一种山羊生长性状的mstn基因分子标记选择方法
【专利摘要】本发明公开了一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法。该方法包括以下步骤：（1）针对山羊MSTN基因5’UTR区域设计特异性核酸引物对待检山羊基因组DNA进行PCR扩增，得到593bp的扩增产物；（2）利用DraⅠ限制性内切酶对PCR产物进行酶切、电泳分析，出现3种基因型，AA型为593bp，AB型为593bp、424bp、174bp，BB型为424bp、174bp；（3）AB型和BB型个体多个体重、体尺指标显著高于AA型，因此选择AB型和BB型个体留种。该方法可以提高波尔山羊生长性状选择的准确性，加快以波尔山羊为育种素材的山羊新品种培育进程。
【专利说明】一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及山羊肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN)5'UTR区域一个多态性 位点的检测方法和应用范围，属于分子生物学领域。
【背景技术】
[0002] 生长是肉用山羊主要的经济性状，同时也是数量性状，表型选择遗传进展缓慢， 开发辅助选择的分子标记可以加快遗传进展。肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN) 又称生长分化因子8(61'〇￥1:11〇1€€616111:;[-31:;[011?3(31:018,60?-8)，属于转化生长因子 3(TransformingGrowthFactorbeta,TGF-0)超家族成员。MePherron等（1997)首先 在小鼠中发现MSTN是影响动物肌肉骨骼肌重量的重要基因。MSTN基因的正常功能是调节 动物骨骼肌的总量，使之保持适当的比例，在肌肉的生长发育中起着重要的调节作用，该基 因突变可引起多种动物双肌性状的产生。
[0003] 在肉牛中，MSTN的3个外显子上有9个影响氨基酸序列的变异，其中6个可导致 双肌，表现出肌肉发达、初生重增加和生长速度快的优势。如比利时蓝牛和皮埃蒙特牛的 双肌性状就是该基因突变造成的。关学敏等报道猪MSTN基因发生在5'调控区的突变可能 与猪的生长性状有关。Johnson等在特克塞尔绵羊MSTN基因区域发现存在一个影响肌肉和 脂肪性状的QTL。ClopA等进一步研究发现特克塞尔绵羊MSTN基因3'UTR区G/A突变可 能产生了一个microRNA祀点，使得MSTN基因翻译受到抑制，造成肌肉肥大。Marcq等分析 了比利时特克塞尔双肌绵羊的可能遗传机制，与普通绵羊相比，双肌羊的MSTN基因的编码 区虽然没有碱基的差异，但采用该基因侧翼序列的微卫星标记进行连锁分析表明，在绵羊 染色体2q远端区存在一个对肌肉发育产生效应的QTL，该基因座可能就是MSTN基因，推测 影响该基因表达的区域很可能在C端或N端的非翻译区域或内含子部分。Li等分析了 24 个山羊品种，8个绵羊品种MSTN基因部分内含子2序列的遗传变异，结果在山羊测序区域发 现7个多态性位点。以上研究表明，MSTN基因对家畜的生长性状起重要的调节作用。但有 关山羊MSTN基因5'UTR区突变与生长性状的关联研究未见报道，而该区域很可能对山羊 MSTN基因表达起到调控作用，从而影响山羊的生长。
[0004] 波尔山羊是世界著名的肉用山羊品种，生长速度快，产肉率高。自引进以来，对我 国肉用山羊产业的发展起了十分重要的作用，但引进的波尔山羊质量参差不齐以及多年缺 乏选育后的种质严重退化，给肉用山羊产业带来了危机，以波尔山羊与本地山羊杂交选育 适合当地饲养环境的肉用山羊新品种（系）和通过本品种选育恢复波尔山羊的优良生产性 能具有现实的紧迫性。如何提高选则的准确性、加快育种进程是目前面临的主要问题。
[0005] 发明人在《8个绵山羊群体中肌肉生长抑制素基因DraI酶切多态性分析》中采用 限制性内切酶DraI对8个绵羊、山羊群体(湖羊、小尾寒羊、陶赛特、特克塞尔、杜泊羊、波 尔山羊、长江三角洲白山羊、黄淮山羊）中MSTN基因5'UTR区进行PCR-RFLP分析，筛选多 态性位点。结果表明，在所有受检绵羊群体中只检测到BB1种基因型；而在山羊群体中均检 测到3种基因型，其中波尔山羊、长江三角洲白山羊以AA居多，AB型次之，BB型很少；黄淮 山羊则以AB型居多，BB型次之，AA型较少。但是，该文并没有公开上述基因型与生长性状 的关系。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服山羊育种中生长性状表型选择准确性低，遗传进展慢的缺 陷，提供一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法，提高波尔山羊生长性状选择的 准确性，加快以波尔山羊为育种素材的山羊新品种培育进程。
[0007] 本发明的目的可通过如下技术方案实现：
[0008] 1)提取山羊基因组DNA;
[0009] 2)利用两条特异性引物扩增MSTN5'UTR区(序列DQ167575,23-615bp区域)，得到 593bp扩增产物；所述的两条特异性引物序列为
【权利要求】
1. 一种山羊生长性状的MSTN基因分子标记选择方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 提取山羊基因组DNA; 2) 利用两条特异性引物PCR扩增MSTN5' UTR区，得到593bp扩增产物；所述的两条特 异性引物序列为 PI :SEQ ID NO. 1，P2 :SEQ ID NO. 2 ; 3) 利用Dra I限制性内切酶对所述的扩增产物进行酶切，电泳分型，仅获得593bp片段 的定义为AA型，获得593bp、424bp、174bp三个片段的定义为AB型，获得424bp、174bp两个 片段的定义为BB型； 4. AB型和BB型的生长性状明显优于AA型，选择AB型和BB型个体留种。
2. 依据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生长性状为初生体重、六月龄体重、 六月龄日增重、九月龄体重、九月龄日增重、初生体高、六月龄体高、九月龄体高、初生胸围、 六月龄管围。
3. 依据权利要求1或2中任意一项所述的方法，其特征在于：所述山羊为波尔山羊。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应总体系为20 y L，模 板 DNA15-100ng，5U/ ii L Taq 聚合酶 0? 2 ii L，10mM 的 dNTPO. 4 ii L，引物 P1 和 P2 各 0? 6 ii L， 25mM的MgCl2l. 2 ii L，10X缓冲液2 ii L，加灭菌双蒸水至20 ii L ;所述PCR扩增的反应程 序为：94°C预变性5min ;94°C变性30s，55°C退火30s，72°C延伸45s，35个循环；72°C延伸 7min〇
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶切的反应体系为15 y L，PCR产物 61^，15。/1^0四1酶0.5111，10\缓冲液1.5111，灭菌双蒸水7111;371：酶切411。
【文档编号】C12Q1/68GK104342492SQ201410140093
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年4月9日 优先权日:2014年4月9日
【发明者】孟春花, 曹少先, 傅泽红, 丰秀静, 张俊, 钱勇 申请人:江苏省农业科学院