专利名称：一种解淀粉芽孢杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细菌，具体涉及一种具有高效抑藻效果的溶藻细菌。
背景技术：
在水体富营养化问题日益严重的情况下，经济、便捷、具有环境友好性的生物方法(Gschmm等，1998 Karpenter等，1992)成为富营养化水体修复领域的研究热点。溶藻细菌控藻研究由20世纪60年代逐步开展，日益受到重视。国内外研究学者从海洋赤潮 (Imai等；2001)、富营养化湖泊(Rashidan等；2001)、水库(S. W. Jung等；2008)、农田排水渠(Jeffrey ；1981)、污水(James 等；1969)、湖泊底泥(Choi Hee-jin 等；2005)等环境中分离出具有抑藻效果的溶藻细菌。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是广泛存在于自然界的一种非致病性细菌。目前，国内对其研究仅局限于发酵条件的优化、降解除草剂丁草胺(谭文捷等；2005)，抑制植物病原真菌和病毒(申莉莉等；2010)等在生物防治(王英国等；2007) 中的应用领域，在控藻领域的研究尚为空白。研究表明，解淀粉芽孢杆菌可产生多种抑菌物质(邓建良等；2007)，通过产生抗生素、抗菌蛋白或多肽等活性物质来抑制植物病原菌、真菌、病毒、线虫(Yoshida等；2001)，从而起到生物防治的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有高效抑藻效果的解淀粉芽孢杆菌。本发明提供的技术方案如下方案1 一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于 2010 年 12 月 28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC NO :4516。方案2 把方案1所述解淀粉芽孢杆菌CGMCC NO 4516应用于水环境的藻类水华控制或除藻。方案3 作为方案2的一个特例，其特征在于，利用解淀粉芽孢杆菌CGMCC NO 4516 抑制水环境中藻类的生长。方案4 作为方案3的一个特例，其特征在于，所述藻类为蓝藻。方案5 作为方案4的一个特例，其特征在于，所述蓝藻为水华鱼腥藻。本发 明的有益效果本发明提供的解淀粉芽孢杆菌CGMCC NO 4516可用于水环境的藻类水华控制或除藻，对水环境中藻类的生长有明显的抑制作用，尤其对于水华鱼腥藻的具有非常高的溶藻效果。生物材料保藏解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2010年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC NO :45160
具体实施例方式下面通过一个具体实施例对本发明做进一步说明。(一 )解 淀粉芽孢杆菌CGMCC NO 4516的分离用水样采集器在滇池富营养化湖泊水面下Im处取水样，将采集的表层水样通过滤纸过滤，以消除原生动物的影响并去除水中杂质。取20mL过滤水样无菌操作注入到 IOOmL预培养5 7天的水华鱼腥藻(水华鱼腥藻(Anabaena flos-aquae)藻种购自中国科学院水生生物研究所藻种库(FACHB))中，对照组注入20mL过滤后的高压灭菌水样，将藻种接种于150mL锥形瓶中，用封口膜封口保存，放置在光合植物培养室内培养，光合培养周期为14h:10h、温度25士 1°C、光照20001UX ；藻体接种和传代过程严格遵守无菌操作规则， 如上培养1周。将对照正常，实验组出现黄化现象的藻液用于下一步实验。本试验选择水华鱼腥藻作为主要的受试蓝藻藻种。收集培养至对数期的水华鱼腥藻，于常温以3500 4000r/min离心12 15min。 用无菌BGll培养液将黄化藻液稀释10、100和1000倍。分别取ImL不同梯度的稀释液与 2mL浓缩水华鱼腥藻液，在小试管中充分混勻后均勻涂布在BGll固体培养基上，并且设置空白对照。将这些藻板倒置放在光合植物培养室内光照培养。待藻板上出现空斑后，用无菌接种环切取典型空斑(每板取2 3个)，重悬于5mL的无菌BGl 1液体培养基中，用铺藻板的方法对这个空斑纯化三次。以上操作均在超净室中进行。牛肉膏蛋白胨培养基分离经过几天培养，藻板上空斑周围出现散落的菌落，用无菌接种环挑取典型菌落，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线分离，经过3 5次划线分离，得到细菌单菌落。分别以水华鱼腥藻、铜绿微囊藻和聚球藻为实验对象，在玻璃孔板小孔中加入3ml 对数生长期的藻液，用无菌接种环挑取单菌落的一部分放入培养至对数期的藻液中，光照培养。对7天内出现黄化现象的单菌落再次划线生长，反复纯化多次。以上操作均在超净室中进行。溶藻细菌选择经过反复纯化多次的溶藻菌加入到水华鱼腥藻、铜绿微囊藻和聚球藻，进行溶藻效果试验，从多种细菌中选取溶藻效果最好的菌株DCl。 (二)解淀粉芽孢杆菌CGMCC NO 4516生化理化鉴定 通过抑藻效果初试实验和细菌生长曲线测定结果，选取抑藻效果最优、生长适应期较短、短时间富集培养即可获得高浓度菌体的DCl菌株。DCl的细胞形态和理化试验结果见下表。
权利要求
1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCC NO :4516。
2.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌在水环境的藻类水华控制或除藻方面的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，利用解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC NO :4516抑制水环境中藻类的生长。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述藻类为蓝藻。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述蓝藻为水华鱼腥藻。
全文摘要
本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌及其应用。该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC NO4516对藻类的生长具有明显的抑制作用，尤其是对于水华鱼腥藻的生长具有高效的抑制作用，可应用于富营养化湖泊、城市景观水体等水环境的藻类水华控制或除藻。
文档编号C12R1/07GK102154162SQ201010614948
公开日2011年8月17日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者吴为中, 吴伟龙, 安成才, 李超, 杨璐华 申请人:北京大学