用于检测流感a型病毒的强毒株的方法

专利名称：：用于检测流感a型病毒的强毒株的方法
技术领域：
：本发明涉及使用与除流感病毒A的强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的抗体用于检测流感病毒A的强毒株的方法，且更具体而言涉及夹心免疫测定法，和特别地免疫层析测定法和免疫层析测定法装置。本发明涉及用于快速和简单的诊断流感病毒的强毒林，例如高致病性禽流感病毒感染的检测方法。
背景技术：
：高致病性禽流感是由对鸡等显示致命致病性的流感病毒引起的传染病。这种疾病也称为鸡瘟。在日本，这种疾病是根据家畜传染病预防法法律上指定的传染病。同样，高致病性禽流感由OfficeInternationaldesEpizooties(OIE)指定为ListA疾病。已引起此类高致病性禽流感的流感病毒归入流感病毒A亚型仅H5和H7。这些亚型不一定是强毒的。然而，当家畜感染这些亚型时，无论它们是强毒的还是减毒的，在日本所有动物都必须被杀死。就感染禽流感病毒的人类而言，禽流感病毒亚型H5、H7和H9感染已得到报道。在这些中，H5N1亚型是已报道引起患者死亡的唯一流感病毒。已报道流感病毒亚型H5N1感染引起严重的肺炎随后为死亡。在1997年，由亚型H5N1引起的高致病性禽流感已在香港变得流行。此外，在2003年后至今这已在几个亚洲国家中变得如此流行，并且甚至人类感染和死亡也已得到报道。目前，亚型H5N1关于人类感染在全世界具有极大关注，并且被关注在亚型H1N1和H3N2后在世界上引起新流感。根据2005年11月17日的WHO报道，存在其中人类感染流感病毒亚型H5N1得到证实的130个病例，并且在他们中，存在其中患者死亡的67个病例。在2004年12月后，其中人类感染得到证实的病例数目已快速增加，并且死亡人数也已增加。感染H5N1病毒后患者的死亡率为51.3%(67/130)。如由上文描述显而易见的，人类感染亚型H5N1现在已变成现实。为了预防流感的大规模感染，亚型H5N1感染的快速检测是主要问题。此外，快速诊断对于其治疗也是重要的。在当前环境下，关于鸟类的高致病性禽流感的诊断通过下述方法来进行，所述方法包括收集来自怀疑病毒感染的患病鸟的气管拭子或泄殖腔拭子(泄殖腔的拭子)，将其接种在含胚鸡蛋中用于培养，且随后分离病毒。然而，这种方法是不利的，因为它需要几天以获得结果且因此结果无法快速获得。使用最近开发的遗传测试(PCR法、LAMP法)，获得结果所需的时间显著减少。然而，因为这些遗传测试需要专用设备和技术，所以无法在家禽饲养所等进行这些测试。流感病毒通过人类上呼吸道、下呼吸道等进行感染，并且在1-2天的潜伏期后，病毒引起头痛、腰痛、肌痛、全身不适、消化器官紊乱等、以及发烧(38°C-39°C)。此类流感最成问题的并发症包括在老年人中的肺炎和在儿童中的脑炎/脑病。特别地，在儿童中的脑炎/脑病的特征在于它伴随高烧、意识紊乱和惊厥。在儿童中的此类脑炎/脑病的预后极差，并且从最初症状到中枢神经系统症状的表现或死亡的时期极短。因此，快速诊断和治疗是必要的。先前，人仅基于前述临床症状诊断为类似流感的疾病。然而，近年来由于用于快速检测流感病毒抗原的测试试剂盒的开发和广泛传播，已可以在早期阶段时诊断流感病毒传染病。此类快速诊断试剂盒包括利用酶联免疫测定法(EIA)或免疫层析测定法作为原理的那些。某些试剂盒仅检测流感病毒A,和其他试剂盒共同检测流感病毒A和B。此外，某些其他试剂盒单独检测流感病毒A和B。然而，目前的流感抗原测试使用所有A病毒共有的核蛋白反应的抗体。因此，无法进行亚型H5与亚型H1N1或H3N2感染之间的鉴别诊断，所有这些都是流感病毒A。亚型H5N1感染引起严重的肺炎，并且死亡率极高。因此，在初次诊断时进行亚型H5感染的鉴别诊断是重要的，这还将用于确定关于患者的治疗策略。这还使得能够采取措施例如在早期阶段时患者的隔离以防止进一步的感染，这对于防止亚型H5N1感染的进一步扩大将是重要的。使用最近开发的遗传测试(PCR法、LAMP法)，可以区别且检测亚型H5N1。然而，这些遗传测试需要专用设备和技术，且因此不能说它们是简单的方法。专利文件1:日本专利提前公开(Laid-open)(Kohyo)号2004-509648专利文件2:日本专利提前公开(Kokai)号11-108932专利文件3:日本专利提前公开(Kokai)号2001-215228非专利文件1:HinshawV.S.等人,"Specificantibodyresponsesandgenerationofantigenicvariantsinchickensimmunizedagainstavirulentavianinfluenzavirus,"AvianDis.1990，34(1):80-6非专利文件2:KaverinN.V.等人，"StructureofantigenicsitesonthehaemagglutininmoleculeofH5avianinfluenzavirusandphenotypicvariationescapemutants,，，J.Gen.Virol.2002,83(ptl0):2497-505本发明的公开内容由本发明解决的问题如上所述，流感病毒快速感染，且如果检测被延迟，那么在大范围中迅速传播。因此，必须尽早且尽快地检测流感病毒感染。特别是，流感病毒A亚型H5N1引起严重的肺炎，并且死亡率极高。然而，迄今为止，通过使用用于检测流感病毒抗原的常规试剂无法与其他类型的流感病毒A感染分开检测流感病毒A亚型H5。本发明的目的是提供使得能够快速和简单的鉴别诊断流感病毒A的强毒林包括流感病毒A亚型H5N1的检测试剂，以及使用其的检测方法，包括夹心免疫测定法、和特别地免疫层析测定法，和免疫层析测定法装置。用于解决该问题的方法本发明人通过用流感病毒A作为免疫原使小鼠免疫已获得各种类型的抗体。随后，这些抗体已在免疫层析测定法装置中进行测试。在这个过程期间，本发明人已成功地获得与除流感病毒的强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的单克隆抗体。随后，本发明已通过发现流感病毒A的强毒林可以使用上述抗体在免疫测定法进行检测来完成，所述免疫测定法特别是夹心免疫测定法、和具体地免疫层析测定法中。换言之，依照本发明的一个方面，提供了用于检测流感病毒A的强毒林的方法，其包括提供与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、和不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒抹外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体，且进行免疫测定法以检测在与第一种抗体的反应中显示阳性应答、和在与第二种抗体的反应中显示阴性应答的抗原。在这种检测方法中使用的免疫测定法未具体限制。夹心免疫测定法、特别是ELISA(酶联免疫吸附测定法)法、免疫层析测定法等是优选的。因此，在本发明的上述检测方法的一个优选实施方案中，上述免疫测定法包括使用第一种抗体和与第三种抗体的夹心免疫测定法，所述第三种抗体与笫一种抗体与之反应的抗原反应，和/或使用第二种抗体和第四种抗体的夹心免疫测定法，所述第四种抗体与第二种抗体与之反应的抗原反应。此类夹心免疫测定法可以有利地通过使第一种抗体和第二种或笫四种抗体固定在栽体中来进行。在这种情况下，如果使用膜载体作为载体，那么可以进行免疫层析测定法。因此，依照本发明的另一个方面，提供了免疫层析测定法，其包括提供具有第一个捕获区带和第二个捕获区带的膜栽体，所述捕获区带通过分别使第一种抗体和第二种抗体固定在其预定位置中形成，第一种抗体与所有流感病毒A亚型反应，和第二种抗体不与流感病毒A的强毒抹反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应；和在膜栽体中分别针对第一个捕获区带和笫二个捕获区带层析法地显现第一种混合溶液和第二种混合溶液，第一种混合溶液包含测试样品和第三种抗体，所述第三种抗体与第一种抗体与之反应的抗原反应，和第二种混合溶液包含测试样品和第四种抗体，所述第四种抗体与第二种抗体与之反应的抗原反应，或在膜载体中针对2个捕获区带层析法地显现第一种混合溶液，由此流感病毒A的强毒林可以基于下述结果进行检测在与第一种抗体的反应中的阳性应答显示于第一个捕获区带中，同时在与第二种抗体的反应中的阴性应答显示于第二个捕获区带中。此外，依照本发明的一个进一步的方面，提供了用于检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、与第一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体、与第二种抗体与之反应的抗原反应的第四种抗体、和膜栽体，其中第一种和第二种抗体先前固定在膜栽体的预定位置中，以便分别形成第一个捕获区带和第二个捕获区带，以及第三种和第四种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中第三种和第四种抗体在远离捕获区带的位置上进行制备，用于在膜载体中分别针对第一个和笫二个捕获区带层析法地显现。上述膜载体可以是具有彼此远离的第一个捕获区带和第二个捕获区带的单个膜载体。另外，膜载体可以包含在其中固定第一种抗体的第一个膜载体，和在其中固定第二种抗体的笫二个膜栽体。后面一个膜载体就特异性而言是极佳的，且因此是优选的。在后面一个膜载体的情况下，第三种抗体在第一个膜载体上进行制备，和第四种抗体在第二个膜载体上进行制备是方便的，因为测量可以仅通过将测试样品注入每个膜载体内来进行。第三种和第四种抗体进行制备同时灌注到部件内是方便的，所迷部件分别排列在第一个和第二个膜载体上。当本发明的膜栽体包含所述第一个和笫二个膜载体时，它们可以被制成所谓的免疫层析测试条，其中第一个和第二个膜载体都具有延伸形式，即条形式，和排列在分别的膜载体上的灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时第一个和第二个膜载体彼此平行放置。备选地，可以形成所谓的免疫层析测试条或免疫层析测试试剂盒，其中笫一个和第二个膜载体都具有延伸形式，即条形式，和排列在分别的膜栽体上的灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时第一个和第二个膜栽体放射状或相对地》文置。上述方法和装置全都涉及其中上述笫二种抗体固定在栽体中的技术。然而，在本发明的一个优选实施方案中，其中上述第二种抗体未固定在载体中的技术也可以采用。换言之，依照本发明的另一个方面，提供了免疫层析测定法，其包括提供与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和与第一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体；制备各自具有通过使第一种抗体固定在其预定位置中形成的第一个捕获区带的膜载体；和在分别的膜载体中针对第一个捕获区带层析法地显现第一种混合溶液和第二种混合溶液，笫一种混合溶液包含测试样品和第二种抗体，和第二种混合溶液包含测试样品和笫三种抗体，由此流感病毒A的强毒林可以基于下述结果进行检测在与第三种抗体的反应中的阳性应答显示于第一个捕获区带中，同时在与第二种抗体的反应中的阴性应答显示于笫一个捕获区带中。这种测定法仅需要在其中固定第一种抗体的单一类型的膜栽体，但需要层析显色2次，即，第一种混合溶液的层析显色和第二种混合溶液的层析显色。因此，这种测定法需要总共2个膜载体用于上述2次层析显色。此外，依照本发明的另一个方面，提供了用于检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、与第一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体、和膜载体，其中第一种抗体先前固定在膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，以及第二种和第三种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中第二种和第三种抗体各自在远离第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在膜栽体中针对第一个捕获区带层析法地显现。在上述测定法装置中，膜载体优选地至少包含在其中固定第一种抗体的第一个膜载体，和在其中固定第一种抗体的第二个膜栽体。第二种抗体在第一个膜载体上进行制备，和第三种抗体在第二个膜载体上进行制备是方便的，因为测量可以仅通过将测试样品注入2个膜载体内来进行。第二种和第三种抗体进行制备同时灌注到部件内是方便的，所述部件分别排列在第一个和第二个膜栽体上。A和B的商购可得的免疫层析测试条或试剂盒来进行，例如CAPILIA(注册商标)FluA+B(由TaunsLaboratories,Inc.制造)，4吏用所述第一种抗体和第二种抗体的夹心免疫测定法装置。因此，对于此类实施方案，依照本发明的另一个方面，提供了检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的笫一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和膜栽体，其中第二种抗体先前固定在膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，和第一种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中第一种抗体在远离第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在膜载体中针对第一个捕获区带层析法地显现。此外，对于相同实施方案，依照本发明的另一个方面，提供了用于检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和膜载体，其中第一种抗体先前固定在膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，和第二种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中第二种抗体在远离第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在膜载体中针对第一个捕获区带层析法地显现。本发明中使用的上述第一种抗体和第二种抗体各自是针对流感病毒的抗体，并且一般作为针对流感病毒的核蛋白的抗体获得。上述第一种抗体和第二种抗体各自可以是多克隆抗体或单克隆抗体，且从特异性的观点来看优选是单克隆抗体。作为上述第一种抗体，一般可以使用针对流感病毒A的核蛋白的已知单克隆抗体。上述第二种抗体已获得，同时就与各自流感病毒A亚型的反应性检查针对流感病毒A的核蛋白的各种单克隆抗体。在第一种抗体的情况下，上述多克隆抗体可以通过下述来获得，例如，克隆对应包含构成表位的氨基酸残基的区带的DNA片段，所述DNA片段来自编码SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的DNA序列，允许克隆基因在宿主例如大肠杆菌(fsc力eWc力/aco//)中以遗传改造的方式表达，提取并纯化表达的蛋白质，用纯化的蛋白质用作抗原根据常规方法免疫动物，并且随后从免疫动物的抗血清中获得多克隆抗体。在第二种抗体的情况下，上述多克隆抗体可以通过下述来获得，例如，克隆对应包含构成表位的氨基酸残基的区带的DNA片段，所述表位不同于流感病毒亚型H5N1，所述DM片段来自编码SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的DNA序列，允许克隆基因在宿主例如大肠杆菌中以遗传改造的方式表达，提取并纯化表达的蛋白质，用纯化的蛋白质用作抗原根据常规方法免疫动物，并且随后从免疫动物的抗血清中获得多克隆抗体。在第一种和第二种抗体的2种情况下，单克隆抗体可以通过下述来获得，例如，用上述纯化的蛋白质用作抗原免疫动物例如小鼠，使免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合用于细胞融合，在含HAT的培养基中选择因而融合的细胞并允许它们生长，并且随后通过酶标记免疫测定法等使用上述纯化的蛋白质选择生长菌林。用作上述第二种抗体的单克隆抗体不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒抹外的所有流感病毒A亚型反应。此类单克隆抗体特别地识别在除流感病毒的强毒抹外的所有流感病毒A亚型中是保守的，并且在流感病毒的强毒林中进行突变且丧失，并且特别地识别流感病毒A的核蛋白的表位。认为流感病毒A的此类表位通过流感病毒亚型H5N1中的氨基酸序列的置换或不同糖链修饰的发生进行突变，且因此不能被上述第二种抗体特异性识别。此类单克隆抗体仍是未知的，且它是新型的。因此，依照本发明的另一个方面，提供了不与流感病毒A的强毒抹反应但与除强毒抹外的所有流感病毒A亚型反应的单克隆抗体。特别地，单克隆抗体不与流感病毒A亚型H5N1的核蛋白反应但与除亚型H5N1外的所有流感病毒A亚型的核蛋白反应。在本发明中，在夹心免疫测定法例如免疫层析测定法中使用的笫三种抗体可以是任何抗体，只要它与第一种抗体与之反应的抗原反应。第三种抗体可以与第一种抗体相同，或可以是除第一种抗体外的抗体。例如，当抗原具有与第一种抗体反应的多个表位时，与第一种抗体相同的抗体可以用作第三种抗体。因此，第三种抗体可以是与所有流感病毒A亚型反应的抗体。此外，第三种抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，并优选是单克隆抗体，并且从特异性的观点来看特别是与流感病毒的核蛋白反应的单克隆抗体。在本发明中，在夹心免疫测定法例如免疫层析测定法中使用的第四种抗体可以是任何抗体，只要它与第二种抗体与之反应的抗原反应。第四种抗体可以与第二种抗体相同，或可以是除第二种抗体外的抗体。例如，当抗原具有与笫二种抗体反应的多个表位时，与第二种抗体相同的抗体可以用作第四种抗体。因此，第四种抗体可以是与所有流感病毒A亚型反应的抗体。另外，第四种抗体还可以是不与流感病毒A的强毒林反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的抗体。此外，第四种抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，并优选是单克隆抗体，并且从特异性的观点来看特别是与流感病毒的核蛋白反应的单克隆抗体。当第四种抗体是与所有流感病毒A亚型反应的抗体时，它可以与第三种抗体相同。提及流感病毒A亚型，目前就H(血凝素)蛋白而言已知16种亚型，和就N(神经氨酸酶)蛋白而言已知9种亚型。因此，在理论上，将存在144(16x9)种亚型。然而，一般而言，与亚型H1-H15的代表性例子反应的抗体应当理解为"与所有流感病毒A亚型反应的抗体"。因此，在本说明书中，"所有流感病毒A亚型"意指目前已知的亚型HI-H15的代表性例子，并且具体意指本说明书中随后的表2中所示的毒林。同样，"除强毒林外的所有流感病毒A亚型，，意指亚型HI-H15的代表性例子，并且具体意指本说明书中随后的表2中所示的毒抹，从其中排除强毒林。术语"强毒林，，意指亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒抹。与流感病毒A的核蛋白反应的抗体不与流感病毒B或流感病毒C的核蛋白交叉反应。类似地，本发明的第一种抗体和第二种抗体都不与流感病毒B或流感病毒C的核蛋白交叉反应。此外，在本说明书中，表达"在与抗体的反应中的阳性应答"意指抗原-抗体反应在抗原和抗体之间进行，而表达"在与抗体的反应中的阴性应答"意指抗原-抗体反应未在抗原和抗体之间进行。此外，在本说明书中，关于抗体的表达"不与流感病毒A的强毒林反应，，包括其中抗体不与选自下述的至少一种的任何区带进行抗原-抗体反应的情况流感病毒A亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒林，和其中抗体仅轻微地进行抗原-抗体反应，同时它在使用的某一状态中不进行抗原-抗体反应的情况，例如，当抗体固定在膜栽体中时。发明效应根据本发明，通过使用与所有流感病毒A亚型反应的抗体作为第一种抗体、连同不与流感病毒A的强毒抹反应但与除强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的抗体作为第二种抗体，根据免疫测定法已可以检测在与第一种抗体的反应中显示阳性应答、和在与第二种抗体的反应中显示阴性应答的抗原。这种检测方法可以用于选择性或特异性检测流感病毒的强毒林，并且可以应用于广泛范围诊断由针对人类、鸟类等的流感病毒的强毒抹引起的传染病。此外，通过使用本发明的免疫层析测定法和免疫层析测定法装置，可以在医院、家禽飼养所等中简单和快速地检测流感病毒的强毒林和诊断病毒感染，无需专用设备或熟练技术。用于执行本发明的最佳方式可以用于执行本发明的免疫层析测定法的测定法装置可以基于已知免疫层析测试条的结构容易地实现。在下文中，其具体例子将就附图而言进行描述。(1)使用单个免疫层析测试条的实施方案作为免疫层析测试条的具体例子，可以提及例如如图1中所示的测试条IO。在图1中，数字l指示粘着层，2指示灌注部件，3指示膜栽体，4指示捕获区带，5指示吸附部件，和6指示样品接受部件。在如该图中所示的例子中，膜载体3由具有5mm宽度和36mm长度的延伸的条形硝化纤维素膜滤器组成。膜载体3与具有与上文相同的宽度的粘着层1的中部附着。膜载体3具有第一种抗体，其固定在距离层析显色的初始点一侧下游7.5mm位置上，即，距离图l中的左侧上的膜栽体的末端(这在下文中称为"上游侧"，和对侧即层析显色方向的一侧，换言之，图1中的右侧在下文中称为"下游侧")。因此形成第一个捕获区带41a用于捕获第三种抗体和病毒抗原的复合物，所述病毒抗原例如流感病毒A的核蛋白。此外，第二种抗体固定在距离膜载体3的上游侧上的末端下游10.5mm位置上，且因此形成第二个41b用于捕获第四种抗体(如下所述，它可以与图1的装置中的第三种抗体相同)和病毒抗原的复合物，所述病毒抗原例如除强毒林外的流感病毒A的核蛋白。此外，在距离膜载体3的上游侧上的末端下游15.0mm位置上提供了所谓的对照线42。提供对照线42以证实反应已进行，不管分析物的存在或不存在。一般而言，此类对照线42可以通过使物质固定来形成，所述物质能够与膜载体3中的第三种和/或第四种抗体(除分析物外)免疫特异性结合。例如，当小鼠抗体用作第三种和/或第四种抗体时，针对小鼠抗体的抗体可以用作该物质。在图1中的装置中，硝化纤维素膜滤器用作膜载体3。然而，任何类型的膜载体都可以在本文中使用，只要它能够层析法地显现测试样品中包含的分析物，并且使形成捕获区带4的抗体固定。因此，其他类型的纤维素膜、尼龙膜、玻璃纤维膜等也可以使用。在图1中的装置中，作为第一种抗体，优选使用与所有流感病毒A亚型的核蛋白反应的单克隆抗体。作为第二种抗体，优选使用与除强毒林外的所有流感病毒A亚型的核蛋白反应的单克隆抗体。在本发明中，第三种抗体是与第一种抗体与之反应的抗原反应的抗体，且优选是与所有流感病毒A亚型的核蛋白反应的抗体。在许多情况下，与第一种抗体相同的抗体可以用作第三种抗体。此外，第四种抗体是与第二种抗体与之反应的抗原反应的抗体。本文使用的第四种抗体的例子包括与所有流感病毒A亚型的核蛋白反应的单克隆抗体，和与除强毒抹外的所有流感病毒A亚型的核蛋白反应的单克隆抗体。换言之，第四种抗体是可以与第一种、第二种或第三种抗体相同的抗体。在图l的装置中，作为可以彼此相同或不同的第三种和第四种抗体，使用与所有流感病毒A亚型反应的抗体。在许多情况下，作为第三种和第四种抗体，可以使用与第一种抗体相同的单克隆抗体。第三种和第四种抗体可以与测试样品和显影溶剂混合，以在与免疫层析测试条IO分开的合适器皿中制备混合溶液。其后，混合溶液可以被注入该图中所示的免疫层析测试条10的样品接受部件6内，从而使得它在膜载体3中层析法地显现。然而，第三种和第四种抗体优选与免疫层析测试条10整合，从而使得当通过使测试样品与显影溶剂混合而制备的混合溶液被注入样品接受部件6内时，这些抗体可以与混合溶液相混合且在膜栽体3中层析法地显现。因此，在图1的装置中，第三种和第四种抗体先前已用合适的标记试剂进行标记，且随后注入部件2，所述部件2与膜载体3的上游侧的末端联系，由此这些抗体构成免疫层析测试条10的部分。应当指出以标记状态的第三种和/或第四种抗体在本发明中通常称为标记抗体。在如该图中所示的例子中，具有5mmx15mm的大小的条形玻璃纤维非纺织物用作灌注部件2。然而，灌注部件2不限于其，而包括例如纤维素织物(滤纸、硝化纤维素膜等)、多孔塑料织物例如聚乙烯和聚丙烯、及其他。作为标记第三种和第四种抗体的标记试剂，可以使用任何物质，只要它可在本文中使用。此类标记试剂的例子包括有色标记试剂、酶才示i己试剂和i丈射才示"i己试剂。在这些中，优选使用有色标记试剂，因为用肉眼观察捕获区带4中的颜色变化使得能够快速和简单的测定。此类有色标记试剂的例子包括金属胶体颗粒例如胶体金颗粒和铂胶体颗粒，合成乳胶颗粒例如用红或蓝色素染色的聚苯乙烯乳胶，和乳胶颗粒例如天然橡胶乳胶。在这些中，金属胶体颗粒例如胶体金颗粒是特别优选的。灌注部件2可以通过下述产生，将标记抗体的悬浮液吸收到部件例如上述玻璃纤维非纺织物内，并且随后使其干燥。如图1中所示，免疫层析测试条IO可以通过下述产生，使膜载体3与粘着层1的中部固定，将灌注部件2的下游侧末端放置在膜载体3的上游侧末端上，以便使其联系，和使灌注部件2的上游侧区带与粘着层1固定。此外，在图l的装置中，样品接受部件6的下游侧区带放置在灌注部件2的上部表面上，并且同时使样品接受部件6的上游侧区带与粘着层1固定。此外，吸收部件5的上游側区带放置在膜载体3的下游侧区带的上部表面上，并且同时使吸收部件5的下游侧区带与粘着层1固定。从而构建了免疫层析测试条10。作为样品接受部件6，可以使用例如多孔合成树脂的层或薄膜例如多孔聚乙烯和多孔聚丙烯，以及纤维素纸或机织物或非纺织物例如滤纸和棉织物。吸收部件5可以由任何材料制成，只要它能够快速吸收且保留液体。此类材料的例子包括棉织物、滤纸、和由聚乙烯、聚丙烯等制成的多孔塑料非纺织物。特别地，滤纸是最佳的。如图1中所示的免疫层析测试条10可以直接用作浸渍片测量装置。备选地，免疫层析测试条10可以作为浸渍片测量装置供应，所述浸渍片测量装置用一个或多个合适的塑料层作为背面或夹心。优选地，如图1中所示的免疫层析测试条IO作为测量装置提供，所述测量装置将测试条容纳在合适的塑料外壳中，所述塑料外壳具有分别在样品接受部件6和捕获区带4上方开放的测试样品注入区带和测定区带。如上所述，在本发明中，第三种和第四种抗体可以与测试样品和显影溶剂在与免疫层析测试条10分开的合适器皿中混合，以便产生混合溶液，并且随后可以将混合溶液注入免疫层析测试条10的样品接受区带6内，从而使得它可以在膜载体3中层析法地显现。因此，当免疫层析测试条10容纳在外壳中时，第三种和第四种抗体可以吸收到灌注部件2内，且因此可以贮藏在上述外壳内。以其他方式，第三种和第四种抗体可以包含在与上述外壳分开的合适器皿中，且因此它们可以贮藏在上述外壳外。因此，必要时，使由怀疑感染强毒抹的患者的生物样品等组成的测试样品与合适的显影溶剂混合，所述强毒林例如流感病毒A亚型H5N1,以便获得可以层析法地显现的混合溶液。其后，将混合溶液注入如图1中所示的免疫层析测试条10的样品接受区带6内，从而使得它经过样品接受部件6且与在灌注部件2处的标记抗体混合。在这种情况下，如果流感病毒A的强毒林存在于上述混合溶液中，那么由于抗原-抗体反应形成强毒病毒林的病毒抗原和标记抗体的复合物。这种复合物在膜载体3中层析法地显现，且随后到达捕获区带4。因此，由于抗原-抗体反应，复合物被固定在第一个捕获区带41a中的第一种抗体捕获，以产生阳性结果。然而，该复合物不被固定在第二个捕获区带41b中的第二种抗体捕获，以给出阴性结果。相比之下，如果除强毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么在第一个捕获区带41a和第二个捕获区带41b中都获得阳性结果。因此，通过将第一个和第二个捕获区带的结果拼凑，可以区别测定强毒抹感染和除强毒林外的流感病毒A感染。当有色标记试剂例如胶体金颗粒用作标记试剂时，基于由有色标记试剂在第一个和第二个捕获区带41a和41b处积聚，无论结果是阳性还是阴性的都可以立即确定。在图l的装置中，因为第二个捕获区带41b位于第一个捕获区带41a下游，所以第二个捕荻区带41b的检测敏感性趋向减少。因此，优选敏感性例如通过使用固定在第二个捕获区带41b中的抗体得到控制，其量大于固定在第一个捕获区带41a中的抗体的那种。测试样品包括，但不限于，例如泄殖腔拭子、气管拭子、粪便、鼻抽吸流体、鼻拭子、咽喉拭子、血液(这可以是全血、血清或血浆)、唾液、尿和器官乳状液。在测试样品注入膜载体内前，它可以用合适的稀释剂例如显影溶剂进行稀释。当全血用作测试样品时，如果有色标记试剂例如胶体金颗粒特别用作标记试剂用于标记抗体，那么优选将血细胞捕获膜部件排列在上述样品接受部件中。此类血细胞捕获膜部件优选在上述灌注部件和上述样品接受部件之间分层。这抑制膜载体中的红细胞显色，且因此促进膜载体的捕获区带中的有色标记试剂积聚的证实。作为此类血细胞捕获膜部件，使用羧甲基纤维素膜。特别地，可以使用可从AdvantecToyoK.K.获得的离子交换滤器CM(商标名)，和可从WhatmanJapanK.K.等获得的离子交换纤维素纸。(2)使用2种免疫层析测试条的实施方案图2的装置是包含2种免疫层析测试条10和20的免疫层析测定法装置。免疫层析测试条10和20各自具有与图1中所示的免疫层析测试条10的那种相同的结构，除了捕获区带4的结构和标记抗体。图2中所示的免疫层析测试条10与图l相同，其中第一种抗体固定在距离膜载体3的上游侧上的末端7.5mra位置上，从而使得形成第一个捕获区带41a以捕获第三种抗体和分析物的复合物。然而，图2中所示的免疫层析测试条10不同于图1，其中针对流感病毒B的抗体固定在距离膜载体3的上游侧上的末端10.5mm位置上，从而使得形成用于检测流感病毒B的捕获区带41b。此外，由标记的第三种抗体和标记的抗流感病毒B抗体组成的标记抗体吸附在免疫层析测试条10的灌注部件2内。此处，作为第三种抗体，在许多情况下可以使用与第一种抗体相同的抗体。作为抗流感病毒B抗体，可以使用已用于免疫层析测定法装置的已知抗体。图2中所示的免疫层析测试条20不同于图1中所示的免疫层析测试条10,其中第二种抗体固定在距离膜载体3的上游侧上的末端9.0mm位置上，从而使得形成第二个捕获区带41c以捕获第四种抗体和分析物的复合物。此外，由标记的第四种抗体组成的标记抗体吸附在免疫层析测试条20的灌注部件2内。此处，作为第四种抗体，使用与第二种抗体相同的抗体。然而，与第一种抗体相同的抗体也可以用作第四种抗体。因此，通过与上文参考图1所述相同的方法获得包含测试样品的混合溶液后，将混合溶液注入图2中所示的免疫层析测试条10和20各自的样品接受部件6内，从而使得它经过样品接受部件6，且与灌注部件2上的标记抗体混合。在这种情况下，如果流感病毒A的强毒林存在于上述混合溶液中，那么由于抗原-抗体反应，在免疫层析测试条10中形成强毒抹的病毒抗原和第三种抗体的复合物。这种复合物在膜栽体3中层析法地显现，且随后到达捕获区带4。因此，由于抗原-抗体反应，复合物被固定在第一个捕获区带41a中的第一种抗体捕获，以产生阳性结果。然而，该复合物不被固定在第二个捕获区带41b中的抗流感病毒B抗体捕获，以给出阴性结果。在免疫层析测试条20中，未形成强毒林的病毒抗原和第四种抗体的复合物，并且因此抗原和抗体各自在膜载体3中层析法地独立显现，且随后到达第二个捕获区带41c。然而，它们不被固定在其中的第二种抗体捕获，以给出阴性结果。相比之下，如果除强毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么由于抗原-抗体反应，在免疫层析测试条10中形成病毒抗原和第三种抗体的复合物。这种复合物在膜载体3中层析法地显现，且随后到达捕荻区带4。随后，由于抗原-抗体反应，复合物被固定在第一个捕获区带41a中的第一种抗体捕获，以产生阳性结果。然而，该复合物不被固定在第二个捕获区带41b中的抗流感病毒B抗体捕获，以给出阴性结果。在免疫层析测试条20中，形成强毒林的病毒抗原和第四种抗体的复合物。该复合物在膜载体3中层析法地显现，且到达第二个捕获区带41c。随后，由于抗原-抗体反应，复合物被固定在其中的第二种抗体捕获，以产生阳性结果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么由于抗原-抗体反应，在免疫层析测试条10中形成病毒抗原和抗流感病毒B抗体的复合物。这种复合物在膜载体3中层析法地显现，且到达捕获区带4。随后由于抗原-抗体反应，该复合物被固定在捕获区带41b中的抗流感病毒B抗体捕获，以产生阳性结果。然而，该复合物不被固定在第一个捕获区带41a中的第一种抗体捕获，以给出阴性结果。在免疫层析测试条20中，未形成病毒抗原和第四种抗体的复合物，并且因此抗原和抗体各自在膜栽体3中层析法地独立显现，且随后到达第二个捕获区带41c。然而，它们不被固定在其中的第二种抗体捕获，以给出阴性结果。因此，基于第一个捕获区带41a、笫二个捕获区带41c、和捕获区带41b中获得的结果，可以区别测定强毒林感染、除强毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。图2的装置仅必须包含至少2种免疫层析测试条10和20。2种测试条可以容纳在单个外壳中。以其他方式，数片分别的条可以包含在分别的单个外壳中，从而使得使用时一片测试条可以从分别的外壳中取出。在前面一种情况下，可以形成整合产物，其包含其中免疫层析测试条10和20以其膜栽体彼此平行，同时其灌注部件彼此以一定距离彼此隔开的方式排列的外壳。作为如图2中所示的免疫层析测试条10,可以使用用于区别测量流感A型和B型的商购可得的免疫层析测试条或试剂盒来进行，例如CAPILIA(注册商标)FluA+B(由TaunsLaboratories,Inc.制造)。因此，仅如图2中所示的免疫层析测试条20可以作为单项供应，从而使得本发明的检测方法或测定法可以使用与此类商购可得的测试条或试剂盒组合的测试条来进行。图3的装置具有与图2的装置的那种相同的结构，除了免疫层析测试条10和20共享单个灌注部件2和单个样品接受部件6。即，免疫层析测试条10和20的2个膜载体3彼此靠近且基本上平行排列。在上游侧上的末端上，单侧宽(宽度约12ram)灌注部件2在2个膜载体3上延伸且与之联系。在这个灌注部件2中，第三种和第四种抗体以及抗流感病毒B抗体这样排列，以便以与上文所述相同的方式层析法地显现。在这个实施方案中，与图1的装置相似，优选第三种和第四种抗体都是与所有流感病毒A亚型反应的抗体，并且第三种和第四种抗体都与第一种抗体相同是方便的。因此，通过与上文参考图2所述相同的方法获得包含测试样品的混合溶液后，将混合溶液注入图3中所示的由免疫层析测试条10和20共享的样品接受部件6内，从而使得它经过样品接受部件6，且与灌注部件2上的标记抗体混合。在这种情况下，如果流感病毒A的强毒林存在于上述混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条10给出在第一个捕获区带41a中的阳性结果和在捕获区带41b中的阴性结果。在免疫层析测试条20中，尽管形成强毒林的病毒抗原和标记抗体的复合物，但它不被固定在第二个捕获区带41c中的第二种抗体捕获，以给出阴性结果。如果除强毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条IO给出在第一个捕获区带41中的阳性结果和在捕获区带41b中的阴性结果。在免疫层析测试条20中，在膜载体3中形成病毒抗原和标记抗体的复合物且层析法地显现，并且到达第二个捕获区带41c。随后，该复合物被固定在其中的第二种抗体捕获，以给出阳性结果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条10给出在捕获区带41b中的阳性结果和在第一个捕获区带41a中的阴性结果。与图2类似地，免疫层析测试条20给出在第二个捕获区带41c中的阴性结果。因此，基于第一个捕获区带41a、第二个捕荻区带41c、和捕获区带"b中获得的结果，可以区别测定强毒抹感染、除强毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。图3的装置也可以容纳在合适的外壳中。图4的装置具有与图2的那种相同的结构，除了免疫层析测试条IO和20共享单个胶带1和单个样品接受部件6。即，免疫层析测试条IO和20的2个膜载体3以彼此相反的方向基本上线性排列。特别地，免疫层析测试条10和20以合适的距离彼此面对排列在2种测试条的灌注部件2的上游侧的末端，即2种条在直线上彼此相对地放置。单个样品接受部件6在2个灌注部件2上延伸且与之联系。备选地，2种免疫层析测试条10和20可以放射状排列，从而使得2种测试条的膜栽体彼此延伸成一个角度。因此，通过与上文参考图2所述相同的方法获得包含测试样品的混合溶液后，将混合溶液注入图4中所示的由免疫层析测试条10和20共享的样品接受部件6内，从而使得它经过样品接受部件6，且与免疫层析测试条10和20的灌注部件2上的标记抗体混合。随后，与图2类似地，基于第一个捕获区带41a、第二个捕获区带41c、和捕获区带41b中获得的结果，可以区别测定强毒林感染、除强毒抹外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。图4的装置也可以容纳在合适的外壳中。提及图4的装置的修改，不仅粘着层1和样品接受部件6而且单个灌注部件都可以由免疫层析测试条10和20共享。在这种情况下，第三种和笫四种抗体可以依照图3的实施方案进行构建以实践本发明。在图4的装置中，将包含测试样品的上述混合溶液均匀地浸入测试条10和20内。因此，与图l的装置不同，图4的装置是方便的，因为无需控制第一个和第二个捕获区带41a和41b的敏感性。(3)使用第二种抗体作为标记抗体的实施方案图2的装置可以修改为使用第二种抗体作为标记抗体用于执行本发明的实施方案的装置。此类装置可以通过下述产生，使第一种抗体而不是第二种抗体固定在图2的装置的免疫层析测试条20的第二个捕获区带41c中，且使用第二种抗体而不是第四种抗体作为标记抗体以吸收到上述条20的灌注部件2内。在这个装置中，免疫层析测试条10的结构与图2的那种完全相同。因此，通过与上文参考图2所述相同的方法获得包含测试样品的混合溶液后，将混合溶液注入图2的修改装置的免疫层析测试条10和20各自的样品接受部件6内，从而使得它经过样品接受部件6，且与灌注部件2上的标记抗体混合。在这种情况下，如果流感病毒A的强毒抹存在于上述混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条10给出在第一个捕获区带41a中的阳性结果和在捕获区带41b中的阴性结果。在免疫层析测试条20中，未形成强毒林的病毒抗原和标记抗体的复合物，并且因此抗原和抗体在膜载体3中层析法地独立显现，且到达第二个捕获区带41c。强毒林的病毒抗原通过固定在第二个捕获区带41c中的第一种抗体捕获。然而，因为标记抗体不与之结合，所以它给出阴性结果。如果除强毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条10给出在第一个捕获区带41中的阳性结果和在捕获区带41b中的阴性结果。在免疫层析测试条20中，形成病毒抗原和标记抗体的复合物，并且在膜载体3中层析法地显现，且到达第二个捕获区带41。随后，该复合物被固定在第二种捕获区带41c中的第一种抗体捕获，以给出阳性结果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么与图2类似地，免疫层析测试条10给出在捕获区带41b中的阳性结果和在第一个捕获区带41a中的阴性结果。免疫层析测试条20在第二个捕获区带41c中给出阴性结果。因此，基于第一个捕获区带41a、第二个捕获区带41c、和捕获区带41b中获得的结果，可以区别测定强毒林感染、除强毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。依照与上文所述相同的修改，图4的装置还可以修改为使用第二种抗体作为标记抗体用于执行本发明的实施方案的装置。即，此类修改可以通过下述对图4的装置来进行，使第一种抗体而不是第二种抗体固定在免疫层析测试条20的第二个捕获区带41c中，且使用第二种抗体而不是笫四种抗体作为标记抗体以吸收到上迷条20的灌注部件2内。同时，免疫层析测试条10的结构与图4的那种完全相同。因此，通过与上文参考图2所述相同的方法获得包含测试样品的混合溶液后，将混合溶液注入图4的修改装置的由免疫层析测试条10和20共享的样品接受部件6内，从而使得它经过样品接受部件6,且与测试条10和20的灌注部件2上的标记抗体混合。类似于图2的上述修改装置，基于第一个捕获区带41a、第二个捕获区带41c、和捕获区带41b中获得的结果，可以区别测定强毒抹感染、除强毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。实施例本发明将在下述实施例中更具体地进行描述。然而，这些实施例不意欲限制本发明的范围。实施例1(流感病毒A和B的重组核蛋白(NP)基因的克隆)将流感病毒A，A/PuertoRico/8/34(H1N1)和流感病毒B，B/Lee/40接种到含胚鸡蛋中，且随后进行培养。数天后，收集绒毛尿囊流体以获4寻病毒。将RNA提取试剂(TRIzolReagent,Invitrogen)加入此类病毒中，且提取每种病毒RNA。对提取的RNA进行逆转录反应，以便生产NP基因cDNA。Uni12Primer:5，—AGCAAAAGCAGG-3，(SEQIDNO:1)在逆转录反应中用作引物。对获得的A/PuertoRico/8/34和B/Lee/40的NP基因cDNAs实施聚合酶链式反应(PCR)法，以便扩增NP基因。在A/PuertoRico/8/34的情况下，使用下述引物有义引物5，-GGAATTCCATATGGCGTCCCAAGGCACC-3，(SEQIDNO:2);和反义引物5，-CCGCTCGAGTTAATTGTCGTACTCCTCTGC-3，(SEQIDNO:3)。在B/Lee/40的情况下，使用下述引物有义引物5，-CGGGATCCATATGTCCAACATGGATATTG-3，(SEQIDNO:4);和反义引物5，-CCGCTCGAGTTAATAATCGAGGTCATCATA-3'(SEQIDNO:5)。为了掺入载体pET15b内，向引物中加入NdeI和XhoI位点内分别作为上游引物和下游引物。对获得的PCR产物的部分实施DNA电泳以证实其扩增，并且每种扩增产物随后用限制酶NdeI和XbaI进行切割。随后将切割产物插入用相同限制酶切割的栽体pET15b内。实施例2(重组核蛋白(NP蛋白质)的表达及其纯化)大肠杆菌BL21CodonPlus用载体pET15b进行转化，所述pET15b载体在实施例1中已插入目的基因。它随后在氨节青霉素选择培养基上进行培养，以便获得集落。它在包含氨千青霉素(100ng/ml)和氯霉素(25ng/ml)的L-Broth中进行过夜培养，并且随后将培养物加入包含氨千青霉素(100ng/ml)的L-肉汤中。使混合物于37。C培养3小时，随后向其中加入lMIPTG至1mM的终浓度，以便诱导重组NP蛋白质的表达。蛋白质经由IPTG的表达通过SDS-PAGE加以证实。将通过离心回收的细胞群悬浮于增溶緩冲液中。对悬浮液进一步实施PMSF和溶菌酶处理，以便完全溶解细胞群。从获得溶液的离心上清液中获得重组NP蛋白质，并且使其经过包含Ni-NTA树脂的柱，以便使其纯化。纯化的蛋白质针对PBS进行透析，以便获得目的重组NP蛋白质。实施例3(单克隆抗体的生产)使用实施例2中获得的流感病毒A重組NP蛋白质(FluANP)和流感病毒B重组NP蛋白质(FluBNP)作为抗原，生产针对FluANP和FluBNP的单克隆抗体(抗FluANP抗体和抗FluBNP抗体)。此类单克隆抗体根据常规方法进行生产。使100jLlg每种重组NP蛋白质与相同量的弗氏完全佐剂混合(Difco)。其后，小鼠(BALB/c,5周大，JapanSLC，Inc.)用混合物免疫3次，并且其脾细胞随后在细胞融合中使用。对于此类细胞融合，使用其为小鼠骨髓瘤细胞的Sp2/0-Agl4细胞(Shulman等人，1978)。对于细胞的培养，使用这样的培养基，其为包含O.3mg/mlL-谷氨酰胺、100单位/mi青霉素G钾、100pg/ml硫酸链霉素和40pg/mlGentacin的Dulbecco'sModifiedEagleMedium(Gibco)(DMEM),向其中进一步加入胎牛血清(JRH)至10%的浓度。细胞融合通过下述来进行，使免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0-Agl4细胞混合，且随后向其中加入聚乙二醇溶液(Sigma)。融合的细月包在HAT-DMEM(包含0.1mM次黄嘌呤钠、0.4pM氨基蝶呤和0.016mM胸苷(Gibco)的添加血清的DMEM)中进行培养。抗FluANP抗体通行筛选，使用在其上已固定灭活的流感病毒，A型(H1N1)的平板。此外，抗FluBNP抗体通过依照相同方法证实抗体在培养上清液中生产进行筛选，使用在其上已固定灭活的流感病毒B的平板。显示抗体生产阳性的细胞在HT-DMEM(包含0.1mM次黄嘌呤钠和0.016mM胸苷(Gibco)的添加血清的DMEM)中进行培养，并且在添加血清的DMEM中进一步连续培养。具有生产抗体的高能力的细胞通过ELISA法进行选择，且随后进行克隆。将克隆细胞接种到小鼠(BALB/c,Retire,JapanSLC，Inc.)的腹腔内，在所述小鼠中已接种2，6，10，14-四甲基十五烷(Sigma),且随后收集其腹水。其后，IgG纯化通过常规方法使用蛋白G吸附剂来进行，以便获得单克隆抗体。生产的单克隆抗体的同种型通过ELISA使用MouseMonoclonalAntibodyIsotypingReagents(Sigma)进行鉴定。最后，获得针对FluANP的单克隆抗体产生细胞的3个克隆，即F/169、B/347和F/211。在它们中，最终发现抗体产生细胞F/211是生产这样的抗体的克隆，所述抗体不与流感病毒A亚型H5N1反应但与除亚型H5N1外的所有流感病毒A亚型反应(本发明的第二种抗体)，如在下述实施例中证明的。获得针对FluBNP的生产单克隆抗体的细胞的4个克隆。在这些中，只有F/171在下述实施例中使用。实施例4(免疫层析测定法装置的生产)(1)抗FluANP抗体、抗FluBNP抗体、和不与亚型H5N1反应的抗FluANP抗体的制备将实施例1中获得的抗FluANP抗体产生细胞F/169和B/347各自接种到小鼠的腹腔内，以便获得包含抗FluANP抗体的腹水。此外，将抗FluBNP抗体产生细胞F/171接种到小鼠的腹腔内，以便获得包含抗FluBNP抗体的腹水。此外，将FluANP抗体产生细胞F/211接种到小鼠的腹腔内，以便获得包含抗FluANP抗体的腹水。此外，IgG纯化根据常规方法使用蛋白G吸附剂来进行，以便获得每种抗体。(2)胶体金颗粒溶液的制备将1ml1%(v/w)氯金酸(原文为chloroauricacid,疑为chlorauricacid)水溶液加入通过加热煮沸的99ml特纯水中。1分钟后，向其中进一步加入1.5ml1%(v/w)柠檬酸钠水溶液，并且随后使混合物加热且煮沸5分钟。其后，使溶液放置于室温，从而使得其冷却。随后，向溶液中加入200mM碳酸钾水溶液，从而使得溶液调整至pH9.0。其后，向其中加入特纯水至100ml的总量，从而获得胶体金颗粒溶液。(3)胶体金颗粒标记的抗体溶液的制备通过下述操作用胶体金颗粒标记抗体产生细胞B/347衍生的抗FluANP抗体(在下文中称为抗FluANP抗体B/347)、抗体产生细胞F/171衍生的抗FluBNP抗体(在下文中称为抗FluBNP抗体F/171)、和抗体产生细胞F/211衍生的抗FluANP抗体(在下文中称为抗FluANP抗体F/211)，所述抗体在上文(1)中获得。使3jug(与蛋白质的重量相等)抗FluANP抗体B/347与上文(2)中描述的1ml胶体金颗粒溶液混合，并且随后使混合物静置于室温2分钟，从而使得允许所有抗体与胶体金颗粒的表面结合。其后，将10%BSA水溶液加入胶体金溶液中至1%的终浓度，并且胶体金颗粒的其余表面全部用BSA进行封闭，以便制备胶体金颗粒标记的抗FluANP抗体B/347溶液。这种溶液(5600xG，30分钟)进行离心，以使胶体金颗粒标记的抗体沉淀。去除上清液，以便获得胶体金颗粒标记的抗体。使这种胶体金颗粒标记的抗体悬浮于包含10%蔗糖、1%BSA和0.5%Triton—X100的50mMTris-HCl緩沖液(pH7.4)中，以便制备胶体金标记的抗FluANP抗体B/347溶液。此外，通过上述方法允许lMg(与蛋白质的重量相等)抗FluBNP抗体F/171与胶体金颗粒的表面结合，以便制备胶体金颗粒标记的抗FluBNP抗体F/171溶液。此外，允许1Mg(与蛋白质的重量相等)抗FluANP抗体F/211与胶体金颗粒的表面结合，以便制备胶体金颗粒标记的抗FluANP抗体F/211溶液。(4)免疫层析测定法装置的产生如图4中所示的免疫层析测定法装置通过下述操作进行生产。(4-1)膜载体的第一个捕获区带的形成具有5醒宽度和36mm长度的大小的延伸的条形硝化纤维素膜制备为膜栽体3。将包含1.0mg/ml抗FluANP抗体F/169的0.5m1溶液以线性形式应用于距离膜载体3的上游侧上的末端5.0腿位置。随后使其在室温下干燥，以便形成捕荻区带41a(第一个捕获区带)用于捕获流感病毒A的病毒抗原和标记抗体的复合物。此外，将包含1.0mg/ml抗FluBNP抗体F/171的0.5|a1溶液以线性形式应用于距离膜载体3的上游侧上的末端8.Omm位置。随后使其在室温下干燥，以便形成捕获区带41b用于捕获流感病毒B的病毒抗原和标记抗体的复合物。(4-2)膜载体的第二个捕获区带的形成制备与上文(4-1)中使用的膜栽体相同的另一个膜载体3。将包含1.0mg/ml抗FluANP抗体F/169的0.5pi溶液以线性形式应用于距离膜载体3的上游侧上的末端5.Omm位置。随后使其在室温下干燥，以便形成捕荻区带41c(第二个捕获区带)用于捕荻流感病毒抗原和标记抗体的复合物。(4-3)灌注有胶体金颗粒标记的抗体的灌注部件的产生具有5mmx15mm的大小的条形玻璃纤维非纺织物注入37.5ja1混合溶液，所述混合溶液具有上文(3)中获得的胶体金颗粒标记的抗FluANP抗体B/347溶液和胶体金颗粒标记的抗FluBNP抗体F/171溶液，且随后在室温下进行干燥，以便制备标记抗体灌注的部件。此外，具有5mmx15mm的大小的另一个条形玻璃纤维非纺织物注入37.5ju1胶体金颗粒标记的抗FluANP抗体F/211溶液，且随后在室温下进行干燥，以便制备标记抗体灌注的部件。前面一种标记抗体灌注的部件用作测试条10的灌注部件3,和后面一种标记抗体灌注的部件用作测试条20的灌注部件3。在上文(4-1)中获得的膜载体用作测试条10的膜栽体3,和在上文(4-2)中获得的膜栽体用作测试条20的膜栽体3。此外，对于每种测试条棉织物用作样品接受部件6，和滤纸用作吸收部件5，从而产生具有与图4中相同的构造的免疫层析测定法装置。实施例5(关于与流感病毒H5N1毒林(Yamaguchi毒林)的反应性的测试)实施例4中产生的免疫层析测定法装置用于执行关于与流感病毒H5N1毒才朱(A/chichen/Yamaguchi/7/04，Yamaguchi毒株)的反应性的测试。流感病毒H3N2(A/Aichi/2/68，Aichi毒林)用作对照。使用已通过下述制备的测试样品，允许上述流感病毒毒林各自在含胚鸡蛋中生长以获得绒毛尿嚢流体，且随后用分析物稀释液来稀释绒毛尿嚢流体。使用微量吸管，将150|il测试样品逐滴加入实施例4中获得的测试条的样品接受部件6中，从而使得它在其中层析法地显现。使其在室温下放置15分钟。其后，通过肉眼观察由第一个捕获区带41a和第二个捕获区带41c各自捕获的病毒抗原和胶体金颗粒标记的抗体的复合物量。通过用肉眼将红-紫色水平分成下述5个阶段来测定捕获的复合物量，所述红-紫色水平取决于捕获的量而增加或减少-(无着色)；±(轻微着色)；+(清楚着色)；++(更清楚的着色)；和+++(显著着色)。应当指出上述Yamaguchi毒^^的绒毛尿嚢流体的HA值为1024,和Aichi毒林的绒毛尿嚢流体的HA值为2048。结果显示于表1中。表l:就与流感病毒A亚型H5N1的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>根据表1中所示的结果，当与用作阳性对照的Aichi毒林(H3N2)的反应性比较时，发现在第二个捕获区带41c中几乎没有证实与Yamaguchi毒一朱(H5N1)的反应性。这些结果暗示用作关于测试条20的标记抗体的抗FluANP抗体F/211不与Yamaguchi毒林(H5N1)反应，并且因此它不与流感病毒A亚型H5N1特异性反应。相比之下，在第一个捕获区带41a中，抗FluANP抗体F/211具有相同水平的与Aichi毒抹(H3N2)和Yamaguchi毒林(H5N1)的反应性。实施例6(关于与流感病毒A的各种亚型的反应性的测试)实施例4中产生的免疫层析测定法装置用于执行关于与流感病毒A的15种亚型的反应性的测试。使用已通过下述制备的测试样品，允许流感病毒A的每种亚型在含胚鸡蛋中生长以获得绒毛尿嚢流体，且随后用分析物稀释液来稀释绒毛尿嚢流体。使用微量吸管，将150jal测试样品逐滴加入实施例4中获得的测试条的样品接受部件6中，从而使得它在其中层析法地显现。使其在室温下放置15分钟。其后，通过肉眼观察由笫一个捕获区带41a和第二个捕获区带41c各自捕获的病毒抗原和胶体金颗粒标记的抗体的复合物量。通过用肉眼将红-紫色水平分成下述5个阶段来测定捕获的复合物量，所述红-紫色水平取决于捕获的量而增加或减少-(无着色)；±(轻微着色)；+(清楚着色)；++(更清楚的着色)；和+++(显著着色)。对下述流感病毒A亚型实施测试A/PuertoRico/8/34(H1N1)、A/Hokkaido/ll/02(H1N1)、A/Singapore/l/57(H2N2)、A/Aichi/2/68(謂2)、A/Hokkaido/1/03(謂2)、A/duck/Czech/56(H4N6)、A/duck/Pennsylvania/1028/83(H5N2)、A/HongKong/156/97(H5N1)、A/HongKong/483/97(H5N1)、A/turkey/Massachusetts/3740/65(細2)、A/seal/Massachusetts/1/80(H7N7)、A/turkey/Ontario/67(訓4)、A/turkey/Wisconsin/66(H9N2)、A/chicken/Ge纖ny/N/49(H10N7)、A/duck/England/56(H11N6)、A/duck/Alberta/60/76(H12N5)、A/gull/Maryland/704/77(H13N6)、A/mallard/Astrakhan/263/82(H14N5)、A/duck/Australia/341/83(H15N8)。结果显示于表2中。如由表2显而易见的，关于实施测试的所有病毒毒抹，在测试条10的第一个捕获区带41a上观察到显著着色，但关于所有病毒毒林，在其捕获区带41b上未观察到着色。另一方面，在测试条20的第二个捕获区带41c中，在实施测试的所有流感病毒A中，关于仅有的H5N1菌才木即A/Hongkong/156/97(H5N1)和A/HongKong/483/97(H5N1)未观察到着色，但关于实施测试的其他病毒毒林包括亚型H纟N2，A/duck/Pennsylvania/1028/83(H5N2)观察到显著着色。因此，发现实施例4中描述的免疫层析测定法装置在第一个捕获区带41a上显示与所有流感病毒A的反应性，但在第二个捕获区带41c上未能显示与仅有的流感病毒亚型H5N1的反应性。这些结果证实用作测试条20的标记抗体的抗FluANP抗体F/211不与流感病毒A亚型H5N1反应，但与除亚型H5N1外的所有流感病毒A亚型反应。因此，当对从怀疑流感感染的患者收集的样品实施实施例4中描述的免疫层析测定法装置时，如果在第一个捕获区带41a和第二个捕获区带41c上观察到着色，那么将证实患者感染流感病毒H1N1或H3N2,且因此将怀疑患者感染通常的流感病毒。此外，如果在笫一个捕获区带41a上观察到着色，但在第二个捕获区带41c上未观察到，那么将怀疑患者感染流感病毒H5N1。因此，使用这种装置，取决于感染病毒的类型和预防感染扩大的努力，可以给出关于患者的合适治疗。如果在捕获区带41b的B型测定区带上观察到着色，那么将确定患者怀疑感染流感病毒B。如果在所有测定区带中未观察到着色，那么将确定患者就流感感染而言是阴性的。因此，根据本发明，流感病毒H5N1感染可以通过第一种抗体和第二种抗体的组合使用进行检测，所述第一种抗体与所有流感病毒A亚型反应，所述第二种抗体不与流感病毒A亚型H5N1反应但与除亚型H5N1外的所有流感病毒A亚型反应。表2:就与流感病毒A的各种亚型的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>实施例7(在各种稀释倍数中就与流感病毒A的各种类型的反应性的测试)实施例4中产生的免疫层析测定法装置用于执行关于与8种流感病毒A的反应性的测试。使用已通过下述制备的测试样品，允许每种流感病毒A在含胚鸡蛋中生长以荻得绒毛尿嚢流体，且随后用分析物稀释液使绒毛尿嚢流体稀释10、100、1000和10000倍。使用微量吸管，将150pi测试样品逐滴加入实施例4中获得的测试条的样品接受部件6中，从而使得它在其中层析法地显现。使其在室温下放置15分钟。其后，通过肉眼观察由第一个捕获区带41a和第二个捕获区带41c各自捕获的病毒抗原和胶体金颗粒标记的抗体的复合物量。通过用肉眼将红-紫色水平分成下述6个阶段来测定捕获的复合物量，所述红-紫色水平取决于捕获的量而增加或减少-(无着色)；±(轻微着色)；+(清楚着色)；++(更清楚的着色)；+++(显著着色)；和++++(更显著的着色)。对下述流感病毒A实施测试A/Vietnam/1194/04(H5N1)、A/HongKong/483/97(謂l)、A/Chicken/Suphanburi/1/04(H5N1)、A/Whooperswan/Mongolia/3/05(固l)、A/Chicken/Ibaraki/1/05(H5N2)、A/Swan/Hokkaido/51/96(H5N3)、A/Chicken/Italy/99(H7N1)和A/Chicken/Netherlands/03(H7N7)。这些流感病毒A除了A/Swan/Hokkaido/51/96(H5N3)和A/Chicken/Netherlands/03(H7N7)已知为强毒林。结果连同每种亚型的绒毛尿嚢流体的HA值一起显示于表3-1至3-4中。表3-l:就与流感病毒A的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表3-2:就与流感病毒A的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表3-3:就与流感病毒A的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表3-4:就与流感病毒A的反应性的测试<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>如由表3-1至3-4显而易见的，在IOOO倍或更小的稀释倍数时关于实施测试的所有病毒毒抹，在测试条10的第一个捕获区带41a上观察到着色。另一方面，在测试条20的第二个捕获区带41c中，在超过1000倍的稀释倍数时，关于所有H5N1亚型和其为亚型H5N2的强毒林的A/Chicken/Ibaraki/1/05(H5N2)未观察到着色，同时在1000倍或更小的稀释倍数时关于实施测试的所有其他流感病毒A毒林观察到显著着色。因此，这些结果证实在实施例4中描述的免疫层析测定法装置对于流感病毒A的强毒林的检测是有效的，优选用于亚型H5N1和亚型H5N2的强毒林的检测，和特别优选用于亚型H5N1的检测。工业适用性本发明提供了用于检测流感病毒A的强毒林的方法，其使用与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、和不与流感病毒A的强毒株反应但与除强毒抹外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体，以便根据免疫测定法检测在与第一种抗体的反应中显示阳性应答、和在与第二种抗体的反应中显示阴性应答的抗原。特别地，本发明提供了夹心免疫测定法、以及免疫层析测定法和免疫层析测定法装置。根据本发明，属于流感病毒的强毒抹的病毒可以通过简单方法特异性检测。因此，本发明对于快速和筒单诊断由此类病毒引起的人类、鸟类等的疾病是有用的。附图简述图la是显示具有单个免疫层析测试条的本发明免疫层析测定法装置的具体例子的平面图，和图lb是图la中所示装置的横断面的纵向图；图2是显示具有2个免疫层析测试条的本发明免疫层析测定法装置的具体例子的平面图；图3是显示具有2个免疫层析测试条的本发明免疫层析测定法装置的另一个具体例子的平面图；和图4a是显示具有2个免疫层析测试条的本发明免疫层析测定法装置的进一步具体例子的平面图，和图4b是图4a中所示装置的橫断面的纵向图。符号描述1粘着层2灌注部件3膜栽体4捕获区带5吸收部件6样品接受部件10免疫层析测试条20免疫层析测试条权利要求1.用于检测流感病毒A的强毒株的方法，其包括提供与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、和不与流感病毒A的强毒株反应但与除所述强毒株外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体，且进行免疫测定法以检测在与所述第一种抗体的反应中显示阳性应答、和在与所述第二种抗体的反应中显示阴性应答的抗原。2.根据权利要求1的检测方法，其中所述免疫测定法包括使用所述第一种抗体和与第三种抗体的夹心免疫测定法，所述第三种抗体与所述第一种抗体与之反应的抗原反应，和/或使用所迷第二种抗体和第四种抗体的夹心免疫测定法，所述第四种抗体与所述笫二种抗体与之反应的抗原反应。3.根据权利要求2的检测方法，其中所述第一种抗体和所述第二种或第四种抗体固定在载体中。4.根据权利要求3的检测方法，其中所述第三种抗体与所有流感病毒A亚型反应，和所述第四种抗体不与流感病毒A的强毒4朱反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应。5.根据权利要求3的检测方法，其中可以彼此相同或不同的所述第三种和第四种抗体与所有流感病毒A亚型反应。6.根据权利要求1-5中任一项的检测方法，其中所述第一种、第二种、第三种和第四种抗体是针对流感病毒的核蛋白的单克隆抗体。7.根据权利要求6的检测方法，其中所述流感病毒A的强毒抹是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒林中的至少一种。8.根据权利要求7的检测方法，其中所述流感病毒A的强毒林是亚型H5N1。9.一种免疫层析测定法，其包括提供具有第一个捕获区带和第二个捕获区带的膜载体，所述捕获区带通过分别使第一种抗体和第二种抗体固定在其预定位置中形成，所述第一种抗体与所有流感病毒A亚型反应，和所述笫二种抗体不与流感病毒A的强毒林反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应；和在所述膜栽体中分别针对所述第一个捕获区带和所述第二个捕获区带层析法地显现第一种混合溶液和第二种混合溶液，所述第一种混合溶液包含测试样品和第三种抗体，所述第三种抗体与所述第一种抗体与之反应的抗原反应，和所述第二种混合溶液包含所述测试样品和第四种抗体，所述第四种抗体与所述第二种抗体与之反应的抗原反应，或在所述膜载体中针对2个所述捕获区带层析法地显现所述第一种混合溶液，由此流感病毒A的强毒林可以基于下述结果进行检测在与所述第一种抗体的反应中的阳性应答显示于所述第一个捕获区带中，同时在与所述第二种抗体的反应中的阴性应答显示于所述第二个捕获区带中。10.根据权利要求9的测定法，其中所述第三种抗体与所有流感病毒A亚型反应，和所述第四种抗体不与流感病毒A的强毒抹反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应。11.根据权利要求9的测定法，其中可以彼此相同或不同的所述第三种和第四种抗体与所有流感病毒A亚型反应。12.根据权利要求9-11中任一项的测定法，其中所述第一种、第二种、第三种和第四种抗体是针对流感病毒的核蛋白的单克隆抗体。13.根据权利要求12的测定法，其中所述流感病毒A的强毒林是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒株中的至少一种。14.根据权利要求13的测定法，其中所述流感病毒A的强毒林是亚型H5N1。15.根据权利要求9的测定法，其中所述第三种和笫四种抗体用金属胶体颗粒或乳胶颗粒进行标记。16.根据权利要求15的测定法，其中所述膜栽体是硝化纤维素。17.用于检测流感病毒A的强毒株的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒抹反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、与所述第一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体、与所述第二种抗体与之反应的抗原反应的第四种抗体、和膜栽体，其中所述第一种和第二种抗体先前固定在所述膜载体的预定位置中，以便分别形成第一个捕获区带和第二个捕获区带，以及所述第三种和第四种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中所述第三种和第四种抗体在远离所述捕获区带的位置上进行制备，用于在所述膜载体中分别针对所述第一个和第二个捕获区带层析法地显现。18.根据权利要求17的测定法装置，其中所述第三种抗体与所有流感病毒A亚型反应，和所述第四种抗体不与流感病毒A的强毒抹反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应。19.根据权利要求17的测定法装置，其中可以彼此相同或不同的所述第三种和第四种抗体与所有流感病毒A亚型反应。20.根据权利要求17-19中任一项的测定法装置，其中所述第一种、第二种、第三种和第四种抗体是针对流感病毒的核蛋白的单克隆抗体。21.根据权利要求20的测定法装置，其中所述流感病毒A的强毒才朱是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒^^中的至少一种。22.根据权利要求21的测定法装置，其中所述流感病毒A的强毒才朱是亚型H5N1。23.根据权利要求17的测定法装置，其中所述膜栽体是具有彼此远离的所述第一个捕获区带和所述第二个捕获区带的单个膜栽体。24.根据权利要求17的测定法装置，其中所述膜载体包含在其中固定所述第一种抗体的第一个膜载体，和在其中固定所述第二种抗体的第二个膜载体。25.根据权利要求24的测定法装置，其中所述第三种抗体在所述第一个膜载体上进行制备，和所述第四种抗体在所述第二个膜载体上进行制备。26.根据权利要求25的测定法装置，其中所述第三种和笫四种抗体进行制备同时灌注到部件内，所述部件分别排列在所述第一个和第二个膜栽体上。27.根据权利要求26的测定法装置，其中所述第一个膜载体和所述第二个膜载体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜栽体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜载体彼此平行放置。28.根据权利要求26的测定法装置，其中所述第一个膜栽体和所述第二个膜载体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜栽体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜载体放射状或相对地放置。29.根据权利要求24的测定法装置，其中可以彼此相同或不同的所述第三种和第四种抗体与所有流感病毒A亚型反应，且制备用于在所述膜载体中针对所述第一个和第二个捕获区带层析法地显现。30.根据权利要求29的测定法装置，其中所述第三种和第四种抗体在所述膜载体上进行制备。31.根据权利要求30的测定法装置，其中所述第三种和第四种抗体进行制备同时灌注到排列在所述膜栽体上的部件内。32.根据权利要求31的测定法装置，其中所述第三种和第四种抗体是相同的，和所述灌注部件与所述第一个和第二个膜载体联系。33.根据权利要求32的测定法装置，其中所述第一个膜栽体和所述第二个膜载体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜栽体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜载体彼此平行放置。34.根据权利要求32的测定法装置，其中所述第一个膜载体和所述第二个膜载体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜栽体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜载体放射状或相对地放置。35.根据权利要求17的测定法装置，其中所述第三种和第四种抗体用金属胶体颗粒或乳胶颗粒进行标记。36.根据权利要求35的测定法，其中所述膜栽体是硝化纤维素。37.根据权利要求17的测定法装置，其中所述膜载体容纳在外壳中。38.根据权利要求37的测定法装置，其中所述第三种抗体和/或所述第四种抗体贮藏在所述外壳内或外。39.免疫层析测定法，其包括提供与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒株反应但与除所述强毒抹外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和与所述第一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体；制备各自具有通过使所述第一种抗体固定在其预定位置中形成的第一个捕获区带的膜载体；和在所述分别的膜载体中针对所述第一个捕获区带层析法地显现第一种混合溶液和第二种混合溶液，所述第一种混合溶液包含测试样品和所述第二种抗体，和所述第二种混合溶液包含所述测试样品和所述第三种抗体；由此流感病毒A的强毒抹可以基于下述结果进行检测在与所述第三种抗体的反应中的阳性应答显示于所述第一个捕获区带中，同时在与所述笫二种抗体的反应中的阴性应答显示于所述第一个捕获区带中。40.根据权利要求39的测定法，其中所述第三种抗体与所有流感病毒A亚型反应。41.根据权利要求39或40的测定法，其中所述第一种、第二种和第三种抗体是针对流感病毒的核蛋白的单克隆抗体。42.根据权利要求41的测定法，其中所述流感病毒A的强毒抹是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒林中的至少一种。43.根椐权利要求42的测定法，其中所述流感病毒A的强毒林是亚型H5N1。44.根据权利要求39的测定法，其中所述第二种和第三种抗体用金属胶体颗粒或乳胶颗粒进行标记。45.根据权利要求44的测定法，其中所述膜栽体是硝化纤维素。46.用于检测流感病毒A的强毒株的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒抹反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、与所述笫一种抗体与之反应的抗原反应的第三种抗体、和膜栽体，其中所述第一种抗体先前固定在所述膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，以及所述第二种和第三种抗体用合适的标记试剂进4亍标记，并且其中所述第二种和第三种抗体各自在远离所述第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在所述膜栽体中针对所述第一个捕获区带层析法地显现。47.根据权利要求46的测定法装置，其中所述第三种抗体与所有流感病毒A亚型反应。48.根据权利要求46或47的测定法装置，其中所述第一种、第二种和第三种抗体是针对流感病毒的核蛋白的单克隆抗体。49.根据权利要求48的测定法装置，其中所述流感病毒A的强毒林是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒林中的至少一种。50.根据权利要求49的测定法装置，其中所述流感病毒A的强毒抹是亚型H5N1。51.根据权利要求46的测定法装置，其中所述膜载体包含在其中固定所述第一种抗体的笫一个膜栽体，和在其中固定所述第一种抗体的第二个膜栽体。52.根据权利要求51的测定法装置，其中所述第二种抗体在所述第一个膜载体上进行制备，和所述第三种抗体在所述第二个膜栽体上进行制备。53.根据权利要求52的测定法装置，其中所述第二种和第三种抗体进行制备同时灌注到部件内，所述部件分别排列在所述第一个和第二个膜载体上。54.根据权利要求53的测定法装置，其中所述第一个膜载体和所述笫二个膜栽体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜载体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜栽体彼此平行放置。55.根据权利要求53的测定法装置，其中所述第一个膜载体和所述笫二个膜载体都具有延伸形式，和排列在所述分别的膜栽体上的所述灌注部件彼此相隔一定距离放置，同时所述2个膜载体放射状或相对地放置。56.根据权利要求46的测定法装置，其中所述笫二种和第三种抗体用金属胶体颗粒或乳胶颗粒进行标记。57.根据权利要求56的测定法，其中所述膜栽体是硝化纤维素。58.根据权利要求46的测定法装置，其中所述膜载体容納在外壳中。59.根据权利要求58的测定法装置，其中所述第二种抗体和/或所述第三种抗体贮藏在所述外壳内或外。60.用于检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和膜载体，其中所述第二种抗体先前固定在所述膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，和所述第一种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中所述第一种抗体在远离所述第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在所述膜载体中针对所述第一个捕获区带层析法地显现。61.用于检测流感病毒A的强毒林的免疫层析测定法装置，其至少包含与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、不与流感病毒A的强毒林反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体、和膜载体，其中所述第一种抗体先前固定在所述膜载体的预定位置中，以便形成第一个捕获区带，和所述第二种抗体用合适的标记试剂进行标记，并且其中所述第二种抗体在远离所迷第一个捕获区带的位置上进行制备，用于在所述膜载体中针对所述第一个捕荻区带层析法地显现。62.单克隆抗体，其不与流感病毒A的强毒林反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型反应。63.根据权利要求62的单克隆抗体，其不与流感病毒A的强毒林的核蛋白反应但与除所述强毒林外的所有流感病毒A亚型的核蛋白反应。64.根据权利要求63的单克隆抗体，其中所述流感病毒A的强毒林是选自亚型H5N1以及亚型H5N2和H7N1的强毒林中的至少一种。65.根据权利要求64的单克隆抗体，其中所述流感病毒A的强毒株是亚型H5N1。全文摘要本发明提供了用于以特异性、快速和简单的方式检测流感病毒的强毒株的方法，和为此的测定法装置。提供了用于检测流感病毒A的强毒株的方法，其包括提供与所有流感病毒A亚型反应的第一种抗体、和不与流感病毒A的强毒株反应但与除所述强毒株外的所有流感病毒A亚型反应的第二种抗体，且进行免疫测定法以检测在与所述第一种抗体的反应中显示阳性应答、和在与所述第二种抗体的反应中显示阴性应答的抗原。文档编号C12P21/08GK101336375SQ20068005239公开日2008年12月31日申请日期2006年12月26日优先权日2005年12月26日发明者难波靖治申请人:株式会社比尔生命