专利名称：：一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种疾病易感基因检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童自闭症易感基因检测试剂盒。
背景技术：
：儿童自闭症，又称儿童孤独症，是一类以严重孤独、缺乏情感反应、语言'发育障碍、刻板重复动作和对环境奇特的反应为特征的精神疾病。现今又统称孤独性障碍。它属于普遍性发育障碍。无论在成因、发展方式和治疗手段和成年人的孤独症都有很大区别，它是一种严重的婴幼儿发育障碍。以社会相互作用、语言动作和行为交往三方面的异常，及以三岁前起病为特征。通常发生于3岁之前，多见于男孩。一般在3岁以前就会表现出来，从婴儿期开始出现，一直延续到终身，是一种严重情绪错乱的疾病。孤独症无种族、社会、宗教之分，与家庭收入、生活方式、教育程度无关。据欧美各国统计，约每]万名儿童中有2-13例。目前，估计在我国约有50万左右孤独症患儿。本症多见于男孩，男女比例为2.6-5.7:1。北医大精神卫生研究所1989-1992年统计60例中，男女为7.5:1，1995年-1997年儿童心理门诊统计19例中，男女为6.3:1。1984年6月至1986年5月南京儿童心理卫生研究中心收住来自全国很多地区的精神病患儿170名，其中诊断孤独症15例，占8.82%，这数字只代表已患精神障碍的儿童中检出率。儿童孤独症的表现(症状)如下主要症状就是不与别人交往和建立正常的社会关系。患儿沉静在自己的世界里，无法用语言、表情、动作跟别人甚至自己的父母进行沟通、交流。有的孩子在开始时会被误认为是弱智或性格内向，还有的孩子在一两岁时看起来很正常，到3岁左右才发现有异类表现。孤独症患者学习正常人的语言会很困难，与人交流及与外界沟通也很困难，他们可能会重复几种动作(拍手、摇摆)。当闩常生活中出现变化，他们会强烈抵制。孤独症对行为的影响，除了语言和社交困难外，还会有父母、家人面前表现得极为亢奋或沮丧。具体1.早期表现，极度孤独，不会对亲人微笑。喂奶时，患儿不将身子紧贴大人。伸手去抱时，患儿无迎接姿势，不会伸手做被抱的准备，不会将身子贴近母亲，眼睛也不看抱他的人。2.社交困难，特别孤独，与人缺乏交往，缺乏感情联系，即使对父母也毫不依恋，如同陌生人。但与陌生人相处，又不感到畏縮。正常儿童常以凝视对方表达自己的感情与要求，而患儿缺乏与人眼对眼的凝视，不会以这种方式表达感情与要求。不爱玩，不爱做游戏。患儿到5岁左右，常还无朋友，很少与小朋友一起玩耍，缺乏情感反应，常常说出或做出一些不合社交的事情来。3.语言发育迟缓或障碍。患儿通常缄默，或说话呈模仿语言，象鹦鹉学舌似地模仿别人的语言。对语言的理解表达能力低下，无法理解稍微复杂一点的句子，不会用手势表示"再见"。不会理解和运用面部表情、动作、姿态及音调等与人交往。缺乏想象力和社会性模拟，不能像正常儿童一样去用玩具"做饭"、"开火车"、"造房子"。有的患儿语言刻板，代词错用，如"我要"说成"你要"，或将自己称为他。与外界交流困难，不能将生词与其含义相联，用手势而不是语言与人交流。4、仪式性和强迫性行为。由于缺乏变化与想象力，患儿常常坚持重复刻板的游戏模式，重复一些身体工作，重复相同的生活，如反复给玩具排队，总要玩弄自己的脚趾，穿衣顺序相同，坚持某些物件的摆置形式，不能变动。一旦有所变化，他们会极为沮丧，别人变动，患儿便大吵大闹。对自己房间的任何变化也都会表示反对和不安，加家具的移位、装饰品的变化等。5、脑部智力大多低于正常人，只有20%的人智商高于正常人或与正常人相当。6、对某些物件，如一只杯子、一块砖，表示出特殊兴趣，甚至产生依恋，而对亲人却不产生依恋。此外，有的患儿还可能有感知障碍，对视、听、触等多种感觉迟钝或过敏。有的存在认知障碍，智力低下，抽象思维能力很差，少数患儿可能伴有癫痫发作。患孤独症的孩子有时会聋，对声音没反应。正常孩子会被声音例如狗叫惊吓，而孤独症小孩会无动于衷。他们对疼痛、冷热也不太敏感，不爱交朋友，宁肯独自一人，很少会接触别人的眼睛或笑。治疗上最重要的是教育和行为治疗，目的是促进对患儿正常行为的教育，特别是社会性行为的矫正，纠IH异常行为，如刻板支作等，消除睡眠障碍、发脾气、多动等继发性症状等。患儿的家庭成员也要注意克服焦虑、自责、急躁情绪，方能对患儿的治疗产生良好的效果。对于孤独症患儿来讲，只有早发现、早干预、进行行为矫治，才能帮他们縮短与正常社会的差距，让他们早日融入社会。一旦错过最佳治疗期，对家庭而言无异于一场深重持久的灾难，因为要让深度自闭症儿童从"天堂"回到"人间"，或许是漫长的、永无尽头的等待。如何才能发现孩子在早期的孤独症倾向呢？由于社会对自闭症的陌生，早期自闭症儿童往往被认为性格孤僻或者"开口晚"，从而延误了治疗时机。目前临床上主要是统计分析孩子的行为做出判断。但由于婴儿行为本身发展不成熟，并且有个体差异；再加上脾性的差异，判断相对来说比较主观，也比较耗时。因此，如果提供一种比较客观的，可用于婴幼儿竜自闭症辅助诊断的检测方法，对于自闭症的早发现，早干预是非常有意义的。
发明内容为了可以简便而客观地对儿童自闭症进行测试，本发明提供一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童自闭症的易感基因进行检测，从而为预防及诊断儿童自闭症，提供重要的参考信息。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。所述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及儿童自闭症相关的OXTR-l和OXTR-2基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和下游引物，序列分别如下扩增基因OXTR-l的引物上游引物F1A5-GAAGCCCCGCAAACCGA-317bp，上游引物FIG5-GAAGCCCCGCAAACCGG-317bp,下游引物Rl5-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-320bp;扩增基因OXTR-2的引物上游引物F2A5-CCACGAACGGATATGCGGA-319bp，上游弓I物F2G5-CCACGAACGGATATGCGGG-319bp，下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-320bp。上述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列SEQ1:TTGTGTGGGCTGCTTTGTGGCACAACTCCAGGGGATGCCTTTTACCTCATGGTCTATGAACAGGGTGTTCCTAGGAGCTTTGCAGTGCACAGCCTGAACAGCTGAACATGGCAGCCTCATCCAGTGCCCCTTTCAGGAAACCATCCCTGTTTTCTCAGTTTGCGGGGCTTCTTCCTCTGAATGCTAAGTCAT;SEQ2:ATGACTTAGCATTCAGAGGAAGAAGCCCCGCAAACTGGGAAAACAGGGATGGTTTCCTGAAAGGGGCACTGGATGAGGCTGCCATGTTCAGC丁GTTCAGGCTGTGCACTGCAAAGCTCCTAGGAACACCCTGTTCATAGACCATGAGGTAAAAGGCATCCCCTGGAGTTGTGCCACAAAGCAGCCCACACAA;SEQ3:GGCTCCACTCCTGGAGACTCCACGAACGGATATGCTGAGTCCACCGTGAAACAAACCGGGAGGGCCGTGAGGAGACCGCCGCGTTTCTCTTCAGACGCGGGTAGGGCGTGCTTGTCCCATTCCCAGGAACCCAACTCATCTGAAACAACAGGGCACAACCGCCGGCCTCGGGTTGCTCAGCCGCCACCCCAG;SEQ4:CTGGGGTGGCGGCTGAGCAACCCGAGGCCGGCGGTTGTGCCCTGTTGTTTCAGATGAGTTGGGTTCCTGGGAATGGGACAAGCACGCCTTACCCGCGTCTGAAGAGAAACGCGGCGGTCTCCTCACGGCCCTCCCGGTTTGTTTCACGGTGGACCCAGCATATCCGTTCGTGGAGTCTCCAGGAGAGGAGCC。上述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，所述的阴性对照品包含的序列为SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。本发明的使用只需取儿童的DNA样本进行分析检测，比如口腔样本，方便、客观、快捷。不受制于年龄和个性差异。可用于婴幼儿童自闭症辅助诊断的检测方法，对于自闭症的早发现，早干预是非常有意义的。图1，图2,图3，图4，图5，图6为荧光定量PCR仪上的扩增曲线图。各图上方的DeltaRnvsCycle,是指△Rn随循环变化的对数扩增图谱；ARn(DeltaRn)是指在给定的一组PCR条件下所生成荧光信号的对数值。该图的横坐标表示循环数(CycleNumber),纵坐标表示荧光值(DdtaRn)。横线表示荧光域值，曲线与荧光域值线的交叉点所对应的循环数即为Ct值。图l、图2、图3中横线3表示荧光域值；曲线l表示为扩增OXTR-l的引物对FG+R，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线2为扩增OXTR-l的引物对FA+R，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图1表示OXTR-l基因GG纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cl,曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C2。图2表示OXTR-l基因AA纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C3，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C4。图3表示OXTR-l基因AG杂合型样本的产物扩增曲线图曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C5，曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C6。图4、图5、图6中横线4表示荧光域值；曲线5表示为扩增OXTR-2的引物对FA+R，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线6为扩增OXTR-2的引物对FG+R，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图4表示OXTR-2基因AA纯合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C7，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C8。图5表示OXTR-2基因AG杂合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C9，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C10。图6表示OXTR-2基因GG纯合型样本的产物扩增曲线图曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cll，曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C12。具体实施例7下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建议的步骤和条件。实施例l:试剂盒的制备。包括(1)探针的准备；(2)DNA抽提试剂；(3)预混反应液；(4)标准阳性对照；(5)标准阴性对照。(1)探针的准备；由通常的核苷酸引物合成仪合成。序列如下扩增基因OXTR-l的引物上游引物F1A5-GAAGCCCCGCAAACCGA-317bp，上游引物FIG5-GAAGCCCCGCAAACCGG-317bp，下游引物R15-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-320bp;扩增基因OXTR-2的引物上游引物F2A5-CCACGAACGGATATGCGGA-319bp，上游引物F2G5-CCACGAACGGATATGCGGG-319bp,下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-320bp。使用前按每OD引物稀释为100pmol/L(即100pmol&l)浓度的加水量，开启瓶盖溶解之前最好在3000-4000转/分钟的转速下离心l分钟，防止开盖时引物散失。使用前，将浓溶液稀释成工作液10pmol/ml后进行实验。(2)DNA抽提试齐廿:试剂名称成分体积浓度缓冲液GASDS100ml0.5mmol/L缓冲液GBNAOH100ml50mmol/L缓冲液GD碳酸钠-丙酮100ml1mmol/L缓冲液GW无水乙醇100ml原液洗脱液Tris盐50ml10mmol/L(3)预混PCR反应液预混反应液包括4种，每种内含一对上下游扩增引物，各对应一个基因型。按lml配比量计算，共同的成分配制为100的dNTP，20pi;500U/|ilTaqDNAPolymerase20^1;2XQuantOneStepSYBR1300^1;10的上游引物50pl;10的下游引物50^U;RNase-freeddH20860^。管1的1对引物为上游引物FlA5-GAAGCCCCGCAAACCGA-317bp，下游引物RA5-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-320bp;管2的1对引物为上游引物FIG5-GAAGCCCCGCAAACCGG陽3下游引物Rl5-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-3管3的1对引物为上游弓I物F2A5-CCACGAACGGATATGCGGA-317bp，20bp;19bp，下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-320bp;管4的1对引物为上游引物F2G5-CCACGAACGGATATGCGGG-3l%p，下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-320bp。(4)标准阳性对照标准阳性模板是含有OXTR-l和OXTR-2的两个基因中含突变核苷酸片段构成的Pucl8-T重组质粒，该重组质料转化大肠杆菌DH5a增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释到109Copy/pl,-20'C保存。贮存存为109Copy/pl,使用浓度为105Copy/pl。标准阳性模板提供4种，每种浓度为105C叩y/ul。序列如下TTGTGTGGGCTGCTTTGTGGCACAACTCCAGGGGATGCCTTTTACCTCATGGTCTATGAACAGGGTGTTCCTAGGAGCTTTGCAGTGCACAGCCTGAACAGCTGAACATGGCAGCCTCATCCAGTGCCCCTTTCAGGAAACCATCCCTGTTTTCTCAGTTTGCGGGGCTTCTTCCTCTGAATGCTAAGTCAT;ATGACTTAGCA丁TCAGAGGAAGAAGCCCCGCAAACTGGGAAAACAGGGATGGTTTCCTGAAAGGGGCACTGGATGAGGCTGCCATGTTCAGCTGTTCAGGCTGTGCACTGCAAAGCTCCTAGGAACACCCTGTTCATAGACCATGAGGTAAAAGGCATCCCCTGGAGTTGTGCCACAAAGCAGCCCACACAA;GGCTCCACTCCTGGAGACTCCACGAACGGATATGCTGAGTCCACCGTGAAACAAACCGGGAGGGCCGTGAGGAGACCGCCGCGTTTCTCTTCAGACGCGGGTAGGGCGTGCTTGTCCCATTCCCAGGAACCCAACTCATCTGAAACAACAGGGCACAACCGCCGGCCTCGGGTTGCTCAGCCGCCACCCCAG;CTGGGGTGGCGGCTGAGCAACCCGAGGCCGGCGGTTGTGCCCTGTTGTTTCAGATGAGTTGGGTTCCTGGGAATGGGACAAGCACGCCTTACCCGCGTCTGAAGAGAAACGCGGCGGTCTCCTCACGGCCCTCCCGGTTTGTTTCACGGTGGACCCAGCATATCCGTTCG丁GGAGTCTCCAGGAGAGGAGCC。(5)标准阴性对照标准阴性模板是含有拟南芥基因片断180个核苷酸构成的Pucl8-T重组质粒。该重组质料转化大肠杆菌DH5a增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测ASEQ1:SEQ2:SEQ3:SEQ4:9A260定量并稀释到109Copy/pl，.20。C保存。贮存存为109Copy4U,使用浓度为105Copy4Ul。序列如下-SEQ5:丁TCGTTA丁TGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。实施例2:试剂盒的使用(1)样本的制备取样方式使用棉签在面颊内擦拭IO次。注意为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。a)处理材料将在面颊内擦拭过的棉签转置于2ml离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，加入400pl缓冲液GA。b)加入20W蛋白酶K溶液，涡旋IO秒混匀，56"C放置60分钟，其间每15分钟涡旋混匀数次。c)加入400^1缓冲液GB，充分颠倒混匀，7CTC放置10分钟，此时溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的液滴。d)加200pl无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的液滴。e)将上一歩所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CR中(吸附柱CR放入收集管中)，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。f)向吸附柱CR中加入500^1缓冲液GD，12，000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。g)向吸附柱CR中加入700^1漂洗液PW，12,000rpm(13，400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管。h)向吸附柱CR中加入500)al漂洗液PW，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液。i)将吸附柱CR放回收集管中，12,000rpm(13,400xg)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CR室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗。j)将吸附柱CR转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50pl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5分钟，12,000rpm(13,400xg)离心2分钟。重复一次。(2)实验过程a)按样品数n(样品数=待测样本数+阴性对照1个+阳性对照1个)取预混PCR反应液每管23pl分装于反应管中。b)将上述处理好的待测样本和阴性、阳性对照(务必振荡混匀数秒)各取2ul分别加入反应管中，混匀，低速离心数秒，立即进行PCR扩增反应。10c)PCR条件95°C10sec(95°C15sec,60°C60sec)X40个循环(3)结果分析a)定量检测SNP的判断标准两曲线的Ct值之差的绝对值记为IACtl，当IACtl《1，判断为杂合型；当IACtl》5，判断为纯合型。如图，图l中IACtl》5，表示该样本为0XTR-1基因GG纯合型样本。图2中，|ACt|》5，表示该样本为OXTR-l基因AA纯合型样本。图3中，|ACt|《l，表示该样本为OXTR-l基因AG杂合型样本。图4中IACtl》5，表示该样本为OXTR-2基因AA纯合型样本。图5中，|ACt|《l，表示该样本为OXTR-2基因AG杂合型样本。图6中，|ACt|》5，表示该样本为OXTR-2基因GG纯合型样本。b)结果分析<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>序列表<uo〉上海裕隆生物科技有限公司<120>—种儿童自闭症易感基因检测试剂盒〈160〉11<210>1〈211〉17〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测OXTR-l基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F1A。〈400〉1gaagccccgcaaaccga17〈210〉2<211>17<212〉DNA<213>人工序列〈220〉〈223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测OXTR-l基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F1G。〈400>2gaagccccgcaaaccgg17〈210〉3<211〉20〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉〈223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测OXTR-l基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物Rl。<400〉312cagtgcacagcctgaacagc20〈210〉4<211〉19<212>腿<213>人工序列〈220〉〈223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测0XTR-2基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F2A。<400〉4ccacgaacggatatgcgga19<210〉5<211〉19<212〉DNA〈213〉人工序列<220><223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测OXTR-2基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F2G。<400〉5ccacgaacggatatgcggg19〈210>6〈211〉20〈212〉腿〈213〉人工序列〈220>〈223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童自闭症易感基因检测试剂盒中检测OXTR-2基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物R2。<■〉6ctgggaatgggacaagcacg20<210〉7<211〉192<212〉腿_〈213〉人属(Homo)〈400〉7ttgtgtgggctgctttgtggcacaactccaggggatgccttttacctcatggtctatgaacagggtgttcctaggagctttgcagtgcacagcctgaacagctgaacatggcagcctcatccagtgccectttcaggaaaccatccctgttttctcagtttgcggggcttcttcctctgaatgctaagtcat60120180192〈210〉8<211>192〈212〉DNA〈213〉人属(Homo)〈400〉8atgacttagcattcagaggaagaagccccgcaaactgggaaaacagggatggtttcctga60aaggggcactggatgaggctgccatgttcagctgttcaggctgtgcactgcaaagctcct120aggaacaccctgttcatagaccatgaggtaaaaggcatcccctggagttgtgccacaaag180cagcccacacaa192<210〉9<2U〉192<212>DNA〈213>人属(Homo)〈400〉9ggctccactcctggagactccacgaacggatatgctgagtccaccgtgaaacaaaccggg60agggccgtgaggagaccgccgcgtttctcttcagacgcgggtagggcgtgcttgtcccat120tcccaggaacccaactcatctgaaacaacagggcacaaccgccggcctcgggttgctcag180ccgccaccccag192〈210〉10<211〉192〈212〉DNA<213>人属(Homo)〈10ctggggtggcggctgagcaacccgaggccggcggttgtgccctgttgtttcagatgagtt60gggttcctgggaatgggacaagcacgccttacccgcgtctgaagagaaacgcggcggtct120cctcacggccctcccggtttgtttcacggtggacccagcatatccgttcgtggagtctcc180aggagaggagcc19214<210>11〈211〉180〈212〉歸<213>拟南芥(Arabidopsisthaliana)<400>11ttcgttattgaatcttgttttggttctcttgtgtggaatgcattgttcttgcttctctggaacttgggatatgatgacaaaaatacgatatctctaaggctaattgctgtgcggatgaaatatatttgcacgtcagtctgatcccattatgtatataacattaggagttggtgcatgctc601201801权利要求1.一种儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及与儿童自闭症相关的OXTR-1基因和OXTR-2基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下扩增基因OXTR-1的引物上游引物F1A5-GAAGCCCCGCAAACCGA-317bp，上游引物F1G5-GAAGCCCCGCAAACCGG-317bp，下游引物R15-CAGTGCACAGCCTGAACAGC-320bp；扩增基因OXTR-2的引物上游引物F2A5-CCACGAACGGATATGCGGA-319bp，上游引物F2G5-CCACGAACGGATATGCGGG-319bp，下游引物R25-CTGGGAATGGGACAAGCACG-320bp。2.如权利要求1所述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有4.个，分别包含如下的序列TTGTGTGGGCTGCTTTGTGGCACAACTCCAGGGGATGCCTTTTACCTCATGGTCTATGAACAGGGTGTTCCTAGGAGCTTTGCAGTGCACAGCCTGAACAGCTGAACATGGCAGCCTCATCCAGTGCCCCTTTCAGGAAACCATCCCTGTTTTCTCAGTTTGCGGGGCTTCTTCCTCTGAATGCTAAGTCAT;SEQ2:ATGACTTAGCATTCAGAGGAAGAAGCCCCGCAAACTGGGAAAACAGGGATGGTTTCCTGAAAGGGGCACTGGATGAGGCTGCCATGTTCAGCTGTTCAGGCTGTGCACTGCAAAGCTCCTAGGAACACCCTGTTCATAGACCATGAGGTAAAAGGCATCCCCTGGAGTTGTGCCACAAAGCAGCCCACACAA;SEQ3:GGCTCCACTCCTGGAGACTCCACGAACGGATATGCTGAGTCCACCGTGAAACAAACCGGGAGGGCCGTGAGGAGACCGCCGCGTTTCTCTTCAGACGCGGGTAGGGCGTGCTTGTCCCATTCCCAGGAACCCAACTCATCTGAAACAACAGGGCACAACCGCCGGCCTCGGGTTGCTCAGCCGCCACCCCAG;SEQ4:CTGGGGTGGCGGCTGAGCAACCCGAGGCCGGCGGTTGTGCCCTGTTGTTTCAGATGAGTTGGGTTCCTGGGAATGGGACAAGCACGCCTTACCCGCGTCTGAAGAGAAACGCGGCGGTCTCCTCACGGCCCTCCCGGTTTGTTTCACGGTGGACCCAGCATATCCGTTCGTGGAGTCTCCAGGAGAGGAGCC。3.如权利要求1或2所述的儿童自闭症易感基因检测试剂盒，其特征在于所述的阴性对照品包含的序列为SEq5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。全文摘要一种用于儿童自闭症易感基因检测的试剂盒，可以克服行为诊断法的局限性。本试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。本发明的使用只需取儿童的DNA样本进行分析检测，比如口腔样本；方便、客观、快捷。不受制于年龄和个性差异。可用于婴幼儿童自闭症辅助诊断的检测方法，对于自闭症的早发现，早干预非常有意义。文档编号C12Q1/68GK101684496SQ200810200630公开日2010年3月31日申请日期2008年9月27日优先权日2008年9月27日发明者汪宁梅,穆海东,飒黎申请人:上海裕隆生物科技有限公司