明工艺合理，成本低廉，易于实施，产品毒性低，无残留，具有良好的经济效益、环境效益和社会效益。
【IPC分类】C05G3/00, A01P3/00, A01N25/14, A01P21/00, A01N43/16, A01N25/12, A01N63/04
【公开号】CN105594751
【申请号】CN201610061272
【发明人】秦森, 姚刚, 杨传伦, 张心青, 王建平
【申请人】黄河三角洲京博化工研究院有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月28日