一种环肽化合物clavatustide A及其产生菌、制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种环肽化合物clavatustide?A及其产生菌、制备方法和应用。clavatustide?A的结构式如式（Ⅰ）所示，其备方法包括：将经活化的棒曲霉（Aspergillus?clavatus）CCTCC?No.M2013421接种到发酵培养液中，进行发酵培养；发酵完成后，分离得到菌丝体和发酵液；对菌丝体提取物或发酵液提取物进行层析分离、纯化处理，制得所述环肽化合物；所述应用是所述环肽化合物在制备抗肿瘤药物或肿瘤预防保健食品中的应用。本发明的环肽化合物具有较好的体外抗肿瘤活性，其对HepG2细胞的IC50值为15μg/mL，具有良好的开发前景；并且制备方法操作简便，适合规模化生产。
【专利说明】—种环肽化合物clavatustide A及其产生菌、制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于海洋真菌活性物质领域,具体涉及一种环肽化合物clavatustide A及其产生菌、制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]海洋微生物由于生活在压力环境下，其二次代谢产物往往具有陆地真菌二次代谢产物不具备的生物活性，近年来成为药物开发的热点。海洋微生物不仅生存竞争压力很大，其所处的海洋环境的PH范围、温度、压力、溶解氧、光线、营养和盐度等都与陆地环境不同，这是海洋微生物二次代谢产物多样性的基础(Debbab，A.;Aly, A.H.;Lin, ff.H.;Proksch, P.Microb.Biotech.2010，3，544 - 563 ;Saleema，M.; Alij M.S.;Hussain, S.; Jabbarj A.; Ashraf, M.; Lee，Y.S.Nat.Prod.Rep.2007，24，1142 - 1152 ；Wu, B.; Wuj X.; Sun, M.; Li, M.Mar.Drugs2013, 11，2713-2721.)?
[0003]海洋真菌作为海洋微生物的重要组成部分，在药物合成、石油降解、环境修复等方面具有重要作用。海洋真菌既具有真核生物典型的蛋白修饰性能，又具有微生物操作上简便、快速的优点，作为新的真核生物表达系统具有巨大的潜能和广阔的应用前景。近年来随着对海洋微生物研究的深入， 从海洋真菌中发现了越来越多的抗肿瘤活性物质，海洋真菌成为了继海洋放线菌之后的又一研究热点。
[0004]沼田敦等(徐赤，顾谦群，崔承彬.2001年.海洋微生物抗肿瘤代谢产物的研究进展[J].中国海洋药物.6:44-49.)对从將苔属海藻Enteromorpha intestinalis体表分离到的一株青霉菌进行了一系列研究。将该菌株置于含2%葡萄糖、1%蛋白胨及0.5%酵母膏的人工海水培养基中，27°C培养3周，首先分离得到2个细胞毒代谢产物Communesins A和B，二者结构上仅酰基侧链存差异，但活性上却相差了近10倍。
[0005]沼田敦等(徐赤，顾谦群，崔承彬.2001年.海洋微生物抗肿瘤代谢产物的研究进展[J].中国海洋药物.6:44-49.)还从分离于海鱼Pseudolabrus japonicus胃肠道的曲霉Aspergillus fummigatus菌丝体中分离到一系列细胞毒化合物Fumiquinazolines A~G,对P385细胞有中等细胞毒性。Fenieal等人从加勒比海绿藻Penicillus capitatus体表分离的Aspergillus versicolor得到四个倍半職硝基苯酯化合物,其中9a, 14- 二羟基_6对硝基苯甲酸肉桂酯对NCI的60个人类肿瘤细胞群的IC5tl的平均值为1.lmg/L，但对5种肾癌细胞(786-0，ACHN, CAK-1, TK-10，V0-31)有选择性毒性，平均 IC5tl 为 0.5lmg/L?
[0006]海洋热液口是地球上最活跃的环境(Thornburg, C.C.;Zabriskie, T.M.;McPhail, K.L.J.Nat.Prod.2010, 73, 489 - 499.),热液口螃蟹(Xenograpsustestudinatus)就生活在极端、毒性、布满硫化物的热液口附近。这种热液口螃蟹在台湾龟山岛被发现(eng, M.-S.;Ng, N.K.;Ng, P.K.L.Nature2004, 432，969.)，迄今为止，没有人研究这种热液口螃蟹的附生真菌的代谢产物。
【发明内容】
[0007]本发明提供了一种环肽化合物clavatustide A,该化合物从热液口螃蟹Xenograpsus testudinatus 附生棒曲霉Aspergillus clavatus C2WU发酵培养物中提取获得，具有较强的抗肿瘤活性。
[0008]一种环肽化合物clavatustide A,结构式如式(I )所示:
[0009]
【权利要求】
1.一种环肽化合物clavatustide A,其特征在于,结构式如式(I )所示:
2.—种棒曲霉,其特征在于,命名为棒曲霉(Aspergillus clavatus) C2WU,保藏号为CCTCC N0.M2013421。
3.如权利要求1所述环肽化合物clavatustideA的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)将经活化的棒曲霉(Aspergillusclavatus) CCTCC N0.M2013421接种到发酵培养液中，进行发酵培养； (2)发酵完成后，分离得到菌丝体和发酵液； 将菌丝体置于有机溶剂中浸提，得到浸提液，再用蒸馏水对浸提液混悬，得到水混悬液，然后用乙酸乙酯或氯仿对水混悬液进行萃取，得到萃取液A，萃取液A经浓缩后得到菌丝体提取物； 或者，用乙酸乙酯或氯仿对发酵液进行萃取，得到萃取液B，萃取液B经浓缩后得到发酵液提取物； (3)对菌丝体提取物或发酵液提取物进行层析分离、纯化处理，制得权利要求1所述的环妝化合物clavatustide A。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述发酵培养的温度为20-30°C，时间为 10-60 天。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述发酵培养的的温度为22-26°C，时间为 15-25 天。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述层析分离为正相硅胶柱层析分离，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯混合液。
8.如权利要求1所述环肽化合物clavatustideA在制备抗肿瘤药物或肿瘤预防保健食品中的应用。
9 .如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为抗肝癌药物，所述肿瘤预防保健食品为肝癌预防保健食品。
【文档编号】C12R1/66GK103724290SQ201310575061
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】吴斌, 叶瑛 申请人:浙江大学