专利名称：一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，尤其是一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法。
背景技术：
金霉素(Chlortetracycline)，又称氯四环素，属四环素类中衍生物的一种。化学名:6~ 甲基 ~4~ 二甲氣基 _3,6,10,12,12a-五轻基-1，11- _-氧代 ~7~ 氣-1,4,4a, 5, 5a, 6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。分子量:478.8 ;分子式=C22H23ClN2O8。金霉素抗菌谱广，对阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、某些原虫等均可产生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制细菌的生长，在其较高浓度时具有杀菌作用，其作用机制是干扰蛋白质的合成。适用于鸡白痢、伤寒、猪细菌性肠炎以及禽类副伤寒、霍乱等疾病。同时，作为理想的饲料添加剂它还具有预防潜在感染、改善消化代谢、抑制肠道内有害微生物，促进有益微生物生长、提高饲料效能等。在全球范围内，金霉素是所有饲料药物添加剂中使用量最大的品种，是国际上重要的兽用抗生素之一。金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)为链霉菌科,链霉菌属，孢子丝长,5-8圈螺旋形。孢子呈球形、卵圆形、长圆形，表面略崎岖不平。菌落呈金黄色。在30°C以下时，合成金霉素的能力较强，当温度超过35°C时，则只合成四环素而不合成金霉素。菌种保藏的目的在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以便于研究、交换和使用。在实际生产实践过程中，菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而出现负突变引起某些优良特性变弱或消失，这种变异的结果往往导致菌种的退化，而金色链霉菌生产过程中的自然变异往往会出现正突变，产生优良菌株。
发明内容
本发明的目的在于利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株，提供一种以微生物的自然突变为基础的菌种选育方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的:(I)生产前期发酵液培养；(2)平皿分离培养；(3)挑单菌落接种试管斜面培养；(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定；(5)砂土管保存；(6)生产应用；本发明的优点和有益效果为:1、本发明利用生产前期的金色链霉菌，通过平皿分离培养、试管斜面培养、摇瓶初复筛得到优胜菌株，应用生产，提高效价和产量，具有显著的经济效益。同时，为菌种选育提供新的思维方式和方法。2、本发明确定了利用金色链霉菌生产前期条件筛选优胜菌株的方法和条件，为进一步研究和开发生产资源，以及在满足畜牧业需求、促进饲料工业发展等方面提供重要的现实意义。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。实施例1:一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其步骤为:(I)选取生产至29h的金色链霉菌发酵液，接种至分离平皿。(2)平皿分离培养:32°C条件下培养3-5天至成熟备用。(3)试管斜面培养:从培养好的平皿中挑取单菌落，接种试管斜面，32°C，培养3-5
天。 (4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定:将试管斜面接种至摇瓶种子培养基，28°C下培养17h,接种摇瓶发酵培养基，280C，培养7天，测效价，挑选本批效价/正常生产效价> 105%或接近105%的菌株进行复筛。(5)砂土管保存。(6)生产应用:将RC2-196应用于生产中，最终效价和总亿分别比正常生产批次提高了 5%和 16%。实施例2:一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其步骤为:(I)选取生产至29h的金色链霉菌发酵液，接种至分离平皿。(2)平皿分离培养:32°C条件下培养3-5天至成熟备用。(3)试管斜面培养:从培养好的平皿中挑取单菌落，接种试管斜面，32°C，培养3-5天。(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定:将试管斜面接种至摇瓶种子培养基，28°C下培养17h,接种摇瓶发酵培养基，280C，培养7天，测效价，挑选本批效价/正常生产效价> 105%或接近105%的菌株进行复筛。(5)砂土管保存。(6)生产应用:将RC2-185应用于生产中，最终效价和总亿分别比正常生产批次提高了 6%和1%。
权利要求
1.一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，包括:(1)选取金霉素生产前期发酵液；(2)平皿分离培养；(3)试管斜面培养；(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定；(5)砂土管保存；(6)工业生产应用。
2.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其特征在于:分离平皿、试管斜面在温度32°C条件下培养3-5天至成熟后备用。
3.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其特征在于:将试管斜面接种于事先经灭菌的摇瓶种子培养基上，在28°C下培养17小时，接种于事先灭菌的摇瓶发酵培养基上。经接种的发酵培养基在温度28°C下培养7天，测效价，挑选本批效价/正常生产效价≥ 105%或接近105%的菌株进行复筛。
4.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其特征在于:将需要保存的菌种斜面孢子，在无菌条件下接入砂土中，搅拌混匀，棉塞封口，做好标记，置于放有干燥剂的真空干燥器内，用真空泵8h内抽成真空状态。将接好的砂土管放置于放有干燥剂的广口瓶 内，盖紧密封，置0-10°C冰箱内保存备用。
全文摘要
本发明涉及到一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，包括取得处于生长旺盛期的金色链霉菌，经过平皿分离培养，选择优势菌落至斜面培养，再经摇瓶初筛、复筛鉴定后，选出优胜菌株。优胜菌株的生物学稳定性经过多次复筛确定后，进行低温纯种保存；同时，在工业生产中进行试用，以达到稳定或提高菌种的工业生产能力。本发明通过一系列筛选，得到三株菌株RC2-88、RC2-185和RC2-196。应用于生产后，效价和产量均有不同程度的提高。与出发菌株相比，其工业生产效能提高了1％-16％。本发明丰富了菌种选育的方法，提高了产量，具有显著的经济效益和社会效益。
文档编号C12N1/20GK103074244SQ20121029927
公开日2013年5月1日 申请日期2012年8月22日 优先权日2012年8月22日
发明者李书至, 朱晓丽, 李亚峰, 张雪峥 申请人:驻马店华中正大有限公司