专利名称：去氢厄弗酚在制备抗肿瘤及抑制肿瘤新生血管生成药物、保健食品或化妆品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种去氢厄弗酚在制备抗肿瘤药物及血管生成抑制物或保健食品或化妆品中的应用。
背景技术：
据2010年2月卫生部统计资料，每年全球癌症死亡人数达1000万。目前全球四分之一人口死亡的原因是癌症所致，并预测若按目前的趋势发展下去，到2050年将有二分之一的死亡者是由于患了癌症。我国每年有220万人患癌症，更令人瞩目的是恶性肿瘤发病率以每年2. 5-5%速度增长，已成为严重危害我国人民生命的元凶。尽管世界各国对肿瘤的治疗已做了很大的努力，对某些肿瘤已取得了一些进展，但从整体而言现有抗肿瘤药物对大部分恶性肿瘤疗效欠佳，其重要原因之一是缺乏有效的抗癌药物。因此，研发有效抗癌新药是目前治疗恶性肿瘤的当务之急。中医药治疗肿瘤的历史源远流长。长期以来，已有紫杉、喜树、砒霜、绿茶、灵芝、人参、长春花、天门冬、半枝莲、天葵子等用于临床治疗癌症；目前已有多种中药制剂用于中西医治疗恶性肿瘤，包括失笑散加味、二陈汤、海藻玉壶汤、附子理中汤、膈下逐瘀汤、柴芍六君子汤、参苓白术散、八珍汤，参芪扶正注射液、康莱特注射液、岩舒注射液、华蟾素注射液、 苦参碱注射液等。中医药治疗在改善癌症病变，减轻放、化疗毒副作用，防止肿瘤转移和复发等方面取得了一些较好的效果，抗癌中草药已在中医医院和中医领域得到广泛应用。然而，迄今中草药尚未在国内外成为首选抗癌药物，现有临床中草药的抗癌疗效亟需进一步提高。长期以来，人们应用传统思维、理念和方法研发抗癌中草药，虽然已取得了进步，但收效甚微。肿瘤细胞仍每时每刻都在危害着成千上万癌症病人的生命，恶性肿瘤已成为严重威胁我国人民生命的罪魁祸首。我国中医中药是一个伟大的宝库，在抗癌治疗方面具有很大的潜力，若采用古为今用、洋为中用的策略，应用现代生物医药科学技术，进行中药有效部位、有效组份、有效成分的创新中药研究，很有可能研发出新型有效抗癌新药。血管为人体正常组织器官的形态发生与功能维护所必需，它与人体发育失调和多种病因导致的种种疾病密切相关。肿瘤血管生成在肿瘤发生、发展、转移和复发中具有举足轻重的作用。一系列研究表明只要有效地抑制肿瘤血管生成或破坏已有肿瘤血管，就能抑制肿瘤生成、转移与复发。此外，糖尿病和风湿性关节炎等疾病都有血管增生，其血管异常与肿瘤血管非常相似。因此，血管增生抑制剂也可用于治疗糖尿病和风湿性关节炎等血管增生性疾病。近年来，人们对肿瘤血管生成机制的研究不断深入，五种抗肿瘤血管生成的药物如Avastin、Angiostatin等相继被开发出来，已在临床上推广应用。这类药物不但可以用于大多数实体肿瘤的治疗，还可以用于肿瘤的预防，同时对其他与血管生成有关的疾病如糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎、银屑病、血管瘤、动脉粥样硬化等的预防与治疗，都具有一定的理论和现实意义。
去氢厄弗酚(dehydroeffusol，化学名为2，7_ 二羟基甲基_5_乙烯基菲，分子式=C17H14O2-分子量250)为灯心草中特征性的成分之一。灯心草(Juncus effusus L.) 为灯心草科(Juncaceae)灯心草属(Juncus L.)植物灯心草(Juncus effusus L.)的干燥茎髓或全草，别名灯心草、灯草，又名虎须草、灯心、碧玉草、水灯心、铁灯心等。灯心草分布于全球各地，全国各地均有生产，主产于江苏、四川、云南、贵州等地。性微寒，味甘、淡，归心、肺、小肠经，功能清心火，利小便，可治疗心烦少眠、高热口渴、尿少涩痛、小儿疳积、口舌生疮等症。目前研究表明，灯心草中的菲类成分具有抗菌、抗氧化、抗微生物及抗藻活性。
发明内容
本发明目的在于提供一种去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，提供了一种用于治疗肿瘤及抑制血管生成的新用途。本发明人在分离出灯心草抗肿瘤有效组份后，进一步分离纯化出具有抗肿瘤的有效单体，经化学结构分析该活性单体名为去氢厄弗酚(dehydroeffusol)。经文献调研和查新，去氢厄弗酚对肿瘤细胞及肿瘤血管生成的影响，国内外至今未见文献报道。为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是本发明人研究证明去氢厄弗酚具有很好的抗肿瘤和抑制肿瘤血管生成作用。本发明提供一种去氢厄弗酚在制备抑制肿瘤及血管生成的药物或保健食品或化妆品中的应用，并提供了一种新的抑制肿瘤及肿瘤血管生成的防治方案，为研发新型抗肿瘤药物和发现药物作用新的靶点提供科学依据和重要信息，为中医药抗肿瘤治疗提供创新中药。所述去氢厄弗酚来源于天然药物灯心草属植物提取或化学合成。本发明提供一种去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用。本发明具体的技术方案如下灯心草抗肿瘤及肿瘤血管生成有效成分去氢厄弗酚的制备方法是干燥的灯心草药材压碎，浸提，富集，得去氢厄弗酚粗品，薄层层析(TLC)检识，用体外肿瘤细胞增殖和肿瘤类血管生成模型测定其活性。去氢厄弗酚粗品经反复分离纯化即得去氢厄弗酚纯品，去氢厄弗酚的化学结构和分子式见图1，其纯度达95%以上。去氢厄弗酚用于制备抗肿瘤及抑制肿瘤血管生成药物，可被制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服剂、膏剂、霜剂、 乳剂或纳米剂，这些药物含有有效剂量的去氢厄弗酚及常规药用载体和/或赋形剂。本发明提供了一种去氢厄弗酚在制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物或保健食品或化妆品中的应用。去氢厄弗酚的靶标为多种恶性肿瘤，包括各种淋巴瘤、白血病、淋巴细胞白血病、T淋巴细胞瘤、肿瘤干细胞引起的肿瘤、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、脑胶质瘤、 肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、骨髓瘤、卵巢癌和宫颈癌等。优选的技术方案中包括所述抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物中含有药学上有效量的去氢厄弗酚及其药学上可接受的载体。优选的技术方案中包括所述抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物剂型选自注射液、 片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服剂、膏剂、霜剂或乳剂。优选的技术方案中包括所述抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物用于防治至少一种选自下述之一的疾病血管瘤、血管纤维瘤、白血病、新生血管性青光眼、糖尿病视网膜病变、早熟视网膜病及视网膜静脉闭塞、视网膜变性、晶体后纤维组织增生、颗粒性结膜炎、血管生成引起的角膜疾病、更年期黄斑和黄斑变性、牛皮癣、老年盘状斑变性、风湿性关节炎、 银屑病、毛细管扩张、脓性肉芽肿、伤口愈合中抑制斑痕形成、动脉粥样硬化、脂溢性皮炎和痤疮。优选的技术方案中包括所述抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物用于肿瘤或肿瘤转移的化学疗法或辅助治疗。本发明的用途如下(1)本发明的去氢厄弗酚用于防治和或治疗至少一种以上选自下述之一的疾病 癌症(请详见以上第一页权利5所述)和或癌症转移，白血病、淋巴瘤、血管瘤，血管纤维瘤，新生血管性青光眼，糖尿病视网膜病变，早熟视网膜病及视网膜静脉闭塞，视网膜变性， 晶体后纤维组织增生，颗粒性结膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黄斑和黄斑变性， 牛皮癣，老年盘状斑变性及风湿性关节炎，银屑病，毛细管扩张，脓性肉芽肿，伤口愈合中抑制斑痕形成，动脉粥样硬化，脂溢性皮炎和痤疮。(2)本发明的去氢厄弗酚有抗肿瘤、肿瘤血管生成及其他与血管生成有关疾病治疗、预防的用途，还有用于肿瘤化疗和/或辅助治疗的用途。本发明的去氢厄弗酚抑制肿瘤及肿瘤血管生成保健食品或化妆品。(3)本发明的去氢厄弗酚可以单独使用或与其他药物配合制备成灾临床上可以使用的各种不同剂型的药物，例如注射液、片齐 、粉齐 、颗粒齐 、胶囊剂、口服剂、膏齐 、霜齐 、乳剂或纳米剂等多种形式。(4)本发明中去氢厄弗酚可以应用于抗肿瘤、肿瘤血管生成及其他与血管生成有关疾病治疗和预防。更具体地，本发明的去氢厄弗酚用于药物、食品、化妆品。相对于现有技术中的方案，本发明具有以下特点和优点(1)研究的原创性本专利申请人应用自己创立的肿瘤干细胞和肿瘤新生血管生成模型，从中成药灯心草中分离出活性成分，在国际上首先发现去氢厄弗酚具有很强的抗肿瘤及抗肿瘤新生血管生成的作用，去氢厄弗酚的抗肿瘤和肿瘤血管生成作用在国内外迄今尚未见报道。本研究成果具有原创性。(2)研究的创新性本专利申请人打破常规，勇于创新，采用现代高新科学技术发掘中医药宝库，以肿瘤干细胞和肿瘤细胞为靶标，研发中草药抗癌和抗肿瘤新生血管形成药物，发现去氢厄弗酚对肿瘤干细胞和肿瘤细胞具有较强的特异性抑制作用，本研究成果具有创新性和开拓性；研发中草药来源的特异性高的抗癌药物和抗肿瘤血管生成创新性药物具有高科技和中国特色。(3)发明的实用性本专利申请人的研究工作已证明去氢厄弗酚具有较强的抗肿瘤作用和抗肿瘤新生血管形成的活性，而且口服有效、高效低毒、价格便宜、稳定性好。利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗和预防与肿瘤或肿瘤血管生成相关的疾病，还可用于肿瘤化疗和/或辅助化疗方面的治疗。本发明巧妙地以血管生成作为治疗疾病的靶点，研究并阐明去氢厄弗酚的药用疗效和机制，为其新用途开发和发现药物作用新的靶点提供科学依据和重要信息。去氢厄弗酚可用于药物、保健品和或化妆品等多种用途。综上所述，本研究集理论创新、应用创新、技术创新为一体，能获得具有自主知识产权的新药和药用前体物质，在祖国传统医药的二次开发中具有前瞻性、先导性和探索性的前沿技术，能为抗肿瘤治疗另辟蹊径。
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述图1为去氢厄弗酚化学结构(C17H14O2,分子量250)；图2为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803增殖的影响；图3为去氢厄弗酚对人胃癌细胞HGC-27增殖的影响；图4为去氢厄弗酚对人胶质瘤细胞U251增殖的影响；图5为去氢厄弗酚对人胃癌细胞AGS增殖的影响；图6为去氢厄弗酚对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖的影响；图7为去氢厄弗酚对人脑胶质瘤干细胞系SU2增殖的影响；图8为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803类血管生成的影响；图9为去氢厄弗酚对人胃癌细胞AGS类血管生成的影响；图10为去氢厄弗酚对小鼠肿瘤干细胞PMKO 102-3类血管生成的影响；图11为去氢厄弗酚对人脑胶质瘤干细胞SU2类血管生成的影响；图12为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803细胞周期的影响；图13为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803细胞凋亡的影响；图14为去氢厄弗酚对人胃粘膜上皮细胞GES-I生长和死亡的影响；其中DAPI染色为蓝色，染细胞核；图15为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803生长和死亡的影响(DAPI为蓝色，染细胞核)；图16为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803细胞亚细胞结构的扫描电镜观察；图17为去氢厄弗酚对人胃癌细胞MGC803细胞亚细胞结构的透射电镜观察。
具体实施例方式以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。实施例1去氢厄弗酚的制备干燥的灯心草药材压碎，乙醇浸提，醇液减压浓缩至无醇味，上样于已大孔树脂柱，用水、乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱部位，减压回收至干，硅胶拌样，上样于硅胶柱，薄层层析(TLC)检识并富集留份得去氢厄弗酚粗品。去氢厄弗酚粗品再经硅胶柱等反复分离纯化即得去氢厄弗酚纯品(纯度> 90% )，再经制备型HPLC进一步纯化，其纯度达95%以上。 去氢厄弗酚的化学结构和分子式见图1。实施例2去氢厄弗酚对多种肿瘤细胞/肿瘤干细胞增殖的影响1、肿瘤细胞株(62株)名称人成巨核细胞白血病细胞MEG-01、Dami和Daudi、人慢性髓原白血病细胞PBL985 和K562、人原髓细胞白血病细胞HL-60、人白血病细胞株NB-4、人红白细胞白血病细胞 HEL、人单核细胞白血病细胞THP-1、UC-CUC、SHI-I和SHI-2、人Burkitt ‘ s淋巴瘤细胞Raji, Namalva、人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat、人T淋巴细胞系H9、人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞CCRF、人骨髓瘤细胞系82沈、My-5、opm2、KMSll和LP-1、人骨肉瘤细胞 Saos-2、MG-63、U-20S和SW1353、人胶质瘤干细胞系SU2、人胶质瘤细胞SHG44、U251、A172 和U-87MG、人脐带静脉血管内皮细胞Eahy拟6、人脐静脉内皮细胞ECV-304、人肺微血管内皮细胞HLMVEC、人卵巢癌细胞系H0-8910PM和HeylB、人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231、 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞CCD-1095SK、人肝癌细胞H印G2和HCCC-9810、人肺癌细胞 SPC-A-U95-D和HU99、人结肠癌细胞系HT-四和SW480、人黑色素瘤高转移细胞株C8161 和A375、人回盲肠癌细胞CCL-M4、人盲肠腺癌细胞(未分化)Hce-8693、人宫颈癌肠转移细胞Caski、人宫颈癌细胞Hela、人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)KP_N_NS、人胃癌细胞 MGC803、HGC-27、SGC-7901和AGS、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞RD、人肾透明细胞癌皮肤转移细胞Caki-I、小鼠肿瘤内皮细胞3B11、小鼠脂肪肉瘤细胞SW872、小鼠肿瘤干细胞2C4G2均来自本所实验室细胞库。细胞培养基RPMI 1640和DMEM(高糖)为Hyclone公司产品。Alamarblue试剂为 INVITR0GEN公司产品。2、受试药物去氢厄弗酚(按实施例1方法制备)用二甲基亚砜(DMSO)溶解，用RPMI 1640或 DMEM (高糖)培养基稀释成所需浓度。3、实验方法细胞培养细胞用含体积分数10%小牛血清及双抗(青霉素和链霉素)的 RPMI1640或DMEM(高糖)培养液常规培养。每48-7 用0. 25%胰酶消化，1 2 1 4 扩瓶传代。(1)贴壁细胞用0. 25%胰酶消化贴壁细胞，离心后计数，以合适的浓度接种于96孔板，37°C、 5% CO2培养箱中培养Mh，分别加入不同浓度的去氢厄弗酚，另外以单纯的培养液和未经药物作用的细胞作为空白对照和阴性对照，每组设3个复孔，培养4 后，加入AlamarBlue试剂IOul/孔，继续培养池，用微孔检测仪进行测定荧光下0D560nm/0D590nm，按以下公式计算平均抑制率细胞抑制率(％ ) = 1_(加药孔RFU-空白对照RFU)/(对照组RFU-空白对照 RFU) X 100%。(2)悬浮细胞吸取悬浮细胞悬液，离心计数，以合适的浓度与不同浓度的去氢厄弗酚混合后，接种于96孔板，分别以单纯的培养液和未经药物作用的细胞作为空白对照和阴性对照，每组设3个复孔，37°C>5% CO2培养箱中培养4 后，加入AlamarBlue试剂IOul/孔，继续培养 2h,用微孔检测仪进行测定荧光下0D560nm/0D590nm，按上述公式计算平均抑制率。4、实验结果结果表明去氢厄弗酚对各种淋巴瘤、白血病、淋巴细胞白血病、T淋巴细胞瘤、肿瘤干细胞、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、脑胶质瘤、肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、骨髓瘤、卵巢癌、宫颈癌等62种肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用，且随着药物浓度的增加，对62 种肿瘤细胞增殖抑制作用相应地增强，其中去氢厄弗酚对人胃癌细胞增殖的抑制效果最强，见表1所示。表1去氢厄弗酚对62种肿瘤细胞增殖的影响
权利要求
1.一种去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用。
2.根据权利要求1所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤新生血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其特征在于去氢厄弗酚用于肿瘤的化学治疗或肿瘤的辅助治疗。
3.根据权利要求1所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其特征在于所述抑制肿瘤和/或肿瘤新生血管生成的药物中含有药学上有效量的去氢厄弗酚及其药学上可接受的载体，包括各种纳米载体。
4.根据权利要求1所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其特征在于所述去氢厄弗酚来源于天然药物灯心草属植物提取或化学合成。
5.根据权利要求4所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其特征在于所述抑制肿瘤和/或血管生成的药物剂型选自注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服剂、膏剂、霜剂、乳剂或纳米剂。
6.根据权利要求4所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其中所述的肿瘤包括各种淋巴瘤、白血病、淋巴细胞白血病、T淋巴细胞瘤、肿瘤干细胞引起的肿瘤、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、脑胶质瘤、肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、骨髓瘤、；卵巢癌、宫颈癌等。
7.根据权利1所述的去氢厄弗酚在制备抗肿瘤或抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用，其特征在于所述药物用于预防或治疗原发或继发产生的血管瘤、血管纤维瘤、新生血管性青光眼、糖尿病视网膜病变、早熟视网膜病及视网膜静脉闭塞、视网膜变性、晶体后纤维组织增生、颗粒性结膜炎、血管生成引起的角膜疾病、更年期黄斑和黄斑变性、牛皮癣、老年盘状斑变性及风湿性关节炎、银屑病、毛细管扩张、脓性肉芽肿、伤口愈合中抑制斑痕形成、动脉粥样硬化、脂溢性皮炎和痤疮。
全文摘要
本发明公开了一种去氢厄弗酚(dehydroeffusol，化学名为2，7-二羟基-1-甲基-5-乙烯基菲，分子式C17H14O2，分子量250)在制备抗肿瘤和抑制肿瘤血管生成药物或保健食品或化妆品中的应用。该发明首次发现中草药灯心草单体去氢厄弗酚具有抑制肿瘤及肿瘤血管生成的活性，利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗或预防和恶性肿瘤以及与肿瘤血管生成相关的疾病，还可用于肿瘤化疗和/或辅助化疗方面的治疗。本发明巧妙地以肿瘤干细胞、肿瘤细胞和肿瘤血管生成作为靶标，研究并阐明去氢厄弗酚的药用疗效和作用机制，为去氢厄弗酚的抗肿瘤创新中药研发奠定了基础，也为恶性肿瘤的中药治疗提供科学依据和重要信息。
文档编号A23L1/29GK102423307SQ20111032495
公开日2012年4月25日 申请日期2011年10月24日 优先权日2011年10月24日
发明者周泉生, 成旭东, 曹志飞, 朱峰妍, 蒋小岗, 顾振纶 申请人:周泉生, 苏州中药研究所