一种组合物及其应用和一种制品及其制备方法与流程

本发明涉及保健食品技术领域，特别涉及一种对化学性肝损伤有保护功能的组合物及制备方法。

背景技术：

化学性肝损伤，顾名思义就是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括乙醇、环境中的化学毒物及其某些药物。日常生活中，化学性有害物质，会通过胃肠道、血液循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到这些毒性物质的损害，造成化学性肝损伤。在我国，酒精肝已成为现代社会不容忽视的隐形杀手，长期大量饮酒会致使肝脏损伤，引发酒精肝，经调查，酒精肝是化学性肝损伤人群中患病人数最广、比例最高的病症。而由ccl4引起的肝损伤也不容小视。急性酒精性肝损伤的机理为机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，乙醇可致α-磷酸甘油增多而促进甘油三酯(triglyceride,tg)合成，致使脂肪在肝细胞内沉积，同时乙醇能激活氧分子，产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽(glutathione,gsh)的耗竭，机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物(lpo)，lpo大部分由肝细胞产生，其分解也主要在肝脏，丙二醛(malondialdehyde,mda)是lpo的主要降解产物，故mda含量上升可间接反映脂质过氧化程度和肝细胞的损伤程度，mda含量愈高，其破坏肝细胞膜结构、导致肝细胞肿胀、坏死的程度就愈大。当摄入的酒精引起肝损伤时，可以通过测定机体内tg、gsh和mda的含量来判断肝损伤的程度。一般认为，ccl4损伤肝组织的机制是四氯化碳经肝微粒体细胞色素p450代谢激活后生成自由基三氯甲基，从而攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化，破坏肝细胞膜结构和功能的完整，使蛋白质等物质合成代谢发生障碍，当肝损伤时，细胞通透性增高，血清中谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast)增加，且alt和ast活性的高低变化与肝损伤的程度相一致，因此测定血清中alt和ast是肝损伤的主要指标。因此，研发能够有效地预防和辅助治疗化学性肝损伤的药物具有重要的社会意义和潜在的经济效益。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种对化学性肝损伤具有保护功能的组合物，能够降低酒精所诱导肝损伤引起的tg、gsh和mda的含量以及降低ccl4所诱导肝损伤引起的alt和ast的活性。

本发明所采取的技术方案是：

一种组合物，所述组合物包含葛根、枳椇子、桑椹、人参和绿豆。

优选地，所述组合物按重量份配比包含：葛根12～28份、枳椇子10～26份、绿豆6～18份、桑椹6～18份、人参4～16份。

优选地，所述组合物按重量份配比包括：葛根20份、枳椇子18份、绿豆10份、桑椹10份、人参8份。

优选地，所述人参不经提取而整用。

本发明所述的组合物可用于制备预防或治疗化学性肝损伤制品。

本发明所述的组合物可用于制备预防或辅助治疗乙醇和/或四氯化碳引起的肝损伤制品。

本发明还提供了一种制品，由如上所述的组合物制成。

将上述的组合物和食品、保健食品、特殊医学用途配方食品或药品中可接受的辅料或添加剂，按照相应的制剂方法和工艺，可制成相应的口服制剂，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂等。其中所述的辅料包括填充剂、赋形剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、矫味剂、发泡剂、润滑剂等口服制剂中允许使用的常用辅料成分，也包括如溶剂、增稠剂、助溶剂、ph调节剂、渗透压调节剂、抗氧化剂、膨松剂等。其中所述的添加剂包括微量元素、矿物质、维生素、氨基酸、牛磺酸等食品、保健食品、特殊医学用途配方食品中允许使用的常用添加剂。

优选地，在上述组合物中添加辅料d-甘露糖醇和/或硬脂酸镁，所述添加剂为微量元素、矿物质、维生素、氨基酸、牛磺酸中的至少一种。

本发明还提供了如上所述的制品的制备方法，包括以下步骤：

取枳椇子、葛根、绿豆、桑椹，进行回流提取，得到提取液；

将所述提取液与人参粉末、辅料混合，制备成型得到所述制品。

优选地，采取乙醇进行回流提取。采用乙醇提取能够避免绿豆和葛根所含的淀粉被糊化，从而避免过滤的困难并提高了药成分的纯度，避免溶解枳椇子和桑椹中所含的糖分，从而避免过滤和成分分离纯化的难度，同时乙醇可以回收再利用，节约了用水，减少了排污量。

优选地，采用65％乙醇进行回流提取。

优选地，在进行所述回流提取之前包括对枳椇子、葛根、绿豆、桑椹中至少一种进行粉碎的步骤。

优选地，人参和绿豆粉碎后过60目筛，枳椇子粉碎成粗粉。

优选地，所述回流提取的步骤包括：加入乙醇进行二次回流提取，合并所述二次回流提取得到的提取液。

进一步地，第一次回流提取中乙醇的投加质量为枳椇子、葛根、绿豆、桑椹的总投加质量的4～8倍，提取时间为1～3h，第二次回流提取中乙醇的投加质量为枳椇子、葛根、绿豆、桑椹的总投加质量的2～6倍，提取时间为1～3h。

进一步地，第一次回流提取中乙醇的投加质量为枳椇子、葛根、绿豆、桑椹的总投加质量的6倍，提取时间为2h，第二次回流提取中乙醇的投加质量为枳椇子、葛根、绿豆、桑椹的总投加质量的4倍，提取时间为2h。

优选地，包括对所述提取液进行浓缩再与人参粉末、辅料混合的步骤。

优选地，提取液浓缩至液固质量比为1.10～1.25：1。

本发明的有益效果是：

提供一种对化学性肝损伤有辅助保护功能的组合物和制备的方法，能够有效地预防或辅助治疗乙醇和/或四氯化碳引起的肝损伤。其中葛根中的葛根素含有皂苷类化合物，对提高机体免疫力，诱导活化肝星状细胞凋亡，有效逆转化学诱导的肝纤维化，以及对四氯化碳诱导的急性肝损伤等具有保护作用。枳椇子中含有葡萄糖、果糖、硝酸钾、过氧化物酶等，能显著降低乙醇在血液中的浓度，促进乙醇的清除，消除酒后体内产生的过量自由基，阻碍过氧化脂质的形成，从而减轻乙醇对肝组织的损伤，避免酒精中毒导致各种代谢异常，与葛根同用，可增加解酒之功效。桑葚提取物也具有较好的解酒功效，人参能够增加与乙醇代谢有关的醇脱氢酶和醛脱氢酶的活性，同时将乙醇代谢所产生的有毒物质乙醛迅速地排出体外，过量的氢参与皂甙合成从而有效地保护乙醇中毒的肝脏，人参中含有的人参皂甙除能降低四氯化碳引起的血清谷草转氨酶活性的升高，与桑椹配伍共为佐药，可增强解酒之功效同时，减轻对肝脏的损害，人参富含40余种皂苷成份，本发明中的人参不经提取而整用，避免了在提取过程中流失有效成分。绿豆含丰富胰蛋白酶抑制剂，可以保护肝脏，与葛根、枳椇子、桑葚和人参同用，起到调和诸药疏肝理气、清热养肝、利湿解毒,增强肝脏的解毒功能。

附图说明

图1为实施例1组合物对乙醇引起的小鼠急性肝损伤中甘油三酯(tg)含量的影响；

图2为实施例1组合物对乙醇引起的小鼠急性肝损伤中丙二醛(mda)含量的影响；

图3为实施例1组合物对乙醇引起的小鼠急性肝损伤中还原型谷胱甘肽(gsh)含量的影响；

图4为实施例1组合物对四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤中谷丙转氨酶(alt)含量的影响；

图5为实施例1组合物对四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤中谷草转氨酶(ast)含量的影响。

具体实施方式

以下将结合实施例和附图对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

实施例1：制备片剂药物

称取8g人参和10g绿豆粉碎，过60目筛备用，称取1.5gd-甘露糖醇粉碎，过100目筛备用，称取18g枳椇子打成粗粉备用；

称取20g葛根、10g桑葚与所述的绿豆和枳椇子混合，加入350ml65％乙醇回流提取2h，过滤得到提取液，滤渣加入230ml65％乙醇继续回流提取2h，合并两次提取液并减压浓缩至液固质量比为1.10，向其中加入所述的人参粉末，搅拌均匀后干燥磨成粉末；

将制备所得的粉末与所述的d-甘露糖醇粉末混合，加入55％乙醇制粒，加入0.2g硬脂酸镁混匀后压片即得片剂。

实施例2：乙醇诱导的肝损伤模型

1、实验动物：清洁级雌性昆明种雌性小鼠，体重20-22g，在室温25℃，湿度50％，12小时黑暗，12小时光照的动物室饲养，饲养方式采用立体笼式饲养，给予标准饲料，并且自由饮水，实验动物由延边大学实验动物中心提供。

2、剂量分组及受试样品给予时间：

实验取60只小鼠，随机分成6组，每组10只，设为一个正常组、一个模型组、一个小剂量组、一个中剂量组、一个大剂量组和一个水飞蓟素组。正常组和模型组每日给予生理盐水(100mg/kg)，水飞蓟素组作为阳性对照组，每日经口灌胃给予水飞蓟素，剂量为100mg/kg，小剂量组、中剂量组和大剂量组每日经口灌胃给予实施例1片剂药物，剂量分别为100mg/kg、300mg/kg和600mg/kg。

3、诱导小鼠乙醇肝损伤及结果检测：

共给药30天，于末次给药4小时后，模型组及各实验组一次灌胃给予50％乙醇(12ml/kg)诱导肝损伤，正常组给予蒸馏水，同时禁食不禁水。给予乙醇12小时后处死小鼠，取部分肝脏组织，以4℃生理盐水制成10％肝匀浆，3500rpm离心15min，取上清液测肝组织甘油三酯(tg)、丙二醛(mda)和还原型谷胱甘肽(gsh)的含量，剩下的部分放在低温冰箱(-80℃)里保存。肝组织中tg、mda、gsh含量由中国南京建成生物公司的提供的试剂盒测定，用比色法测量其含量，单位为tgmmol/gprot；gshμmol/gprot；mdanmol/mgprot。实验测定结果分别见图1、图2和图3，实验数据用graphpadprism程序(graphpadsoftware,inc.,sandiego,usa)进行统计，采用均数±标准差(means±sem)表示，所有数据用one-wayanova和tukey’smultiplecomparisontestes进行比较，*表示p＜0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001，为具有显著性差异。

实验组小鼠在给予水飞蓟素和实施例1片剂药物30天以后，给予乙醇诱导小鼠急性肝损伤，实验结果显示正常组小鼠肝脏中tg、mda和gsh含量为0.0876±0.0061mmol/gprot，2.19±0.22nmol/mgprot和28.49±0.89μmol/gprot；模型组中tg、mda和gsh含量为0.3602±0.0201mmol/gprot,4.60±0.27nmol/mgprot，13.27±0.48μmol/gprot，与正常组相比具有显著性差异(p＜0.001)。相较于模型组，给予实施例1片剂药物小剂量、中剂量和大剂量的实验组小鼠肝损伤程度较低，随着给予量的增加肝损伤程度降低，并且大剂量实验组的实验效果接近于使用水飞蓟素的效果，实验结果显示本发明组合物可以有效地预防或辅助治疗化学性肝损伤。

实施例3：四氯化碳诱导的肝损伤模型

1、实验动物：同上述实施例2。

2、剂量分组及受试样品给予时间：同上述实施例2。

3、诱导小鼠四氯化碳肝损伤及结果检测：

共给药30天，于末次给药后4小时模型组及各实验组一次灌胃给予体积分数0.4％四氯化碳的植物油溶液(0.1ml/10g)诱导小鼠肝损伤，正常组给予等量植物油，禁食不禁水。给予四氯化碳20小时后颈动脉取血，分离血清，分别测定谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast)的含量，剩下的部分放在液氮或低温冰箱(-80℃)里保存。血浆离心后取血清，根据试剂盒说明书测定血清中alt和ast的含量，试剂盒购买于中国南京建成生物公司，实验测定结果见图4和图5，实验数据用graphpadprism程序(graphpadsoftware,inc.,sandiego,usa)进行统计，采用均数±标准差(means±sem)表示，所有数据用one-wayanova和tukey’smultiplecomparisontestes进行比较，*表示p＜0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001，为具有显著性差异。

实验组小鼠在给予水飞蓟素和实施例1组合物30天以后，给予四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤，实验结果显示正常组小鼠颈动脉血清中alt和ast含量分别为19±1.7iu/l和6.7±1.3iu/l；模型对照组的血清alt和ast含量分别为244±6iu/l和62±4iu/l，与正常组相比具有显著性差异(p＜0.001)。从图中可以看出，实验小鼠在给予小剂量、中剂量和大剂量实施例1组合物后，肝损伤程度得到缓解，并且随着给予量的增加，肝损伤程度越低，可见本发明组合物可以有效地预防或辅助治疗化学性肝损伤。

实施例4：临床实例

1、选择病例样本：见表1。选择病例60例构成实验病例样本，其中30人被诊断为乙醇引起的化学性肝损伤，30人被诊断为化学物引起的化学性肝损伤。

2、效果实验：每个病例日服用2次，每次饭前服用1.8g实施例1药物，持续服用3个月，后经调查统计，其中48名病例症状明显好转，显效率达到80％，55名病例症状得到改善，有效率达到91.7％，结果显示本发明组合物可以有效地预防或辅助治疗化学性肝损伤。

表1实验病例样本的构成

实施例5：预防或治疗化学性肝损伤药膏的制备

称取26g枳椇子和6g绿豆，粉碎成粉末，加入28g葛根和6g桑葚混合，加入400ml55％乙醇，回流提取2h，加入260ml55％乙醇，回流提取2h，合并两次的提取液并减压浓缩至液固比为1.25，加入16g人参粉末搅拌均匀后形成药膏。

实施例6：预防或治疗化学性肝损伤的药液的制备

称取12g葛根、10g枳椇子、18g绿豆、18g桑葚和4g人参，加入300ml水，浸泡1h，然后煎煮2h，滤出药液。