专利名称：解淀粉芽孢杆菌及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其用途，属于微生物领域。
背景技术：
四甲基吡嗪又叫川芎嗪(Ligustrazine，缩写为TTMP)，其药理作用主要有扩张血管；轻度降压；改善组织微循环，提高组织血液灌注；抑制血小板粘附聚集和血栓形成；抑制平滑肌细胞和成纤维细胞增生；调节脂质代谢、抗脂质过氧化；有一定的调解免疫的作用；抗组织纤维化，对肺纤维化和肝纤维化有一定的治疗作用。而吡嗪类化合物(在白酒中 的含量300(T6000ug/L)是中国传统固态发酵白酒特有的风味成分，也是酒体中的健康因子。因此，提高白酒中四甲基吡嗪的含量可以有利于人体健康。若能从酿酒环境中选育出代谢四甲基吡嗪的功能菌株，对白酒业来说具有重大的现实意义。目前报道显示解淀粉芽孢杆菌可产α-淀粉酶、β -I, 3-1，4_葡聚糖酶、蛋白酶等多种酶类，已广泛用于酶制剂生产[1_3]。一些研究表明，解淀粉芽孢杆菌还能产生抗菌蛋白、iturin (伊枯草菌素)、surfactin (表面活性素)、fengycin (芬莽素)和bacillomycin (杆菌霉素)等抗菌物质，抗菌谱广，特别是对于霉菌有较好的抑制作用[4_8]，而对于产吡嗪类化合物的解淀粉芽孢杆菌还未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens JNC-002,该菌株于2012年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 5740，保藏地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。进一步的，解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID No. 3所示。进一步的，该菌株的细菌学特征如下菌体呈杆状，长度2 3 μ m，直径O. 6^0. 8 μ m,无荚膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落边缘粗糙扩散；生理生化特征为革兰氏阳性，过氧化氢酶阳性，卵黄反应阴性，吲哚反应阳性，可水解明胶、淀粉、酪蛋白，利用柠檬酸盐、铵盐、丙二酸，硝酸盐还原阳性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可产酸。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌的培养方法，将解淀粉芽孢杆菌接种到成分为蔗糖80 120g/L，豆饼粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氢二铵25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培养基中，35 37°C温度下，18(T200rpm培养96 120h。进一步的，所述培养基成分为蔗糖100g/L，豆饼粉40g/L，酵母膏5g/L、磷酸氢二铵 40g/L，pH7.5。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌在生产四甲基吡嗪中的用途。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌在酿酒中的用途。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌的培养方法在生产四甲基吡嗪中的用途。
本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌的培养方法在酿酒中的用途。本发明的菌株是从四川剑南春(集团)有限责任公司的酒曲中分离获得。本发明的有益效果在于本发明首次发现一株高产四甲基吡嗪的解淀粉芽孢杆菌。该菌株产四甲基吡嗪的能力可达到约2. 4g/L，为四甲基吡嗪的生产提供了新的选择，为生物制药提供了宝贵的菌种资源，具有极大的应用应用价值。本发明解淀粉芽孢杆菌是从酒曲中分离出来的，可用于生产白酒，提高酒体中四甲基吡嗪的含量，为增强酒体典型风味特征提供了新途径。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,于2012年2月I日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCCNo.5740。
图I、初筛得到各菌株的产四甲基吡嗪的能力。图2、氮源优化实验结果。图3、本发明解淀粉芽孢杆菌的菌体形态，显微镜放大倍数为100倍。
具体实施例方式本发明的解淀粉芽抱杆菌Bacillus amyloliquefaciens JNC-002菌株于2012年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCCNo. 5740，保藏地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。进一步的，解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID No. 3所示。进一步的，该菌株的细菌学特征如下菌体呈杆状，长度2 3 μ m，直径O. 6^0. 8 μ m,无荚膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落边缘粗糙扩散；生理生化特征为革兰氏阳性，过氧化氢酶阳性，卵黄反应阴性，吲哚反应阳性，可水解明胶、淀粉、酪蛋白，利用柠檬酸盐、铵盐、丙二酸，硝酸盐还原阳性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可产酸。具体的，解淀粉芽孢杆菌的培养方法将解淀粉芽孢杆菌接种到成分为蔗糖8(Tl20g/L，豆饼粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氢二铵25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培养基中，35 37°C温度下，18(T200rpm 培养 96 120h。进一步的，所述培养基成分为蔗糖100g/L，豆饼粉40g/L，酵母膏5g/L、磷酸氢二铵 40g/L，pH7.5。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌在生产四甲基吡嗪中的用途。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌在酿酒中的用途。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌的培养方法在生产四甲基吡嗪中的用途。本发明还提供了解淀粉芽孢杆菌的培养方法在酿酒中的用途。本发明的菌株是从四川剑南春(集团)有限责任公司的酒曲中分离获得。本发明解淀粉芽孢杆菌产四甲基吡嗪能力可以达到2. (Γ2. 4g/L，是一株高产四甲基吡嗪的新菌株，可用于四甲基吡嗪的生产。本发明解淀粉芽孢杆菌是从酒曲中分离出来的，可用于生产白酒，提高酒体中四甲基吡嗪的含量，为增强酒体典型风味特征提供了新途径。同时，本发明解淀粉芽孢杆菌也为生物制药提供了宝贵的菌种资源，具有极大的应用价值。实施例I菌株筛选I、菌株的初筛材料四川剑南春(集团)有限责任公司使用的酒曲培养基酪蛋白20.0g，氯化铵l.Og，牛肉膏1.(^，氯化镁5.(^，琼脂20.(^，蒸馏水定容至IOOOmL, pH 7. O实验方法无菌条件下取10克酒曲于装有90mL无菌水并放有玻珠的25mL三角瓶中，置摇床上室温振荡30分钟。取菌液按10倍的梯度稀释到10_6，取各稀释度菌液ImL放入无菌平皿中，倒入灭菌后冷却至50°C的培养基，混匀，待凝固后放入37°C培养箱培养5 7天，按其是否产透明圈及透明圈内外直径比值对菌株进行初筛。微生物学认为能够降解酪蛋白的细菌，能产吡嗪类物质。菌体降解酪蛋白时，因利用酪蛋白而会在菌体周围形成一个透明圈。因为微生物菌落本身大小有差异，所以根据透明圈外直径与内直径的比值来筛选，能比较直观的说明微生物降解酪蛋白的能力，进而反映出微生物产吡嗪类物质的能力。初筛得到的菌株经形态观察发现菌株基本都是芽孢杆菌属。表I初筛得到菌株的透明圈比值
权利要求
1.解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens JNC-002，保藏号为 CGMCC No. 5740。
2.根据权利要求I所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于其16SrDNA序列如SEQ IDNo. 3所示。
3.根据权利要求I或2所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于该菌株的细菌学特征如下菌体呈杆状，长度2 3 μ m,直径O. 6^0. 8 μ m,无荚膜，中生芽孢；菌落呈奶油色、不透明、菌落边缘粗糙扩散；生理生化特征为 革兰氏阳性，过氧化氢酶阳性，卵黄反应阴性，吲哚反应阳性，可水解明胶、淀粉、酪蛋白，利用柠檬酸盐、铵盐、丙二酸，硝酸盐还原阳性，以阿拉伯糖、木糖、甘露醇代替葡萄糖可产酸。
4.解淀粉芽孢杆菌的培养方法，其特征在于将解淀粉芽孢杆菌接种到成分为蔗糖8(Tl20g/L，豆饼粉25 40g/L、酵母膏3 5g/L、磷酸氢二铵25 60g/L，pH7. 0^7. 5的培养基中，35 37°C温度下，18(T200rpm 培养 96 120h。
5.根据权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法，其特征在于所述培养基成分为鹿糖100g/L,豆饼粉40g/L,酵母膏5g/L、磷酸氢二铵40g/L, pH7. 5。
6.权利要求f3任一项所述的解淀粉芽孢杆菌在生产四甲基吡嗪中的用途。
7.权利要求f3任一项所述的解淀粉芽孢杆菌在酿酒中的用途。
8.权利要求4或5所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法在生产四甲基吡嗪中的用途。
9.权利要求4或5所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法在酿酒中的用途。
全文摘要
本发明涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其用途，属于微生物领域。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens JNC-002及其用途，该菌株的保藏号为CGMCC No.5740，是从四川剑南春(集团)有限责任公司的酒曲中分离得到的。本发明解淀粉芽孢杆菌产四甲基吡嗪能力可以达到2.4g/L，可用于四甲基吡嗪的生产。
文档编号C12R1/07GK102766592SQ201210277040
公开日2012年11月7日 申请日期2012年8月6日 优先权日2012年8月6日
发明者刘孟华, 唐清兰, 徐占成, 徐姿静, 樊科权, 焦小川 申请人:四川绵竹剑南春酒厂有限公司